N° del

Informe de Resultados de aplicación de la Guía de Prácticas Reporte

3

Datos Generales

NOMBRE DE LA Reacción en cadena de la polimerasa

PRÁCTICA

FACULTAD FACI CARRERA Biotecnología ASIGNATURA Ingeniería genética

PROFESOR DE María Fernanda Garcés AMBIENTE O Virtual

PRÁCTICA LABORATORIO
TIEMPO ASIGNADO 1 hora Tipo APE
UNIDAD: 1y2 TEMAS: PCR
FECHA DE INICIO 21/06/2023 FECHA FIN 28/06/2023

Individual
TIPO DE PRÁCTICA CANTIDAD DE
3
(Marque la opción) ESTUDIANTES
Grupal X

NOMBRE DEL O LOS ESTUDIANTES:

1. STEFANNY CAMINO 2. TITO RODRIGUEZ
3. WALTER ROCHINA

Desarrollo de la Práctica
Introducción.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) es una técnica
revolucionaria en el campo de la biología molecular que ha desempeñado un papel
fundamental en diversas áreas de la ciencia y la medicina. esta técnica implica el uso de
fragmentos cortos de ADN sintético, denominados cebadores, para seleccionar un segmento
del genoma que se amplificará, y luego múltiples sesiones de síntesis de ADN para
amplificar ese segmento (Reacción en cadena de la polimerasa (PCR), s/f), lo que ha tenido
un impacto significativo en la investigación, el diagnóstico de enfermedades y la medicina
forense.
La reacción en cadena de la polimerasa es una reacción enzimática in vitro que amplifica
millones de veces una secuencia específica de ADN durante varios ciclos repetidos en los
que la secuencia blanco es copiada fielmente (En et al., s/f). Con esta tecnología, los
profesionales de la salud pueden detectar con mayor precisión y rapidez la presencia de
enfermedades infecciosas, genéticas y virales. La PCR ha hecho que la detección temprana
de enfermedades como el VIH, el cáncer y los trastornos genéticos sea más fácil y eficaz.
Además, esta tecnología es fundamental para identificar nuevos patógenos como el
SARS-CoV-2, lo que permite un diagnóstico rápido y ayuda a contener los brotes. Además
de tener diferentes métodos o aplicaciones en función de lo que nos interese investigar
como son : PCRs para la amplificación de un solo sitio conocido del genoma o PCRs en los
que no es necesario conocer la región que se está amplificando (Asuar, s/f).

Objetivo general.
Determinar los pasos para realizar una PCR para poder tener una mejor comprensión de la
técnica molecular
Objetivo específico.
Analizar cómo se da la amplificación del fragmento de ADN de interés de la muestra.

Materiales

REACTIVOS DESCRIPCIÓN MATERIALES DESCRIPCIÓN

Primers Secuencia corta de Micropipetas Permite medir y

adn que se Adjunta a transferir con
cualquiera de los precisión
extremos de un cantidades muy
objetivo pequeñas de
líquido.

Taq Polimerasa: ADN polimerasa Puntas para PCR Las puntas de

termoestable que plástico encajan en
copiará el ADN de el extremo de la
cualquier especie. micropipeta

Nucleótidos Bloques de Termociclador Es un dispositivo

construcción de ADN programable donde
Debe agregar los 4 se lleva a cabo el
tipos de nucleótidos: ciclo de
A, C, G y T. temperatura.

Buffers El agua, la sal y los Tubos para PCR Todos los

buffers ayudan a crear ingredientes,
las condiciones en las además de la
que el ADN muestra, van a un
polimerasa puede tubo de reacción.
funcionar.

ADN molde Muestra que se Hisopo Para recolección

amplificará de la muestra
Metodología
1. Se hizo la recolección de la muestra mediante un hisopo.
2. Procedimos a agregar la adn polimerasa en este caso una taq polimerasa
3. Agregamos los nucleótidos o dNTps
4. seguido de esto agregamos agua ,sal y buffers para imitar las condiciones dentro de
una célula.
5. Usamos el termociclador para regular el proceso a través de ciclos repetidos de
cambios de temperatura.
6. Iniciamos primer ciclo con una temperatura de 95°C ocasionando la interrupción del
emparejamiento de bases complementarias y causando el separamiento de las dos
hebras de adn
7. Se procede a bajar la temperatura a 50°C para que los primers se unan a sus
secuencias complementarias antes de que las hebras más largas puedan volver a
unirse.
8. Luego se eleva la temperatura a 72°C para activar la ADN polimerasa para que se
adhieran a los extremos de los primers emparejados para proceder a moverse a lo
largo del ADN monocatenario, añadiendo nucleótidos complementarios.
9. Se extiende hasta el final de la hebra o hasta el próximo cambio de temperatura.
10. Comenzamos el segundo ciclo repitiendo los mismos tres pasos del primer ciclo.
11. A 95°C se separan las hebras.
12. A 50°C los primers se unen a sus secuencias complementarias uniendo no sólo al
ADN diana original, sino también a los productos del ciclo 1.
13. A 72 °C, la polimerasa extiende los primers, agregando nucleótidos
complementarios a medida que avanza.
14. En el tercer ciclo se repite todo de nuevo.
15. Al finalizar el tercer ciclo recién obtenemos dos copias de nuestra secuencia de
interés.
16. finalizando el cuarto ciclo obtendremos ocho copias de la secuencia de interés.
17. así repetimos todo hasta 30 ciclos.
18. al terminar la pcr se procede a hacer el análisis de la secuencia.

