MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR

2020 - 2021

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
FACULTAD DE MEDICINA
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

1
 Directorio
Director
Dr. Germán Fajardo Dolci

Secretaría General
Dra. Irene Durante Montiel

División de Estudios de Posgrado

Dr. José Halabe Cherem

División de Investigación Secretaría de Servicios Escolares

Dra. Marcia Hiriart Urdanivia Dra. María de los Ángeles Fernández Altuna

Secretaría del Consejo Técnico Secretaría Administrativa

Dr. Arturo Espinosa Velasco Lic. Luis Arturo González Nava

Secretaría de Educación Médica Secretaría Jurídica y de Control

Dr. Armando Ortiz Montalvo Administrativo
Lic. Jazmín Aguilar
Secretaría de Enseñanza Clínica, Internado
Médico y Servicio Social Secretaría de Planeación y Desarrollo
Dra. Ana Elena Limón Rojas Institucional
Dr. Ignacio Villalba Espinosa

Plan de Estudios Combinados en Medicina

Dra. Ana Flisser Steinbruch

Coordinación de Ciencias Básicas

Dra. Guadalupe Sánchez Bringas

Coordinación de Servicio Social

Dr. Abel Delgado Fernández

2
 ÍNDICE
Sección Página
I Conceptos teóricos iniciales
El método científico 6
Matemáticas por el laboratorio 13
Notación científica o exponencial 13
El método del factor unitario en los cálculos 14
Logaritmos 14
Gráficas 15
II Algunos métodos utilizados en bioquímica
Centrifugación 19
Potenciometría 20
Electroforesis 22
Soluciones 25
Medidas de seguridad 32
III Prácticas de laboratorio
1. Soluciones 45
2. Regulación del equilibrio ácido-base por los riñones después del
ejercicio muscular intenso y de la ingestión de bicarbonato de sodio 51
3. Cinética enzimática. Efecto de la concentración del sustrato sobre la
velocidad de reacción enzimática 56
4. Estudio del bombeo de protones por levaduras. Efecto de los
inhibidores y de los desacoplantes sobre la cadena de transporte de electrones 61
5. Determinación de glucosa en sangre 65
6. Determinación de colesterol y lipoproteínas plasmáticas 69
7. Integración Metabólica 78
8. Examen General de Orina (EGO) 84
9. Pipeteo 89
10. Huella génica 93

3
 Apéndice
Soluciones 99
Concentración normal de electrolitos 99
Instrucciones para el uso del microscopio Marca Leica 100
IV
Instrucciones para la operación del fotocolorímetro Klett-Summerson 102
Uso del Glucómetro 103
Uso del Accutrend 105
Valores de referencia 107
V Colaboradores 110

IMPORTANTE: La calificación a cargo del profesor se compone del

85% de la evaluación total de la teoría y el 15% la evaluación total
de laboratorio.

4
I. CONCEPTOS TEÓRICOS INICIALES

5
EL MÉTODO CIENTÍFICO Observación

La cultura no puede comprenderse sin hacer referencia al Lo que no puede observarse, directa o indirectamente por
método científico. La ciencia no es un sector de la civilización medio de instrumentos o de modificaciones de la conducta, no
que pueda separarse del resto de ella, sino un esfuerzo creativo puede ser investigado por la ciencia.
con su propio sistema de valores que, poco a poco, ha llegado La observación debe ser repetida en forma
a formar parte de los valores generales en la sociedad moderna. independiente por observadores diversos. Las observaciones
La ciencia está basada en el método científico; su únicas, que no se repiten ni actual ni potencialmente, no pueden
capacidad y limitaciones están definidas por él y dondequiera ser objeto de estudio científico.
que el método científico sea aplicable, puede haber ciencia.
El origen de la ciencia se pierde en el más remoto Problema
pasado. Mucho antes de que existieran los registros históricos
Después de que una observación se hace y se repite, el
de la humanidad, la magia primitiva dio origen también a la
segundo paso es plantear un problema; en otras palabras, se
religión y, mucho antes, al arte. Ciencia, religión y arte difieren
hacen preguntas sobre la observación: ¿Cómo es que los
en métodos, pero coinciden en metas: comprender e interpretar
al universo y la interacción de sus partes para promover el hechos ocurren de esta manera? ¿Qué es lo que determina su
progreso material y espiritual de la humanidad. desarrollo, evolución y término? Es en este punto donde el
científico difiere del hombre común; ambos hacen
El objetivo de la ciencia es hacer teorías. Las teorías
observaciones, pero sólo el primero muestra curiosidad
científicas tratan de explicar los hechos y predicen con un alto
grado de probabilidad que se den hechos similares. científica sobre ellas.
Plantear un problema es hacer preguntas, pero, hacer
Los elementos del método científico son: observar,
“buenas preguntas” al igual que hacer “buenas observaciones”
plantear problemas, hacer hipótesis, experimentar y formular
es un arte muy preciado. Para que tengan valor científico, los
teorías. Cada uno de los pasos del método científico tomado
aisladamente, forma parte de la actuación cotidiana de todos problemas deben ser significativos y tener respuestas
comprobables por técnicas apropiadas. Las preguntas que se
los seres humanos, pero, en su conjunto utilizados
inician por ¿cómo? o ¿qué? se resuelven mejor,
sistemáticamente, constituyen la más poderosa herramienta
científicamente, que las que comienzan con ¿por qué?, pero los
que ha diseñado la humanidad para conocer y transformar
investigadores pueden formular los problemas para que
algunos de los elementos de la naturaleza.
adopten la forma adecuada.

6
Hipótesis Teoría

Una vez planteado un problema de interés para su estudio, el Las pruebas experimentales son la base del quinto paso, final
científico procede al tercer paso del método: formular una del método científico: la formulación de una teoría. Cuando una
explicación o hipótesis. Por supuesto que un problema puede hipótesis se ha sostenido por pruebas convincentes, obtenidas
tener varias explicaciones posibles, pero sólo una de ellas es la por varios laboratorios e investigadores independientes, se
verdadera. Las respuestas casuales a un problema son propone una teoría que consiste en una afirmación con límites
generalmente erróneas; pero el científico con su intuición, su mucho más amplios que los experimentos en que se basa y que
experiencia y, a veces por incidentes afortunados, acierta en la expresa la creencia o probabilidad de que sea valedera en
hipótesis. Esto se sabe al emplear el cuarto paso del método cualquier combinación de sujeto, tiempo y lugar en donde se
científico. reúnan condiciones similares.
Desde este punto de vista, una buena teoría permite hacer
Experimentación “predicciones.” Las predicciones científicas tienen siempre un
soporte experimental muy sólido y aun cuando no afirman que
El objetivo de la experimentación es comprobar la validez de la
un hecho ocurrirá con certidumbre, sí plantean que tiene una
hipótesis. Si los experimentos demuestran que la hipótesis es gran probabilidad de ocurrir.
errónea, se hace una nueva y se la sujeta a comprobación. El Unas pocas teorías han probado su validez tan
procedimiento puede prolongarse por mucho tiempo al formular
universalmente, y expresan tan alto grado de probabilidad, que
nuevas hipótesis y tratar de comprobarlas experimentalmente.
se las conoce con el nombre de leyes naturales. Por ejemplo,
La situación ideal en la experimentación consiste en reducir el ninguna excepción se conoce al hecho de que una manzana
problema a dos alternativas posibles que puedan contestarse
desprendida de su árbol caerá al suelo si no es sostenida de
con claridad, afirmativa o negativamente; pero en muchas
alguna manera. La ley de gravitación se basa en esta
ocasiones los resultados del experimento sólo conducen a
observación.
soluciones parciales. Las leyes naturales orientan la investigación científica.
La experimentación es la parte más ardua del método
Si en el análisis de un hecho se elimina lo imposible, aquello
científico. Cada experimento es un caso en sí mismo; el
que es contrario a las leyes naturales, lo que resta, aunque sea
conocimiento anterior y la experiencia ayudan técnicamente
muy raro y poco probable, debe ser la verdad. La verdad son
para decidir la forma en que una hipótesis puede ser
los hechos que nos rodean. Aunque acontecen sin cesar a
comprobada experimentalmente. La elección correcta del
nuestro alrededor, muy pocas personas y muy pocas veces se
experimento y su interpretación es lo que separa al profesional
hace un análisis científico de ellas.
del aficionado a la investigación.

7
 Si se emplean las leyes naturales para marcar lo
imposible, con el resto posible se hacen nuevas hipótesis, se
comprueban por experimentos, se formulan nuevas teorías y se
acumula el conocimiento científico que ha permitido al hombre
situarse en un Universo observable que tiene un radio de
millares de millones de años luz y que incluye un microcosmos
tan pequeño que se expresa en órdenes de magnitud menores
de 10–20 m y adquirir un dominio incuestionable sobre su
ambiente.

8
SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADES (SI) Unidades de base

Los resultados de todos los experimentos en que se basan las El SI consta de siete unidades básicas que son
teorías científicas y las leyes naturales derivan de las dimensionalmente independientes. Las unidades básicas están
mediciones de objetos o de sus propiedades. anotadas en el cuadro I.1 junto con los símbolos que hay que
Medir es comparar magnitudes, toda medición utilizar para indicar estas cantidades.
comprende un número y una unidad. La unidad identifica la
clase de dimensión y el número expresa las veces que la unidad Magnitud Nombre Símbolo
está contenida en el objeto o la propiedad medida. La medición Longitud Metro m
Masa kilogramo kg
es un arte muy refinado; en la actualidad emplea instrumentos Tiempo Segundo s
muy complejos y alcanza una precisión extraordinaria. Cantidad de
mol mol
Un sistema de medidas preciso requiere unidades bien sustancia
definidas. La Oficina Internacional de Pesas y Medidas revisa Temperatura
kelvin K
termodinámica
periódicamente el sistema para incorporar los adelantos Intensidad luminosa candela cd
tecnológicos y mejorar la exactitud y precisión de las medidas. Intensidad de ampere A
Se han hecho muchos esfuerzos para desarrollar un corriente eléctrica
sistema de unidades universalmente aceptable. El producto de Cuadro I.1. Unidades básicas del SI.
estos esfuerzos es el Sistema Internacional de Unidades (cuya
Unidades SI derivadas
abreviatura es SI en todos los idiomas). A partir del creciente
intercambio de información científica este sistema ha sido Al multiplicar una unidad de base por sí misma o al asociar dos
aceptado por toda la comunidad y en especial en medicina. El o más unidades de base por una simple multiplicación o
SI es esencialmente una versión ampliada del sistema métrico división, se puede formar un amplio grupo de unidades
decimal. llamadas SI derivadas (cuadro I.2). Ejemplo: la unidad derivada
El SI comprende tres tipos de unidades: 1) las unidades de volumen es el metro elevado al cubo o metro cúbico.
de base, 2) las unidades derivadas y 3) las unidades
suplementarias, así como una serie de prefijos que permiten Magnitud Nombre Símbolo
tomar múltiplos y submúltiplos decimales de las unidades Superficie metro cuadrado m2
utilizadas. Volumen metro cúbico m3
Concentración de sustancia mol/metro cúbico mol/m3
Velocidad metro por segundo m/s
Cuadro I.2. Algunas unidades derivadas simples.

