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32.1.18 no  se  usa  regularmente.  
Método  oficial  de  la  AOAC  992.16   (j)  Secador  por  congelación.—Para  secar  muestras  de  alimentos  con  un  mínimo  
Fibra  dietética  total   daño  por  calor  (el  congelador  móvil  Virtis,  con  cámara  de  secado  No.  10­MR­TR  es  

Método  enzimático­gravimétrico   adecuado).  
Primera  acción   (k)  Molino  de  corte .  Cuchillas  giratorias  de  baja  velocidad  en  el  fondo  de  la  
1992  Acción  final  1997 cámara  con  malla  intercambiable  de  20  mallas  (Wiley,  modelo  intermedio,  Fisher  No.  
08­338  es  adecuado).  (Nota:  los  molinos  rotatorios  de  alta  velocidad  no  son  adecuados  
(Aplicable  a  la  determinación  de  la  fibra  dietética  total  en  cereales,  frijoles,  verduras  y  
porque  producen  partículas  finas  que  pueden  pasar  a  través  del  crisol  de  vidrio  fritado).  
frutas).
(l)  Desecador.

Rendimiento  del  método  (base  de  peso  seco):  nabo,  
20,71  %:  sr  =  1,01;   C. reactivos
sR  =  1,37;  RSDr  =  4,85%;  RSDR  =  6,60%  Salvado  de  trigo,   (a)  Solución  de  detergente  neutro.  Disolver  148,5  g  de  laurilsulfato  de  sodio  en  3  L  
46,30%:  sr  =  0,69;  sR  =   de  H2O.  Disuelva  92,12  g  de  EDTA  disódico  y  33,70  g  de  tetraborato  de  sodio  
1,91;  RSDr  =  1,48%;  RSDR  =  4,13%  Frijol,  18,19%:  sr  =  0,90;  sR   (Na2B4O7 10  H2O)  en  1  L  de  H2O  agitando  y  calentando  y  agréguelo  a  la  solución  
=  2,06;  RSDr  =   de  laurilsulfato  de  sodio.
4,93%;  RSDR  =  11,30%  Arroz,  1,21%:  sr  =  0,18;  sR  =  0,22;  RSDr   Disuelva  22,57  g  de  fosfato  de  sodio  dibásico  anhidro  (Na2HPO4)  en  1  L  de  H2O  
=  14,73%;  RSDR   agitando  y  calentando  y  agréguelo  a  la  otra  solución.  Mezclar  bien.  el  pH  debe  estar  
=  17,94%  Pan  integral,  10,29%:  sr  =  0,74;  sR  =  0,80;  RSDr  =  7,18%;   entre  6,9  y  7,1;  ajustar  usando  NaOH  o  HCl.  (b)  Tampón  de  fosfato:  0,1  M,  pH  7,0  ±  
RSDR  =  7,81% 0,1.  

Mezcle  610  ml  de  Na2HPO4  0,1  M  con  390  ml  de  monohidrato  monobásico  de  
fosfato  de  sodio  0,1  M  (NaH2PO4 H2O).
A. Principio
Las  muestras  de  alimentos,  secas  y  molidas,  se  extraen  de  la  grasa  si  contienen  
(c)  Solución  de  acetato  de  sodio:  2,0  M.  Disolver  164,06  g  de  sodio
>5%  de  grasa.  Una  parte  de  la  muestra  se  trata  en  autoclave  con  amilasa  termoestable,  
acetato  en  H2O  y  diluir  a  1  L.
amiloglucosidasa  y  proteasa  para  eliminar  el  almidón  y  la  proteína.  La  fibra  sin  digerir  
(d)  Tampón  de  acetato:  2,0  M,  pH  4,5  ±  0,1.  Mezcle  200  ml  de  acetato  de  sodio  2,0  
enzimáticamente  se  precipita  con  etanol  y  se  filtra.  El  residuo  se  seca,  se  pesa,  se  
M,  (c),  con  300  ml  de  ácido  acético  2,0  M.  Ajuste  el  pH,  si  es  necesario,  agregando  
reduce  a  cenizas  y  se  vuelve  a  pesar.  Una  segunda  porción  de  la  muestra  se  somete  
acetato  de  sodio  o  ácido  acético.  (e)  Solución  
a  reflujo  con  detergente  neutro  y  se  trata  con  α­amilasa  de  páncreas  porcino  para  
de  etanol.—80%.  Diluya  800  mL  de  etanol  anhidro  a  1  L  con  H2O.  (f)  Acetona.—
eliminar  los  carbohidratos  y  las  proteínas  solubles  en  agua.  El  residuo  se  seca,  se  
Vidrio  destilado.  
pesa,  se  reduce  a  cenizas  y  se  vuelve  a  pesar.  La  fibra  dietética  total  se  calcula  como  
(g)  Auxiliar  de  filtración.  —Celite  
la  suma  de  los  2  residuos.
(No.  C­211,  Fisher  Scientific).  No  se  conoce  un  sustituto  adecuado.  (Precaución:  
Celite  es  un  irritante  para  los  pulmones,  la  piel  y  los  ojos;  evite  la  inhalación  y  el  

