Columbus University PROFESORA: MARITZEL PALMA

SISTEMA DE GESTIÓN DE CALIDAD 2023

PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA
PROPEDÉUTICO MINSA-IFARHU

PRÁCTICA Nº5: TINCIONES HISTOLÓGICAS

OBJETIVOS:
1. Identificar las principales tinciones histológicas.
2. Observar imágenes de tejidos.

INTRODUCCIÓN:
El objeto de estudio de la histología son los tejidos (y las células que los componen). A fin de
estudiarlos y comprenderlos, cuenta con dos poderosas herramientas que le permiten observar
la microestructura celular y tisular: la microscopía y la técnica histológica.

La técnica histológica es la serie de pasos ordenados que permiten preparar al tejido para su
observación a través del microscopio. El tejido se prepara para su observación de acuerdo con
el tipo de microscopio que será utilizado.

En el caso de la microscopía de campo claro, la técnica más común para preparar las muestras
es la técnica histológica ordinaria o de inclusión en parafina. En este proceso, las muestras se
infiltran en parafina, con el fin de que tengan la consistencia adecuada para obtener los bloques
con las muestras o especímenes. Una vez que se tienen los bloques (inclusión), éstos se
cortan en un equipo que se llama micrótomo y con el que se obtienen cortes muy delgados
(micrómetros de espesor) lo que permite observar las estructuras celulares y tisulares. Un paso
más allá que ofrece la información más detallada corresponde al momento de aplicar la tinción,
que da colores a la muestra y gracias a ello es posible identificar diversas estructuras mediante
la observación de estas preparaciones con el microscopio de campo claro.

La mayoría de las técnicas histológicas van encaminadas a preparar el tejido para su

observación con el microscopio, bien sea éste óptico o electrónico. Ello es debido a dos
razones: a) que la composición de los tejidos, salvo contadas ocasiones, no tienen contraste
ni colores que permitan diferenciar sus estructuras de una manera clara y b) que la mayoría
de las estructuras tisulares y celulares no se pueden discriminar a simple vista sino con la
ayuda de los microscopios. Por ello hay que procesar las muestras, primero para que no se
deterioren y después para resaltar sus estructuras y poder estudiarlas en detalle.

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TINCIÓN

Los tejidos animales son en su gran mayoría incoloros, excepto aquellos que poseen algún
tipo de pigmento como la hemoglobina de la sangre o la melanina de la epidermis. La tinción
se consigue con el uso de los colorantes, sustancias coloreadas que son capaces de unirse
de manera más o menos específica a estructuras del tejido aportándoles color. Los colorantes
son normalmente hidrosolubles, aunque hay colorantes que sirven para teñir sustancias
grasas, como gotas de lípidos.

Según su naturaleza química los colorantes se clasifican en:

Básicos: son sales en las que la base, normalmente una amina, aporta el color, mientras
que la parte ácida es incolora. Es decir, son colorantes catiónicos. Tienen apetencia por
sustancias ácidas del tejido como el ADN o ciertos componentes de la matriz extracelular
como los glicosaminoglicanos. La unión es por atracción eléctrica. Así, ponen de manifiesto
el núcleo y el ARN, sobre todo el ARN ribosómico presente en los ribosomas por ser muy
abundante, así como ciertas matrices extracelulares ricas en componentes ácidos.
Ejemplos de colorantes básicos son la tionina, safranina, azul de toluidina, el azul de
metileno o la hematoxilina.

Ácidos: son sales con el anión coloreado y la base incolora. Son derivados de grupos
sulfónicos, carboxilos o hidroxilos fenólicos. Tienen apetencia por sustancias básicas, sobre
todo estructuras proteicas localizadas en el citoplasma celular y también por el colágeno de
la matriz extracelular. La unión es por atracción eléctrica. Ejemplos de colorantes ácidos
son la fucsina ácida, verde rápido, naranja G o la eosina.

