UNIVERSIDAD NACIONAL

TORIBIO RODRÍGUEZ DE MENDOZA DE AMAZONAS

FACULTAD DE INGENIERÍA Y CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGRÓNOMA

TESIS PARA OBTENER

EL TÍTULO PROFESIONAL DE INGENIERO AGRÓNOMO

TRANSPORTE Y ACUMULACIÓN DE CADMIO (Cd) EN

CINCO GENOTIPOS DE CACAO NATIVO DE LA
REGIÓN AMAZONAS

Autor: Bach. Jegnes Benjamín Meléndez Mori

Asesor : Ph.D. Juan Carlos Guerrero Abad

Co-Asesor: Dr. Segundo Manuel Oliva Cruz

Registro (…)

CHACHAPOYAS – PERÚ
2021
 DEDICATORIA

Para mis padres, su amor y su arduo trabajo

me permitieron realizar todos mis deseos.
Gracias por formarme con valores y con
algunas libertades, pero sobre todo por
motivarme siempre ha alcanzar mis metas.

A mis hermanas y sobrinos por estar siempre

presente durante todo este proceso. A toda
mi familia por sus consejos y palabras de
aliento.

Jegnes Benjamín Meléndez Mori

ii
 AGRADECIMIENTO

Este proyecto es el resultado de un largo viaje que comencé hace unos años. Por ello
quiero agradecer a mis padres, hermanas y tíos por estar siempre motivándome y
apoyándome.

Agradezco a mi asesor, co-asesor y técnicos de laboratorio por su contribución y guía

durante el desarrollo del proyecto de tesis.

Agradezco al Instituto de Investigación para el Desarrollo Sustentable de Ceja de Selva

(INDES-CES) y al Instituto de Investigación, Innovación y Desarrollo para el Sector
Agrario y Agroindustrial de la región Amazonas (IIDAA – Amazonas), por el apoyo
logístico durante la ejecución del proyecto de tesis.

Jegnes Benjamín Meléndez Mori

iii
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO RODRÍGUEZ
DE MENDOZA DE AMAZONAS

Dr. POLICARPIO CHAUCA VALQUI

RECTOR

Dr. MIGUEL ÁNGEL BARRENA GURBILLÓN

VICERRECTOR ACADÉMICO

Dra. FLOR TERESA GARCÍA HUAMÁN

VICERRECTORA DE INVESTIGACIÓN

Dr. ERICK ALDO AUQUIÑIVÍN SILVA

DECANO DE LA FACULTAD DE INGENIERÍA Y CIENCIAS AGRARIAS
iv
VISTO BUENO DEL ASESOR DE TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO
PROFESIONAL

v
VISTO BUENO DEL CO-ASESOR DE TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO
PROFESIONAL

vi
 JURADO EVALUADOR DE TESIS

______________________________________________
Mg. Santos Triunfo Leiva Espinoza
PRESIDENTE

_____________________________________________
Ing. Mg.Sc. Walter Daniel Sánchez Aguilar
SECRETARIO

_____________________________________________
Ing. Guillermo Idrogo Vásquez
VOCAL

vii
CONSTANCIA DE ORIGINALIDAD DE LA TESIS PARA OBTENER EL
TÍTULO PROFESIONAL

viii
ACTA DE SUSTENTACIÓN DE TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO
PROFESIONAL

ix
 ÍNDICE O CONTENIDO GENERAL

DEDICATORIA ............................................................................................................... ii
AGRADECIMIENTO ..................................................................................................... iii
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL TORIBIO RODRÍGUEZ DE
MENDOZA DE AMAZONAS ....................................................................................... iv
VISTO BUENO DEL ASESOR DE TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO
PROFESIONAL ............................................................................................................... v
VISTO BUENO DEL CO-ASESOR DE TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO
PROFESIONAL .............................................................................................................. vi
JURADO EVALUADOR DE LA TESIS .......................................................................vii
CONSTANCIA DE ORIGINALIDAD DE LA TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO
PROFESIONAL .............................................................................................................viii
ACTA DE SUSTENTACIÓN DE TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO
PROFESIONAL ...............................................................................................................ix
ÍNDICE O CONTENIDO GENERAL ............................................................................. x
ÍNDICE DE TABLAS .....................................................................................................xii
ÍNDICE DE FIGURAS .................................................................................................. xiii
RESUMEN ..................................................................................................................... xiv
ABSTRACT..................................................................................................................... xv
I. INTRODUCCIÓN ................................................................................................... 16
II. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................ 18
2.1. Selección de material vegetal ........................................................................................... 18
2.2. Establecimiento de ensayo a sensibilidad a cadmio ......................................................... 20
2.3. Cuantificación de cadmio en hojas y raíces ..................................................................... 21
2.4. Determinación de la capacidad de acumulación y el factor de translocación. ................. 23
2.5. Diseño experimental y análisis de datos. ......................................................................... 23
III. RESULTADOS ....................................................................................................... 24
3.1. Acumulación de cadmio en hoja de cinco genotipos de cacao nativo. ............................ 24
3.2. Acumulación de cadmio en raíces de cinco genotipos de cacao nativo. .......................... 25
3.4. Factor de Bioconcentración y Translocación. .................................................................. 27
IV. DISCUSIÓN ............................................................................................................. 28
V. CONCLUSIONES ..................................................................................................... 31