B. Aparato contacto  con  la  piel  y  los  ojos).

(a)  Autoclave  u  olla  a  presión.—Capaz  de  15  psi.  (b)  Tubos:  50  ml,   (h)  Lana  de  vidrio .  Fibra  de  vidrio  de  borosilicato,  8  µm  de  diámetro,  libre  de  flúor,  

resistentes,  con  tapones  de  rosca  (Pyrex,  Fisher  No.  05–558–5B,  Fisher  Scientific,   alúmina  y  metales  pesados  (Pyrex  es  adecuado).

Pittsburgh,  PA  15219,  EE.  UU.  o  Corning  No.  8422,  Corning,  Inc.,  Corning,  NY  14831,   (i)  Solución  de  α­amilasa.—Agitar  5,0  g  de  α­amilasa,  tipo  VI­B  (No.  A­3176,  Sigma  

EE.  UU.  son  adecuados).  (c)  Hornos.—(1)  Tiro  forzado,  capaz  de  mantener  105  ±  1°. Chemical  Co.,  St  Louis,  MO  63178,  EE.  UU.  es  una  fuente  adecuada),  con  100  ml  de  
tampón  de  fosfato,  (b),  15  min.
Centrifugar  10  min  a  1500  ×  g  y  filtrar  a  través  de  un  crisol  de  vidrio  sinterizado  grueso  

(2)  Capaz  de  mantener  55  ±  0,5°.  (d)  Baños  de   que  contiene  lana  de  vidrio.  Preparar  diariamente  y  almacenar  a  4°  cuando  no  esté  en  
uso.
agua .—(1)  Ebullición.  (2)  Capaz  de  mantener  60  ±  0,5°.
(j)  Solución  de  amiloglucosidasa .  La  amiloglucosidasa  de  Asper  gillus  niger  (No.  

(e)  Balanza.—Analítica,  sensible  a  0,1  mg.  (f)  Horno  de   A9913,  Sigma  Chemical  Co.  es  una  fuente  adecuada).
Conservar  a  4°.
mufla.—Con  regulador  de  temperatura  capaz  de  525  ±  1°  (Fisher  Isotemp,  Modelo  
497,  o  Thermoline  equipado  con  controlador  Furnatrol  son  adecuados). (k)  Solución  de  proteasa.  —Proteasa  para  el  ensayo  de  fibra  dietética  total  (No.
3910,  Sigma  Chemical  Co.  es  una  fuente  adecuada).  Conservar  a  4°.  Prepare  50  mg/

(g)  Sistema  de  extracción  de  fibra  con  detergente  neutro.  Aparato  de  extracción   ml  de  H2O  justo  antes  de  usar.

con  (1)  condensador  para  caber  en  un  vaso  de  precipitados  de  forma  alta  de  600  ml   (l)  Amilasa  termoestable .  ­  Alfa­amilasa  para  el  ensayo  de  fibra  dietética  total  (No.  

sin  pico,  (2)  placa  caliente  capaz  de  hervir  100  ml  de  detergente  neutro  en  5  a  10   A3306,  Sigma  Chemical  Co.  es  una  fuente  adecuada).  Conservar  a  4°.

minutos,  y  (3)  dispositivo  de  filtración  equipado  con  soporte  adecuado  para  crisol  
(Precaución:  las  enzimas  secas  pueden  causar  una  reacción  alérgica.  Manipular  en
(Fibertec  system  1,  Tecator,  Fisher  No.  TC  1010­001  es  adecuado).
campana  extractora  y  evite  la  inhalación.)