9
 La combinación de unidades de base para formar las prefijos que permiten formar múltiplos y submúltiplos decimales
unidades derivadas es una de las grandes ventajas del SI. En de las unidades SI (cuadro I.4).
el SI no es preciso memorizar factores de conversión; el factor Los prefijos SI se anteponen directamente al nombre de
a que se recurre para formar las unidades derivadas es 1 la unidad, sin signo de puntuación alguno (ejemplo: es correcto
(unidad), cualidad que hace al SI coherente. nanómetro e incorrecto nano-metro).
A cierto número de unidades SI derivadas se les ha dado El símbolo del prefijo se antepone también directamente
nombres especiales, en su mayor parte tomados de los al símbolo de la unidad, sin espacios intermedios ni signos de
hombres de ciencia que han hecho contribuciones notables al puntuación (ejemplo: mm, milímetros; nmol, nanomol que
conocimiento del tema de estudio correspondiente (cuadro I.3). equivale 10–9 moles).

Magnitud Nombre Símbolo Definición Factor Prefijo Símbolo

2 18
Fuerza Newton N kgm/s 10 exa E
15
Presión Pascal Pa N/m 2 10 Peta P
12
Trabajo; energía; cantidad de calor Joule J Nm 10 Tera T
9
Carga eléctrica; cantidad de 10 Giga G
Coulomb C A.s 6
electricidad 10 Mega M
3
Potencia; flujo energético Watt W J/s 10 Kilo K
–3
Tensión eléctrica; potencial eléctrico Volt V W/A 10 Mili M
–6
10 Micro µ
Grado K–273,16 –9
Temperatura Celsius °C 10 Nano N
Celsius –12
10 Pico P
Cuadro I.3. Unidades SI derivadas con nombres especiales. –15
10 Femo F
–18
10 ato Q
Prefijos SI Cuadro I.4. Prefijos SI.
Unidades no pertenecientes al SI
Cuando las unidades SI derivadas resultan demasiado grandes
o pequeñas para determinados fines (sería desproporcionado, Ciertas unidades ajenas al SI son de uso tan frecuente que en
por ejemplo, utilizar el metro cúbico para expresar el volumen cierto modo forman parte de nuestra vida cotidiana y se acordó
de sangre del cuerpo humano), el SI contiene una serie de utilizarlas juntamente con el SI (cuadro I.5).

10
 Algunas de estas unidades, en especial el litro y las
unidades de tiempo, son de gran importancia en las profesiones forma correcta: 1 000 000
de la salud. Conviene señalar que el litro es un nombre especial 0,003 278
que se da al submúltiplo, decímetro cúbico, de la unidad SI de 0.003 278
volumen.
forma incorrecta: 1,000,000
0.003,278

Magnitud Unidad Símbolo Valor en La multiplicación de las unidades se indica con un punto
SI a nivel o elevado (newton. metro=N.m) o un espacio (N m). La
Tiempo minuto min 60 s división se puede indicar mediante una barra oblicua o por
hora h 3 600 s exponentes negativos:
Día D 86 400 s
1/s = s–1
Volumen Litro loL 10-3 m3
Energía caloría cal 4.185J mol por metro cúbico puede expresarse por:
Cuadro I.5. Algunas unidades no pertenecientes al SI.
mol/m3 o mol.m–3

El SI tiene ventajas y desventajas, pero se reconoce el

Reglas de escritura de símbolos y cifras
esfuerzo para implantarlo como una forma de expresar los
Los símbolos de las unidades no toman la terminación del plural datos científicos haciendo la información comprensible para
(ejemplo: dos mililitros se escribe 2 mL y no 2 mLs). todos. Se recomienda desechar las unidades que no
Los símbolos de las unidades jamás van seguidos de un pertenecen al SI a la mayor brevedad posible, pero la realidad
punto, salvo si están al final de una frase (ejemplo: 5 mL y no 5 del uso de otras unidades en textos y comunicaciones
mL). científicas no se puede negar. En este Manual las unidades se
Cuando se escriben cifras, la coma sólo se puede utilizar expresarán empleando el SI.
para indicar los decimales; las cifras deben agruparse en tríos,
dispuestos a la derecha y a la izquierda de la coma, y separados
entre sí por un pequeño espacio. Ejemplo:

11
PARA EXPRESAR CONCENTRACIONES Concentración de iones hidrógeno. La concentración de
hidrogeniones en los líquidos biológicos se expresa en nmol/L
Algunas recomendaciones para utilizar el SI en Bioquímica así como en unidades de pH.
El valor del pH se define como el menos logaritmo de la
La concentración de sustancias cuya masa molecular se
actividad de los iones hidrógeno (pH = -log H+), esta actividad
conoce se expresa en forma de cantidad de sustancia, es decir,
puede determinarse potenciométricamente con la ayuda de un
en moles (o en submúltiplos como el milimol o el nanomol) por
pH-metro.
litro. Ejemplo:
Actividad enzimática. La unidad SI de actividad catalítica es
Ácido úrico en el suero o plasma:
Varones: 0.18 a 0.53 mmol/L mol por segundo: mol/s (también llamado katal, símbolo: kat) y
Mujeres: 0.15 a 0.45 mmol/L corresponde a la cantidad de enzimas que se necesita para
Colesterol en el suero o plasma: 3.9 a 7.2 mmol/L transformar un mol de sustrato por segundo.
Glucosa en el suero o plasma: 3.6 a 6.1 mmol/L La actividad también puede ser expresada en términos
Vitamina A en el suero: 0.53 a 2.1 µmol/L de unidades (símbolo: U). Por definición, una unidad es igual a
la cantidad de enzima necesaria para la formación de un
La concentración de sustancias cuya masa molecular se
micromol de producto por minuto (µmol/min). La actividad
desconoce o es dudosa se expresa en kg/L, g/L, mg/L, etcétera.
específica de una enzima se define como la cantidad de
Ejemplo:
producto que se forma por 1 miligramo de enzima por minuto.
Proteína sérica total: 60 a 80 g/L
Albúmina sérica: 33 a 55 g/L
Globulina sérica: 20 a 36 g/L.
Fibrinógeno en el plasma: 2 a 6 g/L
Hormona antidiurética en plasma: 2 a 12 pg/mL

Concentración de sustancias en tejidos

Se expresa en unidades de masa (si no se conoce la masa

molecular) o en moles (si se conoce la masa molecular) por
kilogramo de tejido seco o húmedo. Ejemplo: g/kg, mg/kg o
mol/kg, mmol/kg, etcétera.

12
MATEMÁTICAS PARA EL LABORATORIO Para fracciones decimales menores de la unidad se
separa la primera cifra distinta de cero después de la coma
Notación científica o exponencial decimal y se cuentan los lugares hacia la izquierda hasta la
coma decimal, incluso la cifra separada y el número es el
Cuando se expresan cantidades muy grandes o pequeñas,
exponente negativo:
como es el caso en Bioquímica, la dificultad de escribir y
manipular muchos ceros se evita con el uso de la notación
0.000 205 = 0.000 “2”05
exponencial o científica.
En la notación exponencial todo número puede del 2 a la coma decimal son 4 lugares; por lo tanto, es:
expresarse como una potencia entera de 10 o como un
producto de dos números, uno de los cuales es una potencia 2.05 x 10–4
entera de 10. Ejemplo: el número de Avogadro, seiscientos dos
sextillones, se escribe: Las operaciones de multiplicar y dividir, elevar a
potencias o extraer raíces se facilitan manipulando los
602 000 000 000 000 000 000 000 exponentes según reglas muy sencillas. La porción decimal no
exponencial se opera en forma ordinaria, lo que reduce el
y en la notación exponencial como una cantidad decimal manejo a tres cifras significativas como máximo; los exponentes
multiplicada por 10 elevada a la potencia apropiada = 6.02 x se suman algebraicamente para multiplicar, se restan para
1023. Como ejercicio, examine las cantidades siguientes: dividir, se multiplican por una potencia deseada para tener el
exponente de esta y para encontrar raíces se divide el
200 = 2 x 10 x 10 = 2 x 102 exponente entre el índice de la raíz. Ejemplos:
205 = 2.05 x 102
205 000 = 2.05 x 105 6 x 106 por 3 x 103 = 18 x 109 = 1.8 x 1010
0.205 = 2.05 x 10–1 ya que 6 x 3 = 18 y 106+3 = 109
0.000 205 = 2.05 x 10–4
0.000 000 1= 1/10 000 000 = 1 x 10–7 6 x 106 entre 3 x 103 = 2 x 103
ya que 6/3 = 2 y 106–3 = 103
El exponente de la base 10 para números mayores de
la unidad es el número de lugares desde la coma o punto Para la adición y la sustracción usando notación
decimal separada de la primera cifra significativa: científica, primero se escribe cada cantidad con el mismo
exponente n. Luego se realiza la operación deseada entre los
205 = 2.05 x 102 = 2 lugares valores N1 y N2, donde N1 y N2 son los números obtenidos con

13
el mismo exponente; estos últimos permanecen iguales. En ambos casos el numerador y el denominador
Ejemplo: describen la misma cantidad, por lo que se puede efectuar
conversiones entre diferentes unidades que miden la misma
(5.1 x 102) + (3.4 x 103) = (0.51 x 103) + (3.4 x 103) = 3.91 x 103 cantidad.

El método del factor unitario en los cálculos El método del factor unitario consiste en:
1. Tomar una relación entre unidades y expresarla en forma
El procedimiento que se utilizará para resolver problemas que
de una ecuación,
incluyan conversión de unidades se denomina método del
2. Luego expresar la relación en forma de una fracción
factor unitario. Esta técnica se basa en las propiedades del
(llamada factor de conversión) y, por último;
número 1, es decir:
3. Multiplicar la cantidad dada por ese factor. En esta
• Cualquier número al ser multiplicado por uno, sigue siendo
multiplicación, las unidades idénticas se multiplican o
el mismo número (1 x 5 = 5).
cancelan como si fueran números.
• El número 1 puede ser escrito como el cociente de
cualquier número dividido por sí mismo (3/3 o 6/6).
Ejemplo: ¿Cuántos µl hay en 0.00005 L (5 x 10-5 L)?
• Se puede tomar cualquier ecuación y dividirla por uno de
los miembros para obtener una razón igual al número 1. 1) 1 µL = 10-6 L o 1 L = 106 µL

Por ejemplo, dada la ecuación: 2) 10-6/ 1L

1 minuto = 60 segundos, obtener la razón igual al número 1. 3) 5 x 10-5 L x= 5 x 10[-5+ 6] = 5 x 101 µL = 50µL
1 minuto 60 segundos En este método las unidades se acarrean en todo el
=
1 minuto 1 minuto proceso del cálculo. Por lo tanto, si la ecuación se establece en
60 segundos 1 minuto forma correcta, todas las unidades se cancelan excepto la
1= o1= deseada.
1 minuto 60 segundos

Estas razones o factores que son equivalentes al

Logaritmos
número 1 se conocen como factores unitarios, factores de
conversión o coeficientes de conversión. El logaritmo de un número es el exponente o potencia de una
El recíproco de cualquier factor unitario es también un base determinada que se requiere para obtener el número. Si
factor unitario. el número “a” elevado a la potencia “n” (an) es igual al número

14
“N”, entonces “n” es el logaritmo de base “a” del número “N”. Es Gráficas
decir:
"Una figura equivale a mil datos en una tabla numérica" y así
n
si a = N entonces n = loga de N como se construye un modelo para visualizar un conjunto
complejo de hechos, se utiliza una gráfica para presentar los
La base “a” puede ser cualquier número; en la práctica datos experimentales en tal forma que fácilmente se asimilen y
médica se usa como base el número 10 y los logaritmos aprecien sus relaciones cuantitativas.
resultantes se conocen como logaritmos “comunes” o de Se llama gráfica a la representación esquemática de las
Briggs. Su símbolo es: log o log10 variaciones que sufren las distintas magnitudes que intervienen
Los logaritmos son indispensables para manejar los en los fenómenos físicos, químicos, biológicos, sociales o de
datos bioquímicos y los estudiantes deben familiarizarse con el cualquier otra índole. Tiene por objeto mostrar rápida e
uso de logaritmos en las operaciones comunes. intuitivamente la relación que guardan las magnitudes
El logaritmo del producto de dos números es igual a la comparadas.
suma de sus logaritmos: Entre las diferentes clases de gráficas que existen las
más importantes son las que se describen a continuación.
log a x b = log a + log b
Gráfica poligonal. Consiste en expresar las variaciones de un
El logaritmo del cociente de dos números es igual al fenómeno continuo por medio de puntos y de representar la
logaritmo del dividendo menos el logaritmo del divisor:
marcha de dicho fenómeno por medio de una línea que une
esos puntos.
log a/b = log a – log b
Para elaborar una gráfica poligonal se trazan en un
El logaritmo de la potencia “n” de un número es igual a papel, de preferencia milimétrico, dos rectas perpendiculares
"n" veces el logaritmo del número: entre sí que se corten en cero. En cada una de ellas se
representará una de las magnitudes que se van a relacionar. El
log a3 = 3 x log a punto cero (0) se llama origen y las rectas son los ejes. Para
referirse al eje X generalmente se dice: eje horizontal o eje de
El antilogaritmo es el número que corresponde a un las abscisas (variable independiente) y para el eje Y: eje vertical
logaritmo dado, es decir, si x es el logaritmo de y, entonces y es o eje de las ordenadas (variable dependiente).
el antilogaritmo de x. Por ejemplo, si 2 es el logaritmo de 100,
entonces 100 es el antilogaritmo de 2.

