MANUAL DE Versión: 01

PROCEDIMIENTOS SECCIÓN Fecha vigencia:  Enero

HEMATOLOGÍA Y COAGULACIÓN 2023
LABORATORIO CLÍNICO REDNORTE

MANUAL DE
PROCEDIMIENTOS SECCIÓN HEMATOLOGÍA Y
COAGULACIÓN
LABORATORIO CLÍNICO REDNORTE
Elaboración de
documento
23.01.2023

TM Roberto TM Sergio Rojas TM Roberto Pastenes

N°1.0 Pastenes Barrera Adaros Barrera
Director Técnico Encargado de Director Técnico
Calidad

Versión Fecha Descripción de Elaboró Revisó Aprobó

la Revisión
revisión

Fecha entrada en vigencia: REF: 01

02/2023
Procedimientos sección Hematología y Coagulación Laboratorio Clínico REDNORTE

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INTRODUCCIÓN

En esta sección se realizan técnicas automatizadas y manuales. Los procedimientos de

ejecución de las técnicas automatizadas están descritos en los respectivos manuales
de los equipos ubicados en los muebles de la sección. Las técnicas manuales se
describen en el presente manual de procedimientos.

OBJETIVO GENERAL:

Estandarizar los procedimientos de ejecución de las técnicas automatizadas y

manuales que se realizan en la sección de Hematología.

ALCANCE:

Este procedimiento aplica a la ejecución de todas las técnicas que se desarrollan en la

sección de Hematología y a todos los responsables de llevar a cabo las actividades que
se describen en el presente documento.

RESPONSABILIDADES:

 Tecnólogo médico encargado sección:

o Asegurar personal necesario y stock de insumos y reactivos para el
funcionamiento de la sección,
o Realizar mantenciones preventivas de los equipos de la sección,
o Revisión de controles e ingreso al sistema Managerlab cuando
corresponda, lectura de frotis, preparación de reactivos, realizar Tiempo
de Sangría IVY,

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o Informe y validación de resultados en el sistema informático,

o Aviso y registro de valores críticos,
o Realizar pedido de reactivos a dirección técnica,
o Entregar estadística mensual,
o Colaborar en la actualización de procedimientos de la sección y
supervisar el cumplimiento de éstos.
o Mantener registros,
o Realizar inducción a personal nuevo en la sección.

 TENS: Mantener lugar de trabajo limpio y ordenado, realizar mantenciones

diarias de los contadores hematológicos y de VHS y llenar registros (ver anexo),
procesar controles de contadores hematológicos, procesar muestras siguiendo
pauta de manejo (ver anexo), realizar frotis y tinciones, montaje y lectura de VHS
y micro hematocrito, revisar el listado de exámenes pendientes.

ABREVIATURAS:

 TM: Tecnólogo Médico

 TENS: Técnico en enfermería de nivel superior
 MBS: Manual de bioseguridad
 MTM: Manual de toma de muestra
 MCCI: Manual de Control de calidad interno
 MCCE: Manual de control de calidad externo.
 VCM: Volumen corpuscular medio

DEFINICIONES SERIE ROJA:

 Acantocitos: células especuladas en espuela. Célula pequeña con escasas

espículas de longitud variable, distribuidas en forma irregular.

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 Anillos de cabot: restos de membrana nuclear o huso mitótico en glóbulos

rojos, pueden adoptar diversas formas, ser únicos o múltiples.
 Anisocromía: presencia en el frotis de glóbulos rojos hipocromos y
normocromos. El estimador que clasifica en cruces la semicuantificación es la
amplitud de distribución de la hemoglobina.
 Codocitos: Célula diana. Célula hipocrómica con zona central de pigmento de
hemoglobina, célula delgada.
 Cuerpos de Howel Jolly: corresponde a uno o más fragmentos de núcleo de 1
µm en la periferia del glóbulo rojo, característicamente son esféricos.
 Dacriocitos: célula en lágrima. Célula con un extremo puntiagudo, en forma de
gota.
 Drepanocitos: células falciformes. Eritrocitos delgados, largos, aguzados en
ambos extremos, sin palidez central.
 Eliptocitos: célula suficientemente larga para tener dos lados paralelos con
apariencia de cigarrillo.
 Eritroblastos: precursores de la serie eritroide, en el hemograma se informa el
número de eritroblastos encontrados al realizar el recuento diferencial.
 Esquistocitos: también llamada esquizocitos. Célula fragmentada, contraída de
manera irregular.
 Equinocito/Crenocitos: célula en erizo. Células con múltiples proyecciones
romas distribuidas de manera regular.
 Esferocitos: células pequeñas, redondas, sin palidez central; por lo general
microcíticas. El VCM se mantiene porque solamente pierde superficie celular.
 Estomatocitos: eritrocitos con una zona de palidez central con forma de
hendidura. Semeja a una boca o estoma, del cual deriva su nombre.
 Leptocitos: célula plana, delgada, con hemoglobina en la periferia y palidez
central aumentada.
 Megalocitos: son glóbulos rojos grandes macrocitos ovales, donde se combina
una alteración del tamaño y de la forma, pueden llegar a tener hasta 12 µm de
diámetro. Se observan en anemia megaloblásticas.

