Universidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Químicas
Carrera: Química y Farmacia
Guía de Prácticas de Laboratorio
Práctica INVESTIGACIÓN DE PRUEBAS REUMÁTICAS POR TÉCNICA AGLUTINACIÓN
#3
Estudiante: Macias Macias Aida Dayana
Objetivos de la práctica de laboratorio
1- Aprender el fundamento de la técnica de aglutinación o floculación.
2- Conocer la reacción antígeno y anticuerpo
3- Conocer la significación clínica de la prueba, que servirá como herramienta diagnóstica para
el tratamiento y curación de los pacientes afectados con la enfermedad .
Instrucciones o consideraciones previas
1. Revisar conceptos y definiciones sobre técnicas de aglutinación en reacciones química
2. Investigar sobre los reactivos a emplear.
3. Revisión e interpretación de la técnica
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Los Factores Reumatoides, grupo de anticuerpos del tipo IgM, se detectan mediante una
reacción inmunológica de aglutinación. El Reactivo látex-FR posee inmunoglobulinas IgG
humanas, absorbidas sobre las partículas de látex. Mezclando de forma directa la muestra
con el Reactivo látex-FR, la presencia de Factores Reumatoides (con capacidad anti IgG)
provocan la aglutinación de las partículas de látex, que se visualiza macroscópicamente.
TECNICAS DE AGLUTINACION
Las reacciones de aglutinación y de precipitación son la base de la mayor parte de las técnicas
inmunológicas. Su principio se basa en la reacción antígeno-anticuerpo.
. Las técnicas de aglutinación son sólo semicuantitativas y algo más difíciles. La aglutinación de los
antígenos nativos insolubles o de las partículas recubiertas por el antígeno puede evaluarse a simple
vista con o sin la ayuda del microscopio. Entre las ventajas de las reacciones de aglutinación están
su alto grado de sensibilidad y la enorme variedad de substancias identificables a través del uso de
partículas que están recubiertas por antígeno o por anticuerpo.
Según Coombs existen 3 requerimientos principales en las pruebas de aglutinación:
1. Disponibilidad de una suspensión estable de células o de partículas.
2. Presencia de uno o más antígenos cercanos a la superficie.
3. Conocimiento de que los anticuerpos "incompletos" o no aglutinables no son localizables sin
modificación (reacciones antiglobulina)
Clasificación de las reacciones de aglutinación:
Aglutinación directa
Un antígeno celular o de partículas insolubles es aglutinado directamente por el anticuerpo. Un
ejemplo de esto es la aglutinación de los eritrocitos del grupo A por antisueros antiA, la aglutinación
de los eritrocitos RH positivos por el antisuero anti-D o la aglutinación del antígeno brucelar por
anticuerpos anti-Brucella. Gran cantidad de partículas como pueden ser eritrocitos, bacterias,
hongos y virus pueden ser aglutinados por anticuerpos séricos, algunas veces de manera
inespecífica y otras muy específica, siendo ésta última, respuesta a una previa inmunización del
organismo productor de los anticuerpos séricos. Las pruebas para identificar anticuerpos específicos
son llevadas a cabo titulando seriadamente antisueros en diluciones al doble en presencia de una
cantidad constante de antígeno.
Aglutinación indirecta
Se refiere a la aglutinación de las células recubiertas de antígeno o a las partículas inertes que son
portadoras pasivas de antígenos solubles. Se tienen ejemplos de lo anterior en la utilización de
partículas de gelatina en la búsqueda de anticuerpos contra Treponema pallidum por aglutinación
pasiva (TPPA), la fijación del látex para VDRL en la sífilis y en la utilización de eritrocitos en la prueba
de hemaglutinación indirecta (HAI) en la búsqueda de anticuerpos contra Tripanosoma cruzi, agente
causal de la enfermedad de Chagas. De manera alterna, el antígeno puede ser localizado
recubriendo partículas de látex o eritrocitos con anticuerpo purificado y practicando la llamada
aglutinación inversa.
Hemaglutinación viral
Otra categoría de aglutinación que involucra la aglutinación espontánea de los eritrocitos por ciertos
virus, es la reacción de hemaglutinación viral, la cual puede inhibirse de manera específica en
presencia de anticuerpos antivirales. Por lo tanto, la hemaglutinación viral puede emplearse para
medir la cantidad de virus o para determinar, por inhibición homóloga, el título de los anticuerpos
dirigidos en contra de los virus hemaglutinantes.