x
VI. RECOMENDACIONES .......................................................................................... 32
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .................................................................... 33
ANEXOS ........................................................................................................................ 42

xi
 ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1. Valores medios de acumulación de Cd en hoja, para los genotipos y horas de

evaluación. ...................................................................................................................... 25
Tabla 2. Valores medios de acumulación de Cd en raíz, para los genotipos y horas de
evaluación. ...................................................................................................................... 27
Tabla 3. Factor de Bioconcentración (FBC) y Translocación (FT) de cadmio. ............ 27

xii
 ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 1. Ubicación de genotipos de cacao nativo, distrito Copallin, región Amazonas – Perú.
..................................................................................................................................................... 18
Figura 2. Niveles de Cd en cultivo de cacao, resultados a nivel de hoja y suelo. ..................... 19
Figura 3. Frutos de cacao nativo. Genotipos: A) 'JSM 2', B) 'INDES 39', C) 'JMB 1', D) 'JSM 3'
y E) 'INDES 38'. .......................................................................................................................... 19
Figura 4. Ensayo de sensibilidad a Cd bajo sistema hidropónico de raíz flotante. .................... 20
Figura 5. Cuantificación de Cd. a) Recolección de muestras, b) Calcinación de muestras en horno
mufla, c) Digestión con ácido clorhídrico y d) Cuantificación por espectrofotometría. ............. 22
Figura 6. Curva de calibración de Cd. ....................................................................................... 22
Figura 7. Acumulación de Cd en hojas de cacao, dependientes del genotipo y tiempo de
exposición. A) 'JMB 1', B) 'JSM 2', C) 'INDES 39', D) 'JSM 3' y D) 'INDES 38'. ..................... 24
Figura 8. Acumulación de Cd en raíces de cacao, dependientes del genotipo y tiempo de
exposición. A) 'JMB 1', B) 'JSM 2', C) 'INDES 39', D) 'JSM 3' y D) 'INDES 38'. ..................... 26
Figura 9. Instalación de sistema hidropónico en cacao. A) Germinación de semillas, B) Indicador
de emergencia de plántulas, C) Plántulas de 2 meses de edad y D) Trasplante de plántulas a
bandejas hidropónicas de tipo raíz flotante. ................................................................................ 42
Figura 10. Instalación de ensayo. A) Sistema hidropónico raíz flotante para cacao y B) Plantón
de cacao desarrollado en sistema hidropónico. ........................................................................... 43
Figura 11. Recolección de muestras. A) Raíz y B) Hoja. .......................................................... 43
Figura 12. Cuantificación de Cd en muestras de cacao. A) Calcinación, B) Digestión en cabina
extractora de gases, C) Dilución y D) Cuantificación por espectrofotómetro. ........................... 44

xiii
 RESUMEN

Debido a las restricciones internacionales que establecen límites máximos

permisibles de metales pesados en productos agrícolas, la acumulación de cadmio
(Cd) en almendras de cacao es considerada una característica no deseada para su
producción y comercialización. El presente estudio tuvo por objetivo evaluar la
dinámica del transporte y acumulación de Cd en plantones de cinco genotipos de
cacao nativo (JMB 1, JSM 2, INDES 39, JSM 3 y INDES 38) a fin de explorar una
muestra de la diversidad genética del cacao y cómo podría contribuir a disminuir la
absorción y translocación del cadmio. Para ello, plantas germinadas de cacao de 60
días de edad se transfirieron a un sistema hidropónico con solución Haogland, y luego
de 90 días se agregó 20 µM de cloruro de cadmio y se recolectaron muestras de raíz
y hoja, estableciendo diferentes periodos de evaluación (0, 24, 48, 96, 120 y 144
horas). Los resultados mostraron diferencias significativas en la acumulación de Cd
en las regiones foliares de los genotipos estudiados, mostrando una respuesta de
genotipo dependencia en la acumulación, sin embargo, la afinidad del cadmio por las
raíces de cacao es alta. Por otro lado, se observó que el tiempo de exposición influyó
en la translocación y bioacumulación de Cd en los genotipos cacao. En general, se
puede mencionar que, bajo las condiciones experimentales del estudio, 'INDES 38'
se presenta como el genotipo de cacao con menor afinidad a la translocación y
acumulación de Cd, convirtiéndose en un potencial material de propagación