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 Macrocitos: glóbulos rojos más grandes de lo normal que presentan halo

central. El estimador hematológico es el VCM.
 Megaloblastos: precursores hematológicos de tamaño grande.
 Microcitos: glóbulos rojos más pequeños de lo normal y cromía variable. El
estimador hematológico es el VCM.
 Ovalocitos: célula ovoide o en forma de huevo que puede o no presentar halo
central. En tamaño grande también es llamado megalocito.
 Policromatofilia: glóbulos rojos de mayor tamaño de color azul grisáceo con
tinción MGG (May grunwald-Giemsa)
 Poiquilocitosis: glóbulos rojos con variación en la forma que orienta la
patología hematológica.
 Punteado basófilo: glóbulos rojos con precipitado de ribosomas y
polirribosomas. Se presentan en forma puntiforme y de color azul grisáceo con la
tinción MGG.
 Queratocitos: células en casco o en cuerno (doble agudeza distal). Fragmento
celular en forma de casco de futbol americano.
 Reticulocitos: precursor de la línea eritroide inmediatamente anterior al glóbulo
maduro. Se denomina reticulocito a los glóbulos rojos que presenta RNA
precipitado.
 Rouleaux: corresponde a la aglutinación de glóbulos rojos de forma regular y
lineal con 4 o más glóbulos rojos.

DEFINICIONES SERIE BLANCA:

 Bastones de Auer: inclusiones intracitoplasmáticas en forma de varilla o de

bastón que se observa en los mieloblastos, promielocitos y monoblastos.
 Granulación patológica: gránulos hipertrofiados que le dan un aspecto
hipergranular al citoplasma de los Neutrófilos.

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 Linfocito reactivo: célula linfoide que ha recibido un estímulo antigénico

modificando sus características morfológicas: tamaño celular, cantidad de
citoplasma, basofilia citoplasmática, reborde hiperbasófilo, etc.
 Neutrófilo hipersegmentado: célula de la línea neutrófila mieloide que
representa la desviación a la derecha, dado que tiene un número mayor de
lóbulos en su núcleo.
 Pelger Huet: alteración hereditaria en la segmentación nuclear de los
Neutrófilos, que en individuos heterocigotos se presenta bilobulado en forma
simétrica.
 Sombras de Gumprech: restos celulares observados en el frotis sanguíneo
como un artefacto producido por la labilidad celular especialmente de la serie
linfoide.

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PROTOCOLO DE TRABAJO:
1. Realizar la mantención diaria de equipos y registro de ella de acuerdo al rol que
le corresponde.
2. Revisar los reactivos necesarios para el funcionamiento de la sección y de los
equipos; cambiar o rellenar cuando corresponda para asegurar la cantidad
suficiente para el trabajo del día.
3. Procesar los controles, revisar los controles de coagulación, aplicar medidas
correctivas en caso que corresponda según procedimiento de CCI. Las
impresiones de los registros de los controles de hematología se mantienen
almacenados en la sección.
4. Los exámenes se procesarán según la siguiente planificación:
 Los hemogramas se realizarán en forma rutinaria entre 08:00 y 19:00 hrs de
lunes a viernes y de 08:00 a 13:00 hrs. los sábados.
 Se deben realizar en todo horario los hemogramas de Recién Nacidos y los
que sean solicitados por el médico tratante.
 Los profesionales de la sección revisarán y validarán los hemogramas.
5. Todas las muestras que ingresan a la sección de Hematología, deben traer la
orden de trabajo correspondiente, el volumen de la muestra varía según el
tubo de colección (3 o 1 ml). (Aplicar criterios de rechazo de MTM) Las
muestras contenidas en tubo minicollet se homogenizan y se procesan en
contador hematológico.
6. Los hemogramas (tubo y orden de trabajo) son enumerados correlativamente
desde el inicio del día con el número 1
7. Activar el contador Hematológico si está en reposo y realizar el Background o
lavado de fondo (según manual del equipo).
8. Las muestras contenidas en tubo estándar son procesadas en el contador
hematológico.

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9. Tens revisa los resultados entregados por el contador hematológico según

indicaciones entregadas por TM (ver pauta en anexos), realizar el frotis si
corresponde a microscopía para que TM. lea en microscopio o entregar para
que TM realice validación.
10. Al informe entregado por el contador hematológico anotarle el número
correlativo correspondiente al hemograma.
11. Las impresiones de los hemogramas deben archivarse en forma correlativa y
mantenerse durante 3 meses en la sección antes de eliminarse.
12. Las muestras de coagulación deben mantenerse en frío hasta su
procesamiento. Antes, controlar técnicas con los dos niveles de control de
calidad, Una vez procesadas las muestras, se deben revisar curvas de
reacción y validar resultados en el sistema informático Managerlab.
13. En caso de que se obtenga algún valor de alerta este debe ser rápidamente
informado y registrado, según procedimiento de notificación oportuna.
14. Las muestras que tengan hemoglobina glicada deben dejarse en la gradilla
correspondiente dentro del refrigerador.
15. Los Tiempos de Sangría IVY se realizan según requerimiento de los pacientes.
16. Se deben guardar los frotis leídos diariamente correctamente rotulados por
fecha y las muestras se guardan en gradillas dentro del refrigerador de la
sección, se mantienen por 48 horas antes de ser eliminadas.
17. Se debe mantener un stock crítico de reactivos para 15 días actualizando la
fecha de vencimiento.
18. Se debe realizar el pedido de reactivos mensualmente de acuerdo con el
Encargado de pedidos.
19. La estadística de la sección se entrega a secretaria de laboratorio antes del 5
de cada mes

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TECNICAS AUTOMATIZADAS
SEGÚN MANUAL OPERATIVO DE LOS SIGUIENTES EQUIPOS:
Nombre y tipo de equipo Técnicas Referencia

Rcto. de Leucocitos,
Rcto. Eritrocitos, Rcto. Guía del usuario Dirui
Dirui BF-6800: Contador de plaquetas, BF-6800
Hematológico Hemograma,
Hematocrito y
Hemoglobina

Urit 600: Coagulómetro TP, TTPA

Manual Urit 600

Alaris ALS-20: Analizador Manual Alaris ALS-20

VHS
automático de VHS

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TECNICAS MANUALES

2.1 Recuentos y otras técnicas microscópicas:

 Recuento manual de Leucocitos

Muestra: Sangre con EDTA como anticoagulante.

