MANUAL DE PRÁCTICAS DE

INMUNOLOGÍA

ÍNDICE

Presentación y Organización del Laboratorio………………………………………….2

Reglamento del Laboratorio……………………………………………………………………4
Forma de Trabajo y Evaluación……………………………………………………………….6
Introducción……………………………………………………………………………………………7
Practica I. Anatomía del Sistema Inmunológico………………………….…………..8
Práctica II. Células del Sistema Inmunitario…………………………………..……….10
Práctica III. Sistema del Complemento………………………………………..…………12
Práctica IV. Activación de Células B y Producción de Anticuerpos………….15
Práctica V. Interacción Antígeno-Anticuerpo………………………….………………18
PCR, PIE, GPO. SANGUINEO, ASO.
Práctica VI. Inmunidad Frente a Microorganismos…………………….…………..32
VDRL, VIH
Práctica VII. Autoinmunidad………………………………………………..………………...37
ANA, FACTOR REUMATOIDE
Práctica VIII. Inmunidad frente a trasplantes
Pruebas cruzadas, Coombs
Anexos……………………………………………………………………………………………………45
Bibliografía…………………………………………………………………………………………….50
 PRESENTACIÓN DEL LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA

El objetivo de este Laboratorio es que el alumno conozca y adquiera el

conocimiento del funcionamiento del Sistema Inmune a través de la realización de
prácticas y actividades de integración del conocimiento. El presente cuaderno del
Laboratorio de Inmunología contiene prácticas diseñadas en base al temario de la
clase de Inmunología, esperando que lo visto en clase se reafirme en el laboratorio.

Al inicio de cada práctica encontrarás información general introductoria al

tema, el fundamento de cada determinación inmunológica y el procedimiento a
seguir. Algunas de las prácticas se basan en reacciones de aglutinación que se
realizan de manera rutinaria en un laboratorio clínico, mientras que otras reacciones
necesitarán de equipo y reactivos específicos. Estas determinaciones permiten
analizar, interpretar y emitir resultados de análisis clínicos que ayudan en el
diagnóstico y tratamiento del paciente. La inmunología, además de servir al hombre
en el diagnóstico clínico y contribuir en el desarrollo de pruebas para la detección
de agentes causales de enfermedades, también es parte importante del desarrollo
científico actual en materia de terapéutica. Por tales motivos es importante que el
Bioquímico tenga conocimientos del área clínica y en tecnologías usadas en la
investigación básica.

Este curso se desarrollará con la exposición oral por parte del alumno y
profesor, además se programarán exposiciones de temas referentes a inmunología
y otras actividades como integración de conocimiento.

HORARIO DEL LABORATORIO

2
 REGLAMENTO DEL LABORATORIO

Antes de comenzar a trabajar:

1. Es de carácter OBLIGATORIO el uso de zapato cerrado, bata de manga

larga abotonada y lentes de seguridad, de lo contrario no podrás realizar la
práctica de laboratorio.
2. No se deben de introducir alimentos, bebidas, dulces, etc.
3. Siempre leer la práctica correspondiente previa a la sesión de
laboratorio, además de traer el material de trabajo (si es necesario).
4. Se darán 10 minutos de tolerancia para ingresar a la sesión de laboratorio.
5. Alumno que no realice la práctica, no tendrá derecho a entregar reporte de
trabajo.

Manejo de sustancias bioinfecciosas:

1. Al comenzar y finalizar la práctica se debe limpiar el área de trabajo antes y

después de cada sesión, con toallas de papel y alcohol al 70%.
2. Nunca se deberá inhalar ni pipetear con la boca sustancias químicas o
inclusive agua.
3. Manejar como muestras potencialmente infecciosas todos los
especímenes con los que se trabajen en el laboratorio. Siempre trabajar con
guantes de látex.
4. Limpiar inmediatamente cualquier salpicadura de la muestra (sangre, suero,
plasma, etc) con solución de hipoclorito de sodio al 5%.
5. Desechar los productos hemáticos (gasas, torundas, guantes, etc.)
conforme al reglamento de RPBI. Revisar el anexo 1.

Para evitar contaminaciones en el laboratorio:

1. En caso de accidente, salpicadura o derrame en la piel, se debe lavar

abundantemente con agua y jabón. Avisar al profesor responsable.
2. Rotular cada tubo antes de tomar la muestra de sangre o antes de transferir
la muestra (suero, plasma, etc) al tubo.
3. Usar marcadores permanentes para identificar las muestras.
4. Se debe utilizar una puntilla de micropipeta nueva cada vez que se tome un
reactivo o sustancia biológica (sangre, suero, etc).
5. Se debe evitar tocar los bordes de los tubos y las puntas de micropipeta con
las manos u otras superficies.
6. Desechar las puntillas usadas en el recipiente correspondiente para ello.
Recomendaciones generales:
3
1. Localizar las rutas de evacuación, extintores y duchas de seguridad del
laboratorio.
2. Mantener las mesas de trabajo libre de objetos extraños y material ajeno que
no sea el adecuado para cada práctica (mochilas, cuadernos, bolsos, etc.).
3. Si no recuerdas como utilizar algún equipo o aparato, si tienes alguna duda
sobre una sustancia química o técnica de laboratorio, acude con el profesor
responsable de la práctica y consúltalo.
4. Al acabar de utilizar un equipo se debe recordar que vendrá otro grupo
después, por lo que se debe ser solidario y dejarlo recogido y limpio. No
olvidar registrar el uso del aparato en la bitácora.
5. Evitar el uso del teléfono celular en el laboratorio ya que es causa de
distracción para el alumno y los demás estudiantes.
6. La conducta personal dentro del laboratorio tiene que ser correcta, no se
deben hacer bromas, correr, gritar, comunicarse con apodos o lenguaje
vulgar, etc.
7. Los residuos generados durante la sesión de práctica deberán ser desechas
de acuerdo a las normas vigentes y en el depósito adecuado.
8. Por razones de seguridad, no ingresar al laboratorio con zapato abierto o
con tacones altos, se debe evitar el uso de joyería (como collares, pulseras)
para evitar accidentes dentro del laboratorio.
9. Cuidar la higiene personal, traer bata blanca limpia, cabello peinado o
recogido.

4
 FORMA DE TRABAJO

En la sesión práctica, la teoría correspondiente a cada práctica del laboratorio será

expuesta por el alumno al inicio del laboratorio. Es responsabilidad de los
estudiantes informarse con el profesor acerca de los puntos que deberá tratar en su
ponencia. El profesor deberá explicar el procedimiento a seguir de cada práctica de
laboratorio. El alumno realizará la sesión experimental apegándose al reglamento
interno del laboratorio. Al finalizar cada práctica, el alumno presentará un reporte de
resultados obtenidos (incluido en el Manual del Laboratorio, al final de cada
práctica).

En la sesión de integración de conocimiento, el alumno y su equipo de trabajo

discutirán sobre la sesión práctica. Previo a esta sesión, al alumno debe redactar
una cuartilla en la cual debe explicar las bases fisiológicas, bioquímicas o
inmunológicas del tema de práctica. En la sesión también se podrán analizar textos
científicos o casos clínicos para integrar el conocimiento. Al cierre de la sesión
algunos alumnos expondrán frente a grupo los análisis de integración de
conocimiento.