15
 Los ejes dividen su propio plano en cuatro regiones Diagrama en barras. Cuando se quieren expresar simples
llamadas cuadrantes que se numeran I, II, III y IV. En el comparaciones de medidas entre sí o para representar un
laboratorio utilizamos habitualmente sólo el primer cuadrante. fenómeno discontinuo se emplean las barras, que pueden ser
Las distancias a la derecha de 0, a lo largo del eje X, se horizontales o verticales.
consideran como positivas y las de la izquierda como negativas.
Similarmente, hacia arriba de 0, a lo largo del eje Y, se miden Barras verticales. Las magnitudes se representan por medio
las distancias positivas y hacia abajo de 0, los valores de rectángulos, barras de base igual que descansan en el eje
negativos. de las abscisas y cuya altura es proporcional a la intensidad del
Después se trazan los puntos cuyas distancias a uno de fenómeno y se mide en el eje de las ordenadas.
los ejes sean proporcionales a la magnitud que se va a
representar y finalmente, al unir estos puntos por medio de
Elección del Parlamento Europeo 2004
300
segmentos de recta, se tiene la gráfica poligonal.
250
Gráfica posición vs tiempo 200

Asientos
40 150

30 100
20 50
Posición (m)

10 0
0 EUL PES EFA EDD ELDR EPP UEN OTROS

-10
0 2 4 6 8 Grupo
-20
-30
Barras horizontales. Las barras descansan sus bases en el
Tiempo (s) eje de las ordenadas y el fenómeno se mide en el eje de las
abscisas.
Nota: Por lo general, es mejor que la curva llene una parte
considerable de la página. Muy bien puede usarse la misma
Gráfica de sectores circulares. Para hacer una gráfica de este
unidad de medida sobre los dos ejes, pero a menudo los valores
tienen un campo de variabilidad muy amplio, lo cual hace tipo hay que tener en cuenta que el círculo debe tener el total
necesario usar diferente escala para cada uno de los ejes. de las magnitudes que se van a representar.

16
 Los sectores circulares son proporcionales a las
Programa Televisivo magnitudes que representan, magnitud que se mide en grados
de circunferencia. Para determinar el número de grados que
Deportes deben tener dichas partes se plantearán una serie de reglas de
8% Concursos tres para cada una de ellas en las cuales se consideran: como
16%
100% a la suma total de las magnitudes que se quieren graficar;
Aventuras para obtener en cada caso el porcentaje correspondiente, se
14% pasará a grados, considerando 360° como 100% y procediendo
entonces a hacer la gráfica.
Caricatura
11% 200

150

Unidades Klett
Telenovelas
22% 100

Lucha libre 50
24%
Otros
0
5%
1 2 3 4 5
Glucosa mmol/L

17
II. ALGUNOS MÉTODOS UTILIZADOS EN BIOQUÍMICA

18
Centrifugación Es decir, sobre ese mililitro de agua, a esas revoluciones
por minuto, se ejerce una fuerza que corresponde a 716 veces
Un método muy útil en el laboratorio para separar sustancias de la de la gravedad, por lo que pesaría, en el fondo del tubo, 716
diferente densidad suspendidas en un líquido es la veces más que en el tubo en reposo, es decir, 716 g. Ese mismo
centrifugación; en ella, la acción de la fuerza centrífuga da como mililitro pesaría en la Luna 0.16 g, porque la fuerza de gravedad
resultado que las partículas pesadas se sedimenten rápido que de la Luna es 0.16 veces la de la Tierra. Hay que recordar que
las partículas ligeras. masa (cantidad de materia) y peso (fuerza) son dos conceptos
La fuerza centrífuga depende de la masa (m), de las diferentes.
revoluciones por minuto (n) y de la distancia radial (r) y se La centrifugación y ultracentrifugación son operaciones
expresa por la fórmula: que se basan en el principio anterior y que permiten separar los
componentes de una mezcla.
f (en dinas) = 0.01096 n2 m r Las centrífugas ordinarias operan a rotaciones menores
de 10 000 revoluciones por minuto (rpm). En cambio, las
En el sistema métrico decimal, la unidad de f es la dina,
ultracentrífugas operan en cámaras refrigeradas, evacuadas de
la de m es el gramo y la de r es el centímetro. Ejemplo: si se
aire y se alcanzan velocidades de 20 000 a 70 000 rpm.
coloca un gramo de agua en un tubo de centrífuga y se rota a 2
La sedimentación en la ultracentrífuga se expresa en
000 rpm (revoluciones por minuto) a una distancia radial de 16
unidades Svedberg (símbolo: S) y se aplica a la comparación
cm, la fuerza es:
práctica de tamaños moleculares que no sólo dependen de la
f = 0.01096 x 20002 x 1 x 16 = 701 440 dinas masa de las moléculas implicadas sino también de su forma. Es
importante considerar que los valores de S no son aditivos, es
Una masa de un gramo de agua (que corresponde a un decir, dos partículas 5S no crean una partícula 10S. Sin
mililitro) es atraído al centro de la Tierra con una fuerza de 980 embargo, hay una correspondencia poco exacta que para las
dinas, de acuerdo con la ley de la gravitación de Newton. En la proteínas esféricas es de:
Tierra ese mililitro de agua pesa 1 gramo. Si se saca el cociente
de las dos fuerzas: 2 S = 10 kdal
4 S = 50 kdal

Frpm 701 440 dinas 8 S = 160 kdal

= = 716
Freposo 980 dinas 16 S = 400 kdal

19
 La unidad S es igual a 10–13 segundos; no pertenece al 5. Ante cualquier dificultad o duda consulte al profesor.
SI y puede suplirse por 0,1 picosegundos (ps) o 100
femtosegundos (fs). En las moléculas menos densas que el Potenciometría
medio de suspensión, como las lipoproteínas, el
Muchas de las reacciones que se realizan en las células son
desplazamiento es hacia la superficie y se expresa en S de
reacciones de oxidación y de reducción, es decir, en las que se
flotación (Sf) y permite la clasificación en: LDL, HDL y VHDL
transfieren electrones.
(low density, high density y very high density) con Sf de 0 a 10,
10 a 400 y las muy densas que no flotan y tienen una densidad La electroquímica estudia las reacciones químicas en
las que hay transferencia de uno o más electrones. La oxidación
mayor de 1.
es la pérdida o liberación de electrones y la molécula que los
El peligro del mal uso de la centrífuga deriva de la
cede se denomina agente reductor. La reducción es la ganancia
enorme fuerza que alcanza en el radio de rotación y el “peso”
de electrones y la molécula que los acepta se denomina agente
de las sustancias colocadas en el campo gravitacional del
oxidante.
aparato.
Cuando se oxida un agente reductor, se transforma en
Se debe tener cuidado con los siguientes puntos:
su forma oxidada y como la reacción es reversible las formas
1. Los tubos en las centrífugas deberán colocarse por pares
para que no haya diferencia de peso en un lado de la oxidada y reducida del compuesto constituyen un par
conjugado llamado par redox o par de oxidorreducción.
centrífuga. Enfrente de un tubo de un peso determinado
El proceso de oxidación siempre va acompañado del
debe estar otro, en la misma posición, con el mismo peso. El
proceso de reducción ya que los electrones que cede una
descuido de esta regla implica un desnivel que, a las
molécula reductora son aceptados por una molécula oxidante,
velocidades y fuerzas señaladas, puede romper los tubos y
lo cual constituye las reacciones de oxidorreducción o
dañar el aparato. Para balancear por pares los tubos lo mejor
reacciones redox.
es usar una balanza de dos brazos y ajustar el peso hasta
La determinación cuantitativa de la concentración de las
que sea idéntico.
2. Para no forzar el motor arránquese gradualmente la moléculas oxidantes y reductoras en una solución es el objeto
de estudio de la potenciometría. En esta técnica se determina
centrífuga hasta alcanzar la velocidad requerida.
el potencial eléctrico generado por la transferencia de
3. Nunca se frene una centrífuga, déjese parar por su propia
electrones en una reacción redox en la cual estén involucradas
inercia; el no hacer esto conduce a que se agite el contenido
de los tubos y se pierda el trabajo experimental. las moléculas a estudiar.
4. No alzar las tapas de la centrífuga cuando está en
Este potencial se determina en una celda
movimiento.
electroquímica. La celda más común es la de Daniell (figura I.1),

20
en la que en dos compartimientos separados que contienen
MgSO4 y CdSO4 se colocan magnesio y cadmio metálico,
respectivamente; las dos soluciones se conectan por un puente
salino (un tubo que contiene agar embebido en una solución de
un electrolito como el KCl). Cuando los dos electrolitos se
conectan por un alambre metálico, ocurre un flujo de electrones
del electrodo de magnesio al electrodo de cadmio, el cual puede
ser medido por medio de un voltímetro. Cuando el magnesio
cede los electrones se convierte en ion soluble, mientras que el
cadmio disuelto, al aceptar los electrones, se convierte en
cadmio metálico que se deposita en el electrodo. El puente
salino cierra el circuito eléctrico entre las dos soluciones.
El hecho de que fluya una corriente eléctrica del polo
negativo (cátodo, que en este caso es el electrodo de
magnesio) al polo positivo (ánodo, que en este caso es el
Figura I.1. Celda de Daniell
electrodo de cadmio), significa que hay una diferencia de (http://www.qfa.uam.es/labqui/practicas/practica19.pdf).
potencial entre los electrodos denominada fuerza electromotriz
(fem) de la celda. Dado que el potencial de un electrodo está
relacionado con la magnitud de cargas negativas existentes, la Es por ello, que se usan otros electrodos de referencia,
diferencia de potencial compara las cargas relativas existentes como el de calomel, en el cual el sistema de medición es
en dos puntos. Se denomina potencial de electrodo (E) a la mercurio y cloruro mercuroso. En el caso de este electrodo,
diferencia de potencial respecto a un electrodo de referencia como sucede con todos los pares redox, debe calibrarse con
arbitrario y depende de la concentración de las moléculas en la respecto al electrodo de hidrógeno.
solución y de la temperatura. Los pares redox de interés para el bioquímico incluye a
En general, el potencial de los electrodos se mide con menudo al ion hidrógeno como reactivo o como producto, por lo
referencia al electrodo de hidrógeno al que se le ha asignado que tales sistemas dependen del pH del medio.
arbitrariamente un potencial de cero a 25ºC a una Hay diferentes tipos de electrodos: los metálicos (como
concentración de 1 mol/L y una presión del gas de una los de la celda de Daniell), los metálicos-sal insoluble (como el
atmósfera. Sin embargo, en la práctica es inconveniente porque de plata/cloruro de plata), los gaseosos (como el de hidrógeno,
se trata de un electrodo gaseoso. que se adsorbe sobre platino), los electrodos selectivos de

