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Curso de extraccionista y manejo básico de laboratorio

ERITROSEDIMENTACIÓN

Es la velocidad de sedimentación globular (V.S.G.), es equivalente a la longitud de recorrido

descendente de la parte superior de la columna de eritrocitos en un intervalo de tiempo, y varios
factores que contribuyen a este valor.
La VSG no está incluido en el desarrollo del hemograma; sin embargo, es una prueba muy
importante por su gran sensibilidad, pues resulta normal en las enfermedades funcionales, así como
en los procesos inactivos o estrictamente locales. Es un examen complementario u obligado en toda
persona enferma o con alguna sintomatología.
Es una prueba simple que puede ser practicada en el mismo laboratorio o en el consultorio médico,
ya que es rápida y no requiere de instrumental caro, ni de precisión.
Tiene valor diagnóstico y pronóstico de diversos estados patológicos.
Se describieron gran número de técnicas dependiendo del anticoagulante usado, volumen del tubo
que porta la sangre, volumen de sangre empleada, tiempo utilizado para la prueba, etc.

Fundamento

La sedimentación es consecuencia de la interacción de fuerzas opuestas: por un lado, la mayor

densidad eritrocitaria con respecto al plasma; por el otro, la fuerza ascendente que opone el plasma a
ser desplazado por los glóbulos rojos que sedimentan. En una muestra de sangre normal, estas
fuerzas tienen un valor semejante.
Consiste en medir durante un tiempo determinado el descenso de los hematíes, en un dispositivo
calibrado donde se colocó sangre anticoagulada. Este descenso se traduce en velocidad de
sedimentación de eritrocitos, cuyo mecanismo obedece a interacciones electrostáticas entre la
superficie de los eritrocitos y diversas proteínas del plasma que favorecen (fibrinógeno y globulinas)
o disminuyen (albúmina) la agregabilidad de estas células, también dependen de la diferencia que
existe entre la densidad del plasma y la masa globular, tamaño de los eritrocitos, viscosidad del
plasma, temperatura. Cuanto más grande sea esta diferencia, o sea, a mayor cantidad de plasma y
menor cantidad de glóbulos, mayor será la velocidad de sedimentación, porque a mayor densidad del
plasma hay mayor aumento de proteínas plasmáticas, y por lo tanto, compactan mas a los eritrocitos
que descienden.

Factores de descenso globular

La velocidad de caída depende entonces de varios factores interrelacionados, siendo el mas

importante la pseudoaglutinación de los hematíes por su propio plasma con la formación de
agregados o rouleaux, que son agregados o conglomerados cilíndricos por unión de los eritrocitos
cara a cara, que sedimentan mas rápidamente que los hematíes aislados.

Producción de los rouleaux y sedimentación posterior

La sedimentación se produce en tres etapas:

1) Formación del rouleaux que dura pocos minutos y durante la cual el descenso es lento.
2) Sedimentación del rouleaux con descenso rápido a velocidad constante.
3) Empaquetamiento de ellos en el fondo de la pipeta con descenso lento de la sedimentación.

Fases en la VSG
a) en los primeros 10 minutos hay poca sedimentación en forma de pilas
b) durante 40 minutos aproximadamente, la sedimentación se produce a una velocidad
constante
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c) la sedimentación se retrasa en los 10 minutos finales a medida que las células se apilan en
la parte inferior del tubo.

Los factores que mas influyen en la eritrosedimentación son aquellos que intervienen en la formación
del rouleaux, y son fundamentalmente factores plasmáticos, que son proteínas de molécula lineal,
tales como el fibrinógeno en primer lugar y las α2 y β gammaglobulinas que la aceleran.

El fibrinógeno y las globulinas son moléculas asimétricas de proteínas que disminuyen la carga
negativa a nivel de la superficie de los eritrocitos que es lo que produce el potencial zeta de
membrana el cual explica que estas células se mantengan separadas. La disminución de este
potencial promueve la formación de apilamientos, que sedimentan mas rápidamente que las células
aisladas. La intensidad del potencial zeta depende en gran medida de la composición proteica del
plasma y especialmente de la relación entre las concentraciones de albúmina, globulinas y
fibrinógeno. Así, mientras la albúmina tiende a aumentar el potencial zeta, las globulinas y sobre
todo el fibrinógeno, tienden a disminuirlo. Ello obedece a que tanto el fibrinógeno como las
globulinas tienen mayor peso molecular y una conformación menos esférica que la albúmina, lo que
aumenta la constante dieléctrica del plasma y reduce el potencial zeta eritrocitario. La lecitina retrasa
la sedimentación y el colesterol las acelera. La disminución del potencial zeta de los eritrocitos tiene
como consecuencia una mayor tendencia de éstos a agregarse y formar las llamadas “pilas de
monedas”.