Materiales:
 Pipeta de dilución de leucocitos y manguera de aspiración
 Cámara de Neubauer limpia y seca, cubrecámara
 Agitador mecánico de pipetas
 Solución diluyente Hayem II

1. Verificar que la muestra no presente microcoágulos y homogeneizar la muestra

por 3 minutos*.
2. Conectar la manguera de aspiración al extremo posterior de la pipeta cuenta
glóbulos. Aspirar suavemente la sangre hasta la marca 1. En caso de
hiperleucocitosis cargar solamente hasta la marca 0.5 y el resultado se Multiplica
por 2.
3. Limpiar los bordes externos de la pipeta con papel absorbente, introducir la pipeta
en forma inclinada (45ª) en la solución diluyente, a medida que se aspira
suavemente se va girando la pipeta hasta llenar la ampolla y enrasar hasta la
marca 11.
4. Una vez cargada la pipeta quitar la goma de aspiración, tapar la pipeta con el
pulgar y el índice de la mano (usando guantes) y agitarla para producir la lisis de
5. los glóbulos rojos, luego colocarla en el mezclador mecánico de pipetas y agitarla
durante 5 minutos.
6. Preparar la cámara de Neubauer cuidando que el cubrecámara quede bien
pegado en los bordes hasta formar círculos concéntricos y cubra de igual forma
ambas zonas cuadriculadas.

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7. Tapando el extremo superior de la pipeta con el dedo índice, mantenerla en

posición horizontal y desechar las 3 ó 4 primeras gotas. Apoyar la punta de la
pipeta en el ángulo formado por el cubrecámara y la cámara y deslizar lentamente
el líquido hasta llenar el retículo, cuidando de no sobrepasar los bordes ni formar
burbujas.
8. Dejar en reposo en cámara húmeda por 3 a 5 minutos para dar tiempo a que
sedimenten los glóbulos blancos.

9. Observar al microscopio con aumento menor, contando los glóbulos blancos

existentes en los cuatro retículos de los extremos. Si la distribución es uniforme
deberá existir una diferencia no mayor a 8 glóbulos entre los 4 retículos.
10. En cada retículo se contarán los glóbulos que se encuentren dentro de cada
cuadradito y los que estén en contacto con la línea divisoria izquierda e inferior.

11. Cálculo:
Nº total leucocitos contados x 100 (dilución y profundidad)
Leucocitos x mm3 =-------------------------------------------------------------------------------
4

Valor de referencia x 10 ³:

Edad Bajo Alto

Menos de 31 días 15.0 25.0
Hasta 4 años 11 meses 4,5 13.5
Más de 5 años 4,5 11.5

11. Registrar en la orden de trabajo y en el sistema informático el resultado obtenido.

12 Validar el resultado.

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 Fórmula Diferencial de Leucocitos:

1. Verificar que la muestra no presente microcoágulos y homogeneizarla por 3

minutos.
2. Realizar un recuento de leucocitos.
3. Realizar un frotis sanguíneo y teñirlo.
4. Observar al microscopio en la cola del frotis con aumento mayor y con objetivo
de inmersión y contar 100 leucocitos, informando en porcentaje los diferentes
tipos de leucocitos encontrados. Si se observan pocas células realizar varios frotis
para hacer la diferenciación celular.
5. Registrar en la orden de trabajo y en el sistema informático el resultado obtenido.
6. Validar el resultado.
Nota: Recuento de leucocitos inferior a 1000 células no se realiza fórmula diferencial.

 Elaboración frotis sanguíneo:

1. Homogeneizar la muestra.
2. Colocar una gota de sangre a 2 cm. de uno de los extremos de un portaobjetos.
3. Sujetar firmemente con los dedos índice y pulgar el portaobjetos, con la otra
mano colocar el cubreobjetos por delante de la gota de sangre en un ángulo de
45º, tocando la gota de sangre (la sangre difundirá tanto en el cubre como en el
portaobjetos).
4. Una vez extendida la gota en el diámetro transversal del portaobjetos, deslizar el
cubreobjetos a una velocidad uniforme y moderada, sin perder contacto con el
portaobjetos hasta que la gota de sangre quede bien extendida y con una cola
pareja.
5. El grosor de la extensión dependerá de la velocidad y el ángulo que se le aplique
(mientras más agudo y más rápido, más grueso el extendido).
6. Un buen frotis debe ser: más angosto y más corto que el portaobjetos; regular, sin
escotaduras ni agujeros. Ni demasiado grueso ni demasiado delgado. Sin flecos
ni estrías.

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7. Dejar secar a temperatura ambiente.

8. Colocar el nombre y apellido del paciente y número correlativo de la muestra en la
zona gruesa del frotis o en el borde esmerilado, utilizando un lápiz grafito.

 Recuento de Reticulocitos

Muestra: Sangre con EDTA como anticoagulante.

1. Verificar que la muestra no presente microcoágulos y homogeneizar la muestra

por 3 minutos.
2. Depositar en un tubo de hemólisis 2 gotas de colorante azul de cresil brillante y 2
gotas de sangre si el hematocrito es normal. Si el hematocrito es bajo agregar 2
gotas más de sangre.
3. Mezclar e incubar 15-20 minutos a 37 ºC en baño maría.
4. Mezclar para resuspender y colocar una gota sobre un portaobjeto limpio y hacer
un frotis dejar secar a temperatura ambiente.
5. Observar con lente de inmersión. El contenido nuclear del reticulocito se tiñe de
color azul intenso.
6. Contar todos los reticulocitos que se encuentren en 10 campos de 200 glóbulos
rojos cada uno y hacer el cálculo utilizando la siguiente fórmula:

Porcentaje de reticulocitos = Nº Reticulocitos x 100

2000 glóbulos rojos

7. Informar el porcentaje obtenido, en la orden de trabajo.

8. Validar los resultados en el sistema informático

Rango de referencia:
Recién nacido: 2.6 – 6.5 %

Adulto: 0,5 – 2.0 %

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 Recuento de Eosinófilos nasales

Muestra: Secreción nasal

1. A partir de una secreción nasal realizar un extendido sobre un portaobjeto limpio y

desengrasado, dejar secar a temperatura ambiente.
2. Identificar la muestra, pegando la etiqueta con el código de barras sobre el borde
esmerilado del portaobjetos.
3. Teñir el frotis con tinción May-Grunwald Giemsa
4. Observar al microscopio con inmersión y contar 100 leucocitos. Informar el
porcentaje de eosinófilos encontrados.
5. Registrar en la orden de trabajo y en el sistema informático el resultado obtenido.
6. Validar el resultado
Nota: Si el frotis contiene menos de 50 leucocitos se deberá solicitar una
nueva muestra.

 Búsqueda de Eosinófilos en orina

1. Centrifugar 15 ml de orina en tubo cónico a 2000 rpm por 5 minutos.

2. Eliminar el sobrenadante y homogeneizar el sedimento.
3. Colocar una gota del sedimento sobre un portaobjetos.
4. Dejar secar a temperatura ambiente.
5. Teñir con tinción rápida de frotis (Ver IT tinciones).
6. Observar con objetivo de inmersión.
7. Informar eosinófilos por campo.
8. Rango de referencia: No se observa Eosinófilos o Negativo.

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 Recuentos absolutos de Neutrófilos, Linfocitos, Monocitos, Eosinófilos,

Basófilos,
1. Verificar que la muestra no presente microcoágulos y homogeneizar la muestra
por 3 minutos.
2. Realizar un recuento de leucocitos.
3. Efectuar la fórmula diferencial al microscopio.
4. Calcular el valor absoluto de Neutrófilos, Linfocitos, Monocitos utilizando las
siguientes fórmulas:

Neutrófilos x mm³ = Nº neutrófilos x Nº leucocitos (x mm³)

100

Linfocitos x mm³ = Nº linfocitos x Nº leucocitos (x mm³)

100

Monocitos x mm³ = Nº monocitos x Nº leucocitos (x mm³)

100

Eosinófilos x mm³ = Nº eosinófilos x Nº leucocitos (x mm³)

100

Basófilos x mm³ = Nº basófilos x Nº leucocitos (x mm³)

100

5. Informar en el sistema informático y en la orden de trabajo.

6. Validar.
7. Rango de referencia:

Neutrófilos: 1800 – 7500 x mm³ o bien 1.8– 7.5 x 10³/ul.

Linfocitos: 1500 – 4500 x mm³ o bien 1.5 – 4.5 x 10³/ul.

Monocitos: 200 – 800 x mm³ o bien 0.2 - 0.8 x 10³/ul.

Eosinófilos: 40 – 400 x mm³ x 10³/ul o bien 0.04 – 0.4 x 10³/ul

Basófilos: 10 – 150 x mm³ o bien 0.01 – 0.15 x 10³/ul

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Determinación de cuerpos de Heinz

Muestra: Sangre con EDTA como anticoagulante. La muestra debe ser procesada
antes de una hora de la extracción.

1. En un tubo de hemólisis agregar 2 gotas de sangre previamente

homogeneizada y una gota de solución de azul de cresil brillante.
2. Incubar en baño maría a 37 ºC. Hacer un frotis a los 30 minutos y a los 60
minutos. Dejar secar a temperatura ambiente.
3. Sacar el tubo del baño y hacer un frotis a las 24 horas.
4. Buscar en los glóbulos rojos la presencia de una o más inclusiones, que
pueden tener diferente forma y tamaño.
5. Observar los frotis con aumento de inmersión.
6. Resultados: Positivo: si se observan cuerpos de Heinz.
Negativo: no se observan cuerpos de Heinz
7. Validar los resultados en el sistema informático.
8. Rango de referencia: Sin presencia de cuerpos de Heinz en los glóbulos
rojos.

 Citológico en líquidos biológicos

Muestra: Líquido cefalorraquídeo, líquido pleural, líquido ascítico, líquido peritoneal y

sinovial con o sin anticoagulante.

1. Verificar que la muestra no presente coágulos.

2. Para el recuento celular homogeneizar bien la muestra y cargar una gota de
líquido directamente en cámara de Neubauer y se hace el recuento con objetivo
menor. El número de leucocitos encontrados se multiplica por 10 que es la
profundidad de la cámara.

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3. En presencia de eritrocitos o de un gran número de leucocitos, diluir la muestra

con reactivo Hayem II y cargar la cámara de Neubauer.
4. La diferenciación celular se realiza si el LCR tiene un recuento de 20 o más
leucocitos x mm ³ y en los demás líquidos biológicos si tienen recuento mayor a
100 leucocitos x mm³.
5. Para diferenciar entre polimorfonucleares y mononucleares centrifugar una
fracción del líquido a 3500 rpm x 5 minutos.

6. Colocar una gota del sedimento sobre un portaobjetos, extender ligeramente y

dejar secar al aire. Teñir con tinción hematológica. También pasar la muestra por
el contador hematológico modo secundario.
7. Observar al microscopio con inmersión. Contar las células e informar
polimorfonucleares y mononucleares en porcentaje.
8. Registrar en la orden de trabajo y en el sistema informático el resultado obtenido.
9. Validar el resultado.

2.2 Técnicas manuales no microscópicas:

 VHS en pipeta de Westergreen

Materiales:
Tubo venoject tapa lila (con EDTA como anticoagulante).
Pipeta y soporte de Westergreen
Solución de citrato trisódico al 3,8 %

1. Realizar la prueba dentro de las 2 horas posteriores a la extracción si la muestra

ha sido mantenida a temperatura ambiente y, dentro de 6 horas si ha sido
conservada a 4 ºC.
2. Verificar que la muestra no presente microcoágulos.