(h)  Sistema  de  filtración.—  Crisol  Gooch  con  soporte  adecuado  y  matraz  de   D. Idoneidad  de  la  enzima Prueba

succión  (Fibertec­E,  con  matraces  de  incubación,  Tecator,  Fisher  No. Cada  3  meses  o  cada  vez  que  cambie  el  lote  de  enzimas,  verifique  la  actividad  
TC­1023­002  es  adecuado).  (i)   enzimática  completa  y  la  ausencia  de  actividades  enzimáticas  indeseables  ejecutando  
Crisoles  de  vidrio  fritado  (sinterizado).—(1)  Tipo  Gooch,  50  mL,  grueso,  ASTM  40– los  estándares  enumerados  en  la  Tabla  992.16  en  este  método.
60  µm;  o  crisoles  P2  de  40–90  µm  (Tecator  No.  1000  1172).  (2)  Tipo  Gooch,  50  mL,  
ASTM  medio,  10–15  µm  (Fisher  No.
08­237­1B)  con  adaptadores  de  anillo  de  goma.  Calentar  2  h  a  525°  antes  de  usar,  si

©  1998  AOAC  INTERNACIONAL
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Seque  el  crisol  y  el  contenido  durante  la  noche  a  105°  en  un  horno  de  tiro  forzado.  Enfriar  
Tabla  992.16  Estándares  para  probar  la  actividad  enzimática
en  un  desecador  a  temperatura  ambiente  y  pesar  con  una  precisión  de  0,1  mg  (C1r).
Peso  del   Actividad   Recuperación   Residuo  de  ceniza  4  h  a  525°.  Enfriar  en  un  desecador  a  temperatura  ambiente  y  pesar  con  
Estándar estándar,  g probada esperada,  %
una  precisión  de  0,1  mg  (C1a).

Maicena 0.5 0­1 (b)  Pese  con  precisión  (S2)  el  segundo  conjunto  de  porciones  duplicadas  de  0,5  g  de  

Amilasa
(Sigma  S­2388) muestra  con  una  precisión  de  0,1  mg,  en  un  vaso  de  precipitados  de  forma  alta  de  600  ml  o  en  

Almidón  de  trigo 0.5 0­1 un  crisol  P2 .  Agregue  100  ml  de  solución  de  detergente  neutro  al  vaso  de  precipitados;  

Amilasa
(Sigma  S­1514) colóquelo  en  una  placa  caliente  y  coloque  el  condensador  (o  coloque  el  crisol  P2  en  el  extractor  

Caseína 0.5 Proteasa 0­1 caliente  y  agregue  100  ml  de  solución  de  detergente  neutro,  precalentada  a  80°,  a  la  columna  

(Sigma  C­7906) de  ebullición).  Calentar  hasta  que  hierva  en  5  a  10  min;  luego  reducir  el  calor  y  reflujo  60  min  

0.1 90–95 desde  el  inicio  de  la  ebullición.  Filtrar  a  través  de  Gooch  grueso  o  crisol  P2 .  Lave  el  residuo  

β­glucano β­glucanasa
(Sigma  G­7391) con  aprox.  100  ml  de  H2O  caliente.  Si  la  filtración  es  difícil,  aplique  cualquiera  de  los  siguientes  

0.1 pectinasa 80–85 procedimientos  para  facilitar  la  filtración:  (1)  aplique  contrapresión,  (2)  agregue  100  µL  de  

pectina  de  cítricos
(Sigma  P­7536) amilasa  termoestable,  (3)  agregue  aprox.  0,5  g  de  Celite  al  crisol,  (4)  reduzca  el  peso  de  la  

0.2 hemicelulasa 95–100 muestra  a  0,3  g  y  analice  por  triplicado,  o  (5)  limpie  el  crisol  o  (6)  use  un  crisol  nuevo.

arabinogalactano
(Sigma  A­9788)
Agregue  10  mL  de  solución  de  α­amilasa  fría  y  15  ±  2  mL  de  H2O  caliente  al  crisol  y  

MI. Preparación  de  la  muestra mantenga  5  min  en  el  dispositivo  de  filtración  o  extractor  caliente  sin  calentar.  Aplique  succión  

para  eliminar  la  solución  enzimática  y  lave  los  residuos  con  aproximadamente  20  ml  de  H2O  
Muestras  húmedas  liofilizadas.  Muele  las  muestras  usando  un  molino  de  corte  equipado  
caliente.  Tape  el  fondo  del  crisol  (utilice  el  tapón  de  goma  n.°  8  para  el  crisol  Gooch  o  el  n.°  7  
con  un  tamiz  de  malla  20  en  la  parte  inferior  de  la  cámara  de  corte.  Si  el  contenido  de  grasa  es  
para  el  crisol  P2 )  y  agregue  10  ml  de  solución  de  α­amilasa  fría  y  15  ±  2  ml  de  H2O  caliente.  
≥5%,  desengrasar  la  muestra  seca  agregando  4  volúmenes  de  acetona,  agitando  durante  1  
Incubar  60  min  en  horno  a  55°.  Filtrar  en  un  dispositivo  de  filtrado  o  extractor  frío  y  lavar  el  
hora  a  temperatura  ambiente  y  evaporando  la  acetona  durante  2  horas  a  55°.  Registre  la  
residuo  sucesivamente  con  aprox.  100  mL  de  H2O  caliente  y  dos  porciones  de  20  mL  de  
pérdida  de  peso  debido  a  la  eliminación  de  grasa  y/o  H2O  y  realice  la  corrección  adecuada  al  
acetona.  Desechar  los  eluatos.
peso  de  la  muestra  en  el  cálculo  del  %  de  fibra  dietética.