EVALUACIÓN DEL LABORATORIO

La calificación mínima aprobatoria del laboratorio es de un 60%, sin embargo

es requisito indispensable la aprobación del examen escrito (calificación mayor a
6.0) para poder acreditar el laboratorio. A continuación se presentan dichas
evaluaciones:

5
 INTRODUCCIÓN A LA INMUNOLOGÍA

La Inmunología es una ciencia relativamente joven, autónoma y madura,

cuyos orígenes han estado estrechamente ligados al desarrollo de la Microbiología.
Inmunidad deriva del latín immunitas, término que hace referencia a una serie de
garantías civiles y legales que tenían los senadores en ejercicio en la antigua Roma.

El objetivo principal y clásico de la Inmunología es el estudio de las

respuestas de defensa que han desarrollado los organismos frente a la invasión por
microorganismos o partículas extrañas. Es así como los seres vivos superiores
están defendiendo constantemente su integridad biológica frente a agresiones,
esencialmente externas. De no ser así, morirían como consecuencia de tumores e
infecciones de bacterias, virus, hongos, etc. Para que estos fenómenos de defensa
se lleven a cabo, los organismos disponen de un conjunto de elementos especiales,
conocido como Sistema Inmune. Estos mecanismos son altamente evolucionados
e integrados, dotados de especificidad y de memoria, frente a agentes reconocidos
por el organismo como no propios.

Las células y moléculas responsables de la inmunidad constituyen el

Sistema Inmune y la respuesta coordinada y colectiva de los componentes del
sistema corresponde a la respuesta Inmune. Si bien la función del Sistema
Inmunológico es la defensa frente a microorganismos patogénicos, sustancias no-
infecciosas pueden también llevar a la activación de este sistema y generar una
respuesta inmune.

La Inmunología es una ciencia que ha desarrollado su importancia a una

velocidad creciente y constante, que se ha diversificado en campos especiales
como la Inmunoquímica, Inmunogenética, e Inmunopatología. El desarrollo
científico moderno ha permitido la utilización de herramientas de laboratorio tales
como la bioquímica, cultivos celulares, ADN recombinante y la generación de
OGM´s. Estos avances han permitido que en poco tiempo la Inmunología haya
experimentado un intenso y vertiginoso avance en el conocimiento tanto de los
fenómenos y eventos que subyacen a la respuesta inmune. Debido a esto, el estudio
del sistema inmunológico, como sistema de defensa del cuerpo humano ocupa un
lugar importante dentro del conocimiento básico que debe poseer un profesionista
de la salud, como lo es el Bioquímico.

6
PRÁCTICA I. ANATOMÍA DEL SISTEMA INMUNOLÓGICO

INTRODUCCIÓN

El propósito del sistema inmunológico es mantener fuera del cuerpo a los

microorganismos infecciosos tales como ciertas bacterias, virus y hongos, así como
destruir cualquier microorganismo infeccioso que invada al cuerpo. El sistema
inmunológico está formado por un conjunto vital y complejo de células y órganos
que protegen al cuerpo contra la infección.

Los órganos y tejidos del sistema linfático, distribuidos ampliamente en todo

el cuerpo, se clasifican en dos grupos con base en sus funciones. Los órganos
linfáticos primarios constituyen el ambiente idóneo para la división de las células
madre y su maduración en células B y T, o sea, los linfocitos que se encargan de
las respuestas inmunitarias. Dichos órganos son la médula ósea roja, que se
encuentra en los huesos planos y en las epífisis de los huesos largos de adultos, y
el timo. Las células madre pluripotenciales de la médula ósea roja son el origen de
las células B maduras y las células pre-T, de las cuales estas últimas emigran al
timo y maduran en él. Los órganos y tejidos linfáticos secundarios, donde tiene lugar
gran parte de las respuestas inmunitarias, comprenden los ganglios y folículos
linfáticos y el bazo. Se considera que el timo, los ganglios y el bazo son órganos
porque los rodea una cápsula de tejido conectivo, mientras que los folículos no lo
son por carecer de ella.
COMPETENCIAS
Manejar especímenes biológicos de experimentación empleados en
investigación biomédica, siguiendo la normativa internacional vigente para el
manejo de animales de laboratorio.
A través de: la localización de los tejidos linfoides primarios y secundarios, la
descripción morfológica del bazo, timo, ganglios y de las células inmunitarias de
dichos tejidos.

MATERIALES Y EQUIPO

Microscopio óptico
• Portaobjetos
• Equipo de disección
• Agujas
• Guantes
• Jeringa de 1mL
• Tela de organza
• Tabla de disección
• Alcohol, Aceite de inmersión
• Colorantes para tinción T-E (Hematoxilina y Eosina)

7
PROCEDIMIENTO

1.-Localización de los órganos linfoides.

-Sacrificar al ratón por dislocación cervical.
-Fijar el ratón a la mesa de disección utilizando cinta adhesiva.
-Rociar alcohol sobre el abdomen del ratón para facilitar su manejo.
-Realizar una incisión en “V” en la región abdominal del espécimen.
-Retirar con cuidado la piel del ratón hacia los lados y comenzar la identificación
del bazo y timo. (Apoyarse con el esquema, ver anexo 2).
-Extraer los tejidos: timo, bazo, riñón e hígado y depositarlos en una caja de petri
con PBS.
-Enjuagar los tejidos, retirando los residuos de sangre y grasa.
-Colocar los tejidos dentro de una jarra de coplin para su almacenamiento.
-Obtener el bazo y cortar una sección de alrededor de 0.04 g.

Tinción de tejidos
Realizar la tinción H-E (Hematoxilina y Eosina) de acuerdo al procedimiento
establecido.
-Observar al microscopio óptico con el objetivo de 40X y posteriormente a
100X utilizando aceite de inmersión o aceite de bálsamo de Canadá.

2.-Observar al microscopio las preparaciones de bazo, ganglios y timo, ayudarse

del Anexo 3 para la identificación de los diversos componentes.

CONCLUSIONES

8
PRÁCTICA II. CÉLULAS DEL SISTEMA INMUNÓLÓGICO

INTRODUCCIÓN

Todas las células del Sistema Inmunológico (SI) tienen su origen en células
madres pluripotenciales de la médula ósea que originan fundamentalmente dos
tipos de diferenciación, la linfoide, que da lugar a los linfocitos, y la mieloide, que da
origen a los fagocitos. Existen por lo tanto en el SI dos grandes tipos de células que
intervienen en los procesos de inmunidad.
La primera línea celular son los fagocitos, son capaces de ingerir y degradar
antígenos y microorganismos. Dentro de ellos encontramos los fagocitos
mononucleares y los neutrófilos polimorfonucleares. El representante genuino de
los mononucleares lo constituye la estirpe existente en la sangre periférica o
monocitos que son capaces de emigrar a los tejidos transformándose en los
macrófagos tisulares (sistema monocito-macrófago). Los neutrófilos
polimorfonucleares o PMN son los leucocitos más abundantes en sangre periférica.
La segunda línea celular son los linfocitos son de dos clases principales, B o
T, según donde se desarrollan; en los humanos, las células B se diferencian en la
médula ósea y en el hígado fetal y las células T en el timo. En estos órganos en los
que se diferencian los linfocitos, órganos linfoides primarios, las células B y T
adquieren la capacidad para reconocer antígenos (Ags) por medio de la adquisición
de receptores de superficie específicos. Existe una tercera clase de linfocitos que
no expresan receptores de Ags y que se denominan células asesinas naturales (NK,
natural killer).
Se calcula que en el organismo humano existen del orden de 1012 células
linfoides y que aproximadamente 109 linfocitos se producen diariamente. Los
linfocitos B están programados para codificar un receptor de superficie específico
de un determinado antígeno tras lo cual se multiplican y diferencian en células
plasmáticas que producen anticuerpos (Ac). Los linfocitos T tienen diversas
funciones. Algunos interactúan con las células B y los fagocitos mononucleares y
se denominan células T colaboradoras (células Th, de helper); otras destruyen
células infectadas por agentes intracelulares y se denominan células T citotóxicas
(Tc). La mayoría (más del 90%) de las células T son células Th.
COMPETENCIAS