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3. Después de homogeneizar cuidadosamente la muestra, dispensar 750 ml de

sangre en los capachos de color azul que contienen 250 ml de citrato.
4. Tapar el tubo azul y homogeneizar bien la mezcla.

750 ml de sangre

5. Introducir la pipeta de Westergreen por la parte donde la numeración es mayor

(140) y enrazar en la marca cero (0).

140

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6. Colocar el tubo perfectamente vertical en su soporte y dejarlo a temperatura

ambiente, protegido de vibraciones. Echar a andar el cronómetro.
7. Al cabo de 1 hora, leer la altura del plasma sobrenadante, desde el menisco
superior hasta el punto más alto de la columna de eritrocitos. Expresar el
resultado en milímetros.

8. Validar el resultado.

9. Valor de referencia: Mujer: 1 – 20 mm / hora

Hombre: 1 –15 mm/hora

 TIEMPO DE COAGULACIÓN (Lee-White).

Muestra: sangre venosa entera

1. se obtiene mediante una punción venosa de 4 a 5 ml de sangre.
2. Desconectar la aguja y vaciar ordenadamente 2 ml de sangre en 2 tubos Khan
de vidrio, previamente colocados en una gradilla a 37°C.
3. Poner en marcha el cronómetro al añadir la sangre al primer tubo. Al llegar al
segundo tubo no deben haber transcurrido más de 5 segundos.
4. Inclinar ambos tubos cada 30 segundos por la misma cara, hasta ver que la
sangre coagule, o sea hasta que la sangre deje de escurrir por las paredes del
tubo.
5. Sacar un promedio de los tiempos en que coagularon cada tubo e informar.

Valor de referencia: a 37°C: 7 – 15 minutos

Significado clínico:
La sangre al ser extraída sin mayor contaminación con tromboplastina tisular es
capaz de coagular cuando se la deposita en un tubo de vidrio.

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El tiempo que tarda este proceso está en relación con el sistema de

procoagulantes e inhibidores fisiológicos o adquiridos, que influyen en la
formación de dicho coágulo.
Este tiempo de coagulación in vitro reflejará mejor la eficacia del sistema in vivo,
cuanto menos se modifique o manipule esta sangre (contacto con el vidrio,
burbujas de aire, detergentes, etc.).
El tiempo de coagulación ha sido un método útil en el control de la terapia
anticoagulante con heparina, reemplazado actualmente por otras pruebas de
mayor sensibilidad y reproducibilidad.
Un tiempo de coagulación normal no descarta la existencia de un trastorno de la
coagulación, pero un tiempo prolongado es siempre índice de un defecto severo
de la misma, que puede deberse a una deficiencia de cualquiera de los factores
que intervienen en la formación del coágulo de fibrina, con excepción de una
deficiencia pura de los factores VII y XIII.
Sin embargo, el método es mucho más sensible a los defectos de los factores
que intervienen en la activación por contacto y en la formación del activador
intrínseco de la protrombina.

Utilidad clínica:
Evaluación global del sistema de coagulación.
Monitoreo de la terapia con heparina.
Screening prequirúrgico.

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TIEMPO DE SANGRIA

Método: Ivy
Muestra: el método es in vivo

1. Con un esfigmomanómetro se produce una presión constante de 40

mmHg.
2. Se realiza una incisión de profundidad estandarizada (1 mm de
profundidad), en la cara interna del antebrazo del paciente.
3. Se pone en marcha el cronómetro.
4. Durante ese tiempo, se absorbe la sangre cada 30 segundos, con un
papel absorbente sin tocar el lugar de la incisión.
5. Se toma el tiempo que transcurre entre el momento en que se realiza la
incisión y el que termina de sangrar.
6. El paciente deberá tener un recuento de plaquetas superior a 100.000.
Esto no es excluyente. A veces el médico necesita saber si un paciente
con 90.000 plaquetas tiene una hemostasia primaria dentro de límites no
hemorrágicos para realizar algún procedimiento invasivo (biopsia, etc).
Para esto se solicita el tiempo de sangría.

Es muy importante que el paciente no tome aspirinas u otros antiinflamatorios

no esteroideos por un lapso de 10 días antes de este test.

Valor de referencia: 1 a 5 minutos.

Significado clínico:
El tiempo de sangría es un test global que evalúa la formación del tapón
plaquetario que se forma como resultado de la adhesión de las plaquetas a la
pared de los vasos y la subsiguiente agregación. Mide el tiempo que tarda en
detenerse la hemorragia provocada por la injuria de los pequeños vasos.

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El test depende de la función plaquetaria, del adecuado número de plaquetas

funcionalmente intactas, de la presencia de proteínas plasmáticas adhesivas
que permiten la adhesión de las plaquetas a la pared vascular injuriada y la
agregación plaquetaria, y de la integridad de la matriz de la pared vascular.
Un tiempo de sangrado prolongado requiere de futuros análisis y sugiere un
desorden de la hemostasia primario que puede ser adquirido, hereditario o
inducido por drogas.

La prolongación del tiempo de sangría con un recuento de plaquetas normal

indica la presencia de síndrome de von Willebrand o una disfunción plaquetaria
o una hipo o disfibrinogenemia severa. Un tiempo de sangrado normal no
descarta un defecto en la hemostasia primario.

Utilidad clínica:
Evaluación de la disfunción plaquetaria e integridad de la pared vascular, el
número de plaquetas y de las proteínas plasmáticas de adhesión. Evalúa la
formación del tapón plaquetario.
Screening para pacientes con sospecha de disfunción plaquetaria.
Variables preanalíticas:
Prolongado: Si el número de plaquetas es menor de 100.000 /mm3, cambios
seniles de la piel.