Palabras claves: absorción, bioacumulación, cadmio, genotipos de cacao

xiv
 ABSTRACT

Due to international restrictions that establish maximum permissible limits for heavy
metals in agricultural products, the accumulation of cadmium (Cd) in cocoa beans is
considered an undesirable characteristic for their production and commercialization.
The objective of this study was to evaluate the dynamics of Cd transport and
accumulation in seedlings of five native cocoa genotypes (JMB 1, JSM 2, INDES 39,
JSM 3 and INDES 38) in order to explore a sample of the genetic diversity of the
cocoa and how it could contribute to decrease the absorption and translocation of
cadmium. For this, germinated cocoa plants with 60 days age transferred to a
hydroponic system with Haogland solution, and after 90 days 20 µM of cadmium
chloride was added and root and leaf samples were collected, establishing different
evaluation periods (0, 24, 48, 96, 120 and 144 hours). The results showed significant
differences in the accumulation of Cd in the foliar regions of the genotypes studied,
showing a response of genotype dependence in the accumulation, however, the
affinity of cadmium for cocoa roots is high. On the other hand, it was observed that
the exposure time influenced the translocation and bioaccumulation of Cd in the
cacao genotypes. In general, it can be mentioned that, under the experimental
conditions of the study, 'INDES 38' is presented as the cocoa genotype with the
lowest affinity to translocation and accumulation of Cd, becoming a potential
propagation material.

Keywords: absorption, bioaccumulation, cadmium, cocoa genotypes

xv
I. INTRODUCCIÓN

El cacao (Theobroma cacao L.) es un cultivo perenne oriundo de los bosques

tropicales de la región amazónica (cuenca alta del Amazonas) comprendida entre los
territorios de Brasil, Perú y Colombia (Cuatrecasas, 1964; Motamayor et al., 2002).
Estos países albergan la mayor diversidad de cacao, tanto poblaciones silvestres
como nativas (Thomas et al., 2012; Osorio-Guarín et al., 2017).

En la actualidad, el cacao es uno de los cultivos más importantes del mundo, siendo
sus semillas la principal materia prima para la industria chocolatera (Kongor et al.,
2016). Brinda beneficios económicos a múltiples sectores pobres del mundo, por lo
cual es uno de los cultivos priorizados para impulsar programas de desarrollo social
(Benjamin et al., 2018; Rodriguez-Medina et al., 2019). Por otro lado, cabe
mencionar que África es la región con mayor producción de cacao, debido a que este
es el principal cultivo comercial para países como Ghana, Costa de Marfil, Uganda,
Nigeria, Camerún y Togo (Romero, 2016).

En Perú, la producción de cacao data desde inicios del siglo XXI, logrando un
posicionamiento en el mercado mundial a partir del 2012 (Garate-Navarro et al.,
2017). A nivel nacional la producción ha tenido un constante crecimiento, siendo
Cusco, San Martín, Amazonas, Piura, Ayacucho y Junín las principales regiones
productoras de este cultivo (Instituto Interamericano de Cooperación para la
Agricultura, 2006). Este crecimiento le permitió al país ubicarse dentro de los
principales exportadores de cacao, destacando el cacao fino o de aroma y la
producción orgánica (Romero, 2016).

Para la región Amazonas, el cacao es uno de los principales productos de exportación

y una importante fuente económica para las familias del ámbito rural. Ocupa el
segundo lugar de superficie agrícola cultivada y cosechada (13,416.83 ha) de la
región, estando solo por detrás del café (42,724.46 ha); además, a nivel nacional
representa el 4% de la producción de cacao, con un aporte de 4,529.20 toneladas de
grano seco (Zamora, 2015).

En la actualidad, el interés en torno al cacao es significativa por su alta valoración

económica, pero también por la presencia de metales pesados como el cadmio (Cd),
en sus diferentes estructuras (raíces, tronco, hojas y semillas). El Cd es un metal

16
pesado ampliamente utilizado en diversas industrias, y en plantas se ha estudiado
extensamente debido a sus efectos tóxicos (Pernía et al., 2008). Su presencia dentro
de los ecosistemas tiene un origen natural, sin embargo, son los diversos procesos
antropogénicos quienes han ocasionado que el nivel de este elemento se incremente
continuamente (Rodríguez, 2017).

El riesgo de contaminación por Cd radica no solo por ser un elemento altamente

toxico, sino también en su capacidad de bioacumulación en los diferentes seres vivos
(plantas y animales), resultando alarmante que su disponibilidad aun en pequeñas
concentraciones se prolongue en el tiempo (Reyes et al., 2016). Su acumulación se
ha dado a conocer en cultivos de gran importancia agrícola como el cacao (Arévalo-
Gardini et al., 2017), la papa (Oliva et al., 2019) y el arroz (Wang et al., 2020). Este
panorama ha generado gran preocupación para el sector cacaotero, ya que según las
normas establecidas por la Unión Europea (UE), todo producto derivado que
contenga como mínimo un 50 % de cacao debe contener índices menores a 0.8 ppm
de Cd (Comisión Europea, 2014).