21
iones (que pueden ser para aniones o para cationes) y los de
vidrio (que son electrodos selectivos de iones, especiales para
determinar H+).
La determinación más precisa del pH se realiza en un
pH-metro que consiste, fundamentalmente, en un
potenciómetro diseñado para emplearse con un sistema de
electrodo de vidrio. Como una unidad de pH corresponde a 59
milivoltios a 25º C, el mismo medidor se puede usar con dos
escalas para hacer lecturas en mv o en pH. El electrodo de
vidrio consiste en una membrana de vidrio situada al final de un
tubo de vidrio o plástico de paredes más gruesas. El pH se
determina determinando la diferencia de potencial a través de
la membrana de vidrio que separa la solución a la cual se quiere
determinar el pH, de la solución de referencia en el interior del
electrodo cuya concentración de hidrogeniones se conoce.
El esquema del circuito de un potenciómetro típico se
encuentra en la figura I.2. La sensibilidad del medidor se puede
ajustar para cambios de acuerdo con la temperatura (botón de
control de temperatura). El medidor se calibra antes de usarlo,
primero con una solución reguladora de pH 7; se lava el
Figura I.2. Esquema de un potenciómetro
electrodo con agua destilada o desionizada y se calibra con una
segunda solución reguladora de pH 4 o 10. Luego se determina Electroforesis
el pH de la solución problema.
Una partícula coloidal o un ion provistos de carga eléctrica
migran hacia el ánodo o el cátodo bajo la influencia de un
campo eléctrico externo. Si las partículas de una mezcla tienen
diferentes velocidades de desplazamiento, puede aprovecharse
esta propiedad para separarlas. El empleo de fuerzas eléctricas
para lograr esta separación se llama electroforesis y depende
fundamentalmente de la carga y no de la masa molar de las

22
partículas cargadas. Esta técnica se ha empleado en la numerosos puentes de hidrógeno entre cadenas adyacentes de
separación de proteínas, péptidos, nucleótidos, ácidos polisacáridos. El gel de agarosa ofrece ciertas ventajas sobre
orgánicos y porfirinas, entre otros compuestos. Es importante otros soportes; posee una porosidad elevada y uniforme, lo que
considerar que en el caso de una proteína su carga depende favorece la migración regular de las sustancias cargadas, lo
del pH del medio, por lo que es posible emplear la técnica para cual se traduce en una mayor resolución.
determinar el punto isoeléctrico de la misma. Para realizar la electroforesis en estos medios se
Si se aplica un campo eléctrico a través de una solución, prepara el gel sobre una superficie de vidrio. Una vez
la fuerza que actúa sobre las moléculas cargadas depende de solidificado el gel, se colocan las muestras en los pocillos y se
la carga eléctrica (e); del número de cargas en la molécula (z), aplica el campo eléctrico. La electroforesis en agarosa ha
y de la fuerza del campo eléctrico (E). Inmediatamente después permitido el estudio de las moléculas del DNA, cuyo tamaño
de poner a funcionar el campo eléctrico se alcanza una impide que puedan penetrar en los geles de poliacrilamida, pero
velocidad constante de migración de las partículas, ya que la que penetran fácilmente en geles de agarosa a 0.2%, si tienen
fuerza impulsora dada por el campo eléctrico se iguala con la un peso hasta de 150 x 106, o a 0.8% si pesan hasta 50 x 106.
fuerza friccional. La velocidad por unidad de campo eléctrico se Es posible separar moléculas de DNA que difieren sólo
denomina movilidad electroforética. Dado que la fricción 1% de peso molecular según sea la concentración de la
depende del tamaño de la partícula y de la viscosidad del medio agarosa. Para detectar las bandas, se sumerge el gel en una
en que se mueve, la facilidad con la que se mueve una partícula solución de bromuro de etidio el cual se pega al DNA y fluoresce
cargada depende directamente de su carga e inversamente de cuando se excita con luz ultravioleta. El peso molecular se
su tamaño y de la viscosidad del medio. determina por la distancia de migración. También se han usado
estos geles de agarosa para la obtención de mapas de
restricción, los que permiten ver diferencias entre dos
Tipos de electroforesis moléculas de DNA, localizar mutaciones, detectar
recombinaciones de fagos, aislar fragmentos de DNA
Electroforesis en geles de agar y agarosa. El agar es una
deseados, distinguir entre el DNA lineal, circular o
mezcla de polisacáridos que se obtiene de ciertas especies de
superenrollado.
algas marinas. Está constituido de dos componentes
principales: uno lineal o agarosa y uno ramificado y muy ácido
Electroforesis en geles de poliacrilamida. Los geles de
llamado agar o pectina. El agar y la agarosa son solubles en poliacrilamida son geles totalmente sintéticos que han
soluciones acuosas a 100ºC y solidifican a temperatura
sustituido a los geles de almidón en el estudio rutinario de
ambiente; forman geles de buena firmeza cuando se usan a una
proteínas por métodos electroforéticos. Esto ha sido posible
concentración de 0.5 a 2%. Su estructura se mantiene por

23
gracias a la gran facilidad con que puede variarse el poro del técnica es lo que se conoce como electroenfoque. Para formar
gel según el contenido total del monómero y su grado de un gradiente estable y continuo de pH se usan anfolitos
entrecruzamiento. Dada su capacidad de filtrador molecular, se sintéticos de una gran variedad de pesos moleculares y rangos
ha empleado para separar compuestos con base en su peso de pH. Cuando se establece el campo eléctrico, los anfolitos
molecular para lo que se usa lauril sulfato de sodio (SDS) con migran y generan el gradiente de pH según sus propios puntos
el objeto de evitar las diferencias individuales en las cargas de isoeléctricos. Esta técnica ha sido utilizada en combinación con
las proteínas. la separación por pesos moleculares en la electroforesis
Los sistemas electroforéticos que se usan pueden ser bidimensional como método de análisis de proteínas.
continuos, en los que se utiliza el mismo amortiguador en los
tanques de los electrodos y en el gel, y discontinuos, en los que
se utiliza un amortiguador en los tanques de los electrodos y
otro diferente para el gel. En uno de los sistemas discontinuos
más utilizado se utiliza un gel concentrador de poro abierto
(para concentrar en una sola banda los componentes de una
mezcla) y un gel separador de poro cerrado, en donde se
resuelven los componentes de la mezcla. A los geles se les
puede incorporar sustancias disociantes como la urea y el SDS.
También pueden emplearse agentes reductores como el 2
mercaptoetanol o ditiotreitol para romper los puentes disulfuro
de las proteínas.
Las dos aplicaciones principales de la electroforesis
discontinua son la determinación de la pureza de proteínas y el
análisis de los componentes de una mezcla. La electroforesis
en gel de poliacrilamida en presencia de SDS también se ha
empleado en la determinación de los pesos moleculares de
proteínas.

Electroenfoque. Si se coloca una proteína en un gradiente de

pH sujeto a un campo eléctrico, se moverá hasta alcanzar su
punto isoeléctrico, donde permanecerá sin moverse. Esta

24
SOLUCIONES Las mencionadas soluciones son poco precisas y no
indican, de manera cuantitativa, la cantidad del soluto y del
Una solución es una mezcla homogénea de por lo menos dos solvente; los métodos cuantitativos más comunes, que sirven
componentes: una fase dispersa, que es el soluto (sustancia para expresar la concentración (la medida numérica de la
que se disuelve) y una dispersora que constituye el solvente o cantidad de soluto en la solución) de las soluciones son: las
disolvente (la sustancia que disuelve al soluto) y que, porcentuales, las molares y las normales.
generalmente, se encuentra en mayor proporción. Las
soluciones más utilizadas en bioquímica son las que tienen Soluciones porcentuales
agua como solvente.
La solubilidad de un soluto en un solvente depende de En las soluciones porcentuales no se toma en cuenta el peso
la naturaleza de éstos, de la temperatura y en el caso de un molecular o peso fórmula del soluto. En este tipo de soluciones
gas, de la presión. La solubilidad generalmente está dada en se debe especificar si la relación es peso a peso (p/p), peso a
gramos de soluto por 100 g de solvente. volumen (p/v) o volumen a volumen (v/v). A continuación, se
Se llaman soluciones diluidas las que contienen una describen dichas soluciones.
proporción relativamente pequeña de soluto; se llaman
soluciones concentradas las que contienen una gran cantidad Solución porcentual p/p. Solución al 10% de NaCl contiene
de soluto. Sólo son posibles soluciones concentradas cuando 10 g de la sal por 100 g de solución. El peso/peso porcentual
el soluto es muy soluble. expresa el número de gramos del soluto en 100 gramos de la
Una solución saturada contiene la cantidad de soluto solución final.
disuelto necesaria para la existencia de un equilibrio entre las p g de soluto
% = × 100
moléculas disueltas y las moléculas en exceso que no están p 100 g de solución
disueltas. Esta solución se forma por medio de una vigorosa Solución porcentual p/v. Solución de NaCl a 10% p/v: 10 g de
agitación con exceso de soluto. Existe una solución NaCl en 100 mL de solución. Esto expresa el número de gramos
sobresaturada cuando en la solución hay presente más soluto de soluto en 100 mL de la solución final. En bioquímica, si no
que en una solución saturada. Para prepararla se forma una
se especifica otra situación, las soluciones porcentuales deben
solución saturada a temperatura elevada y se enfría entenderse como p/v.
cuidadosamente para evitar la cristalización. Las soluciones
sobresaturadas son inestables y con facilidad se convierten en p g de soluto
% = × 100
soluciones saturadas. v 100 mL de solución

25
Solución porcentual v/v. Se utiliza cuando el soluto y el 20 x 100
solvente son líquidos. El v/v indica los mililitros de soluto por X = = mL de solución
96
100 mililitros de solución. Por ejemplo, una solución de etanol
al 30% v/v tiene 30 mL de éste en 100 mL de solución. Esto
Resultado: se necesitan 20.83 mL de solución de alcohol a
quiere decir que, por cada 100 mL de solución, 30 mL 96% y completar a un volumen de 100 mL.
corresponden al soluto y el resto, hasta completar 100 mL, al
agua destilada o al solvente empleado. Si tan sólo se quieren 50 mL de esta nueva solución,
entonces:
v mL de soluto
% = × 100
v 100 mL de solución 100 mL de sol. de alcohol a 20% tienen 20.83 mL de
alcohol a 96%
Es importante insistir que los términos porcentuales
expresan siempre una relación, es decir, se pueden variar los 50 mL de sol. de alcohol a 20% tienen X mL de alcohol
volúmenes siempre y cuando no se pierda dicha relación. Por a 96%:
ejemplo, si se pide preparar 50 mL de una solución de alcohol
20 x 50
etílico al 20%, se seguiría el siguiente planteamiento: X= = 10
100
100 mL de sol. tienen 20 mL de alcohol puro
Resultado: se necesitan 10.41 mL de alcohol de 96% y
50 mL de sol. tienen x mL de alcohol puro completar con agua destilada hasta un volumen final de 50 mL.