Variables por enfermedad:

Prolongado: Trombocitopenias, trombopatías, tromboastenias, uremias,
mielomas, macroglobulinemias, deficiencia de fibrinógeno, enfermedad de von
Willebrand constitucional o adquirida (aunque también puede dar valores
normales), enfermedad del tejido conectivo (síndrome de Ehless-Danlos),
síndrome de Bernard-Soulier, tromboastenia de Glanzmann, enfermedad
hepática, preeclampsia.

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Acortado: Hiperlipoproteinemia, diabetes mellitus, ateroesclerosis.

Variable por drogas:

Prolongado: Ingestión de ácido acetilsalicílico, antiinflamatorios no esteroides,
allopurinol, ácido aminocaproico, ampicilina, asparaginasa, azlocilina,
carbenicilina, cefoperazona, dextran, diltiazem, etanol, halotano, heparina,
mezlocilina, moxalactama, nifedipina, fenoprofeno, ibuprofeno, indometacina,
ketoprofeno, naproxeno, fenilbutazona, piroxicam, penicilina G, piperacilina,
propanolol, estreptoquinasa, estreptodornasa, uroquinasa, ácido valproico,
triclopidina, sulfinpirazona, ticarcilina. Si bien la aspirina y otros antiflamatorios
no esteroideos prolongan el tiempo de sangría, no todos los que se consignan
tienen un efecto importante sobre el mismo.

Acortado: Desmopresin, eritropoyetina. La administración oral de estrógenos

conjugados puede disminuir el tiempo de sangrado y mejorar el sangrado
clínico en pacientes con falla renal.

 Determinación de Monotest

1. Dejar los reactivos por 30 min. a temperatura ambiente. Colocar 50 ul de

muestra en un círculo de la tarjeta desechable, y 50 ul del control deseado en
otro.

2. Agitar suavemente el reactivo de látex y añadir una gota (50ul) en cada círculo
junto a la muestra que se va a analizar. Mezclar ambas gotas con un palillo,
cubriendo toda la superficie del círculo.

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3. Rotar en forma manual la tarjeta desechable, con movimiento circular durante

3 minutos y observar la presencia o ausencia de aglutinación.

4. Interpretación de resultados:
 Reacción positiva: Presencia de aglutinación.
 Reacción negativa: Ausencia de aglutinación, suspensión uniforme.

5. Registrar en la orden de trabajo el resultado obtenido. Validar el resultado.

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Microhematocrito:

Muestra: Sangre con EDTA como anticoagulante.

Materiales: Capilares heparinizados, plasticina, Microcentrífuga, Lector de
microhematocrito.
1. Verificar que la muestra no presente microcoágulos y homogeneizar la
muestra por 3 minutos.
2. Llenar el capilar heparinizado hasta sus ¾ partes y sellar por un extremo con
plasticina.
3. Colocar en la microcentrífuga con la plasticina hacia afuera, equilibrando con
otro capilar de hematocrito. Cerrar girando la tapa atornillada.
4. Centrifugar por 3 minutos a 12.000 rpm.
5. Leer el hematocrito en el lector manual de hematocrito, colocando el capilar en
la ranura del lector, desplazándolo para dejar la interfase hematíes-plasticina
en la línea 0 del lector y el menisco de la columna de plasma en la línea 100.
Desplazar la regla para interceptar la interfase hematíes-plasma y leer en la
escala de la derecha el valor correspondiente al hematocrito.

10
0
Capilar en
la ranura Zona de
del lector lectura

6. Informar el resultado y validarlo en el sistema informático.

7. Valor de referencia:
Sexo Edad Bajo Alto
Menos de 31 días 40 64
Hasta 14 años 11 meses 36 44
Femenino Más de 15 años 36 47
Masculino Más de 15 años 40 54

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1.3 TINCIONES:

 TINCIÓN MAY-GRUNWALD GIEMSA

1. La tinción se puede realizar en forma horizontal o vertical (Coplin)
2. Cubrir el frotis con solución May-Grunwald por 5 minutos
3. Eliminar colorante y cubrir frotis con buffer (tampón) fosfato PH 6.8-7.0, por 2
minutos.
4. Estilar buffer y cubrir frotis con solución Giemsa diluída al 10% por 10
minutos.
5. Realizar lavado con agua potable, hasta que el agua salga clara.
6. Dejar secar a temperatura ambiente en soporte de secado.

 TINCION RÁPIDA DE FROTIS

1. Tomar por los bordes un frotis seco y sumergirlo 5 veces seguidas en la solución
fijadora Nº 1 (metanol).
2. Estilar brevemente sobre toalla de papel y sumergir 3 veces seguidas en la
solución Nº 2 (reactivo de coloración rojo: eosina amarilla).
3. Estilar brevemente sobre toalla de papel y sumergir 6 veces seguidas en la
solución Nº 3 (reactivo de coloración azul: azur B).
4. Lavar con agua corriente y dejar secar a temperatura ambiente sobre toalla de
papel absorbente.
5. Resultado de la tinción:
a) Núcleos: rojo a violeta
b) Linfocitos: plasma azul
c) Monocitos: Plasma mayoritariamente azul paloma
d) Neutrófilos: Gránulos violeta claro
e) Eosinófilos: Gránulos rojo ladrillo a pardo rojizo
f) Basófilos: Gránulos violeta oscuro a negro
g) Plaquetas: Violeta

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h) Eritrocitos: Rojizo

 TINCION PARA RETICULOCITOS

1. Mezclar en proporciones iguales sangre con EDTA como anticoagulante y la

solución azul cresil brillante (2 gotas de sangre más 2 gotas de la solución).
Tener precaución de no tomar tinción del fondo del frasco.