Practicar metodologías necesarias para el cultivo celular y el desarrollo de

investigación biológica, familiarizándose con la terminología científica adecuada
empleada en inmunología celular y con el uso de equipos de nueva generación.
A través de: conocer las células que participan en la respuesta inmune y
mediante la descripción de los aspectos morfológicos y moleculares de dichas
células.

9
MATERIALES Y EQUIPO
• Kit para extracción de muestra sanguínea.
• Tubos cónicos marca Corning.
• Tubos de ensayo.
• Micropipetas y puntillas.
• Centrífuga.
• Cámara de Neubauer.
• Microscopio óptico
• Solución buffer de fosfatos (PBS: Phosphate Buffered Saline)
• Solución azul de tripano
• Solución Ficoll-Histopaque

PROCEDIMIENTO

Técnica para el aislamiento de linfocitos

1. Extraer 4 ml de sangre venosa en tubos con EDTA.

2. Vaciar la sangre en un tubo cónico de 15 ml
3. Hacer una dilución 1:1 con buffer de fosfatos pH= 7.3 (PBS). Mezclar.
4. Colocar 3 ml de Ficoll- Histopaque en un nuevo tubo cónico de 15 ml.
5. Agregar poco a poco la mezcla (sangre –PBS) sobre los 3 ml de Ficoll-
Histopaque, utilizando una micropipeta evitando que se mezclen completamente.
6. Con mucho cuidado, llevar a centrifugar a 2500 rpm durante 20 minutos
7. Separar la interfase (halo de linfocitos) y colectar en tubos cónicos de 15 ml.
8. Lavar con 5 ml de PBS, centrifugar a 1500 rpm por 10 min, desechar el
sobrenadante y resuspender las células.
9. Lavar con 2 ml de PBS, centrifugar a 1500 rpm por 10 min, desechar el
sobrenadante y resuspender aforando a 1 ml con PBS.
10. Para teñir las células: colocar 90 ul de Azul Tripano (1:10) en un tubo de ensaye
y agregar 10 ul de la suspensión de células.
11. Contar las células en la cámara de Neubauer. Revisar anexo 3.

CONCLUSIONES

10
PRÁCTICA III. SISTEMA DEL COMPLEMENTO

INTRODUCCIÓN

La unión del anticuerpo al antígeno muchas veces no es suficiente para

brindar una protección efectiva contra el agente invasor, por lo que requiere de la
acción complementaria de otro componente del sistema inmunológico que sea
capaz de neutralizar o de llevar a la neutralización del agente.
Se denomina sistema del complemento a un conjunto de proteínas que
constituyen una cascada bioquímica que participa en los mecanismos de defensa
inmunológico del organismo. Este sistema, muchas veces, de hecho, actúa
complementariamente y como resultado de la interacción antígeno-anticuerpo,
puede actuar independientemente de la acción de los anticuerpos.

Las proteínas que forman este sistema son en su mayor parte enzimas
proteolíticas en forma de zimógenos, que al ser iniciado este mecanismo de
respuesta inmunológica se van activando las unas a las otras desencadenando
procesos de defensa que van desde la activación de procesos de fagocitosis hasta
la lisis de las bacterias invasores. En este proceso, algunas proteínas del sistema
actúan como cofactores, y otras como inhibidores.
Las funciones de este sistema incluyen:
1. Lisis celular
2. Estimulación de la fagocitosis por opsonización.
3. Atracción de células fagocíticas (quimiotaxis)
4. Contribución a la respuesta inflamatoria y alérgica, estimulando la
degranulación celular y liberación de enzimas intracelulares, histamina, etc.
5. Facilitación de la eliminación de complejos inmunes.
La activación del sistema del complemento puede producirse por tres mecanismos
fundamentales:
1. Activación por la vía clásica del complemento.
2. Activación por la vía alternativa
3. Activación por vía de la lectina-manosa.

COMPETENCIAS

Operar equipos de nueva generación útiles en el diagnóstico clínico de

enfermedades con participación del sistema inmunológico, e interpretar valores
anormales de proteínas séricas asociadas a inmunopatologías.
A través de: la cuantificación de moléculas del complemento mediante
sistemas semiautomatizados de nefelometría, e interpretación de los resultados de
las pruebas.

11
MATERIALES Y EQUIPO

Kit de extracción de sangre

Nefelómetro
Kit de reactivo para determinar el Complemento
Micropipetas y puntas (diferentes volúmenes)

PROCEDIMIENTO

1. Obtener una muestra de sangre venosa periférica (SVP) mediante el método

de venopunción habitual, utilizando tubos vacutainer sin anticoagulante.
2. Centrifugar la muestra durante 10 min a 3500 rpm.
3. Separar el suero en un tubo limpio y seco.
4. Almacenar la muestra a 8 °C si no se procesará en ese momento, de lo
contrario, seguir las instrucciones del proveedor del reactivo para realizar la
determinación de Complemento mediante Nefelometría.

CONCLUSIONES

12
 Fecha:

Dr. A quien corresponda

ESTUDIOS PRACTICADOS A:

ESTUDIO RESULTADO VALOR DE REFERENCIA

Método:

ATENTAMENTE

Responsable

13
 PRÁCTICA IV. ACTIVACIÓN DE CÉLULAS B Y PRODUCCIÓN DE
ANTICUERPOS

INTRODUCCIÓN

Las células efectoras B son responsables de la inmunidad humoral

(producción de anticuerpos). Para su activación y la producción de anticuerpos IgM,
es necesaria la presencia del antígeno y la cooperación de linfocitos Th específicos
del mismo antígeno que envíen señales accesorias (por contacto o mediante
citocinas). La respuesta a nuevas estimulaciones antigénicas es más eficaz
(respuesta secundaria) y se manifiesta por un cambio de isotipo de los anticuerpos
producidos (habitualmente a IgG o IgA). Este cambio de isotipo está controlado por
los linfocitos Th mediante contactos B/T y citocinas. La maduración de linfocitos B
mejora la afinidad de los anticuerpos por sus antígenos específicos (consecuencia
de procesos de hipermutación somática y selección de los clones celulares con
mayor afinidad). La diferenciación de los linfocitos B a células plasmáticas
(productoras de anticuerpos) requiere contacto con células dendríticas foliculares y
la diferenciación a células de memoria, el contacto con linfocitos Th.