Resultados

La técnica de PCR nos permite identificar la concentración de un fragmento específico del

código genético, del ADN estudiado (obtención de una célula) mediante enzimas que nos
permite hacer copias muy repetidas en ciclos para determinar una región en la secuencia de
adn específico; es decir, se agregaron secuencias que harán que se unan a cadenas opuestas
del molde de ADN sólo en los extremos de la región a copiar mediante el uso de cebadores
que flanquean la región blanco y a si unió al molde mediante complementariedad de bases.
Los resultados de la PCR se visualizan al usar electroforesis en gel, es una técnica en la que
una corriente eléctrica impulsa fragmentos de ADN a través de una matriz de gel y los
fragmentos de ADN se separan según su tamaño la cual será medida por un marcador de
peso molecular.
 En el gel que se puede identificar a simple vista si el gel se tiñe con un pigmento que se una al ADN

Adicionalmente, la PCR se utiliza en muchos laboratorios de investigación, y también tiene

aplicaciones prácticas en medicina forense, pruebas genéticas, identificación de virus,
identificación de especies, diagnósticos de enfermedades, etc.

Conclusiones
En conclusión, la (Reacción en Cadena de la Polimerasa) PCR permite amplificar y detectar
una secuencia específica de ADN de manera exponencial, lo que permite obtener una
cantidad suficiente de ADN amplificado para su posterior análisis y detección gracias a su
versatilidad y sensibilidad la convierten en una herramienta esencial en la investigación
científica en diversas aplicaciones de diagnóstico.

Discusión
La PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) es una técnica molecular que se utiliza en
varias áreas; una muy interesante es el uso de pruebas de paternidad para determinar la
relación biológica entre dos individuos ya que se basa en amplificar una región específica
del ADN mediante la aplicación de ciclos de temperatura y la utilización de enzimas y
cebadores específicos. Esta técnica permite obtener una gran cantidad de copias exactas de
la región de interés en el ADN y, posteriormente, analizarla para detectar similitudes o
diferencias entre los individuos.
En la prueba de paternidad, se toman muestras biológicas (por lo general, sangre o saliva)
del presunto padre o madre y del hijo. Se extrae el ADN de cada muestra y se amplifica la
región específica de interés mediante la PCR. Luego, se compara la secuencia del ADN
amplificado del hijo con el de los presuntos padres para determinar si existe una relación
biológica entre ellos.
La PCR en pruebas de paternidad es una técnica muy precisa y fiable, ya que permite
detectar incluso pequeñas diferencias entre el ADN de los individuos. Además, esta técnica
es rápida y fácil de llevar a cabo, lo que la hace ideal para ser utilizada en casos donde se
necesita una respuesta rápida y confiable sobre la paternidad. Es esencial considerar la
necesidad de un enfoque sensible y respetuoso hacia todas las partes interesadas,
especialmente cuando se trata de revelar información que puede tener un impacto duradero.
Pero también establecer protocolos y regulaciones claras en relación con el uso de las
pruebas de paternidad mediante PCR, es decir, buscar un equilibrio entre el derecho de los
individuos a conocer su identidad biológica y los posibles efectos negativos que pueden
surgir de la revelación de esta información.
En sí, la PCR es una técnica esencial en las pruebas de paternidad y ha revolucionado la
forma en que se realiza la identificación de la paternidad.

Bibliografía
All About PCR - Beta. (s/f). [Link]. Recuperado el 29 de junio de 2023, de
[Link]

Asuar, L. E. (s/f). Guía pr áctica sobre la técnica de PCR. [Link]. Recuperado el

28 de junio de 2023, de
[Link]

En, M., Lenin, C., De, T., Avenida, D., & Núm, M.-X. (s/f). Fundamentos de la reacción en
cadena de la polimerasa (PCR) y de la PCR en tiempo real. [Link]. Recuperado el
28 de junio de 2023, de
[Link]
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s=1687922071&Signature=GSzi3kaDOw8XzRgdpPoR8G1p3tHxk2SCpgzsiez20cAkbb9O
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 Investigación, R. (2021). Diagnóstico y tipos de PCR. Revisión bibliográfica. ▷ RSI -
Revista Sanitaria de Investigación.
[Link]
a/

Pérez, C. (2020). Qué es una PCR: cómo se hace y cómo interpretar los resultados. Muy
Interesante. [Link]

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (artículo) | Khan Academy. (s. f.). Khan
Academy.
[Link]
gy/a/polymerase-chain-reaction-pcr

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). (s/f). [Link]. Recuperado el 28 de junio

de 2023, de
[Link]

Anexos

Responda las siguientes preguntas:

a) Cuánto ADN se necesita para realizar una PCR.

En una PCR convencional, que utiliza ADN genómico como plantilla, se suelen
recomendar concentraciones de ADN en el rango de 10 a 100 ng (nanogramos) por
reacción. Esto puede corresponder a alrededor de 1.000 a 10.000 copias del genoma
objetivo.

b) ¿Se puede realizar PCR en ARN? Explique su respuesta

Sí, se puede realizar PCR en ARN. Para que las pruebas de PCR funcionen con ARN,
primero hay que convertir el ARN en ADN. El ARN del virus que se extrae de la muestra
se purifica y se mezcla con una enzima llamada transcriptasa inversa, que convierte el ARN
de una sola cadena en ADN de doble cadena.

c) Existen diferentes tipos de PCR, indique ¿cuáles son y en qué consisten

PCR anidada: consigue amplificar muestras mínimas de ADN a miles de millones de
fragmentos. Es capaz por lo tanto de detectar trazos minúsculos.
PCR in situ: permite la detección de ADN en el mismo lugar de la muestra, sin tener que
procesarla primero con técnicas de laboratorio. Se suele utilizar para biopsias o raspados de
células.
PCR múltiple: con este tipo de PCR se consiguen detectar varios trazos de ADN a la vez y
con una sola muestra.