“Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

Práctica de Laboratorio N°09

Alumna: Hurtado Díaz, Marita Verónica

Docente: Cecilia Bardales Vásquez
Curso: Bioquímica y Nutrición Humana
NRC: 8008
 SEMANA N° 9
LABORATORIO N° 8
DEMOSTRACIÓN EXPERIMENTAL DEL METABOLISMO DEL
GLUCÓGENO EN EL HÍGADO
INTRODUCCIÓN
La glucosa se almacena en el hígado como glucógeno en el período postprandial bajo
la acción de la insulina que incrementa su síntesis (glucogénesis) por activación de la
glucógeno sintasa. En el ayuno el glucagón aumenta la degradación del glucógeno
(glucogenolisis) vía AMP cíclico activando la fosforilasa cinasa y fosforilasa, y la
glucosa es liberada a la sangre gracias a la glucosa 6 fosfatasa a fin de que los tejidos
que necesitan glucosa como el cerebro y hematíes puedan utilizarla. El hígado
acumula glucógeno hasta 5% de su peso haciendo un total promedio de 90 gramos. El
objetivo de esta práctica es demostrar la presencia de glucógeno en el hígado y su
variación con el tiempo.
MATERIALES Y REACTIVOS
● Lugol 1 :30
● Solución Krebs
● Ácido tricloroacético TCA 5 %
● Reactivo de Fehling
● Cobayo
● Pinza
● Centrífuga
● Baño maría
PROCEDIMIENTO
Sacrificar un cobayo. Extraer el hígado y colocarlo en trozos de 1 cm
aproximadamente en un Petri con suero fisiológico a O°C
1. Marcar tres tubos de ensayo con 0 min, 30 min y 60 min, colocar en cada uno de
ellos 3 ml de solución de Krebs y colocar 3 a 4 cortes de hígado en cada tubo
2. Extraer de inmediato los cortes de hígado del tubo 0 minutos y colocarlo en un
mortero con 4 ml de ácido tricloroacético. Molerlos bien y centrifugar por 5 minutos a
3500 rpm. El sobrenadante pasarlo a un tubo marcado como SN- 0. Conservar el
líquido de incubación en un tubo marcado con LI-0 para determinar la glucosa en él.
3. A los 30 y 60 minutos de incubación, repetir el procedimiento con los cortes de
hígado a los tubos30min. Y 60min. Respectivamente. Marcar los tubos como SN-30 y
SN-60
4. Para determinar el glucógeno armar el siguiente sistema:
Agitar los tubos. Observar la coloración de los tubos y anotar la turbidez como mayor
presencia de glucógeno.
5. Para determinar la glucosa rotular armar el siguiente sistema:

Empleando pinzas colocar por 3 minutos al mechero o en baño de agua de agua

hirviente. Observar el cambio de color y la precipitación de precipitado de color rojo en
cada tubo.
RESULTADOS

INTERPRETACIÓN
Los tubos de ensayo en los cuales el reactivo de Fehling actuó denota los siguientes
resultados:
- En el primer tubo el cual el tiempo es de 0 min hay una poca cantidad de ladrillo,
porque él hay poca presencia de glucosa. Esto se debe a que no se realizó la
glucogénesis. Mientras que en el primer tubo con Lugol hay una coloración morada
intensa que determina la mayor cantidad de glucógeno.
- En el segundo tubo de líquido de incubación, teniendo 30 min, cuando se aplica el
reactivo de fehling se observa una mayor cantidad de color rojo ladrillo, por lo que
demuestra que hay una mayor concentración de glucosa y se realizó mayor proceso
de glucólisis. Mientras que en la reacción con lugol se observa un ligero aclaramiento
a diferencia del primer tubo, indicando menor presencia de glucógeno.
- En el tercer tubo en la reacción de fehling se observó una coloración rojiza ladrillo
casi completa lo cual indica que hay una gran cantidad de glucosa, por lo que hubo
1hora para realizar glucólisis. Mientras que en la reacción con Lugol una coloración
violeta claro indicando las bajas cantidades de glucógeno.
- Dado los resultados se nos da a entender que a mayor tiempo sometido el líquido de
incubación a los pedazos de hígado, este produce la vía de la glucogenólisis. Por eso
cuando se tuvo una interacción prolongada en el tercer tubo se observó que se
encontraban bajas cantidades de glucógeno.
 CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es la estructura del glucógeno y cuál es su función?

La glucosa es la fuente principal de combustible para nuestras células. Cuando el
cuerpo no necesita usar la glucosa para generar energía, la almacena en el hígado y
los músculos. Esta forma almacenada de glucosa se compone de varias moléculas
conectadas entre sí y se llama “glucógeno”. El glucógeno es el polisacárido de reserva
energética en los animales, y se almacena en el hígado (10% de la masa hepática) y
en los músculos (1% de la masa muscular) de los vertebrados. Además, pueden
encontrarse pequeñas cantidades de glucógeno en ciertas células gliales del cerebro.
Cuando el organismo o la célula requieren de un aporte energético de emergencia,
como en los casos de tensión o alerta, el glucógeno se degrada nuevamente a
glucosa, que queda disponible para el metabolismo energético