20 x 50 Soluciones molares
X= × 10
100
Una solución molar se define como el número de moles de
Resultado: se necesitan 10 mL de alcohol puro y completar un soluto en un litro de solución:
volumen de 50 mL.
No. moles
M=
El alcohol etílico común es de 96% de pureza (v/v). Por litro de solución
lo tanto, si se cuenta con alcohol puro y se quiere preparar una donde un mol es igual al peso atómico o molecular expresado
solución de alcohol 20%, se seguiría el siguiente planteamiento: en gramos (átomo gramo o molécula gramo). Un mol contiene
el número de Avogadro (6.023x1023) de partículas, átomos o
100 mL de sol. tienen 96 mL de alcohol puro
moléculas.
X mL de sol. tienen 20 mL de alcohol puro

26
 Si un mol de una sustancia se disuelve en agua hasta Soluciones normales
un volumen de un litro, se obtiene una solución 1 molar (1M).
Por ejemplo, si se desea preparar una solución 1 molar Una solución 1 Normal es la que contiene el peso equivalente
de NaCl, se tendría que considerar, primero su peso molecular de una sustancia en gramos por litro de solución:
(Na: 23 + Cl: 35.5 = 58.5) y este valor en gramos disolverlo en
peso equivalente
agua, hasta completar un litro. 1N=
litro de solución
Ahora bien, si se requiere preparar 400 mL de una
solución 0.5 M de NaCl: ¿cuántos gramos de NaCl deben donde el peso equivalente corresponde a los gramos de una
pesarse? sustancia que se combina con un gramo de hidrógeno.

1. Se sabe que un mol de NaCl es de 58.5 g. Peso molecular

Peso equivalente =
2. Se hace el siguiente planteamiento: n

Una solución 1M tiene 58.5g de NaCl n = número de hidrógenos sustituibles o valencia o número de
Una solución. 0.5M tiene X g de NaCl carga positiva dada por los cationes.

0.5 × 58.5 El peso equivalente de un ácido se calcula dividiendo el

X= = 29.25 g NaCl
1 peso molecular entre el número de átomos de hidrógeno
sustituibles en la molécula. El ácido sulfúrico (H2SO4), de peso
3. De acuerdo con la definición de solución molar, los 29.25
molecular 98, tiene dos átomos de hidrógeno sustituibles en la
g de NaCl se consideran en un litro de solución, pero como
molécula (valencia de 2); por lo tanto, su peso equivalente es:
se pide preparar 400 ml, se hará el siguiente planteamiento:
98/2 = 49 g.
En 1000 mL de sol. hay: 29.25g de NaCl
En 400 mL de sol. hay: X g de NaCl H2SO4 ----- > 2 H+ + SO4-2

400 x 29.25 dos hidrógenos con carga positivas por lo tanto valencia = 2
X= = 11.70 g Na Cl
1000
El peso equivalente de un hidróxido se calcula
Resultado: se necesitan 11.7 g de NaCl y disolverlo hasta dividiendo el peso molecular entre el número de grupos
completar un volumen de 400 mL. hidroxilo (OH–) de la molécula. El hidróxido de aluminio Al (OH)3
contiene tres grupos OH– por molécula (valencia de 3) y su peso

27
molecular es de 78; por lo tanto, su peso equivalente es 78/3 =
26 g. Peso molecular 58.5
Peso equivalente = = = 58.5 g
Valencia 1
Al(OH)3 ----- > Al+3 + 3 OH–
y estos gramos se disuelven en agua hasta completar un litro.
Tres cargas positivas del Al por lo tanto valencia = 3
Ahora bien, si se piden 150 mL de una solución 0.5 N
El peso equivalente de una sal se calcula dividiendo el NaCl ¿Cuántos gramos de NaCl deben pesarse?
peso molecular entre la valencia total de los cationes (cargas 1) Se sabe que una solución 1N de NaCl tiene un peso
positivas) que contenga la fórmula. La valencia del sodio es 1, equivalente de 58.5 g en un litro.
y el sulfato de sodio Na3PO4 tiene un peso molecular de 163.9 2) Se hace el siguiente planteamiento:
y tres iones de sodio en cada molécula (valencia de 3); por lo
tanto, el peso equivalente del fosfato de sodio será 163.9/3 = una solución 1N tiene 58.5 g de NaCl
una solución 0.5 N tiene X g de NaCl
54.6 g.
X = (0.5 N)(58.5 g) = 29.25 g
Na3PO4------ > 3 Na+ + PO4-3
3) De acuerdo con la definición de solución Normal, los
Tres cargas positivas de los 3 sodios por lo tanto valencia = 3
29.25 g de NaCl se consideran en un litro de solución, pero
El peso equivalente de un oxidante (reductor) se calcula como se pide preparar 150 mL, se hace el siguiente
dividiendo el peso molecular entre el número de electrones que planteamiento:
puede ganar o perder la molécula (valencia).
En 1000 ml de solución hay 29.25 g de NaCl
Si se disuelve un peso equivalente de un compuesto
En 150 ml de solución hay X g de NaCl
hasta un volumen de un litro se obtiene una solución 1 normal
(1 N). Por ejemplo, si se quiere preparar una solución 1 N de (150)(29.25)
NaCl, se tendría que calcular primero su peso equivalente. Para X= = 4.38 g
1000
esto hay que considerar el peso molecular (Na+:23 + Cl-: 35.5 =
58.5 g) y su valencia (1).
Resultado: se necesita pesar 4.38 g de NaCl y disolverlos
NaCl ------> Na+ + Cl- hasta completar un volumen de 150 mL para obtener una
solución 0.5 N.
Una carga positiva de Na+ por lo tanto valencia 1

28
Soluciones osmolares molécula de glucosa o un ion de Na+ o de Cl–. Así, para
determinar el efecto osmótico de una solución hay que sumar
El fenómeno de la ósmosis se presenta cuando una solución los efectos de todas las partículas incapaces de atravesar la
está separada de su solvente o de una solución con una de membrana independientemente de su peso molecular.
diferente concentración de soluto por una membrana Por ejemplo, el cloruro de sodio en solución acuosa se
semipermeable. La ósmosis es la difusión de solvente a través disocia casi completamente en iones sodio (Na+) y cloruro
de la membrana desde la parte de menor a la de mayor (Cl–). Por lo tanto, cada molécula da origen a dos partículas
concentración. La presión osmótica es la presión que debe osmóticamente activas, y una solución 1 molar contiene un mol
aplicarse sobre la solución de mayor concentración a fin de de catión de Na+ y otro mol de anión de Cl- por litro, o sea:
impedir el paso del solvente (ósmosis) a través de la membrana.
Las membranas biológicas tienen permeabilidades 1 mol NaCl = 58.5 g
distintas y se dice que son semipermeables, es decir, que son
permeables de forma selectiva para las moléculas del solvente 1 mol Na+ + 1 mol Cl− 2 mol de partículas
1M NaCl = =
o pequeñas moléculas, pero no permiten el paso libre de todas 1 litro 1 litro
las moléculas disueltas.
2 osmol
Las mediciones cuantitativas demuestran que la presión = = 2 Osmolar
osmótica es proporcional a la concentración molar (para 1 litro
sustancias no disociables) del soluto, por lo que, una solución Por ejemplo, suponga que se quiere preparar 300 mL de
osmolar es aquella que contiene un mol de la sustancia en un una solución de NaCl 0.2 Osmolar.
litro de solución; el osmol es una medida del número total de Se sabe que una solución 2 osmolar contiene 58.5 g de
partículas en solución. La concentración expresada en osmol NaCl en 1 L de solución. Por tanto, se hace el siguiente
por litro se llama osmolaridad; el osmol por kilogramo de planteamiento:
disolvente se denomina osmolalidad; en las soluciones muy
diluidas, como son las del cuerpo humano, las dos medidas son Una solución 2 osmolar tiene 58.5 g de NaCl en 1 litro
tan cercanas que con gran frecuencia se utilizan una solución 0.2 osmol tiene X g de NaCl en 1 litro
indistintamente.
La presión osmótica depende del número de partículas (0.2 osm)(58.1)
X= = 5.85 g
y no de su carga, ni de su masa; la misma fuerza osmótica es 2 osm
ejercida por una molécula grande, como una proteína, con peso
molecular de varios miles y muchas cargas, como por una

29
 Estos 5.85 g se encuentran en un litro de solución, pero se llaman hipotónicas y cuando su concentración es mayor de
como se pide preparar 300 ml, se hace el siguiente 300 mosm/L se denominan hipertónicas.
planteamiento para una solución 0.2 osmolar: Una solución es isotónica con respecto a una célula
cuando no ocurre ganancia ni pérdida neta de agua en la célula
En 1000 mL de solución hay 5.85 g y por tanto no hay un cambio en el volumen de la célula cuando
En 300 mL de solución hay X g ésta entra en contacto con la solución.
( 5.85)(300 mL) El término isotónico, que significa igualdad de tono, se
X= = 1.75 g emplea en medicina como sinónimo de isosmótico; pero los
1000 mL
términos isotónico y tonicidad sólo deben emplearse en relación
Se necesitan 1.75 g de NaCl y disolverlos hasta con un cambio de volumen. Por ejemplo, una solución de ácido
completar un volumen de 300 mL y la solución sería 0.2 bórico que es isosmótica con la sangre (porque tiene la misma
Osmolar. osmolaridad que la sangre), pero es hipotónica ya que ocasiona
En cambio, la glucosa en solución no se disocia y para hemólisis de los eritrocitos porque las moléculas de ácido bórico
esta sustancia una solución 1 osmolar contiene un mol por litro: atraviesan libremente la membrana del eritrocito a favor de su
gradiente de concentración. En consecuencia, isotonicidad
1 mol de glucosa/L = 180 g/L = 1 osm/L = 1 Osmolar connota compatibilidad fisiológica (no hay cambio de volumen),
mientras que isoosmoticidad, no necesariamente. Por tanto, la
La mayoría de los líquidos corporales tiene una osmolaridad tonicidad de una solución no se puede predecir únicamente por
que concuerda con la de una solución de cloruro de sodio a su composición ya que intervienen también las propiedades
0.9% y se dice que esta solución es isosmótica con los líquidos distintivas de la membrana limitante.
fisiológicos.
Cálculo y expresión de diluciones
Soluciones isotónicas
La dilución consiste en preparar una solución menos
Dos soluciones isotónicas ejercen la misma presión osmótica; concentrada a partir de una solución inicial más concentrada.
es decir, contienen la misma concentración de partículas Las diluciones se expresan usualmente como una razón
osmóticamente activas. Cuando se habla de soluciones matemática, como 1:10. Esto significa una unidad de solución
isotónicas en el laboratorio, suele tratarse de las que tienen la original diluida a un volumen final de 10, esto es, 1 volumen de
misma osmolaridad que el plasma sanguíneo, que es solución original con 9 volúmenes de solvente (volumen final =
aproximadamente de 0.3 osmolar (300 miliosmoles/L). Las 10).
soluciones fisiológicas de concentración menor a 300 mosm/l