Los anticuerpos pueden presentarse en distintas variedades conocidas como

isotipos o clases. En mamíferos placentados existen cinco isotipos de anticuerpos
conocidos como IgA, IgD, IgE,IgG e IgM. El isotipo cambia durante el desarrollo y la
activación de los linfocitos B. Antes de la maduración de estos últimos, cuando aún
no se han expuesto a su antígeno, se conocen como linfocitos B vírgenes y sólo
expresan el isotipo IgM en su forma anclada a la superficie celular. Los linfocitos
comienzan a expresar tanto IgM como IgD cuando alcanzan la madurez y en ese
momento están listos para responder a su antígeno. La activación de los linfocitos
B sigue al encuentro y unión de éste con su antígeno, lo que estimula a la célula
para que se divida y se diferencie en una célula productora de anticuerpos
denominada plasmática. En esta forma activada, los linfocitos B comienzan a
secretar anticuerpos en lugar de anclarlos a la membrana. Algunas células hijas de
los linfocitos B activados sufren un cambio isotípico, un mecanismo que provoca
que la producción de anticuerpos en las formas IgM o IgD se trasmute a los otros
tipos, IgE, IgA o IgG, que desempeñan distintos papeles en el sistema inmunitario.

COMPETENCIAS

Usar equipos y materiales especializados de laboratorio, empleados para el

diagnóstico de enfermedades asociadas al sistema inmune, e interpretar
clinicamente los resultados obtenidos. A través de: la cuantificación de
inmunoglobulinas séricas en equipo semiautomatizado de nefelometría.

MATERIALES Y EQUIPO

14
Kit de extracción de sangre
Nefelómetro
Kit de reactivo para determinar el IgA, IgG, IgM.
Micropipetas y puntos (diferentes volúmenes)

PROCEDIMIENTO

1. Obtener una muestra de sangre venosa periférica (SVP) mediante el método

de venopunción habitual, utilizando tubos vacutainer SIN anticoagulante.
2. Centrifugar la muestra durante 10 minutos a 3500 rpm.
3. Separar el suero en un tubo limpio y seco.
4. Almacenar la muestra a 8 °C si no se procesará en ese momento. De lo
contrario, seguir las instrucciones del proveedor del reactivo para realizar la
determinación de IgA, IgG, IgM mediante Nefelometria.

CONCLUSIONES

15
 Fecha:
Dr. A quien corresponda

ESTUDIOS PRACTICADOS A:

ESTUDIO RESULTADO VALOR DE REFERENCIA

Método:

ATENTAMENTE

Responsable

16
PRÁCTICA V. INTERACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO

INTRODUCCIÓN

La reacción Antigeno-Anticuerpo (Ag-Ac) es una de las piedras angulares en

la respuesta inmunológica del cuerpo humano. El concepto se refiere al momento
cuando un anticuerpo se une a un antígeno para inhibir su toxicidad dentro del
cuerpo. El acoplamiento estructural entre las macromoléculas está dado por varias
fuerzas débiles que disminuyen con la distancia, como los puentes de hidrógeno,
las fuerzas de Van Der Waals, las interacciones electrostáticas y las hidrofóbicas.
El reconocimiento Ag-Ac es una reacción de complementariedad, por lo que se
efectúa a través de múltiples enlaces no covalentes entre una parte del antígeno y
los aminoácidos del sitio de unión del anticuerpo. La reacción se caracteriza por su
específicidad, rapidez, espontaneidad y reversibilidad.
Los anticuerpos son moléculas de peso molecular aproximado de 150 kDa,
pertenecientes al grupo de las inmunoglobulinas (Ig). Son moléculas capaces de
reconocer otras moléculas, los antígenos. La capacidad de reconocimiento de un
anticuerpo radica en las secuencias variables de sus cadenas proteicas, generadas
por recombinación de una serie de “genes” en el proceso de producción de los
linfocitos B durante el desarrollo embrionario. La combinatoria de estas secuencias
puede producir más de un billón de secuencias diferentes. Se dividen en varias
clases que se identifican según el tipo de cadena pesada en: IgG, IgM, IgA, IgD e
IgE.
Virtualmente toda molécula ajena a un determinado organismo se comporta
frente a éste como un antígeno, se pueden diferenciar dos características
primordiales en un antígeno. Por una parte la inmunogenicidad o capacidad que
presenta una molécula para generar una respuesta inmune en un organismo dado
y la antigenicidad o particularidad del antígeno que hace que éste sea reconocido
por un determinado anticuerpo. Moléculas de pequeño tamaño (haptenos o
péptidos) son poco inmunogénicas y por ello se asocian a proteínas transportadoras
de alto peso molecular o “acarreadoras” para inducir una respuesta inmune
adecuada. A la región del antígeno reconocida por un anticuerpo se le denomina
epítope o determinante antigénico. Un antígeno puede presentar un número
variable de epítopes de estructura única o repetitiva. La complejidad estructural de
las proteínas favorece que éstas presenten por lo general un número elevado de
epítopes distintos.

COMPETENCIAS

Realizar e interpretar correctamente pruebas básicas de laboratorio útiles

para el diagnóstico clínico.

A través de: la detección cualitativa de complejos inmunológicos en las

pruebas de PCR, ASO, PIE y grupo sanguíneo.

17
MATERIALES Y EQUIPO

Kit de extracción de sangre

Muestra biológica (suero o sangre)
Centrifuga
Kit de reactivo para la determinación
Placas de reacción
Micropipetas y puntos (diferentes volúmenes)

PROCEDIMIENTO

En esta práctica se realizarán cuatro determinaciones relacionadas con la

reacción antígeno-anticuerpo basados en la precipitación y aglutinación. Las
cuales se mencionan a continuación:

1. Determinación cualitativa de Proteína C-Reactiva (PCR)

2. Determinación de hCG en orina y suero (PIE)
3. Determinación del Grupo Sanguíneo del sistema ABO
4. Determinación cualitativa de Anti-estreptolisina O (ASO)
5. Determinación de Reacciones febriles. (no incluida en el manual)