La regulación entrada en vigencia a inicios del 2019, establece los límites máximos
permisibles (LMP) de metales pesados para productos agrícolas de exportación, entre
ellos el cacao. El estado actual, determina la importancia de estudiar los mecanismos
de transporte de Cd en la planta, así como, la identificación de genotipos que
presentan menor afinidad al transporte de dicho metal. La persistencia de este
problema puede conllevar a la insostenibilidad agrícola y comercial del cacao de la
región Amazonas y el país, lo cual implicaría en una reducción de las divisas para
los pequeños agricultores.

En ese sentido, el presente estudio tuvo por objetivo determinar el dinamismo del Cd
en las plantas de cacao, desde la incorporación en sus raíces hasta su trasporte y
acumulación en sus diferentes órganos (raíces y hojas). Los resultados permitirán
conocer la dinámica del Cd en plantas de cacao, asimismo, identificar cuál o cuáles
de los genotipos estudiados presenta una menor afinidad a su transporte. El estudio
servirá de base para que mediante el uso de herramientas biotecnológicas se pueda
obtener plantas con menor afinidad al transporte de Cd, y de esta manera garantizar
la sostenibilidad productiva y comercial del cacao.

17
II. MATERIALES Y MÉTODOS

El estudio se realizó en la provincia de Chachapoyas (Universidad Nacional Toribio

Rodríguez de Mendoza), región Amazonas, ubicado al norte Perú. Los ensayos se
condujeron bajo condiciones de invernadero con un promedio de temperatura
máxima de 24,46 °C y mínima de 13,87 °C, y humedad relativa promedio de 70,28%.

2.1. Selección de material vegetal

El material vegetal (frutos maduros) fue colectado de parcelas cacaoteras
localizadas en el distrito de Copallin, provincia de Bagua, región Amazonas
(área de actividad del Instituto de Investigación para el Desarrollo Sustentable
de Ceja de Selva – INDES CES) (Figura 1).

Figura 1. Ubicación de genotipos de cacao nativo, distrito Copallin, región

Amazonas – Perú.

Inicialmente, se identificaron 13 genotipos de cacao nativo y se realizó un

análisis de acumulación de Cd en hojas y, un análisis de muestras de suelo de
puntos adyacentes a la planta identificada (Figura 2). Luego, se obtuvo la
relación de absorción de Cd para cada genotipo (Cd en hoja / Cd en suelo) y se
seleccionaron cinco (05) genotipos (Figura 3) con una relación entre 1,40 a 4,79.

18
Figura 2. Niveles de Cd en cultivo de cacao, resultados a nivel de hoja y suelo.

Figura 3. Frutos de cacao nativo. Genotipos: A) 'JSM 2', B) 'INDES 39', C)

'JMB 1', D) 'JSM 3' y E) 'INDES 38'.
19
2.2. Establecimiento de ensayo a sensibilidad a cadmio
Se recolectaron frutos maduros y se extrajo sus semillas. Luego, mediante
frotamiento con aserrín se les retiro el exceso de mucílago, seguido se lavaron
en agua corriente (Gómez & Ormeño, 2013). Posteriormente, fueron
seleccionadas 300 semillas por genotipo y se colocaron en bandejas con aserrín
(desinfectado) durante 60 días.

A continuación, se realizó el trasplante de plántulas. Para ello, se extrajeron

cuidadosamente y se lavaron sus raíces a chorro continuo. Luego se transfirieron
a un sistema hidropónico de raíz flotante (Figura 4); el cual contenía como fuente
de nutrientes a la solución Hoagland (Hoagland & Arnon, 1950). Transcurridos
90 días se aplicó Cd (Cloruro de cadmio - CdCl2) a una concentración de 20 uM
(3,66 ppm). En seguida se recolectó muestras de raíz y hoja en distintos
intervalos de tiempo (0, 24, 48, 96, 120, 144 horas posteriores a la aplicación de
Cd) (Figura 4).

Figura 4. Ensayo de sensibilidad a Cd bajo sistema hidropónico de raíz flotante.