30
 Para calcular la concentración de la solución diluida se Paso 2: transferir a otro tubo 0.5 ml de la dilución anterior
multiplica la concentración de la solución original por la dilución (tubo 1) y agregarle 0.5 ml de diluyente (dilución 1:2, tubo 2). La
expresada como fracción. dilución final obtenida se calcula al multiplicar la dilución del
tubo 1 (o anterior) con la nueva dilución (1/2 x 1/2), igual a 1:4.
Ejemplo: una solución de 300 mg/100 mL se diluye en la Los pasos siguientes se hacen igual que para el paso 2. En el
razón 1:10. La concentración de la solución final es: siguiente cuadro se muestra un resumen de lo anterior.
Paso 3: transferir a otro tubo 0.5 mL del tubo 2 y
1
( 300 mg) ( ) agregarle 0.5 mL del diluyente (dilución ½, tubo 3) La dilución
10 = 30 mg
100 mL 100 mL final saría: ½ x ½ x ½ = 1/8. Los pasos siguientes se hacen igual
que para los pasos 2 o 3.
Si se hace más de una dilución a partir de una misma
Tubo Dilución
solución, la concentración de la solución final se obtiene al 0.5 mL (1) 0.5 mL(1)
1
multiplicar la concentración original por el producto de las = = 1: 2(4)
0.5 mL (1) + 0.5 mL (2) 1 mL (3)
diluciones.
0.5 mL (5) 0.5 mL(5)
Ejemplo: la solución anterior se diluye a su vez en la 2 = = 1: 2(4)
0.5 mL (5) + 0.5 mL (2) 1 mL (3)
razón 1:100. La concentración de la solución será: 300 x 1/10 x
1/100 = 0.3 mg/100 mL.
Es decir
La dilución y redilución sistemáticas de una solución se 1⁄2 x 1⁄2 = 1: 4
3 1⁄4 x 1⁄2 = 1: 8
llaman diluciones seriadas. Para encontrar la concentración en
4 1⁄8 x 1⁄2 = 1: 16
un tubo dado de la serie, se multiplica la dilución en ese tubo
5 1⁄16 x 1⁄2 = 1: 32
por cada una de las diluciones precedentes, incluida la del tubo
original. (1) Volumen de la solución original a diluir.
(2) Volumen del agua necesaria para la dilución.
Ejemplo: hacer una dilución seriada 1:2, 1:4, 1:8 y 1:16, (3) Volumen final.
a un volumen final de 1 mL. (4) Dilución obtenida.
(5) Volumen de la solución diluida 1:2 (o anterior).
Paso 1: a 0.5 mL de la solución a diluir, añadirle 0.5 mL
del diluyente y etiquetarlo como tubo 1 (dilución 1:2, volumen 1
mL).

31
MEDIDAS DE SEGURIDAD Asegurarse de conocer la localización de extinguidores, del
botiquín y de las salidas de emergencia.
Durante el desarrollo del curso de Bioquímica y Biología 3. Usar bata en el laboratorio, la cual deberá estar
Molecular, en el laboratorio se pueden llegar a utilizar cerrada durante todo el tiempo que permanezca en el
sustancias o muestras biológicas que, en ocasiones laboratorio.
representan riesgos potenciales a la salud, debido a que 4. Lavar las manos y usar guantes. Los guantes deben
pueden ser: corrosivas, reactivas, explosivas, tóxicas, usarse para efectuar punciones vasculares y para manipular
inflamables o biológico infecciosas. sangre, líquidos corporales, cultivos de microorganismos,
Aunque los laboratorios se consideran en general sustancias o superficies contaminadas. Después del uso de
lugares de trabajo seguros, esto es así sólo cuando conocemos cualquier material biológico, se procede al lavado de manos con
y seguimos las normas de seguridad existentes en la materia los guantes puestos, que se depositarán en el contenedor
acerca de la clasificación, manejo y disposición final de estas correspondiente. Después de quitarse los guantes debemos
sustancias, lo cual nos permite identificar los peligros y lavarnos nuevamente las manos.
disminuir los riesgos. 5. Todos los materiales desechables y no desechables
se deben descontaminar en una solución 1:10 de hipoclorito de
Manejo de materiales peligrosos y/o biológico infecciosos sodio de 4 a 7 % de concentración, durante más de 20 minutos
Precauciones generales: Se refieren a las medidas para antes de ser desechados.
minimizar la difusión de enfermedades transmisibles, 6. Los elementos punzocortantes deben desecharse en
especialmente hepatitis B o SIDA y para evitar incendios, recipientes especiales destinados para ello, los cuales deben
cortaduras o exposiciones simples, de corta duración o estar etiquetados con la leyenda que indique "Peligro, residuos
accidentales a sustancias químicas peligrosas. punzocortantes biológico-infecciosos" y marcados con el
1. Manejar cualquier líquido corporal, sangre, plasma, símbolo universal de riesgo biológico. Nunca reencapuche las
agujas
suero, orina, tejido, cadáver o cultivo como potencialmente
infeccioso. Todas las sustancias químicas proporcionadas, 7. Limpiar las superficies potencialmente contaminadas
equipos y materiales del laboratorio deberán ser utilizados con con hipoclorito de sodio al 1%, con alcohol al 70% o con agua
el máximo cuidado, atendiendo a las indicaciones de oxigenada.
peligrosidad y cuidados específicos, según el caso. 8. Todas las sustancias químicas son potencialmente
tóxicas y peligrosas, por lo que se deberá:
2. Se debe conocer los símbolos y los códigos de color
sobre las precauciones y los peligros en el laboratorio. a) Conocer las propiedades (venenosas, cáusticas
o corrosivas) y el uso correcto de las mismas.

32
 b) Nunca probar, así como tampoco inhalar, correspondientes incluyen qué hacer en caso de accidentes y
directamente las sustancias. Para determinar el olor se la forma correcta de desechar los residuos.
acerca la tapa del frasco cuidadosamente a la nariz, o bien, 11. Indicaciones generales para evitar incendios o
si se trata de sustancias volátiles o vapores acercar éstos explosiones al utilizar solventes inflamables. Los solventes
con la mano a la nariz. inflamables (alcohol, éter, cloroformo, acetona, tolueno, xilol,
c) Evitar el contacto de sustancias con la piel, etcétera) se utilizan en todos los laboratorios, por lo que se
especialmente la cara; usar bata y guantes para proteger la recomiendan las siguientes precauciones:
ropa y el cuerpo. Nunca dirigir un tubo de ensayo o la boca a) No fumar en el interior del laboratorio.
de un matraz con líquidos en ebullición o material de b) No utilizar la llama del mechero sin cerciorarse
reacción hacia el vecino, o a sí mismo, ya que puede de que no hay cerca líquidos inflamables. No mantener el
proyectarse el contenido; para las sustancias que no tienen mechero encendido cuando esté fuera de uso.
un efecto pronunciado sobre la piel, pero cuya ingestión es c) Si se vierten accidentalmente sobre las mesas,
peligrosa, evitar la contaminación de alimentos o manos que secar de inmediato con un trapo húmedo y enjuagar éste en
después se llevarán a la boca o con las que se tocarán el chorro de agua, exprimiéndolo.
alimentos (nunca ingerir alimentos en el laboratorio). d) Nunca calentar un líquido orgánico sobre una
d) Por último, nunca pipetear con la boca, flama.
especialmente los ácidos fuertes, productos cáusticos,
oxidantes fuertes y compuestos venenosos. Para calentar, usar baño de agua o parrilla eléctrica. En
9. Seguir las indicaciones del profesor y del personal a caso de incendio debe hacerse lo siguiente: para un incendio
cargo del área de prácticas. Es una regla de laboratorio que pequeño en un vaso, un matraz, etcétera, éste se cubrirá con
todos los accidentes personales, por triviales que sean, se un recipiente mayor o se ahogará el fuego con un trapo mojado
comuniquen inmediatamente al profesor. Nunca realizar o se combatirá con un extinguidor.
actividades experimentales sin la supervisión del responsable Cuando el fuego sea de un solvente derramado sobre la
del grupo. mesa o el piso, se utilizará un extinguidor de bióxido de
10. Manejar adecuadamente los residuos peligrosos carbono. Si el fuego no puede vencerse de inmediato, se
derivados de las prácticas, identifique su nivel de riesgo y el evacuará el laboratorio y se avisará al departamento contra
mecanismo para su desecho. Queda prohibido desechar incendios de la institución.
sustancias a la tarja o por cualquier otro medio, sin autorización 12.Los accidentes más frecuentes que ocurren en el laboratorio
del responsable del grupo. Las hojas de seguridad son las lesiones debidas a cortes, laceraciones, etcétera, por
cristalería rota.

33
 En caso de heridas pequeñas dejar que sangre unos Todo aquello que pueda contener bacterias, virus u
segundos; tener cuidado de no dejar partículas de vidrio en la otros microorganismos con capacidad de infección o cuando
herida y aplicar un desinfectante. contiene toxinas producidas por microorganismos que causen
Las heridas de mayor importancia deben ser atendidas efectos nocivos a los seres vivos. Ejemplo: jeringas, sangre.
por un médico. Mientras tanto, evitar el sangrado aplicando Medidas de prevención: evitar el contacto con los ojos, la piel y
presión en un punto más arriba la herida o antes de ella (no las vías respiratorias. Utilizar elementos de protección personal.
mantener la presión por más de 5 minutos).
13. Casi siempre, los choques eléctricos en el laboratorio son
de poca importancia; las precauciones de seguridad se
deducen de la naturaleza del peligro. Nunca tocar un aparato
eléctrico con las manos húmedas o cuando se esté parado
sobre un piso húmedo. Siempre apagar y desconectar los
aparatos antes de cualquier manipulación.

Pictogramas de seguridad
En las etiquetas de productos químicos de uso en el laboratorio E = EXPLOSIVO
además de la identificación del contenido, calidad y límite de
Es toda sustancia sólida o líquida o mezcla de
pureza de lo que contiene, se puede encontrar pictogramas
sustancias que pueden desprender gases a una temperatura,
(símbolos internacionalmente aceptados y reconocidos) que
presión y velocidad tales que pueden detonar, producir
indican los riesgos principales. Los pictogramas de seguridad
violentas deflagraciones, o explotar al exponerse al calor
son:
cuando están parcialmente confinadas. Ejemplo: azida de
plomo, fluoruro de carbono.
Medidas de prevención: almacenarlas alejadas de otros
productos, evitar todo choque, fricción y mantener alejadas de
fuentes de calor, chispas o fuego.

RIESGO BIOLÓGICO

34
 Sustancias de menor toxicidad, pero pueden causar
daños a la salud. También se incluyen aquellas mezclas o
preparados que tienen alguna sustancia que puede ser tóxica
pero que se encuentra a una baja concentración en la mezcla.

O = OXIDANTE

Sustancias capaces de aportar oxígeno cuando

reaccionan con otra sustancia, por lo que cuando entran en
contacto con combustibles o inflamables avivan la reacción
pudiendo desarrollar reacciones violentas. Ejemplo: nitrito de Xi = IRRITANTE
sodio, hiposulfito de sodio.
Medidas de prevención: mantener alejadas de las sustancias Sustancias que pueden causar irritación a la piel,
combustibles o inflamables, ya que pueden favorecer los mucosas, o los ojos, por contacto inmediato, prolongado o
incendios y dificultar su extinción. repetido, pudiendo también provocar inflamación. Ejemplo:
cloroformo, SDS, hipoclorito de sodio, aminoantipirina.
Medidas de prevención: evitar el contacto con los ojos, la piel y
las vías respiratorias. Utilizar elementos de protección personal.

Xn = NOCIVO
F+ = EXTREMADAMENTE INFLAMABLE

35
 Aquellas sustancias o preparados que cuando son
liberados al medio ambiente pueden presentar un efecto
Sustancias cuyo punto de ignición es menor de 0°C y su inmediato o diferido, poniendo en peligro a alguna especie.
punto de ebullición máximo de 35°C. Ejemplo: tiourea, o-toluidina.
Medidas de prevención: evitar que los derrames alcancen los
desagües, tratar los residuos en condiciones ambientalmente
adecuadas.