2. Si el hematocrito es menor a 30 % mezclar en proporción de 2 gotas de

sangre por 1 gota de la solución de azul de cresil brillante.

3. Si el hematocrito es menor a 20 % mezclar en proporción de 3 gotas de

sangre por 1 gota de la solución de azul de cresil brillante.

4. Incubar a Baño María a 37º C por 15 minutos.

5. Retirar del Baño María y mezclar la muestra suavemente, depositar una gota
en el extremo de un portaobjetos y con un cubreobjetos realizar un extendido.

6. Dejar secar al aire e identificar anotando el número de folio y primer apellido

del paciente con lápiz grafito en la parte gruesa del frotis.

 Dilución manual de plaquetas

1. Identificar un tubo Kahn con el código de barras correspondiente.

2. Homogeneizar la muestra y hacer una dilución en proporción 1: 10, colocar
900 µl de suero fisiológico 0.9% + 100 µl de muestra. Mezclar.
3. Realizar el recuento de plaquetas por el modo secundario (según manual
equipo), identificando la muestra sólo con las iniciales del paciente y
multiplicar el resultado por 10 (dilución).
4. Registrar el resultado obtenido en el informe entregado por el equipo.
5. Ingresar el resultado en forma manual al sistema informático y validar.

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ANEXOS:

1. Cálculo de constantes hematológicas:

Hto x 1000
VCM
Rcto G. Rojos (x10¹²)
Hb (g/L)
CHCM
Hto (1/L)
Hb (g)
HCM
Rcto G. Rojos (x10¹²)

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Rangos de referencia hematológicos:

CONSTANTES HEMATOLÓGICAS
5 -14 MASCULINO FEMENINO
0 – 4 AÑOS UNIDAD
AÑOS ADULTO ADULTO

VCM 73 -85 77 - 89 80 - 96 80 - 96 fl

HCM 28 - 33 28 - 33 28 - 33 28 - 33 pg

CHCM 31 – 36 31 – 36 31 – 36 31 – 36 g/dl

VHS Hasta 15 Hasta 15 Hasta 15 Hasta 20 mm/hr

RETICULOCITOS 0.5 – 1.5 0.5 – 1.5 0.5 – 1.5 0.5 – 1.5 0.5 – 1.5

VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO ADULTOS:

VCM: 80.0 – 96.0 fl

MACROCITOSIS MICROCITOSIS

+ 96.1 – 102.0 + 75.0 – 79.9

++ 102.1 – 120.0 ++ 70.0 – 74.9

+++ MAYOR DE 120.1 +++ MENOR DE 69.9

VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO NIÑOS ENTRE 5 Y 14 AÑOS

VCM: 77.0 – 89.0 fl

MACROCITOSIS MICROCITOSIS

+ 89.1 – 96.0 + 72.0 – 76.9

++ 96.1 – 103.0 ++ 67.0 – 71.9

+++ MAYOR DE 103.1 +++ MENOR DE 66.9

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VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO NIÑOS ENTRE 0 Y 4 AÑOS

VCM: 73.0 – 85.0 fl

MACROCITOSIS MICROCITOSIS

+ 85.1 – 92.0 + 68.0 – 72.9

++ 92.1 – 99.0 ++ 62.0 – 67.9

+++ MAYOR DE 99.1 +++ MENOR DE 61.9

HEMATOCRITO Y HEMOGLOBINA

HEMOGLOBINA HEMATOCRITO
SEXO EDAD
Bajo Alto Bajo Alto

Menos de 31 días 12 19 40 64

Hasta 14 años 11 meses 12 15 36 44

Femenino Más de 15 años 12 16 36 47

Masculino Más de 15 años 13.5 18 40 54

NORMOCROMIA: 31.0 – 36.0 CHCM

HIPOCROMIA

+ 30.9 – 29.5

++ 29.4 – 28.0

+++ MENOR DE 27.9

FORMACION DE ROULEAUX

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NORMAL: 1-20 mm/hora

ROULEAUX

+ 40 - 60

++ 61 - 89

+++ MAYOR DE 90

RECUENTO DE LEUCOCITOS

RANGO DE REFERENCIA
EDAD UNIDADES
BAJO ALTO

Menos de 31 días 15 25 x 10³

Hasta 4 años 11 meses 4.5 14 x 10³

Más de 5 años 4.5 12 x 10³

EQUIVALENCIA ENTRE CRUCES Y CANTIDAD

Recomendación consensuada

+ 0 a 4 por campo

++ 5 a 9 por campo

+++ 10 más por campo

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3.Clasificación serie roja según tamaño, forma y color.

CLASIFICACION SERIE ROJA

TAMAÑO CONSENSO ANTES

NORMAL NORMOCITOS
MICROCITOSIS
ANISOCITOSIS
MACROCITOSIS
FORMA
ACANTOCITOS ESPICULADO
CODOCITOS DIANOCITOS, TARGET CELL
QUERATOCITOS CELULAS EN CASCO
DACRIOCITOS CELULAS EN LÁGRIMA
DREPANOCITOS FALCIFORMES, SICKLE CELL
ELIPTOCITOS
POIQUILOCITOSIS
OVALOCITOS
ESQUISTOCITOS ESQUIZOCITOS
EQUINOCITO CRENOCITOS
ESFEROCITOS
ESTOMATOCITOS
MEGALOCITOS MACROOVALOCITOS
CROMIA
NORMAL NORMOCROMO
HIPOCROMO
ANORMAL ANISOCROMIA
POLICROMATOFILIA

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2. Test de sangría de IVY:

Rango de referencia: Pediátrico: 1.30 – 9.00 minutos

Adulto: 2.00 – 8.00 minutos

3. Preparación de reactivos:

 CITRATO DE SODIO AL 3.8%

Citrato trisódico 3,8 grs.
Agua destilada 100 ml
Disolver la solución y guardar refrigerado en bidón de plástico. La aparición
de turbidez debe hacer rechazar la solución.

