UNIVERSIDAD PRIVADA DE HUANCAYO “FRANKLIN
ROOSEVELT”
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
IDENTIFICACIÓN DE AMINOACIDOS
Docente:
Semestre: IV Flexible
Integrantes: Suazo Maldonado Lioshvi
HUANCAYO-PERÚ
2023
IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS
I. OBJETIVOS:
Seleccionar pruebas de laboratorio que permitan el estudio de las
propiedades fisicoquímicas de aminoácidos y proteínas, además de su
identificación.
Utilizar técnicas analíticas que permitan la identificación de aminoácidos
en general, aminoácidos específicos y proteínas, en cualquier espécimen
biológico.
II. MARCO TEÓRICO
2.1. Reacción de Ninhidrina
Tiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de aminoácidos
libres. Los aminoácidos, en general reaccionan con la ninhidrina (hidrato de
hicelohidrandeno) cuando son calentados con un exceso de la misma.
Todos los aminoácidos que poseen un grupo amino libre reaccionan y
forman dióxido de carbono, amoníaco y un aldehído que contiene un átomo
de carbono menos que el compuesto original. Esta reacción da lugar a la
formación de un producto color azul o púrpura (que posteriormente puede
ser utilizado para cuantificar el aminoácido). En el caso de la prolina, que
estructuralmente no posee el grupo amino libre, sino un grupo imino, la
coloración final es amarilla. El amoníaco, la mayoría de los polipéptidos y
las proteínas pueden desarrollar coloración en esta reacción, pero a
diferencia de los aminoácidos, no liberan CO2 1.
2.2. Reacción Biuret
El Reactivo de Biuret indica la presencia de proteínas, péptidos cortos y
otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de
composición desconocida2.
Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto
con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo cambia a
violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con
polipéptidos de cadena corta. El hidróxido de potasio no participa en la
reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga
lugar3.
Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que
permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante
espectroscopía ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm (para
detectar el ion Cu2+)2..
2.3 Reacción del Millón
La reacción del Millón se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la
molécula proteica. Cualquier compuesto fenólico que no esté sustituido en
la posición 3,5 como la tirosina, el fenol y el timol producen resultados
positivos en esta reacción. De estos compuestos, sólo la tirosina está
presente en las proteínas, de manera que sólo las proteínas que tienen
este aminoácido ofrecen resultados positivos3.
En esta prueba los compuestos mercúricos en medio fuertemente ácido
(ácido nítrico del reactivo) se condensan con el grupo fenólico formando un
compuesto de color rojo ladrillo o rojizo. La prueba no es satisfactoria para
soluciones que contienen sales inorgánicas en gran cantidad, ya que el
mercurio del reactivo del Millón es precipitado y se vuelve negativo, razón
por la cual este reactivo no se usa para medir albúmina en orina 3.
Debe tomarse en cuenta que en el caso de que la solución a examinar sea
muy
alcalina, debe ser previamente neutralizada, ya que el álcali precipitaría al
ion mercurio en forma de óxidos amarillos. Además, proteínas como la
ovoalbúmina producen un precipitado blanco que progresivamente por
acción del calor se torna rojo; pero, las peptonas, dan solamente una
solución de color rojo4.
III. REACTIVOS:
Ninhidrina 0.3%etanOIic0
Ácido nítrico concentrado
Hidróxido de sodio 10%
Hidróxido de sodio
Reactivo de Millon
Sulfato de cobre 1%
Reactivo de biuret
Ácido nítrico 2M
Sulfato de mercurio
Tirosina
Gelatina
Clara de huevo (albumina)
IV. MATERIALES:
Matraz Erlenmeyer de 250 ml
Papel filtro
Vasos de precipitado de 100 y 250 Ml
Espátulas
Pinzas para tubos de ensayo
Lunas de reloj
Probetas de 50 y 100 Ml
Embudo de vidrio
Tubos de ensayo
Balanza analítica
Mechero Bunsen
Cocinilla eléctrica de plancha
V. PROCEDIMIENTO:
Reacciones de caracterización de las proteínas.