F = INFLAMABLE
T+ = ALTAMENTE TÓXICO, T TÓXICO
Sustancias líquidas cuyo punto de ignición es menor a
40°C. Ejemplo: etanol, tolueno, éter dietílico.
Sustancias que pueden causar daño en forma aguda o
Medidas de prevención: mantener alejado de fuentes de calor,
crónica a la salud o causar la muerte si son inhaladas, ingeridas
de ignición o eventuales chispas, de materiales combustibles y o se absorben por la piel, aún en pequeñas cantidades.
oxidantes. Ejemplo: azida de sodio, dinitrofenol, bromuro de etidio.
Medidas de prevención: evitar todo contacto directo. Utilizar
elementos de protección personal. Emplear estrictas medidas
de higiene personal y del ambiente del laboratorio.

N = NOCIVO PARA EL MEDIO AMBIENTE

36
 casos se mencionan combinaciones de frases R o de frases S,
cuando dos o más riesgos tienen relación entre sí (cuadro I.6).

El símbolo de la N.F.P.A. (National Fire Protection

Association)

El símbolo de la N.F.P.A. es un sistema de identificación de

riesgos de un producto químico, en tres categorías principales:
"salud", "inflamabilidad" y "reactividad" indicando el grado de
C = CORROSIVO severidad por medio de una escala numérica desde (4) que
indica el riesgo mayor, (3) riesgo severo, (2) riesgo moderado,
Sustancias capaces de atacar y destruir los tejidos (1) riesgo menor, hasta (0) que representa ausencia de riesgo.
orgánicos si entran en contacto con ellos o bien atacar ciertos Este símbolo es útil para alertar acerca del riesgo de ese
metales o materiales. Ejemplo: hidróxido de sodio, ácido producto y a su vez, puede ayudar a determinar los cuidados a
clorhídrico, ácido acético. tener en cuenta en el almacenamiento y en caso de
Medidas de prevención: evitar el contacto con los ojos, la piel y emergencias, de derrames o salpicaduras.
las vías respiratorias. Utilizar elementos de protección personal. La información se presenta por medio de una estructura
espacial en forma de rombo principal, dividido a su vez en otros
Identificación sobre los riesgos específicos y los consejos cuatro.
de prudencia El rombo azul a la izquierda identifica el riesgo para la
salud. El rombo rojo en la parte superior indica el riesgo por
Frases "R" éstas advierten acerca del riesgo más común inflamabilidad.
asignado a esa sustancia química, por medio de la enumeración El rombo amarillo a la derecha señala el riesgo por
de riesgos específicos en frases cortas que son adaptables a reactividad o inestabilidad. El rombo blanco en la parte inferior
las distintas sustancias. indica riesgos especiales tales como: W reactivo al agua, COR
Las frases "S" brindan los consejos de prudencia o las corrosivo, AIR reactivo al aire, OXY oxidante. Ejemplo:
medidas de prevención más importantes relacionadas con el
riesgo asignado a esa sustancia química y que permitirán su
manipulación y almacenamiento en forma segura. En algunos

37
 Clasificación de los residuos

Los residuos que se generan en laboratorios de instituciones de

enseñanza o investigación, así como en hospitales y clínicas
contienen residuos no peligrosos o municipales, residuos
biológicos infecciosos y residuos especiales.

Residuos peligrosos biológico-infecciosos (RPBI): es todo

aquello que ha entrado en contacto con pacientes o animales,
sus muestras biológicas y/o cepas de microorganismos, se
clasifican en: sangre, cultivos, patológicos (tejidos, órganos,
Ácido clorhídrico partes y fluidos corporales, etcétera), no anatómicos (gasas,
algodones, jeringas, etcétera) y punzocortantes (lancetas,
Hojas de seguridad agujas, pipetas Pasteur, etcétera).

Cada práctica cuenta con las hojas de seguridad para cada

Residuos municipales: son aquellos que no representan peligro
reactivo o sustancia que se utilice en el laboratorio.
para la salud y sus características son similares a los residuos
Las hojas de seguridad proveen información sobre (cuadro I.8, domésticos comunes.
pág. 43):
• Los componentes de un producto, su reactividad, las Residuos especiales: son aquellos residuos que constituyen un
medidas precautorias principales o las advertencias más peligro para la salud por sus características agresivas tales
importantes. como: Corrosividad, Reactividad, Explosividad, Toxicidad e
• Los elementos de protección personal que se recomienda Inflamabilidad (CRETI). Es importante no olvidar que, la mezcla
emplear en la manipulación. de residuos municipales con residuos biológico-infecciosos
• Las vías de ingreso y los órganos blanco. hace que se consideren en su totalidad como biológico
• Las medidas por derrame accidental y de primeros auxilios. infecciosos, mientras que la mezcla de residuos biológico-
• La información toxicológica. infecciosos con peligrosos CRETI se deben consideran como
• Las recomendaciones para su almacenamiento. peligrosos CRETI.
• Las condiciones para la disposición de los residuos.
Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho. Los residuos
RPBI deben ser envasados de acuerdo con sus características

38
físicas y biológico infecciosas conforme la norma oficial capacidad de uno a cuatro litros, latas de aluminio para
mexicana 087-ECOL-95 (cuadro I.7). solventes (capacidad máxima de 20 L) y, en algunos casos
recipientes de plástico, siempre y cuando las características
Es importante destacar que todos los envases tengan fisicoquímicas de la sustancia a envasar lo permitan. Cada
impreso el símbolo universal de riesgo biológico y leyendas que residuo debe envasarse en forma individual y colocar en el
indiquen la peligrosidad de los residuos y el tipo de residuos que frasco respectivo el pictograma de seguridad correspondiente.
contienen.
Manejo de residuos CRETI
Los contenedores para punzocortantes deben de ser:
• De color rojo. El manejo, consistente en la separación, envasado y
• De paredes rígidas. almacenamiento de cada uno de los reactivos peligrosos CRETI
• De polipropileno. utilizados en las prácticas deberá realizarse de acuerdo con
• Resistentes a fracturas y pérdida del contenido al caerse.
cada reactivo en cuestión según lo indicado en las hojas de
• Destruibles por métodos fisicoquímicos.
seguridad.
• Esterilizables y con tapa, la que puede tener o no separador
de agujas. El manejo de accidentes, tales como derrames,
ingestión o salpicaduras, así como la aplicación de primeros
Precauciones: depositar los RPBI, de acuerdo con su auxilios deberán de realizarse de acuerdo con el reactivo en
clasificación, inmediatamente después de su generación. cuestión según lo indicado en la hoja de seguridad. Las hojas
de seguridad serán proporcionadas para cada práctica en el
No compactar los residuos durante el envasado y no
laboratorio.
mezclar residuos de diferente clasificación.
De manera general, los envases destinados a los
Una vez identificados, separados y envasados
residuos CRETI deben ser de cristal de color ámbar, con
correctamente los residuos peligrosos, el personal responsable
capacidad de uno a cuatro litros, latas de aluminio para
del laboratorio se encargará de su recolección, tratamiento y
solventes (capacidad máxima de 20 L) y, en algunos casos
disposición final; así como de las medidas necesarias para la
recipientes de plástico, siempre y cuando las características
desinfección, esterilización y limpieza del material y equipo
fisicoquímicas de la sustancia a envasar lo permitan. Cada
utilizado en el laboratorio.
residuo debe envasarse en forma individual y colocar en el
De manera general, los envases destinados a los
frasco respectivo el pictograma de seguridad correspondiente.
residuos CRETI deben ser de cristal de color ámbar, con

39
 Frases R Frases S Combinación de frases
R7 Puede provocar S3 Conservar en sitio fresco R 20/21 Nocivo por inhalación y
incendios contacto por la piel
R 23 Tóxico por inhalación S 20 No comer ni beber durante la R 39/25 Tóxico: peligro de efectos
manipulación irreversibles graves por
ingestión
R 36 Irrita los ojos S 29 No tirar los residuos por los S 3/7 Mantenga el contenedor bien
desagües cerrado y en un lugar fresco
R 45 Puede ser cancerígeno S 37 Llevar guantes de protección S 36/37/39 Utilice ropa protectora
adecuados adecuada; guantes y
protección fácil o gafas

Cuadro I.6. Ejemplos de frases S y R

TIPO DE RESIDUO ESTADO FÍSICO ENVASADO COLOR

Sangre Sólido Bolsa de plástico Rojo

Líquido Recipiente hermético

Cultivos y cepas de agentes infecciosos Sólidos Bolsa de plástico Rojo

Líquidos Recipiente hermético

Residuos no anatómicos Sólidos Bolsa de plástico Rojo

Líquidos Recipiente hermético

Patológicos Sólidos Bolsa de plástico Amarillo

Líquidos Recipiente hermético
Objetos punzocortantes usados y sin usar
Sólidos Recipientes rígidos Rojo

Cuadro I.7. Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho.

40
 Ácido clorhídrico
Identificación
Fórmula química: HCl
Primeros auxilios
Apariencia y olor: solución de color ligeramente amarillo o incolora Ojos: lavar inmediatamente con agua corriente durante 15 minutos.
con olor característico muy penetrante.
Marcaje líquido corrosivo
Piel: quitar ropa y zapatos contaminados, lavar inmediatamente la zona
Sinónimos: ácido muriático, cloruro de hidrógeno. dañada con abundante agua.
Generalidades
Está presente en el sistema digestivo de muchos mamíferos y una deficiencia Inhalación: mover a la persona al aire fresco; si se dificulta la respiración
de éste provoca problemas en la digestión; un exceso provoca úlceras proporcionar oxígeno y mantenerlo caliente y en reposo, no dar a ingerir
gástricas. La disolución acuosa grado reactivo contiene aproximadamente 38% nada.
de HCl. Ingestión: no provocar vómito y dar a beber agua continuamente, por
ejemplo, una cucharada cada 10 minutos o dar a beber leche de magnesia.
Propiedades física y químicas
En todos los casos de exposición, el afectado debe ser transportado al
PM: 36.46
hospital tan pronto como sea posible.
Solubilidad: soluble en agua
pH de disoluciones acuosas: 0.1 (1.0N), 4.0 (0.001N).
Reacciona con la mayoría de los metales desprendiendo hidrógeno. Manejo y almacenamiento
Peligro: corrosivo y veneno. Manténgase en envase de vidrio, en lugares
Con agentes oxidantes como peróxido de hidrogeno genera cloro, el cual es
secos, bien ventilados, alejados de materiales oxidantes y fuentes de
muy peligroso.
ignición o calor.
Niveles de toxicidad.
DL50 (oral en conejos): 900 mg/Kg, inhalación en ratas): 3124 ppm/1 h.
Tratamiento en caso de accidente
CLMo (concentración letal mínima publicada): (inhalación en humanos) 1300 Control de fuego: en caso de accidente utilizar CO 2, polvo químico seco o
ppm/30 min; 3000ppm/5 min. arena seca. Los extinguidores de fuego se eligen dependiendo de los
Riesgos alrededores, ya que el HCl no arde.
Produce gas inflamable cuando se encuentra en contacto con metales. Se Fugas y derrames: ventilar el área y protegerse con el equipo de seguridad
generan vapores tóxicos e irritantes de cloruro de hidrógeno cuando se calienta. necesario. Cubrir el derrame con bicarbonato de sodio o una mezcla de
Inhalación: el gas causa dificultad para respirar, tos, inflamación y ulceración 50:50 de hidróxido de calcio y cal sodada, mezclar cuidadosamente.
de nariz, tráquea y laringe. Exposiciones severas causan espasmo de la laringe Mantener el material lejos de fuentes de agua y drenajes hasta no ser
y edema en los pulmones. neutralizado como se indicó anteriormente.
Contacto con los ojos y piel: es un irritante severo de ojos y piel, puede causar
quemaduras serias, dermatitis, reducir la visión o, incluso, la pérdida total de Desechos
ésta. Neutralizar las soluciones concentradas de ácido clorhídrico con
Ingestión: produce corrosión de las membranas mucosas de la boca, esófago carbonato de calcio o cal y diluir con agua cuidadosamente. La disolución
y estómago, causa náusea, vómito, disfagia, sed intensa y diarrea. resultante puede verterse al drenaje, con abundante agua. En caso de
soluciones diluidas.