Los factores globulares son de menos importancia. La forma bicóncava de los hematíes es la forma
ideal para la agregación. La V.S.G. es directamente proporcional al peso del agregado celular e
inversamente proporcional al área de superficie. Los microcitos se sedimentan con mayor lentitud
que los macrocitos, que tienen un área superficial disminuida en relación con el volumen. Los
hematíes con forma anormal o irregular, tales como las células falciformes y los esferocitos,
dificultan la formación de pilas y la eritrosedimentación se retarda. La anemia acelera la
sedimentación porque modifica la composición hematíes/plasma, aumentando la formación de
rouleaux (continúan siendo factores plasmáticos), por eso en cualquier método de determinación, la
V.S.G. es muy sensible a las proteínas plasmáticas alteradas en el intervalo de valores de hematocrito
de 30% a 40%. No existen correcciones de la eritrosedimentación con respecto al tipo o grado de
anemia, pues depende de cada paciente, grado de enfermedad, pérdida de sangre, hemorragias, etc.
Westergren y Wintrobe aseguran que ninguna corrección es buena y que el número de hematíes
influye en la lectura recién a las 24 hrs.

Es imprescindible la acción de los anticoagulantes sobre la eritrosedimentación en determinadas

circunstancias, es por ello que deben respetarse fielmente las técnicas y las propiedades dadas de las
mismas originariamente establecidas. El valor de la V.S.G. puede disminuir si la concentración de
anticoagulante es mayor de lo recomendado. La heparina altera el potencial zeta de la membrana y
no se puede usar como anticoagulante.
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Es fundamental la verticalidad de la pipeta, pues una pequeña inclinación acelera la V.S.G., los
eritrocitos se agregan a lo largo del lado inferior, mientras que el plasma aumenta por el superior; en
consecuencia la influencia retardadora del plasma ascendente es menos efectiva (una inclinación de
3º a partir de la vertical puede acelerar en hasta un 30%).
La temperatura también es un factor a tener en cuenta, ya que la eritrosedimentación aumenta con la
temperatura ambiental y del paciente. Si la muestra estaba refrigerada se debería llevar a temperatura
ambiente para realizar la prueba.
Es imprescindible efectuar la lectura dentro de las 3 o 4 horas de extraída la muestra (ó 12 horas si se
utiliza EDTA como anticoagulante y se mantiene refrigerada a 4º C), de lo contrario, algunas
muestras con V.S.G. elevada darán valores falsamente bajos. Con el tiempo, los eritrocitos tienden a
adoptar una forma esférica con menor inclinación a formar apilamientos.
La hemólisis puede modificar la sedimentación. La limpieza del tubo es importante, y se deben
eliminar todos los restos de alcohol y éter.
Por observación de un tubo de sangre con anticoagulante en las proporciones adecuadas, puede
intuirse si la V.S.G. tendrá un valor normal, aumentado o disminuido. Sirve para darse idea del valor
que va a tener la eritrosedimentación, siendo confirmada con los datos de lectura y con la
observación del tubo una vez que volvió a la posición de reposo. La observación del color del plasma
es una indicación para corroborar un dato de la V.S.G. y se debe tener en cuenta cuando se cargan
tandas con muchos tubos.
Las causas más comunes de error son:
1. Si se aumenta la concentración de anticoagulante, la VSG tendrá valores bajos falsos.
2. Los anticoagulantes oxalato de potasio o de sodio y la heparina hacen que los eritrocitos se
contraigan y producen valores de VSG elevados falsos.
3. Un cambio importante en la temperatura ambiente altera la VSG.
4. Incluso una ligera inclinación de la pipeta la aumenta.
5. Si se deja la muestra a temperatura ambiente durante más de 2 horas antes de hacer la
determinación, los eritrocitos empiezan a adoptar forma esférica y pueden inhibir la formación de
rouleaux.
6. Las burbujas de aire en la columna de sangre invalidan los resultados de la prueba.
7. La sangre debe cargarse en forma correcta hasta la marca del cero al comienzo de la prueba.
8. No deben usarse muestras coaguladas.
9. Los trastornos hemáticos que impiden la formación de rouleaux (p. ej., las células falciformes
y los esferocitos) disminuyen la VSG.
La VSG de pacientes con anemia grave tiene poco valor diagnóstico.