CONCLUSIONES

18
PROTEINA C REACTIVA
La Proteína C reactiva (PCR ó CRP por sus siglas en inglés) es una proteína
plasmática, una proteína de fase aguda producida por el hígado y por los adipocitos.
La PCR es miembro de la clase de reactivos de fase aguda y su nivel
aumenta dramáticamente durante los procesos inflamatorios que ocurren en el
cuerpo. Este incremento se debe a un aumento en la concentración plasmática de
IL-6, que es producida por macrófagos, células endoteliales y linfocitos T, como
también lo hacen los adipocitos. La PCR se liga a la fosforilcolina de los
microorganismos. Se piensa que colabora con el complemento ligándose a células
extrañas y dañadas, y que realce la fagocitosis hecha por macrófagos, quienes
expresan un receptor para PCR. También se cree que desempeña un papel
importante en la inmunidad innata, como un sistema de defensa temprano contra
infecciones. Además se ha demostrado que sus niveles se incrementan en los
episodios agudos coronarios (síndromes coronarios agudos), significando un mal
pronóstico tanto a corto como a largo plazo.
La elevación de la Velocidad de Sedimentación Eritrocitaria (VSG) se
acompaña de la presencia de PCR, pero la elevación de la PCR ocurre antes que
el VSG aumente, usualmente se solicita la determinación de ambos parámetros. La
proteína C reactiva aparece en el suero en la forma de complejo de glicoproteína.
Usos: la PCR se usa como marcador de inflamación. Aparte de un fallo hepático,
se conocen pocos factores que intervengan con la producción de PCR.
Valor de Referencia: normalmente hasta 6 mg/L y varía según el laboratorio en el
cual se realice.
Procedimiento:
1. Obtener una muestra de sangre venosa periférica (SVP) mediante el método
de venopunción habitual, utilizando tubos vacutainer sin anticoagulante.
2. Dejar a temperatura ambiente durante 10-15 minutos para la formación del
coagulo. Centrifugar la muestra durante 10 minutos a 3500 rpm.
3. Separar el suero en un tubo limpio y seco.
4. Almacenar la muestra a 8 °C si no se procesará en ese momento, de lo
contrario, seguir las instrucciones del proveedor del reactivo para realizar la
determinación de PCR.

19
 Fecha:

Dr. A quien corresponda

ESTUDIOS PRACTICADOS A:

ESTUDIO RESULTADO V.R.

Método:

A T E N T A M E N T E.

Responsable

20
PRUEBA INMUNOLÓGICA DE EMBARAZO (PIE)
La gonadotropina coriónica humana (hCG) es una glucoproteína sintetizada
en las células del sincitiotrofoblasto de la placenta, formada por dos cadenas una
alfa (que no son específicas) y otra beta (altamente específica). Aumenta en sangre
y orina poco tiempo después de la implantación. La hormona tiene como objetivo
mantener la funcionalidad del cuerpo lúteo como ente endócrino en la secreción de
progesterona durante el primer trimestre de embarazo.
La hCG es la base histórica y actual del diagnóstico de embarazos, su
diferenciación de los falsos embarazos que pueden constituirse en tumores así
como de los cánceres de próstata, molahidatiforme (lleva al aborto) y
cariocarcinoma (malformaciones al feto y hay que impedir embarazos posteriores
durante 3 años, ya que pueden afectarlo).
La mayor parte de las pruebas químicas buscan la presencia de la subunidad
beta de la gonadotropina coriónica humana (hCG) en la sangre o en la orina. El hCG
se puede detectar en la orina o la sangre después de la implantación del producto
en la matriz, que ocurre de seis a doce días después de la fertilización. Los métodos
cuantitativos (suero beta) pueden detectar niveles de hCG tan pequeños como 1
mIU/mL, mientras que las pruebas de orina requieren de 20 a 100 mIU/mL,
dependiendo de la marca.
Orina: la primera orina de la mañana es la que contiene las concentraciones
más elevadas de hCG, por lo que esta será la mejor muestra para realizar la prueba;
sin embargo cualquier muestra puede servir. La orina deberá ser recolectada en un
recipiente de vidrio o plástico limpio y seco. No se debe utilizar conservadores. La
prueba debe hacerse en el menor tiempo posible después de la recolección, si no
es así, almacenarla entre 2 y 8 °C por un periodo no mayor a 72 horas. Antes de
realizar la prueba, la orina deberá estabilizarse a temperatura y se seguir las
indicaciones del proveedor para la determinación de la hCG
Suero: Realizar la venopunción en tubo sin coagulante, después se dejará a
temperatura ambiente durante 10-15 minutos para la formación del coagulo.
Posteriormente se centrifugará (3500 rpm por 10 min) y el sobrenadante será
retirado y transferido a otro tubo nuevo. De ahí tomar el volumen necesario para
realizar la prueba, de acuerdo a las instrucciones del proveedor.

21
 Fecha:
Dr. A quien corresponda

ESTUDIOS PRACTICADOS A:

ESTUDIO RESULTADO

Método:

A T E N T A M E N T E.

Responsable

22
GRUPOS SANGUINEOS Y FACTOR RH

Un grupo sanguíneo es una clasificación de la sangre de acuerdo a las

características presentes o no en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de
la sangre. Las dos clasificaciones más importantes para describir grupos
sanguíneos en humanos son los antígenos (el sistema ABO) y el factor RH. El
sistema ABO fue descubierto por Karl Landsteiner en 1901, convirtiéndolo en el
primer grupo sanguíneo conocido; su nombre proviene de los tres tipos de grupos
que se identifican: los de antígeno A, de antígeno B, y sin antígeno o cero (Ø) y que
no hay que confundir con la letra "O". Las transfusiones de sangre entre grupos
incompatibles pueden provocar una reacción inmunológica que puede desembocar
en hemólisis, anemia, fallo renal, shock, o muerte.

• Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan
antígenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antígenos B en
el suero de su sangre.
• Las personas con sangre del tipo B tiene la combinación contraria, glóbulos
rojos con antígenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los
antígenos A en el suero de su sangre.
• Los individuos con sangre del tipo O ó 0 (cero) no expresan ninguno de los
dos antígenos (A o B) en la superficie de sus glóbulos rojos pero tienen
anticuerpos contra ambos tipos.
• Mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su
superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos.

Puede recibir sangre de

Tipo de
sangre O- O+ B- B+ A- A+ AB- AB+
AB+ SI SI SI SI SI SI SI SI
AB- SI SI SI SI
A+ SI SI SI SI
A- SI SI
B+ SI SI SI SI
B- SI SI
O+ SI SI
O- SI

Por lo tanto se puede comentar que existen dos tipos de personas:

• Donantes universales: son los que tiene el grupo O Rh negativo (O-). Sus
glóbulos rojos no tienen antígenos por lo que los anticuerpos del receptor no
pueden reaccionar.
23
 • Receptor universal: son las personas que tienen el grupo AB positivo (AB
+). Estas personas no poseen anticuerpos por lo que no rechazan la sangre
trasfundida.

El Factor Rh es una proteína integral de la membrana aglutinógena que está

presente en todas las células. Un 85% de la población tiene en esa proteína una
estructura dominante, que corresponde a una determinada secuencia de
aminoácidos que en lenguaje común son denominados habitualmente Rh+.
Rh- es tener la misma proteína pero con modificaciones en ciertos aminoácidos que
determinan diferencias significativas en la superficie de los glóbulos rojos, y hacen
a los humanos Rh- disponer de anticuerpos (aglutininas) en el plasma que
reaccionan con los glóbulos rojos Rh+.
La transfusión de sangre de un Rh+ a un Rh- que no tiene dicho aglutinógeno
induce la formación de anticuerpos, que en sucesivas donaciones puede aglutinar
la sangre. De ahí que en las donaciones de sangre y órganos se tenga en cuenta
dicho factor. El diminutivo "Rh" es usado para abreviar la palabra rhesus, la cual
significa mono en griego. Su origen se encuentra en 1940, cuando Karl Landsteiner
junto con Alexander Salomon Wiener, descubrieron un antígeno en los hematíes al
que bautizaron como factor Rh, al haber sido hallado en el suero de conejos
inmunizados con sangre procedente de un mono de la India de la especie Macacus
Rhesus.