Inhibición de la aglutinación
La inhibición de la aglutinación, si se arregla de manera cuidadosa con antígenos altamente
purificados, puede ser usada como un indicador sensible de la cantidad del antígeno en diversos
líquidos de los tejidos.
Hemaglutinación indirecta (pasiva)
Este tipo de aglutinación se lleva a cabo utilizando eritrocitos recubiertos de antígenos, o anticuerpos
acoplados de manera espontánea (adsorción pasiva) o mediante un acoplamiento químico,
utilizando diversas sustancias para este fin, tales como Acido tánico Bencidina bisdiazoada (BDB),
Cloruro crómico (CrCIs), Glutaraldehído, clorurocianúrico entre otros.
Prueba de factor reumatoideo (FR)
¿Qué es una prueba de factor reumatoideo (FR)?
Una prueba de factor reumatoideo (FR) busca por el
factor reumatoideo en una muestra de sangre. Los
factores reumatoideos son proteínas producidas por el
sistema inmunitario.
Normalmente, su sistema inmunitario produce
proteínas llamadas anticuerpos para atacar gérmenes
que podrían enfermarle. Sin embargo, los factores
reumatoideos son anticuerpos que en ocasiones atacan
células y tejidos sanos en su cuerpo por error. Cuando
esto ocurre, usted tiene un trastorno inmunitario.
No todos tienen factores reumatoideos en su sangre. Además, algunas personas que los tienen
están sanas. Pero, si usted tiene ciertos síntomas y niveles más altos de factores reumatoideos,
puede tener un trastorno autoinmune u otro problema de salud relacionado con niveles altos de
factores reumatoideos.
Por lo general, la prueba de factores reumatoideos se utiliza en su mayoría con otros análisis para
ayudar a diagnosticar artritis reumatoide. La artritis reumatoide es un tipo de trastorno autoinmune
que causa dolor, hinchazón y rigidez. Es una afección crónica (de larga duración) que también afecta
sus órganos y causa otros síntomas.
Pruebas de PCR
¿Qué son las pruebas de PCR?
Las pruebas de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) son una forma rápida y muy precisa de
diagnosticar ciertas enfermedades infecciosas y cambios genéticos. Las pruebas detectan el ADN
o el ARN de un patógeno (el organismo que causa una enfermedad) o células anormales en una
muestra.
El ADN es el material genético que contiene las instrucciones y la información de todos los seres
vivos
El ARN es otro tipo de material genético. Contiene información copiada del ADN e interviene en la
producción de proteínas
La mayoría de los virus y de otros patógenos contienen ADN o ARN.
A diferencia de muchas otras pruebas, las de PCR pueden encontrar signos de una enfermedad en
las fases más tempranas de la infección. Otras pruebas pueden no detectar los primeros signos de
la enfermedad porque no hay suficientes virus, bacterias o patógenos en la muestra, o porque su
organismo no ha tenido tiempo suficiente para desarrollar una respuesta de anticuerpos. Los
anticuerpos son proteínas que el sistema inmunitario produce para atacar a sustancias extrañas
como los virus y las bacterias. Las pruebas de PCR pueden detectar una enfermedad cuando hay
sólo una cantidad muy pequeña de patógenos en su cuerpo.
Durante una prueba de PCR, una pequeña cantidad de material genético de una muestra se copia
varias veces. El proceso de copia se conoce como amplificación. Si en la muestra hay patógenos,
la amplificación hace que sean mucho más fáciles de ver.
Pruebas ASO
El ASO-Látex es una técnica de aglutinación en porta
para la detección cualitativa y semicuantitativa de anti-
estreptolisina O (ASO) en suero humano. Las partículas
de látex recubiertas con estreptolisina O (SLO) son
aglutinadas por anticuerpos ASO presentes en la
muestra del paciente.
Reactivos
• Reactivo Fr látex: El FR-Látex es una técnica de
aglutinación en porta para la detección cualitativa y
semicuantitativa de factores reumatoides (FR) en suero
humano. Las partículas de látex recubiertas con gamma-
globulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra del paciente.