Interpretación semiológica

A pesar de ser la V.S.G. un método inespecífico, dependiendo su aceleración de los cambios de las
proteínas plasmáticas, tiene gran utilidad clínica como orientación en un examen habitual de un
paciente y como parámetro en la evolución de una enfermedad, en algunos trastornos crónicos
(enfermedades autoinmunes, fiebre reumatoidea, tuberculosis, hepatopatías).
La eritrosedimentación se eleva con la edad, este aumento es alrededor de 0,85 mm en la hora por
cada 5 años de aumento en la edad. Después de la menopausia, alrededor de los 50 años, la
eritrosedimentación se eleva más rápido en la mujer. Las causas de este aumento no son claras, pero
se postula que refleja un aumento en los niveles de fibrinógeno.
En estados fisiológicos, como el embarazo aumenta moderadamente, dicho aumento empieza entre la
10 y 12 semanas de gestación, normalizándose un mes después del parto, se presume que es por
aumento del fibrinógeno plasma. El aumento se inicia alrededor del cuarto mes y alcanza un máximo
en la primera semana del puerperio y vuelve a lo normal entre la tercera y cuarta semana post-parto.
El aumento alcanza de 40 a 50 mm en la hora. También en ejercicios violentos, stress prolongado,
estados de angustia, envejecimiento, crecimiento.
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Si bien una eritrosedimentación normal no permite excluir una enfermedad orgánica, su aceleración
puede afirmar su presencia. Hay muchas etiologías capaces de acelerar la V.S.G., por eso su
inespecificidad.
Sin embargo, una eritrosedimentación acelerada, sobre todo en los primeros minutos, puede ser de
gran valor orientativo para el diagnóstico de algunas enfermedades hematológicas, en particular con
la que poseen proteínas anormales, tales como: mieloma múltiple, macroglobulinemias, leucemias
crónicas, hiperglobulinemias policlonales graves debidas a enfermedades inflamatorias y en
hiperfibrinogenemias, gammapatías monoclonales, especialmente cuando la proteína posee elevado
peso molecular (por ejemplo, IgM) como es el caso de la macroglobulinemia de Waldenströnm
(gammapatía monoclonal de tipo IgM) que da una V.S.G. mas elevada que en el mieloma múltiple
(gammapatía monoclonal casi siempre de tipo IgG o IgA).
Los incrementos moderados resultan corrientes en los casos de enfermedad inflamatorias o
infecciosas activas (agudas y crónicas), tales como sífilis, tuberculosis, artritis reumatoidea,
infecciones crónicas, enfermedad del colágeno, afecciones purulentas, enfermedades degenerativas,
enfermedad neoplásica y algunas de la coagulación. Es indicadora de problemas reumáticos
(reumatograma) por los anticuerpos autoinmunes o no (artritis) como lupus eritematosos sistémico,
polimialgia reumática, enfermedad de Horton y de problemas bucales (caries, infección de encías,
gingivitis). También en patologías tales como anemia intensa, infarto de miocardio en fase aguda,
insuficiencia renal y hemopatías malignas.
La VSG enfermedad inflamatorias o infecciosas activas (agudas y crónicas), tales como sífilis,
tuberculosis, artritis reumatoidea, infecciones crónicas, enfermedad del colágeno, afecciones
purulentas, enfermedades degenerativas, enfermedad neoplásica y algunas de la coagulación. Es
indicadora de problemas reumáticos (reumatograma) por los anticuerpos autoinmunes o no (artritis)
como lupus eritematosos sistémico, polimialgia reumática, enfermedad de Horton y de problemas
bucales (caries, infección de encías, gingivitis). También en patologías tales como anemia intensa,
infarto de miocardio en fase aguda, insuficiencia renal y hemopatías malignas.
Cuando la VSG está elevada sobre 100 mm en la hora, la falsa positividad es muy baja, y el test
adquiere una alta especificidad. En menos del 2 % de estos pacientes no se encuentra causa
explicable. Jamás debe considerarse como normal una VHS sobre 100mm la hora.
La disminución puede ocurrir en algunas afecciones hepáticas con valor pronósticos durante el curso
de la enfermedad. También se da en policitemia vera (enfermedad autoinmune sanguínea, no
complicada con infección, disminuye la firmeza del rouleaux y baja artificialmente la VSG), en la
poliglobulia, alteraciones congénitas eritrocitarias, hipofibrinogenemia, insuficiencia cardíaca
congestiva.
Algunos factores técnicos capaces de modificar la V.S.G. son causa de aumento como es la
desviación de la verticalidad de la pipeta, incremento de la longitud y diámetro de la pipeta,
elevación de la temperatura en el ambiente; también es causa de disminución la reducción del
diámetro de la pipeta, la utilización tardía de la sangre (espécimen envejecido), cambio de
anticoagulante.