20
2.3. Cuantificación de cadmio en hojas y raíces
El análisis de Cd en cacao inicio con la recolección, lavado (agua destilada) y
etiquetado (empaquetado en sobres de papel) de las muestras (hojas y raíces)
(Figura 5a). Las muestras se secaron en una estufa BINDER FD 115 (BINDER
GmbH, Alemania) a 70 °C durante 48 horas. Seguido se pulverizó la muestra y
se pesó 1 g (hoja y raíz, respectivamente) y, luego se colocó en crisoles de
porcelana. Para preparar la muestra se siguió la técnica de mineralización por vía
seca establecida por Carter (1993), que consiste en reducir las muestra a cenizas
y su posterior tratamiento con ácidos. Este proceso se realizó mediante
calcinación de las muestras en horno mufla THERMOLYNE (Thermo
Scientific, USA) a 480 °C durante 08 horas (Figura 5b). A continuación, dentro
de una cabina extractora de gases (Figura 5c) se realizó los siguientes
procedimientos:

- La muestra calcinada se humedeció con agua destilada,

- Se agregó lentamente un (01) ml de HCl concentrado y se agitó,
- Se agrego 2 mL de agua destilada y un (01) mL de HCl concentrado,
- El contenido se filtró (Whatman 40) a una Fiola de 25 mL y luego se llevó
al volumen final (25 mL) con agua de alta pureza.

Las muestras se analizaron por espectrofotometría, a través del uso de un

espectrofotómetro de emisión atómica de plasma por microondas Agilent 4100
MP-AES (Agilent Technologies, USA) (Figura 5d). Previamente, se realizó la
calibración del equipo mediante el uso de soluciones estándar de Cd en diversas
concentraciones (0, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0 y 5.0 ppm) (Figura 6), preparados a
partir de una solución patrón (1000 ppm Cd).

21
Figura 5. Cuantificación de Cd. a) Recolección de muestras, b) Calcinación de
muestras en horno mufla, c) Digestión con ácido clorhídrico y d) Cuantificación
por espectrofotometría.

Figura 6. Curva de calibración de Cd.

22
2.4. Determinación de la capacidad de acumulación y el factor de translocación.
La eficiencia de la planta en acumular Cd en sus tejidos del ambiente circundante
se calcula de la siguiente forma (Zhuang et al., 2007):
Cplanta
Factor de Bioconcentración (FBC) =
Chidropónica

La eficiencia de la planta para translocar Cd desde la raíz hacia las hojas se

calculó de la siguiente manera (Padmavathiamma & Li, 2007):
Choja
Factor de translocación (FT) =
Craíz

2.5. Diseño experimental y análisis de datos.

El experimento se realizó bajo un diseño experimental completamente al azar,
con tres repeticiones por tratamiento (30 plantas por repetición). La acumulación
neta de Cd para cada genotipo se obtuvo restando la concentración del metal
registrada en los tratamientos (20 uM Cd) con los valores obtenidos en
condiciones de control (0 uM Cd).

Los datos recopilados se analizaron mediante la prueba no paramétrica de

Kruskal-Wallis (p<0,05), debido a que no cumplieron con los supuestos del
análisis de varianza. Para el análisis se utilizó el software estadístico InfoStat
(versión 2018).

23
III. RESULTADOS
3.1. Acumulación de cadmio en hoja de cinco genotipos de cacao nativo.
El análisis de varianza detectó la existencia de diferencias significativas (p<0,05)
para los niveles de acumulación de Cd en hoja. En la figura 7 se muestra que la
concentración de Cd aumentó proporcionalmente al tiempo de evaluación; es
decir la acumulación de Cd en hojas fue superior cuando las plantas
permanecieron mayor tiempo en el sistema hidropónico tratado con Cd.

La acumulación de Cd en hojas estuvo influenciada por el genotipo y el tiempo

de evaluación. Por ejemplo, en el genotipo 'JMB 1' (Figura 7A) se observa que
después de 96 h de exposición a estrés por Cd, la concentración de Cd
incrementó significativamente y alcanzó un valor máximo de 1,34 ppm en 144
h. En los genotipos 'JSM 2' e 'INDES 39' (Figura 7B y C, respectivamente), la
concentración de Cd no varió significativamente durante las primeras 24 h, pero
desde las 48 h se observa una tendencia creciente significativa hasta registrar
niveles de 1,67 y 0,76 ppm, respectivamente. En cuanto a los genotipos 'JSM 3'
e 'INDES 38' (Figura 7D y E, respectivamente), se necesitaron 96 h para que la
acumulación de Cd pueda ser detectado, presentando un incremento
significativo durante siguientes puntos de evaluación.

Figura 7. Acumulación de Cd en hojas de cacao, dependientes del genotipo y

tiempo de exposición. A) 'JMB 1', B) 'JSM 2', C) 'INDES 39', D) 'JSM 3' y D)
'INDES 38'.

24
 En general, a nivel de genotipos se puede mencionar que, la concentración media
de Cd en hoja (durante la fase experimental) fue significativamente superior (p
= 0,0053) en el genotipo 'JSM 2', mientras que la acumulación más baja se
registró en el genotipo 'INDES 38' (Tabla 1A). Por otro lado, los resultados
muestran que, en los cinco genotipos de cacao, la mayor acumulación de Cd se
presentó a 144 h (p = 0,0001) de exposición a Cd (Tabla 1B).