1. Desnaturalización de proteínas:
Disponer 4 tubos de prueba y adicionar a cada uno de ellos 2ml de
solución de albumina luego al:
Tubo 1: Someterlo a calentamiento en baño maría, observando la
temperatura aproximada a la que se coagula la solución.
Tubo 2: Adicionar 2ml de alcohol etílico.
Tubo 3: Adicionar gotas de HCl.
Tubo 4: Adicionar de 1ml de una solución concentrada de Na OH observar
observar y anotar.
2. REACCIONES DE COLORACION:
a) Reacción de Biuret:
En un tubo de prueba deposita 2ml de solución de albumina, adicionar 1ml
de una solución de NaOH al 10% y luego añadir una gota de Cu
SO4(sulfato de cobre) al 1%.
b) Reacción de Formaldehido:
En un tubo de ensayo depositar 2ml de solución de albumina y adicionar
una gota de formaldehido diluido, adicionar luego en zona con mucho
cuidado 0.5 ml de H2SO4
c) Reacción de la Ninhidrina:
En un tubo de ensayo colocar 1ml de solución de albumina adicionar
gotas de una solución acuosa de ninhidrina calentar la mezcla a ebullición
por 5 min dejar enfriar.
VI. DISCUSIÓN:
Mientras tanto, la prueba de Biuret, se llevó a cabo para identificar a
las sustancias que tuvieran proteínas, ya que en el reactivo de Biuret se producen
reacciones con los péptidos y las proteínas, pero no con los aminoácidos. Este
efecto sucede por la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al
liberarse los aminoácidos, además de que el reactivo de Biuret lleva sulfato de
cobre, el cual, en un medio alcalino, se une con los enlaces peptídicos dando así
la coloración violeta que se observó únicamente en la albúmina. La albúmina
contiene proteínas y aminoácidos, es por eso que reaccionó de manera efectiva
con este reactivo, pero con una coloración más intensa provocada por la
ninhidrina6.
La reacción de Millón es debida a la presencia del grupo
hidroxifenílico
(-C6H4OH) en la molécula proteica. El anillo fenólico tiene un
comportamiento característico frente a las sales de mercurio a pH ácido,
formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenólico de la tirosina,
dando positivo también en la albúmina.
VII. CUESTIONARIO:
Realice las ecuaciones químicas de cada reacción :
CONCLUSIÓN
El método de obtención empleado, influye directamente sobre la cuantía y
concentración de los metabolitos extraídos; de aquí la importancia de seleccionar
el método y procedimiento adecuados.
Existen diferentes pruebas para la identificación de proteínas y aminoácidos que
permiten establecer un resultado positivo o negativo de acuerdo a las
características y composición de cada una de ellas, evidenciado en coloraciones,
presencia de anillos, etc. Se establecieron las características de estas pruebas
para la identificación de dichas biomoléculas y se logró la identificación cualitativa
de sustancias que pueden contener aminoácidos, proteínas o péptidos.
BIBLIOGRAFÍA
1. Universitat Politècnica de València-UPV. Aminoácidos y proteínas:
identificación cualitativa | | UPV [Internet]. Youtube; 2011 [citado el 7 de
junio de 2023]. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?
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2. Serrano A. Preparación del Reactivo de Biuret [Internet]. Youtube; 2018
[citado el 7 de junio de 2023]. Disponible en:
https://www.youtube.com/watch?v=xPqrhgTyaUA
3. Pasteur LLL. Práctica 6 Identificación de proteínas [Internet]. Youtube;
2020 [citado el 9 de junio de 2023]. Disponible en:
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4. Beltran C. Laboratorio 4.3 Reacciones de Biuret, Denaturación y
Actividad Enzimática de la Catalasa [Internet]. Youtube; 2021 [citado el
9 de junio de 2023]. Disponible en: https://www.youtube.com/watch?
v=FKE_deprGx8