TÉCNICAS DE DETERMINACIÓN

Método de Westergren (método de referencia)

Es un método universal que se utiliza en un tubo recto, de cristal o de vidrio borosilicato, de 30 cm

de longitud y 2,5 mm de diámetro, graduado de 0 a 200 mm. Tiene un volumen aproximado de 1 ml.
Se extrae sangre de punción venosa y se diluye con citrato trisódico al 3,8% en proporción 1:4 de
citrato a sangre. Se homogeniza bien y se aspira (previo uso de propipeta o perita de goma) hasta
enrasar con la sangre en el punto cero del tubo. Se coloca el tubo en el soporte vertical (estativo) a
temperatura ambiente, sin vibración ni exposición directa a la luz del sol, y se lo deja en esa posición
por 60 minutos. A la hora se lee la altura de plasma claro sobre el límite superior de la columna de
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glóbulos sedimentados. Si la demarcación entre el plasma y la columna es confusa, se toma el nivel

donde la densidad total aparece en primer lugar.
La cifra en mm es la velocidad de sedimentación globular (mm/60 minutos). El valor a las dos horas
no es apropiado, el valor real es el de la primera hora, pero en caso de sedimentación muy acelerada
puede tener fundamental importancia la lectura a los treinta minutos. El índice de Katz, que involucra
la lectura a las dos horas, está fuera de uso y no aporta sino confusión sin variar el diagnóstico.
Para necesidades clínicas y no experimentales, basta efectuar las investigaciones a temperatura
ambiente de 15º C a 25º C.
Hay equipo comerciales descartables, los cuales varios presentan tapones de seguridad para las
pipetas que permiten que la sangre alcance la marca del cero con exactitud. Esto transforma la pipeta
en un sistema cerrado y elimina el error del llenado manual hasta la marca del cero

Valores Normales (puede variar según los distintos autores)

Niños mayores y jóvenes: 5-15 mm/h

Hombres: 3-12 mm/h
Mujeres: 3-15 mm/h
Sistema para VSG descartable
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Micrométodo de Chattas

Para niños o adultos con extracción muy dificultosa o sangre de punción digital. Este procedimiento
debe efectuarse inmediatamente después de extraer la sangre.
Se utiliza una pipeta de 13 cm de largo por 1 mm de diámetro interno. A 2 cm del extremo inferior se
encuentra una marca identificable con la letra C (citrato), que sirve para aspirar citrato de sodio hasta
esa marca, el cual se depositará en una plaqueta o policubeta; desde esta marca existe una graduación
de 40 espacios milimétricos hacia arriba. Una segunda marca, desde el extremo superior de la pipeta,
es decir a 2 cm del cero, e identificable con la letra S (sangre), que se utiliza para cargar sangre en
ella. Se coloca la solución de citrato por aspiración hasta la marca C y sangre hasta la marca S. El
anticoagulante y la sangre se homogeniza y se vierte el contenido en un vidrio reloj o policubeta para
obtener una buena mezcla, se carga la pipeta hasta el enrase a cero de la escala, evitando cargar
burbujas y se la coloca en el soporte. Esto puede evitarse repitiendo el procedimiento dos veces para
obtener una buena proporción de sangre anticoagulada y que esto no se convierta en limitante del
método. La lectura se efectúa al final de la primera hora.
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Los valores normales obtenidos mediante este método no son análogos a los de Westergren, de
modo que para su conversión se utiliza el normograma de Chattas:

CHATTAS WESTERGREN
1 1
2 2
3 3
4 4
5 5
6 6
7 7
8 8
9 9
10 10
11 12
12 13
13 14
14 16
15 18
16 20
17 22
18 24
19 26
20 28
21 31
22 34
23 38
24 42
25 47
26 53
27 59
28 65
29 71
30 77
31 84
32 95
33 106
34 120
35
36 mas de120
37
38
39
40

Método de Chattas sin cargar sobre pipeta

Se utiliza una pipeta automática de 50 a 200 λ (μl) o bien cualquier elemento que permita tomar
volúmenes pequeños. Siempre se carga primero 50 μl de citrato y luego recién, con el mismo tips,
200 μl de sangre entera (el cambio de tips se realiza solo cuando se trabaja con otra muestra). Se
homogeniza los 250 μl de mezcla en una policubeta o vidrio de reloj, y se carga una pipeta de
Chattas hasta enrasar en cero. Se lee también a la hora, dado que el método es el mismo, solo se
modificó la forma de efectuar el anticoagulado.

Micrométodo de Gutiérrez

Consiste en cargar una pipeta de Westergren pero con una modificación en su diámetro interno. Se
utiliza la pipeta de 0-200 mm y de 30 cm de longitud con un diámetro interno de 1 mm. Sirve para
utilizar sangre anticoagulada, pero en comparación utiliza un 50% menos de muestra que en el
método de Westergren. Se carga y lee igual que la otra, y los valores normales son los mismos. Muy
utilizado para pacientes pediátricos.

VSG automatizada

El sistema Ves-Matic es un analizador de mesa diseñado para determinar la VSG mediante un sensor
optoelectrónico que mide el cambio en la opacidad de una columna sangre a medida que se produce
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la sedimentación de la sangre. La sangre se obtiene en tubos especiales Ves-Tec o Vacu-Tec, que

contienen el anticoagulante y son compatibles con el sistema Vacutainer. Estos tubos se colocan en
forma directa en el instrumento. La aceleración de la sedimentación se logra al colocar los tubos en
un ángulo de 18º con respecto al eje vertical. En 20 minutos a se obtienen resulados comparables con
los obtenidos con el método de Westergren 1 hora.

Otro analizador de VSG automatizado es el VSG-8, que es un analizador de sistema cerrado que
tiene una capacidad para ocho tubos y proporción de resultados en 30 minutos.

Sistema automatizado VSG-8

Eritrosedimentación cargada del tubo de hemograma

a) Método directo: al tubo de hemograma cargado con EDTA y sangre (1 gota al 10% de EDTA
para 2,5 ml de sangre) se le introduce (previa homogenización) una pipeta de Westergren, se
la carga, se enrasa a cero y se sigue con el procedimiento habitual. No es un método exacto,
dado la dilución y al efecto del anticoagulante (EDTA es un quelante del calcio iónico y el
citrato un precipitante de citrato de calcio), pero puede dar una indicación de enfermedad o
estado fisiopatológico presente. De la muestra existe la posibilidad de que de dos a tres de
ellas no coincidan numéricamente con la realidad de un dato del método de Westergren, pero
tampoco se aleja mucho de ella. Los valores pueden variar de 3 a 10 puntos, con lo que para
una eritrosedimentación alta el valor se mantiene.
b) Método indirecto (microeritrosedimentación del hemograma): Se toma el tubo de
hemograma, se homogeiniza y se trasvasa 1,25 ml de esta sangre anticoagulada a un tubo de
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coagulograma cargado con 0,25 ml de citrato. Si bien la sangre ya se encuentra

anticoagulada, lo que se desea expresar es la dilución real. Con esta mezcla ya homogenizada
se carga una pipeta de Westergren normal. Este método es útil cuando la muestra del paciente
es escasa, tiene alta dificultad en la extracción venosa y se requiere sangre para otros
estudios, ya que permite realizar una VSG normal con poca cantidad de muestra. Las causas
de porqué no se hacen habitualmente son: 1- requiere un tubo extra, 2- cargar 1,25 ml es
difícil de enrasar en la velocidad que se debe tener para cargar los tubos de muestra para los
distintos estudios, 3- siempre puede existir una variación en la lectura por la variedad de
anticoagulante, 4- no es el método original de Westergren para el que se impusieron los
valores normales. De todas maneras, es de gran utilidad y soluciona el tema de la extracción
difícil.