Colorantes mordientes: son aquellos que se usan en combinación con sales metálicas,
que actúan como mordiente. Estas sales se pueden emplear junto con el colorante, antes o
después. En algunos casos el colorante mordiente puede ser también aniónico o, menos
frecuentemente, catiónico. Normalmente se emplean para teñir los núcleos. Por ejemplo, la
hematoxilina férrica de Heidenhain.

Neutros: poseen una porción ácida y otra básica, ambas con capacidad para aportar color.
Por tanto, un mismo colorante puede teñir tanto las partes básicas como las ácidas de los
tejidos. Por ejemplo, el eosinato de azul de metileno.

Indiferentes o hidrofóbicos: realmente no se unen a elementos de los tejidos por afinidad

química sino porque se disuelven en ellos. Por ejemplo, el colorante Sudán se disuelve en
los lípidos y por tanto teñirá a las gotas de lípidos, especialmente en los adipocitos.

En algunas ocasiones necesitamos resaltar elementos tisulares de manera específica y

para ello usamos colorantes que tienen apetencia por dichas estructuras. Por ejemplo, la
tinción denominada azán contiene azocarmín y naranja-anilina-ácido acético que tiñen los
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núcleos de rojo y sobre todo destaca el conectivo intensamente teñido de azul. Otra tinción
combinada es el tricrómio de Mallory que tiñe el colágeno de verde y las células
musculares de rojo.

Cuando un colorante se une al tejido y aporta un color diferente al que tiene en solución se
dice que ha ocurrido un fenómeno de metacromasia. Esto se debe a que las propiedades
de absorción de la luz del colorante cambian al unirse a componentes celulares. Por
ejemplo, el azul de toluidina se vuelve púrpura cuando se une a ciertos gránulos de los
mastocitos. Cuando el colorante unido al tejido tiene el mismo color que en solución se
denomina ortocromasia.

Hematoxilina-eosina
Una de las tinciones más comúnmente usada en histología es la hematoxilina-eosina sobre
cortes de parafina. Un colorante básico (hematoxilina) y otro ácido (eosina) para teñir de
diferente color a las estructuras ácidas y básicas de la célula (Figura a). Antes de proceder
a la tinción, si partimos de cortes de parafina, tenemos que llevar a cabo unos tratamientos
previos sobre las secciones como es el desparafinado y la hidratación, puesto que estos
colorantes son hidrosolubles.

Figura a). Sección de un glomérulo de un riñón de mamífero

obtenida a partir de una inclusión en parafina y teñido con
hematoxilina-eosina. Los núcleos aparecen de color
violáceo (hematoxilina) y el citoplasma de color rosado
(eosina).

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Histoquímica

Las reacciones químicas consisten en la modificación química de moléculas del tejido para
posteriormente poder colorearlas. Existen técnicas histoquímicas para detectar glúcidos,
proteínas y nucleótidos. La técnica histoquímica más empleada es la reacción
de PAS (Periodic Acid Schiff). Se utiliza para la detección de hidratos de carbono, libres o
conjugados, cuando están en cantidades relativamente grandes en los tejidos.

MATERIALES:
• Atlas de Histología.
• Guía de laboratorio.
• Imágenes de tejidos

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ACTIVIDAD

I. OBSERVE LAS IMÁGENES DE CORTES HISTOLÓGICOS Y COMPLETA LA

TABLA.
TINCIÓN IMAGEN FUNDAMENTO
HyE

Epidermis

5
PAS

Intestino delgado

Giemsa

Médula ósea

6
Wright

Tejido sanguíneo

Azul de
Toluidina

Riñón
Azul de
Metileno

riñón

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 Safranina

cartílago

CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es la tinción más usada en histología?
2. ¿Qué es un corte histológico?
3. ¿Cómo se clasifican los colorantes?
4. ¿Qué es la técnica histológica?

REFERENCIA

Atlas de Histología
http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/atlas2013A/

Colorantes más usados en el estudio de estructuras tisulares.

https://cibamanz2021.sld.cu/index.php/cibamanz/cibamanz2021/paper/viewFile/465/345

Video: Colorantes
https://youtu.be/MxP-rm_1_Xg