Tabla 1. Valores medios de acumulación de Cd en hoja, para los genotipos y

horas de evaluación.

A Genotipo Cadmio en hoja (ppm)

JSM 3 0,23 b
INDES 38 0,17 a
JMB 1 0,40 bc
INDES 39 0,31 bc
JSM 2 0,74 c
B Hora de evaluación Cadmio en hoja (ppm)
0 0,04 a
24 0,07 a
48 0,10 ab
96 0,31 bc
120 0,72 cd
144 0,98 d
a,b,c,d Letras diferentes indica diferencias
significativas (p<0,05).

3.2. Acumulación de cadmio en raíces de cinco genotipos de cacao nativo.

El análisis de varianza mostró diferencias significativas (p < 0,05) para la
concentración de Cd en raíces dependientes del tiempo. La figura 8 muestra que,
durante las primeras 48 h, la concentración de Cd en raíz tiene una curva similar
(con acumulación de Cd creciente), pero luego siguieron patrones distintos
según el genotipo y el tiempo de evaluación.

La acumulación de Cd en raíces, para los cinco genotipos de cacao, pudo ser

detectado desde las 24 h posteriores a la aplicación de Cd en el medio. En el
genotipo 'JMB 1' (Figura 8A) se observa que entre las 24 y 96 h hubo un
incremento significativo en los niveles de Cd, aumentando de 112,24 a 143,44
ppm. En el genotipo 'JSM 2' (Figura 8B) los niveles de Cd incrementaron de
forma lenta entre las 24 y 120 h (máxima acumulación), y registró un

25
decrecimiento en las siguientes 24 h. En el genotipo 'INDES 39' e 'INDES 38'
(Figura 8C y E, respectivamente) la acumulación de Cd fue significativamente
superior a las 48 h de evaluación, registrando en 24 h un aumento superior a 32
y 47 ppm, respectivamente. Por su parte, en el genotipo 'JSM 3' (Figura 8D) la
acumulación de Cd pasó de 72,40 ppm a las 24 h a 136,73 ppm a las 144 h,
siendo este último, un valor significativamente superior respecto a las
evaluaciones anteriores.

Figura 8. Acumulación de Cd en raíces de cacao, dependientes del genotipo y

tiempo de exposición. A) 'JMB 1', B) 'JSM 2', C) 'INDES 39', D) 'JSM 3' y D)
'INDES 38'.

Por otro lado, la concentración media de Cd en raíces a nivel de genotipos no

evidenció diferencias significativas (p = 0,4571), pero existió una variación
numérica entre 91,75 y 108,43 ppm (Tabla 2A). Por el contrario, la acumulación
de Cd según la hora de evaluación mostró diferencias significativas (p = 0,0001),
siendo el periodo entre las 48 a 120 h donde se registró la mayor concentración
de Cd (Tabla 2B).

26
 Tabla 2. Valores medios de acumulación de Cd en raíz, para los genotipos y
horas de evaluación.

A
Genotipo Cadmio en raíz (ppm)
JSM 3 91,75 a
INDES 38 108,43 a
JMB 1 100,15 a
INDES 39 96,64 a
JSM 2 93,64 a
B
Hora de evaluación Cadmio en raíz (ppm)
0 0.06 a
24 100,74 b
48 131,75 c
96 125,21 c
120 122,82 c
144 108,16 b
a,b,c,d Letras diferentes indica diferencias
significativas (p<0,05).

3.4. Factor de Bioconcentración y Translocación.

Para determinar el factor de Bioconcentración (FBC) y factor de Translocación
(FT) se utilizó la concentración de Cd obtenido en todas las evaluaciones y se
obtuvo el promedio general. Los valores del FBC en hojas fueron inferiores a 1,
variando entre 0,05 y 0,20, pero a nivel de raíz el FBC varió entre 25,07 y 29,63
(Tabla 3). Esto indica que, bajo las condiciones del ensayo, los genotipos de
cacao bioacumulan más Cd en su estructura radicular. Por otro lado, el FT fue
muy bajo en todos los genotipos (<0,008), lo que demostró que el Cd acumulado
en raíces presenta poca movilidad a las hojas.

Tabla 3. Factor de Bioconcentración (FBC) y Translocación (FT) de cadmio.

Genotipo FBC hoja FBC raíz FT

JMB 1 0,11 27,36 0,004

JSM 2 0,20 25,58 0,008
INDES 39 0,08 26,40 0,003
JSM 3 0,06 25,07 0,003
INDES 38 0,05 29,63 0,002

27
IV. DISCUSIÓN

El cadmio (Cd) es un elemento ampliamente distribuido en la corteza terrestre, sin

embargo, diversos procesos antropogénicos han hecho que su nivel aumente
continuamente (Rodríguez, 2017). En la Amazonía peruana, uno de los procesos
relacionados con el origen y/o incremento de metales pesados (por ejemplo, cadmio
y plomo) en el suelo y fuentes fluviales es la industria de hidrocarburos debido a los
derrames de accidentales o descargas habituales de aguas de formación extraídas de
los yacimientos de petróleo del Oleoducto Norte del Perú (Yusta-Garcia et al., 2017;
O’Callaghan-Gordo et al., 2018). Esta contaminación pone en riesgo la flora y fauna
de la región, además de las comunidades que viven en el área.