F. Fibra Determinación Seque  el  crisol  y  el  contenido  durante  la  noche  a  105°  en  un  horno  de  tiro  forzado.  Enfriar  

(a)  Pesar  con  precisión  (S1)  duplicar  porciones  de  0,5  g  de  muestra  con  una  precisión  de   en  un  desecador  a  temperatura  ambiente  y  pesar  con  una  precisión  de  0,1  mg  (C2r).

0,1  mg  en  tubos  de  50  ml  con  tapón  de  rosca.  Ejecute  blancos  de  reactivo  duplicados.  Agregue   Residuo  de  ceniza  4  h  a  525°.  Enfriar  en  desecador  a  temperatura  ambiente  y  volver  a  pesar  

20  ml  de  H2O  y  2  ml  de  tampón  de  acetato  y  mezcle.  Autoclave  60  min  a  120°  y  15  psi  (con  la   (C2a).

tapa  aflojada).  Disminuya  la  presión  del  autoclave  lentamente  antes  de  retirar  el  tubo  del  
GRAMO. Cálculos
autoclave.  Agregue  0,1  ml  de  amilasa  estable  al  calor,  mezcle  e  incube  en  un  baño  de  H2O  
Fibra  dietética  total:
hirviendo  durante  30  min.
Filtrar  a  través  de  un  crisol  grueso  de  Gooch  (o  P2  con  Fibertec),  que  contiene  aprox.  0,5  g  de  
FDT,  %  =  {[(C2r  –  C2a)/S2]  +  [(C1r  –  C1a  –  B)/S1]}  ×  100
Celite,  en  un  aparato  de  filtración  equipado  con  un  matraz  de  succión  (o  Fibertec  E  equipado  
con  un  matraz  de  incubación)  para  recibir  el  filtrado. Blanco  (B)  =  Cb  –  Ca
Enjuague  el  tubo  con  10  mL  de  H2O  caliente  y  agregue  el  enjuague  al  crisol  (agregando  al  
filtrado).  Retire  el  crisol  y  enjuague  el  dispositivo  de  filtración,  o  el  tubo  Fibertec  E,  con  5  ml  de  
H2O  caliente  (95–100°)  (añadiendo  al  filtrado).  Al  filtrado  combinado,  agregue  4  ml  de  solución   donde  Cb  =  peso  del  crisol  con  blanco;  Ca  =  peso  del  crisol  con  blanco  después  de  la  

de  acetato  de  sodio  y  mezcle.  Agregar  0,3  mL  de  solución  de  amiloglucosidasa,  tapar,  mezclar   incineración;  C1r  =  peso  del  crisol  con  residuo,  F(1);  C1a  =  peso  del  crisol  con  residuo  después  

e  incubar  30  min  en  baño  de  H2O  a  60° .  Agregue  0,1  mL  de  solución  de  proteasa  y  continúe   de  la  incineración,  F(1);  C2r  =  peso  del  crisol  con  residuo,  F(2);  C2a  =  peso  del  crisol  con  

la  incubación  a  60°  durante  30  min. residuo  después  de  la  incineración,  F(2);  y  S1  y  S2  =  pesos  de  las  muestras  secas.

Agregar  4  volúmenes  (166  mL)  de  etanol  anhidro  y  mezclar.  Deje  que  se  forme  el   Referencias:  Cereal  Foods  World  35,  319  (1990);  J.  AOAC  Int.  76,  
precipitado  a  temperatura  ambiente  ≥60  min.  Filtrar  la  mezcla  a  través  de  un  crisol  Gooch   923  (1993).
mediano  que  contiene  lana  de  vidrio.  Enjuague  el  residuo  sucesivamente  con  dos  porciones  de  
Revisado:  marzo  de  1998
20  mL  de  etanol  al  80%  y  dos  porciones  de  20  mL  de  acetona.
Desechar  los  eluatos.

©  1998  AOAC  INTERNACIONAL