24
PROCEDIMIENTO:

Se extrae una muestra de sangre mediante una venopunción habitual en un

tubo con anticoagulante (EDTA o Heparina) o bien, se realiza una punción en el
dedo del paciente. En una placa de porcelana, se colocan tres gotas de sangre del
paciente por separado, después se marca cada pocillo como: anti A, anti B y anti D.
A continuación se adiciona una gota del reactivo (de igual volumen que la de la
muestra) correspondiente y se mezclan con un aplicador de madera diferente para
cada pozo. Se toma la placa de porcelana y se agita con movimientos rotatorios
durante 2 minutos. Después se procede a interpretar los resultados como se
muestra en la siguiente tabla:

GRUPO REACCIONA CON ANTIGENO ANTICUERPO

SANGUINEO A B PRESENTE EN SUERO
O - - Ninguno anti-A, anti-B
A + - A anti-B
B - + B anti-A
AB + + A,B Ninguno

25
 Fecha:
Dr. A quien corresponda

ESTUDIOS PRACTICADOS A:

GRUPO SANGUÍNEO FACTOR RH

Método:

ATENTAMENTE

Responsable

26
ANTIESTREPTOLISINA O (ASO)

Es un método cualitativo y semicuantitativo que determina la respuesta

serológica a la infección estreptocócica del grupo A, como en pacientes con
complicaciones de infecciones estreptocócicas no supurantes: fiebre reumática y
glomerulonefritis aguda. Estos pacientes presentan títulos más altos que los que
presentan en infecciones estreptocócicas sin complicaciones.

El examen de ASO es un procedimiento que demuestra la presencia de

anticuerpos generados por el organismo en contra del estreptococo del grupo A. El
ASO es un anticuerpo especifico de la instalación de una infección estreptocócica y
aparece después de dos semanas. Durante la agresión estreptocócica los
anticuerpos ascienden notablemente en la segunda semana, alcanzando su
máxima concentración en la cuarta y sexta semana pera luego disminuir
gradualmente. Es importante hacer notar que la elevación de las antriestreptolisinas
solo demuestra que el paciente está o estuvo en contacto con un estreptococo pero
no certifica la presencia de fiebre reumática.

Los estreptococos B hemolíticos del grupo A producen la enzima

estreptolisina O, que puede producir la lisis y ocasionar la destrucción de la
membrana de los glóbulos rojos. También es antigénico, es decir, que el organismo
produce anticuerpos en contra de él. El anticuerpo puede detectarse en la sangre
durante semanas o meses de erradicado el microorganismo causal de la infección.

PROCEDIMIENTO

1. Obtener una muestra de sangre venosa periférica (SVP) mediante el método

de venopunción habitual, utilizando tubos vacutainer sin anticoagulante.
2. Dejar a temperatura ambiente durante 10-15 minutos para la formación del
coagulo.
3. Centrifugar la muestra durante 10 minutos a 3500 rpm.
4. Separar el suero en un tubo limpio y seco.
5. Almacenar la muestra a 8 °C si no se procesará en ese momento, de lo
contrario, seguir las instrucciones del proveedor del reactivo para realizar la
determinación de ASO.

REVISAR: MÉTODO SEMICUANTITATIVO.

27
 Fecha:
Dr. A quien corresponda

ESTUDIOS PRACTICADOS A:

ESTUDIO RESULTADO V. DE REFERENCIA

Método:

A T E N T A M E N T E.

Responsable

28
CUADRO COMPARATIVO DE LAS TÉCNICAS EMPLEADAS

29
CONCLUSIONES: PCR, PIE, ASO, GRUPO SANGUÍNEO

30
PRÁCTICA VI. INMUNIDAD FRENTE A MICROORGANISMOS

PARTE I. Inmunoprecipitación, Electroforesis, Electrotransferencia e Inmunotinción.

Identificación de antígenos complejos. Técnica de inmunocromatografía para VIH.
Periodo ventana y efecto poszona.

PARTE II. ELISA, determinación del punto de corte, Inmunodiagnóstico y

seroepidemiologia. Prueba confirmatoria para VIH (Western Blot). Anexo 5.

INTRODUCCIÓN

A través de una serie de pasos conocidos como respuesta inmunitaria, el

sistema inmunitario ataca a los organismos y sustancias que invaden nuestros
cuerpos y que podrían provocarnos enfermedades.
Las células que forman parte de este sistema de defensa son los glóbulos
blancos, o leucocitos que trabajan conjuntamente para localizar y destruir los
organismos o sustancias que provocan enfermedades. El SIDA (síndrome de
inmunodeficiencia adquirida) va destruyendo lenta y progresivamente el sistema
inmunitario. Esta enfermedad es provocada por el VIH (virus de la
inmunodeficiencia humana), que aniquila ciertos tipos de linfocitos denominados
células T cooperadoras. Sin este tipo de células, el sistema inmunitario no puede
defender al cuerpo contra organismos normalmente inofensivos, los cuales pueden
provocar infecciones muy graves en las personas con SIDA.

Para el diagnóstico del SIDA o de la infección por VIH es importante

conocer el concepto de periodo ventana o de seroconversión, se refiere al primer
estadio de la infección, es decir que, a pesar de un resultado negativo (no reactivo),
la persona puede estar infectada y, por lo tanto, transmitir el virus, debido a que el
organismo no ha tenido aún tiempo de desarrollar la suficiente cantidad de
anticuerpos en la sangre para ser detectados a través de la prueba de
inmunocromatografía ELISA o Western Blot. El período ventana, entonces, se
extiende desde el ingreso del virus al organismo hasta el momento en que éste
genera el número de anticuerpos necesario para ser captados por las pruebas. En
promedio a los 21 días del contacto de riesgo el 90% de las personas infectadas ya
tienen anticuerpos, y a los 60 días se considera un 99% confiable, aun así el
resultado de la prueba a los 3 meses o 90 días no es el definitivo. Se aconseja
repetir la prueba a los 6 meses para confirmar que no hubo errores debidos a la
evolución de la enfermedad. Anexo 5.

31
 Las técnicas realizadas más frecuentemente son: inmunocromotografía,
ELISA (PRUEBAS PRESUNTIVAS) y WESTERN BLOT (PRUEBA
CONFIRMATORIA).

COMPETENCIAS

Emplear adecuadamente la Norma Oficial Mexicana para el diagnóstico de

enfermedades infecciosas de interés en salud pública.

A través de: realizar la detección presuntiva del VIH, y analizar los

fundamentos de pruebas con mayor sensibilidad (ELISA y Western Blot).

MATERIALES Y EQUIPO

Kit de extracción de sangre

Tira reactiva para la prueba de VIH
Micropipetas y puntas (diferentes volúmenes)

PROCEDIMIENTO

1. Obtener una muestra de sangre venosa periférica (SVP) mediante el método

de venopunción habitual, utilizando tubos vacutainer sin anticoagulante.
2. Centrifugar la muestra durante 10 minutos a 3500 rpm.
3. Separar el suero en un tubo limpio y seco.
4. Almacenar la muestra a 8 °C si no se procesará en ese momento. De lo
contrario, seguir las instrucciones del proveedor del reactivo para realizar el
test de VIH de acuerdo a las instrucciones del proveedor.