El Cd es un metal pesado que ha originado gran preocupación debido a su efecto

tóxico en humanos, animales y plantas. En las plantas no tiene una función esencial,
pero puede ser absorbido por las raíces con relativa facilidad (Zitka et al., 2013). La
acumulación de este metal puede afectar procesos como la fotosíntesis (Mysliwa -
Kurdziel et al., 2004; Dias et al., 2013) y la absorción de nutrientes (Hossain et al.,
2010; Qin et al., 2020) y, como consecuencia alterar el normal crecimiento y
desarrollo de las plantas (Benavides et al., 2005; Wan & Zhang, 2012; Huang et al.,
2020). En el cultivo de cacao representa una fuerte amenaza no solo por su efecto
adverso en procesos fisiológicos sino también por su acumulación en los granos. Por
lo tanto, es importante reunir esfuerzos que permitan comprender los mecanismos de
absorción y acumulación de Cd en la planta (Satoh-Nagasawa et al., 2012; Guo et
al., 2016).

En el presente estudio, la concentración de Cd en raíces fue superior respecto al

contenido de las hojas. Dicha respuesta indica que solo una parte del Cd que ingresó
al sistema radicular fue transportada hacia la parte aérea de la planta. Similares
hallazgos se describieron en especies como Lactuca sativa (He et al., 2005),
Arabidopsis thaliana (Jozefczak et al., 2014), Miscanthus sacchariflorus (Guo et al.,
2016) y Theobroma cacao (Llatance et al., 2018). Este patrón de distribución se
puede explicar mediante el mecanismo de retención que las células del sistema
radicular (a través de la pared celular y/o vacuolas) ejercen sobre el metal y
consecuentemente limitan su entrada al xilema (Richau et al., 2009; Mofarrán &
Wunderlin, 2013; Page & Feller, 2015), siendo este tejido la vía utilizada para la

28
translocación de Cd desde la raíz a los brotes y hojas (Benavides et al., 2005; Mori
et al., 2009; Uraguchi et al., 2009). Es decir, el secuestro de Cd en raíces es probable
funcione como un mecanismo de defensa, debido a que por sus efectos tóxicos puede
dañar los órganos de destino (Page et al., 2006).

Por otro lado, la acumulación de Cd en hojas mostró un incremento relacionado con

el tiempo que las plantas permanecen en el sistema hidropónico tratado con Cd.
Observaciones similares han sido reportados por Guo et al. (2016) y Liu et al. (2018).
Estos resultados presentan un comportamiento lógico puesto que la absorción de Cd
esta mediado por la absorción de elementos esenciales (por ejemplo: Fe y Zn) para
el desarrollo de la planta (Uraguchi et al., 2009; Ismael et al., 2019); es decir, para
su ingreso en la planta, el Cd puede competir con los nutrientes y, como consecuencia
puede incrementar su bioacumulación con el paso del tiempo. Este efecto creciente
es observado principalmente en plantas jóvenes debido a que la biomasa para la
distribución del Cd absorbido es pequeña. Por el contrario, en una planta adulta la
concentración de Cd en hojas puede reducirse por dilución dado a su mayor biomasa
(Lettens et al., 2011; Meter et al., 2019). Sin embargo, el incremento de biomasa
foliar puede significar una mayor absorción y acumulación de Cd (Liu et al., 2018).

A nivel del sistema radicular se observa que los niveles de acumulación de Cd

descienden luego de alcanzar una concentración pico. Estos resultados pueden tener
explicación en aspectos como el incremento en la translocación de Cd a las partes
aéreas de la planta y la reducción de la fracción disponible de Cd en el medio (Wang
et al., 2003; Ishikawa et al., 2011). Curiosamente, en este estudio se observa que la
caída en los niveles de Cd en raíz coincide con el incremento de Cd en hojas. Sin
embargo, cabe resaltar que la acumulación de Cd en raíces de los cinco genotipos de
cacao superó las 90 ppm. Esto indica que para minimizar los efectos tóxicos se
activan mecanismos de defensa como la inmovilización del Cd en las vacuolas de las
raíces (Zhang et al., 2018; Huang et al., 2020). Esta característica sugiere que los
genotipos evaluados se consideren como plantas exclusoras de Cd, debido a que en
plantas hiperacumuladoras el Cd absorbido no es secuestrado en las raíces, sino que
se translocan a brotes y hojas (Singh et al., 2016; Zhang et al., 2018).