2. ¿Qué cambios sufre el metabolismo del glucógeno en el ayuno y estado

postprandial? Haga un esquema
Cuando se realiza el ayuno, la glucogenólisis es la vía principal que mantiene a la
glicemia y a medida que el ayuno se aplaza, las reservas hepáticas de glucógeno se
van agotando por lo que la gluconeogénesis a partir de lactato y alanina va a continuar
recuperando glucosa que previamente se había convertido en lactato y alanina en
los tejidos periféricos.
3. ¿Cómo se regula la glucogénesis? Haga un esquema
La regulación de la gluconeogénesis es crucial para muchas funciones fisiológicas,
pero sobre todo para el funcionamiento adecuado del tejido nervioso. El flujo a través
de la ruta debe aumentar o disminuir, en función del lactato producido por los
músculos, de la glucosa procedente de la alimentación, o de otros precursores
gluconeogénicos.
La gluconeogénesis está controlada en gran parte por la alimentación. Los animales
que ingieren abundantes hidratos de carbono presentan tasas bajas de
gluconeogénesis, mientras que los animales en ayunas o los que ingieren pocos
hidratos de carbono presentan un flujo elevado a través de esta ruta.
Dado que la gluconeogénesis sintetiza glucosa y la glucólisis la cataboliza, es evidente
que la gluconeogénesis y la glucólisis deben controlarse de manera recíproca. En
otras palabras, las condiciones intracelulares que activan una ruta tienden a inhibir la
otra.
Regulación por los niveles de energía
La fructosa 1,6-bisfosfatasa es inhibida por concentraciones altas de AMP, asociadas
con un estado energéticamente pobre. Es decir, la elevada concentración de AMP y
reducida de ATP inhibe la gluconeogénesis
Regulación por fructosa 2,6-bisfosfato
La fructosa 1,6-bisfosfatasa es inhibida por la fructosa 2,6-bisfosfato, un modulador
alostérico cuya concentración viene determinada por la concentración circulante en
sangre de glucagón; la fructosa 1,6-bisfosfatasa está presente tanto en el hígado
como en los riñones.
Regulación de la fosforilación
Este proceso es dependiente de la concentración de ATP; al disminuir la
concentración de ATP, la fosforilación también se observa disminuida y viceversa. En
el hígado, este proceso aumenta al aumentar la síntesis de glucocinasa, proceso que
es promovido por la insulina. La membrana de los hepatocitos es muy permeable a la
glucosa, en el músculo y el tejido adiposo la insulina actúa sobre la membrana para
hacerla permeable a ella.
Regulación alostérica
El ayuno prolongado aumenta el acetil-CoA y este estimula la piruvato carboxilasa y
por lo tanto la gluconeogénesis, a mismo tiempo que inhibe la Piruvato
Deshidrogenasa; la elevación de alanina y glutamina estimulan la
gluconeogénesis. El cortisol aumenta la disponibilidad de sustrato y la fructosa 2,6-
bisfosfato inhibe a la fructosa 1,6-bisfosfatasa.
4. ¿Cómo se regula la glucogenólisis? Haga un esquema
La regulación se realiza a través de enzimas interconvertibles:

- Glucogenólisis → Glucógeno fosforilasa (degrada)

La glucógeno fosforilasa es la enzima reguladora y es regulada por dos caminos:

Regulación por modificación covalente: Reversible por fosforilación-desfosforilación
como respuesta a la acción hormonal que desencadena una cascada de
fosforilaciones que acaba fosforilando a la fosfatasa.
Regulación alostérica por metabolitos: En el músculo el AMP activa a la fosforilasa
b y en el hígado la glucosa provoca un efecto desactivador.
5. ¿Cuáles son las semejanzas y diferencias del metabolismo del glucógeno
hepático y muscular?

6. Haga un cuadro con las principales glucogenosis.

DISCUSIÓN
1. En el estado de ayuno, la vía principal que mantiene la glucemia es la
glucogenólisis hepática, esta es activada como respuesta de una demanda de
glucosa en sangre ya sea por utilización en el estado postabsortivo o debido al
aumento de glucosa como respuesta al estrés.
2. La glucoquinasa funciona únicamente en el hígado a niveles elevados de
glucosa y con un Km disminuido; mientras que la Hexoquinasa funciona en el
músculo a niveles bajos de glucosa.

CONCLUSIONES
1. Las glucogenosis, son un grupo de enfermedades hereditarias, que
afectan el metabolismo del glucógeno, bien sea a su degradación
para transformarse en glucosa, o en su síntesis, que puede resultar
escasa o anómala. Entre ellas encontramos a las más conocidas: La
enfermedad de Pompe (tipo II), la enfermedad de Forbes (tipo III), enfermedad
de Andersen (tipo IV), entre otras.
2. En una situación de ayuno prolongado existe mucho glucagón y poca glucosa.
De forma que, el glucagón estimula a la proteína kinasa A por medio del AMP
cíclico.
3. La gluconeogénesis es necesaria para mantener la glucemia durante el ayuno
y la inanición. A diferencia de la glucogenólisis, que puede responder
rápidamente al estímulo hormonal, la gluconeogénesis es una respuesta más
lenta que depende de cambios en la expresión génica y que alcanza una
actividad máxima en un periodo de horas. La gluconeogénesis requiere una
fuente de energía para la biosíntesis y una fuente de carbonos para la
formación del esqueleto de la molécula de glucosa.
La energía es proporcionada por el metabolismo de los ácidos grasos liberados
por el tejido adiposo.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

- Martin E, Simulador y demostración experimental del metabolismo del

glucógeno en el hígado, Bioquímica y nutrición humana, Perú 2021.
- RodwellV, Bender D, Botham K, Kennelly P, Weil P.Harper. Bioquímica
Ilustrada, 31 ed, 2018, 185-194
- Kasper D , Fauci A, Hauser S, Longo D, Jameson L, Loscalzo J. Ed,
Harrison, Principios de Medicina Interna, Ed19 ed, 2016, McGraw Hill
Interamericana Ed, Mexico, pg 2399-242