CONCLUSIONES

32
 Fecha:

Dr. A quien corresponda

ESTUDIOS PRACTICADOS A:

ESTUDIO RESULTADO VALOR DE

REFERENCIA

Método:

ATENTAMENTE

Responsable

33
PARTE II. INMUNIDAD FRENTE A MICROORGANISMOS

ELISA, determinación del punto de corte, Inmunodiagnóstico y seroepidemiología.

Prueba confirmatoria para VIH (Western Blot). Anexo 4.

Esta sección consiste en: conocer, comparar, discutir, explicar y evaluar las
diferentes técnicas empleadas en el diagnóstico del VIH. En esta sesión los alumnos
correspondientes darán una ponencia en donde se explicarán todos los aspectos
relacionados con el diagnóstico del VIH. Al final, se realizará un análisis de
Fortalezas, Oportunidades, Debilidades y Amenazas (conocido como análisis
FODA) de cada metodología.

COMPETENCIAS

Evaluar diferentes metodologías de diagnóstico clínico que permitan formar

un criterio de selección para elegir la prueba adecuada para el diagnóstico
inmunológico de VIH.

A través de: Realizar un análisis FODA de las pruebas presuntivas y

confirmatorias señaladas en la NOM vigente para el diagnóstico de VIH.

34
ANÁLISIS FODA DE LAS TÉCNICAS EN EL DIAGNÓSTICO CLÍNICO DE VIH

35
PRÁCTICA VII. AUTOINMUNIDAD

PARTE I: ANTICUERPOS ANTINUCLEARES (ANA)

INTRODUCCIÓN

El sistema inmune (SI) tiene como función primordial la defensa del

organismo, a través del reconocimiento de antígenos potencialmente patógena y su
eliminación mediante dos mecanismos efectores: la inmunidad humoral y la
inmunidad celular. Sin embargo, éstos pueden fallar por una inadecuada respuesta
a patógenos (inmunodeficiencia), por falta de reconocimiento a lo propio
(autoinmunidad) o por una respuesta exagerada e inapropiada a un antígeno
(hipersensibilidad)
Anteriormente, se pensaba que el fenómeno de autoinmunidad solo se
presentaba en procesos patológicos, ahora sabemos que no es necesariamente
patológica ni ocasional, ya que los fenómenos autoinmunes pueden presentarse en
sujetos normales o pueden acompañar a algunas enfermedades infecciosas y sólo
bajo ciertas circunstancias evolucionaran a enfermedad, encontrando que la
autoinmunidad, en individuos sanos, aumenta con frecuencia al avanzar la edad.
Por tanto, el reconocimiento de lo propio y lo no propio por el SI es de capital
importancia para el entendimiento de la autoinmunidad. Para prevenir la
autoagresión, el SI cuenta con mecanismos que le permiten identificar a los
antígenos derivados de la misma (alogénicos) o de otras especies (xenogénicos) y
puede distinguirlos de los propios (singénicos).
El SI puede distinguir normalmente las células propias de las células o
agentes extraños, pero algunos linfocitos son capaces de reaccionar contra uno
mismo, dando por resultado una reacción autoinmune. Normalmente, estos
linfocitos son suprimidos por otros linfocitos. La autoinmunidad ocurre de manera
natural en todas las personas hasta un cierto grado; y en la mayoría de nosotros no
provoca enfermedades. Las enfermedades autoinmunes ocurren cuando se
produce cierta alteración en el proceso de control, permitiendo que los linfocitos
eviten la supresión, o cuando hay una alteración en algún tejido del cuerpo, de modo
que ya no es reconocido como propio y es atacado. No se conocen del todo los
mecanismos exactos que producen estos cambios en el proceso de control; pero
las bacterias, los virus, las toxinas, y algunos fármacos (o sustancias extrañas)
pueden desempeñar un papel en la aparición de un proceso autoinmune en
personas con alguna predisposición genética para desarrollar dicha enfermedad.
Además de otros factores como las hormonas o la luz UV. Las enfermedades
autoinmunes pueden clasificarse en dos grandes grupos: específica de órganos y
específicas de sistemas

36
COMPETENCIAS

Emplear técnicas especializadas para el diagnóstico de enfermedades

autoinmunes de interés en salud pública.

A través de: la determinación semicuantitativa de ANA y FR en pacientes con

diagnóstico presuntivo de enfermedades autoinmunes.

PROCEDIMIENTO

1. Obtener una muestra de sangre venosa periférica (SVP) mediante el método

de venopunción habitual, utilizando tubos vacutainer sin anticoagulante.
2. Centrifugar la muestra durante 10 minutos a 3500 rpm.
3. Separar el suero en un tubo limpio y seco.
4. Almacenar la muestra a 8 °C si no se procesará en ese momento, de lo
contrario, seguir las instrucciones del proveedor del reactivo para realizar la
determinación de los anticuerpos antinucleares.

SUERO POR INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

1.- Diluir el suero problema de la siguiente manera:
2
No Tubo 1 2 3 4
Dilución 1:10 1:30 1:100 1:1000
PBS 0.9 ml 0.2 ml 0.9 ml 0.9 ml
Suero 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml

2.- Laminillas con dos cortes congelados de hígado de ratón márquelas de la

siguiente manera: dos laminillas para las diluciones del suero, una para control
positivo y control negativo.
3.- Cubra cada uno de los cortes de hígado con las diluciones de suero o controles
respectivamente, evite cubrir con cantidades muy pequeñas o muy grandes, ya que
en el primer caso se evaporará el suero y en el segundo podrá correrse hacia el
corte contiguo.
4.-Incubar a temperatura ambienten cámara húmeda durante 20’.
5.- Elimine el exceso de suero sobre un papel absorbente y lave las laminillas
durante 5 min en jarras de Coplin previamente llenadas con PBS.
6.-Saque las laminillas y elimine el exceso de PBS con papel absorbente, evite tocar
los cortes.
7.- Cubra los cortes con antisuero, anti-IgG humano conjugado a FITC (Sigma),
diluido 1:60 en PBS.
8.- Repita: incubación en cámara húmeda por 15 min, lavar las laminillas en PBS y
secar las laminillas con papel absorbente.
9.-Cubra los cortes con laminillas cubre-objetos, colocándoles previamente una gota
de medio de montaje.
10.-Observe al microscopio de Fluorescencia.
PATRONES DE ANA OBSERVADOS
37
Figura 1. Tipos de ANA fluorescente: (a) moteados, (b) homogéneos, (c) periféricos
(anillo) y (d) nucleolares.

CONCLUSIONES

38
 Fecha:

Dr. A quien corresponda

ESTUDIOS PRACTICADOS A:

ESTUDIO RESULTADO PATRÓN OBSERVADO

Método:

ATENTAMENTE

Responsable

39
PARTE II: FACTOR REUMATOIDE

INTRODUCCIÓN

La artritis reumatoide es una enfermedad destructiva que afecta básicamente

a las articulaciones de las extremidades, sobre todo a la de los dedos. A medida
que la enfermedad progresa, se afectan más articulaciones. La artritis reumatoide
se caracteriza por la destrucción del cartílago articular y la inflamación de la
membrana sinovial. Los pacientes con la forma adulta de la artritis reumatoide tienen
con frecuencia anticuerpos circulantes, que pueden ser IgM o IgG, reactivos con las
porciones Fc (y raramente Fab) de sus propias moléculas IgG. Estos anticuerpos
se llaman factores reumatoides, y su presencia se utiliza como una prueba
diagnóstica de la artritis reumatoide.