• Reactivo ser látex PCR: Suspensión estabilizada y tamponada de partículas de látex recubiertas
con anticuerpos específicos anti-PCR humana. Contiene 0,95g/L de azida sódica. CONTROL +
Suero humano con una concentración de PCR > 15 mg/L. Contiene 0,95 g/L de azida sódica.
CONTROL - Suero animal, con una concentración máxima de 1 mg/L de PCR humana. Contiene 0,
95 g/L de azida sódica.
• Reactivo Aso látex: Suspensión de partículas de látex cubiertas con SLO, pH, 8,2. Azida sódica
0,95 g/L, es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de
antiestreptolisina O (ASO) en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con estreptomicina
O (SLO) son aglutinadas por anticuerpos ASO presentes en la muestra del paciente.
Reactivos de laboratorio
• Reactivo A: Serolatex PCR Control positivo, negativo B.
• Reactivo Fr látex Control positivo, negativo
• Reactivo Aso látex Control positivo, negativo
• Solución Salina al 9%
Materiales de laboratorio
1.-Pipetas automáticas
2.-tubos de ensayo
3.- Puntas descartables para pipetas automáticas.
4.-Placas de plástico o vidrio de fondo negro
Equipos de laboratorio
1.-Microscopio
2.- Centrifuga
3.- Estufa
Actividades por desarrollar/ técnica operatoria.
PROCEDIMIENTO de FR Cualitativa
Mezclar cada uno de
Llevar los reactivos y Agitar el Reactivo A Colocar una gota del
los anillos con un Oscilar la placa por
las muestras a antes de usar, Servir una gota Colocarlo en el anillo control positivo en le
aplicador diferente unos minutos y
temperatura vaciando equivalelnte a 50 de una placa limpia y segundo anillo y otra
esparciendo por observar en el
ambiente antes de previamente la landas. seca. del negativo en el
todo el circulo de la microoscopio.
usar. pipeta del gotero. tercer anillo.
placa
PRUEBA PCR Cualitativa
Agregar una gota de
agregar una gota del Mezclar el
medir 0,4 ml de solucion Añadir 0,1 ml del suero control positivo en el
Preparar una disolucion suero diluido en el primer reactivo y
salina en un tubo de con una pipeta de 1ml y segundo circulo y una de
de 1,5 del suero. anillo de la placa limpia y observar en el
12*75 mezclar control negativo en el
seca. microoscopio.
tercer circulo.
Resultados obtenidos (Observaciones, cálculos, datos, ecuaciones, tablas, gráficos, figura
- Prueba FR cualitativa.- es positiva cuando este forma un halo en el pocillo que contiene
el control positivo y se observa la aglutinación que vendrían ser especies de grumos, pero
en la muestra sale negativa.
- Prueba PCR cualitativa
En el pocillo que tenemos la muestra del paciente se formó los grumos de aglutinación lo
que quiere decir que en el pocillo de control positivo también se formara dando resultado
positivo.
- Prueba PCR Semicuantitativa
En el pocillo 1y 2 se formó la aglutinación y da una PCR de 12mg/L
-
Prueba de ASO cualitativo
En el pocillo dos del control de positivo se formó un halo mientras que en la del paciente
está en negativa.
Conclusiones
- Estas pruebas son de gran importancia debido a que las reacciones de antígenos y
anticuerpos son de una gran especificidad. Debido a ello, las reacciones entre antígenos
y anticuerpos resultan adecuadas para identificar a uno por medio del otro; ésta es la
base de las pruebas serológicas.
Recomendaciones
• Contar con su mandil y guantes para trabajar en el laboratorio.
• Seguir la técnica paso a paso, empleando las debidas medidas de bioseguridad.
• Manipular los reactivos con prolijidad, para evitar su contaminación
Bibliografía
Singer, J.M.; Plotz, C.M.; Parker, E. and Elster, S.K. - Am. J. Clin. Path. 28:611 (1957). - Nilson,
L.A. - Acta Pathol. Microbiol. Scand. 73:129 (1968). - Scherffarth, F.; Pérez-Miranda, M.; Goetz, H.
- Blut. 20: 296 (197
Pruebas de PCR. (s. f.). [Link]
Prueba de factor reumatoideo (FR). (s. f.). [Link]
laboratorio/prueba-de-factor-reumatoideo-fr/
(2021). ASO-LATEX. SPINREACT. Recuperado 17 de enero de 2023, de
[Link]