Por su parte, resulta interesante observar que las diferencias en la absorción y

translocación de Cd estuvieron mediadas por el genotipo de cacao. De acuerdo con

29
los resultados se puede mencionar que el genotipo 'INDES 38' es particularmente
interesante pues se presenta como un genotipo con baja afinidad de acumulación de
Cd. Estos resultados proporcionan una evidencia para la búsqueda de estrategias que
tienen como objetivo reducir las concentraciones de Cd en almendras de cacao.
Durante los últimos años son diversos los estudios que informan sobre la variabilidad
genotípica y su importancia para contrarrestar la acumulación de metales pesados
(Arévalo-Gardini et al., 2017; Lewis et al., 2018; Argüello et al., 2019). Por ejemplo,
en un estudio donde se analizó 100 accesiones de cacao se muestran que, la
acumulación de Cd tiene importantes diferencias entre accesiones, lo que indicaría
una influencia genética (Lewis et al., 2018). Sin embargo, estos estudios no
proporcionan información sobre los mecanismos de adsorción de Cd en cacao.

En las plantas, no todos los tejidos u órganos tienen la misma capacidad de acumular
metales pesados, y generalmente la raíz es el principal órgano de entrada y
acumulación (Barcelo & Poschenrieder, 1992). El transporte y distribución del metal
en raíces, tallos y hojas se produce a través de apoplastos o simplastos (Son et al.,
2016). Asimismo, se ha sugerido que existen diferentes genes/proteínas que son
responsables de la absorción, transporte y acumulación de Cd en la planta, entre los
cuales se puede destacar al transportador del calcio LCT1 (Clemens et al., 1998),
IRT1 que pertenece a la familia de transportadores del Zn y Fe (Guerinot, 2000) y
Nramp que se encuentra ubicada en la membrana de la vacuola (Thomine et al.,
2000).

En la región Amazonas, la diversidad genética probablemente sea amplia debido a la

autoincompatibilidad de algunos árboles de cacao. La combinación de genes durante
el cruzamiento del material vegetal asegura un alto grado de variabilidad (Zhang et
al., 2011; Cornejo et al., 2018) y, como consecuencia, es probable encontrar
genotipos con características agronómicas deseadas (Zhang et al., 2011), como la de
baja acumulación de Cd. Este panorama abre una brecha para el desarrollo de
programas de mejoramiento que puedan contribuir en la selección de aquellos
genotipos que regulen la bioacumulación de Cd dentro de sus órganos. Sin embargo,
para minimizar el contenido de Cd en productos elaborados también se necesita
evaluar el procesamiento postcosecha, pues se informa que los granos tostados tienen
una mayor concentración (0,46 ppm) en comparación con los granos fermentados
(0,372 ppm) (Anyimah-Ackah et al., 2019).
30
V. CONCLUSIONES

La acumulación de Cd en plantones de cacao mostró estar influenciado por los

genotipos. Asimismo, el tiempo de exposición de estos dentro del sistema
hidropónico tratado con Cd tiene marcada influencia en la acumulación del metal.

La concentración media de Cd en hoja fue significativamente superior en el genotipo

'JSM 2', mientras que la acumulación más baja se registró en el genotipo 'INDES 38'.
Por otro lado, a nivel del sistema radicular, la concentración media de Cd no fue
significativamente entre genotipos.

El valor del FBC indicó que los genotipos en estudio bioacumulan más Cd en su
estructura radicular. En tanto, el FT fue muy bajo en todos los genotipos, lo cual
demostró que el Cd acumulado en las raíces presenta poca movilidad a las hojas.

31
VI. RECOMENDACIONES

Determinar las concentraciones de cadmio en suelo, raíz, hoja y grano seco de cacao
de los genotipos de la región Amazonas.

Ampliar el estudio de la diversidad genética de cacao fino de aroma, a fin de

identificar posibles genotipos de baja afinidad a cadmio.

Realizar estudios sobre la aplicación de fertilizantes químicos y/o orgánicos y su

relación con la incorporación de metales pesados en el sistema suelo-planta.

32
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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38469-1

41
ANEXOS

Figura 9. Instalación de sistema hidropónico en cacao. A) Germinación de semillas, B)

Indicador de emergencia de plántulas, C) Plántulas de 2 meses de edad y D) Trasplante
de plántulas a bandejas hidropónicas de tipo raíz flotante.

42
Figura 10. Instalación de ensayo. A) Sistema hidropónico raíz flotante para cacao y B)
Plantón de cacao desarrollado en sistema hidropónico.

Figura 11. Recolección de muestras. A) Raíz y B) Hoja.

43
Figura 10. Cuantificación de Cd en muestras de cacao. A) Calcinación, B) Digestión en
cabina extractora de gases, C) Dilución y D) Cuantificación por espectrofotómetro.

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