El factor reumatoide está constituido por inmunoglobulinas con especificidad

para el fragmento Fc de la IgG. La mayoría de los métodos de los laboratorios
detectan el factor reumatoide IgM 19S, pero también se observan propiedades de
factor reumatoide tanto en las inmunoglubulinas IgM e IgG 7S como en la IgA. El
factor reumatoide está presente en enfermos con artritis reumatoide, lupus
eritematoso generalizado, artritis reumatoide juvenil, Sindrome de Sjogren,
esclerosis generalizada progresiva, mononucleosis infecciosa y en algunos
pacientes con poliomielitis.

La prueba de aglutinación con partículas de látex es hoy en día el método

más comúnmente empleado para la detección del factor reumatoide, la
gammaglobulina agregada es absorbida sobre partículas de látex, que se aglutinan
en presencia del factor reumatoide, la prueba de aglutinación con partículas de látex
no es específica, pero sí muy sensible. La aglutinación positiva con las partículas
de látex ocurre también en los enfermos con hipergamaglobulinemia asociada a
hepatopatias, kala-azar, sarcoidosis y sífilis.

MATERIALES Y EQUIPO

Kit de extracción de sangre

Placas de reacción
Kit de reactivo para determinar Factor Reumatoide
Micropipetas y puntas (diferentes volúmenes)

40
PROCEDIMIENTO

1. Obtener una muestra de sangre venosa periférica (SVP) mediante el método

de venopunción habitual, utilizando tubos vacutainer sin anticoagulante (tubo
rojo).
2. Centrifugar la muestra durante 10 minutos a 3500 rpm.
3. Separar el suero en un tubo limpio y seco.
4. Almacenar la muestra a 8 °C si no se procesará en ese momento, de lo
contrario, seguir las instrucciones del proveedor del reactivo para realizar la
determinación del factor reumatoide.

CONCLUSIONES

41
 Fecha:

Dr. A quien corresponda

ESTUDIOS PRACTICADOS A:

ESTUDIO RESULTADO V.R.

Método:

ATENTAMENTE

Responsable

42
CUADRO COMPARATIVO DE LAS TÉCNICAS EMPLEADAS

43
 ANEXO 1

MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICO-INFECCIOSOS (RPBI)

Los residuos peligrosos biológicos infecciosos (RPBI), son aquellos que se

generan durante las actividades asistenciales a la salud de humanos o animales en
los centros de salud, laboratorios clínicos o de investigación, bioterios, centros de
enseñanza e investigación, principalmente; que por el contenido de sus
componentes puedan representar un riesgo para la salud y el ambiente. Los RPBI
son riesgo debido a que pueden contener agentes biológicos infecciosos que se
definen como “cualquier microorganismo capaz de producir enfermedades cuando
está presente en concentraciones suficientes (inóculo), en un ambiente propicio
(supervivencia), en un hospedero susceptible y en presencia de una vía de entrada”.

Los RPBI deberán ser desechados de acuerdo a la reglamentación vigente

de la Secretaría de Salud, en función de la NOM-087-ECOL-SSA1-2002. A
continuación se presentan la información que te ayudará a clasificar correctamente
los desechos generados.

TIPO DE RESIDUO EDO. ENVASADO COLOR

FÍSICO
Sangre Líquido Recipientes Rojo
Herméticos
Cultivos y Cepas de Sólido Bolsa de Plástico Rojo
Agentes Infecciosos
Residuos No Anatómicos Sólido Bolsa de Plástico Rojo
Patológico Sólido Bolsa de Plástico Amarillo
Patológico Líquido Recipientes Amarillo
Herméticos
Objetos Punzocortantes Sólido Recipientes Rígidos Rojo

Torunda o gasa empapada, saturada o goteando sangre,

Jeringas sin aguja con sangre, guantes con sangre, tiras
reactivas, tapones con sangre, papel sanitario empapado o
saturado de sangre, unidades de reacción (vacios).

Órganos o partes de órganos tejidos, cadáveres de animales y

vísceras

Agujas, Cubreobjetos y portaobjetos, Hojas de bisturí, Lancetas

y Pipetas Pasteur. Sangre, suero, plasma, coágulos, Hisopos
con residuos anatómicos. Tubos de vidrio que hayan contenido
sangre.

44
En cada mesa se tendrá un recipiente (con una solución de hipoclorito de sodio) en
el cual se depositarán las puntas de micropipetas con residuos de sangre, suero o
plasma que se hayan utilizado.

Material que se debe tirar en BOTE DE BASURA MUNICIPAL

• Torundas sin sangre o con pequeños rastros de sangre.
• Capucha de la aguja verde o blanca.
• Desecho de los curitas.
• Estuche de las jeringas.
• Bolsa de los botes para muestras.
• Bolsa de los guantes.
• Abatelenguas.
• Tubos y aplicadores impregnados de pequeñas cantidades de sangre,
suero o plasma.

45
 ANEXO 2

ÓRGANOS LINFOIDES EN EL RATÓN

FIGURA 1. Esquema de los órganos linfoides del ratón.

46
 ANEXO 3

CÁMARA DE NEUBAUER

La Cámara de Neubauer es un instrumento utilizado en cultivo celular para

realizar conteo de células en un medio de cultivo líquido. Esta cámara de contaje
está adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de
un portaobjetos con una depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado
con la ayuda de un diamante una cuadrícula de dimensiones conocidas. Consta de
dos placas de vidrio, entre las cuales se puede alojar un volumen conocido de
líquido. Para contar las células de un cultivo líquido, se agrega una gota de este
entre estas dos placas y observar al microscopio óptico la cantidad de células
presentes en un campo determinado de la cuadrícula.
Con base en la cantidad de células contadas, conociendo el volumen de
líquido que admite el campo de la grilla, se calcula la concentración de células por
unidad de volumen de la solución de medio de cultivo inicial
Para determinar la viabilidad celular se emplean diferentes métodos. El más
común es el de tinción con azul tripán. El azul tripán es un coloide que se introduce
en el interior de las células que presentan roturas en la membrana. Así pues las
células que aparecen en la imagen, claramente de color azul, son consideradas no
viables.

47
ANEXO 4

48
BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA

Inmunología biológica y patológica del sistema inmune

J.R. Regueiro González
Medica-Panamericana
Última Edición.

Inmunología Celular y Molecular

Abul K. Abbas
Mc. Graw-Hill. Interamericana
Séptima Edición.

Libro Electrónico en línea Inmunología

José Peña Martínez
Edit. Universidad de Córdoba, España, Phadia, Año 2007

Diagnóstico y Tratamiento Clínico por el Laboratorio

Jonh Bernand Henry
9ª edición
Editorial Masson

NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Protección ambiental - Salud ambiental - Residuos

peligrosos biológico-infecciosos - Clasificación y especificaciones de manejo

NOM-007-SSA-2011. ORGANIZACIÓN Y FUNCIONAMIENTO DE LOS

LABORATORIOS CLÍNICOS

49