 TINCION PARA RETICULOCITOS

20 ml de solución de citrato de sodio al 3,8 %
80 ml de cloruro de sodio al 0,9 %
Mezclar bien.
Azul de cresil brillante 1,0 grs.
Disolver el colorante en la solución salina. Filtrar y dejar en frasco color ámbar
a temperatura ambiente sin volver a mezclar para evitar que el precipitado se
resuspenda.

 SOLUCION HAYEM II
Azul de metileno 0,25 grs.
Acido acético glacial 5,0 ml
Agua destilada csp. 100 ml
Disolver la solución y guardar refrigerada en frasco de vidrio.
 SOLUCION FIJADORA DE TINCION RAPIDA
Metanol 500 ml agregar 3 gotas de tinción para reticulocitos. Mezclar.

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 REACTIVO PARA TINCION DE CUERPOS DE HEINZ

Azul de cresil brillante 1 gr
Suero fisiológico 100 ml
Citrato de sodio 400 ml
Disolver el azul de cresil brillante en suero fisiológico, luego agregar el citrato
de sodio y filtrar. Guardar en frasco color ámbar.

4. Pauta para realizar frotis a Hemogramas:

El frotis se debe realizar a todo hemograma que cumpla alguno de los siguientes
criterios:
1. Paciente menor de un año de edad
2. Paciente hematológico y/o oncológico por solicitud del especialista tratante.
3. A solicitud del Tecnólogo Médico.
4. A solicitud orden médica.
5. Si el resultado del hemograma tiene:

Parámetro Valor
Hemoglobina ≤11,5 ≥ 18 g/dl
Rcto de Leucocitos ≤3,5 ≥ 15,0 x 103
Rcto de Plaquetas ≤150 ≥ 450 x 103
Rcto. Absoluto de Neutrófilos ≤0,5 x 10 3
Rcto. Absoluto de Linfocitos ≥ 5,0 x 103
Rcto. Absoluto de Eosinófilos ≥0,8 x 103

5. Pautas de manejo de muestras:

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 Si el hematocrito es igual o inferior a 20 % realizar microhematocrito.

 Si el hematocrito es igual o inferior a 25 % realizar VHS manual.
 Si el Recuento de Plaquetas es muy alto (++++) diluir la muestra.
 Si las plaquetas se observan aglutinadas al frotis y el paciente además tiene
muestra para exámenes de coagulación, se procesa el tubo con citrato en el
contador hematológico y el resultado se multiplica por 1,1 (dilución)
 Si los glóbulos rojos se observan como roseta, o presenta formación de
rouleaux abundante y la VHS está normal, la muestra es sugerente de
presentar crioaglutininas por lo tanto se debe procesar nuevamente a 37º C,
teniendo la precaución de mantener todo el material a usar a esa temperatura.
 Si en la impresión del equipo no aparece el recuento de plaquetas o el
recuento de leucocitos se deben revisar los recuentos parciales del equipo y el
profesional al mirar el frotis verificará el valor real.
 Si en la impresión del equipo aparecen dos valores para el recuento de
leucocitos realizar frotis.
 Si en la impresión del equipo no aparece el resultado del diferencial realizar
frotis.

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6. Inducción Tecnólogos médicos en la sección :

Nombre Fecha
Si No Otros
Conocer áreas de trabajo y equipos de la sección.
Conocer y aplicar procedimientos de la unidad.
Revisar, enumerar y proceso primario de muestras
hematológicas.
Conocer las no conformidades y solicitar nueva muestra.
Conocer protocolo de valores críticos.
Realización y tinción de frotis sanguíneos.
Realizar recuento de Reticulocitos.
Realizar recuento de Plaquetas.
Cargar muestras en Equipo de Sedimentación.
Cargar muestras en Contador Hematológico.
Leer hemogramas normales y patológicos.
Revisar y validar resultados de exámenes en sistema
informático.
Conocer funcionamiento de equipos y mantención primaria
de ellos.
Pasar controles en contador hematológico y revisarlos.
Manejar protocolos de trabajo de la sección según
parámetros establecidos.

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Coagulación:
Nombre Fecha
Si No Regular
Conocer áreas de trabajo y equipos de la sección.
Revisar, centrifugación y proceso primario de muestras para
coagulación.
Conocer las no conformidades y solicitar nueva muestra.
Conocer protocolo de valores críticos.
Cargar muestras en equipo de coagulación, revisar curvas de
reacción e informar resultados en sistema informático.
Preparar reactivos si se necesitan.
Procesar y analizar controles de calidad.
Manejar protocolos de trabajo de la sección según
parámetros establecidos.
Conocer funcionamiento de equipos y mantención primaria
de ellos.
Tiempo estimado de orientación:

OBSERVACIONES
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
__________________________________________________________

Evaluación:

Evaluadores:

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REGISTROS

HOJA DE REGISTRO DE MANTENCION DIARIA DIRUI BF-6800

MES/AÑO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31

INICIALIZACION

VERIFICAR NIVELES DE
REACTIVOS

CEBADO

LAVADO CON CLORO

PASAR 3 NIVELES DE
CONTROLES

RESPONSABLE
NE
IO
AC
RV
S BSE
O

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REFERENCIAS
 Técnicas y procedimientos de Laboratorio Hematología. Guido Osorio Solis.
 Manual of clinical Hematology. Joseph J. Mazza. Second edition.
 Hematología sin microscopio. José Luis Gil. 2° edición.
 Insertos de reactivos y manuales de equipos.

REVISIONES Y MODIFICACIONES:

Rev. No Cambio Fecha Aprobado por:

0 Creación Junio 2013 Dra. Doris Vera

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