Cuadro I.8. Hoja de seguridad para el ácido Clorhídrico

43
III. PRÁCTICAS DE LABORATORIO

44
 Práctica 1 INTRODUCCIÓN

Las soluciones son mezclas homogéneas de dos o más

Soluciones sustancias. La sustancia que se disuelve se llama soluto (la
cual se encuentra en menor cantidad) y el medio en que se
Tiempo de la práctica: 3 horas
disuelve es el solvente o disolvente, presente en mayor
Objetivos cantidad (en muchas ocasiones, una solución consta de
varios solutos). En el ser humano los solutos están
Al terminar la práctica el estudiante: representados por iones inorgánicos (Na+, K+, Cl-, Ca2+,
1. Reconocerá las diferencias correspondientes a las Mg2+) y moléculas orgánicas de mayor peso molecular
soluciones porcentuales y molares que se emplean en la (glucosa, urea, proteínas). El solvente universal en los
práctica clínica.
sistemas biológicos es el agua, que en el caso de la especie
2. Realizará los cálculos y procedimientos para preparar
soluciones porcentuales, y molares, así como las diferentes humana representa aproximadamente el 60% del peso
diluciones de éstas. corporal total en un individuo adulto promedio. Estos
3. Reconocerá algunas de las soluciones utilizadas en componentes se distribuyen en dos compartimientos
medicina (solución isotónica, Ringer). principales, intracelular y extracelular, como se muestra en
la figura 1.1.
El cuerpo se mantiene en un equilibrio hídrico, lo que
Responda las siguientes preguntas:
1.- ¿Qué es una solución? significa que cada uno de los compartimentos tiene las
2.- ¿Cuántas clases de soluciones existen? cantidades necesarias de agua y solutos. Sin embargo, cabe
3.- ¿Qué significan los siguientes términos: mol, solución recordar que el intercambio de agua y solutos entre los
molar, solución osmolar? diferentes compartimentos es continuo a través de la
4.- ¿Qué significan: v/v, p/v, p/p? filtración, la osmosis y otros procesos físicos; el volumen de
5.- ¿Qué es una solución isotónica? líquido en cada compartimento permanece casi constante
6.- ¿Cómo se calcula la osmolaridad de una solución?
sin que se altere el equilibrio hidroelectrolítico.
7.- ¿Qué les pasa a los eritrocitos cuando se ponen en
contacto con soluciones salinas de diferente osmolaridad?
8.- ¿Qué se entiende por dilución y dilución seriada de las
soluciones?

45
 ECUACIÓN

En esta ecuación, el factor de 2 que multiplica a la

concentración de sodio considera la concentración de los
aniones (principalmente los iones cloruro y bicarbonato) que
contrarrestan la carga positiva de los cationes y que también
son osmóticamente activos. Las concentraciones de glucosa
y BUN (Blood Urea Nitrogen) están dadas en mg/dL y los
números 18 y 2.8 que aparecen en el denominador
Figura 1.1. Distribución del agua corporal en el ser humano. El respectivo representan el resultado final de los factores de
agua corporal total es el 60%, que equivale a 42 L. El líquido conversión para transformar de mg/dL a mOsm/L.
intracelular (LIC) 28 L (40% del peso corporal) el líquido
Para mantener o restablecer el equilibrio hídrico y
extracelular (LEC) 14 L (20 % peso corporal) del LEC el plasma es
2.8 L (4% del LEC) y el líquido intersticial 11.2 L (16% del LEC) electrolítico en un paciente se necesitan determinadas
soluciones, las cuales se han de calcular y preparar con
La ósmosis constituye el medio primario para el precisión; éstas van desde el simple suministro de agua y sal
desplazamiento del agua entre el líquido intracelular y el (en el caso de pacientes con deshidratación o quemadura
intersticial, y la concentración de solutos en ellos – dada mayor a 2º grado), hasta la corrección de posibles
como osmolaridad - determina la dirección en la cual se va a deficiencias de otros iones - por ejemplo potasio - o bien
desplazar el agua. aporte de aminoácidos o calorías en forma de solución
La osmolaridad de las soluciones refleja la glucosada (para pacientes en terapia intensiva o falla
concentración total de los solutos osmóticamente activos orgánica múltiple). Algunas de estas soluciones requieren
disueltos en el solvente, se define a la osmolaridad como el además un compuesto amortiguador para tratar estados de
número de moles de soluto por litro de solución (un osmol acidosis o alcalosis. Para poder realizar un cálculo
representa un mol de partículas osmóticamente activas, adecuado de las soluciones que se necesita se deben
independientemente de su naturaleza química). considerar los siguientes aspectos:
La osmolaridad del plasma sanguíneo humano es de 1. Existen compartimientos celulares (intracelular y
290-310 mOsm/L (1 Osmol = 1000 mOsmoles), y se puede extracelular) en los que se lleva a cabo el intercambio de
medir con un osmómetro o calcularse mediante la siguiente sustancias entre ellos para mantener un equilibrio integral
fórmula: (homeostasis).
mg
mOsm Glucosa ( )
+
= 2 (Na mM) + dL
L 18
mg
BUN ( )
+ dL
2.8 46
 2. El agua corporal total (TBW) de un individuo
depende del porcentaje de masa muscular y del tejido graso, 42 litros-------100% del agua corporal total
como se muestra en la tabla 1. x----------- 40% del LEC
(42 litros) (40%)
Agua Corporal Total (%) = 16.8 L de LEC
100%
Complexión Lactante Hombre Mujer
Delgado 80 65 55
3. En cada compartimento los electrolitos se
Promedio 70 60 50
distribuyen de manera diferente; esto se debe a la
Obeso 65 55 45
Tabla 1. Porcentaje de agua corporal total por género y permeabilidad selectiva de las membranas celulares, la
complexión. presencia de transportadores y canales que permiten su
difusión. La concentración de solutos determina la
Ingresos mL Pérdida mL distribución del agua y la osmolaridad de la solución. Por
Líquido ingerido 2100 Insensible: piel 350 ejemplo, en el LEC el sodio representa un porcentaje
importante de las partículas osmóticamente activas, por lo
Del metabolismo 200 Insensible: 350
pulmones que si hay cambios en su concentración cambiara la
Sudor 100 osmolaridad debido al desplazamiento del solvente hacia
Heces 100 otros compartimentos.
Orina 1400 4. Necesidades de mantenimiento: para que se
Total 2300 Total 2300 metabolice una caloría se necesita 1 mL de agua, por lo que
Tabla 2. Ingresos y pérdida de agua diarios (mL/día). las necesidades calóricas – y por lo tanto de agua - son
proporcionales al peso corporal. Los datos que se
Con base en las consideraciones anteriores, para un
mencionan a continuación pueden servir de guía para el
individuo masculino de 70 kg de peso de complexión
cálculo de los requerimientos de agua:
promedio:
0 a 10 Kg de peso corporal → 100 cal/Kg
TBW = (peso Kg) (% agua corporal total) 11 a 20 Kg de peso corporal → 50 cal/Kg adicionales por
TBW= (70Kg) (0.60)42 litros cada Kg después de los 10 Kg
Más de 20 kg de peso corporal: 20 cal/Kg adicionales por
Si se tienen 42 litros de agua corporal total y el cada Kg después de los 20 Kg
volumen de líquido extracelular (LEC) corresponde al 40%,
entonces:

47
 De acuerdo con lo anterior, las necesidades diarias
de agua se calcularían así:

1 a 10 Kg de peso corporal: 100 mL/Kg día (= 4 mL /Kg h)

11 a 20 Kg de peso corporal: 1000 mL + 50 mL/Kg día (= 2
mL /Kg h adicional)
>20 Kg de peso corporal: 1500 mL + 20 mL /Kg día (= 1 mL
/Kg h adicional)

5. Existen factores que modifican las necesidades

basales de agua, tales como:
a) Fiebre: por cada grado centígrado que aumente
la temperatura por arriba del valor basal, se incrementa en
un 12% las necesidades de agua.
b) En estados hipometabólicos - como en el estado
de coma - las necesidades de agua disminuyen
Figura 1.2. Requerimientos basales de sodio y potasio.
aproximadamente 20%.
6. La osmolaridad de los distintos compartimentos Para ilustrar lo anterior, tomemos como ejemplo un
depende principalmente de los electrolitos más abundantes individuo que pesa 60 Kg; en este caso, sus requerimientos
disueltos en ellos. Así, la osmolaridad extracelular depende serán:
de la [Na+], y la osmolaridad intracelular de la [K+]; por lo que
es necesario mantener los requerimientos basales de tales 1) Necesidades diarias de líquido:
electrolitos, de acuerdo con la figura 1.2. 1000 mL + 500 mL + 40 Kg x 20 mL/Kg/día= 2300 mL
2) Necesidades de sodio
3 mEq /Kg/ día x 60 Kg de peso = 180 mEq/L
3) Necesidades de potasio:
2 mEq/Kg/ día x 6 Kg de peso= 120 mEq /L

Con base en esta información, será más fácil poder

decidir qué solución se requerirá.

48
Material solución una de sangre (la cual se tomará de la punción de
Por equipo: la yema del dedo con una lanceta) y observarlas al
• 3 vasos de precipitado de 10 mL microscopio para valorar el efecto de la osmolaridad de las
• 1 vaso de precipitado de 50 mL soluciones sobre los eritrocitos.
• 1 pipeta de 1.0 mL
• 1 pipeta de 5.0 mL Resultados
• 1 pipeta de 10.0 mL 1. Expresar en forma ordenada los cálculos efectuados para
• Cloruro de sodio en cristales (NaCl) cada uno de los ejercicios.
• Balanza granataria 2. Deducir el movimiento neto del solvente – en caso de que
• 1 Portaobjetos y 3 cubreobjetos lo haya – cuando se ponen en contacto eritrocitos con
• Lanceta soluciones hipo, hiper e isoosmóticas.

Por grupo: Problemas adicionales

• 1 Microscopio marca Leica 1. Preparar 250 mL de una solución de Na2CO3 0.20 M.
2. Preparar 150 mL de una solución de NaCl al 4.5%.
Procedimiento 3. Preparar 250 mL de una solución de NaOH al 35%.
1. Hacer los cálculos correspondientes para comprobar que 4. Preparar 1.5 litros de H3PO4 0.75 M.
la solución de NaCl al 0.9% es isotónica con respecto al 5. Preparar 150 mL de una solución 0.6 M de KMnO4.
plasma. Hay que considerar que: 6. Preparar 400 mL de una solución de histidina al 0.03M
a) El cloruro de sodio se disocia completamente en (PM = 155.15/mol).
solución acuosa en los iones sodio y cloruro, por lo que 7. Preparar 25 mL de una solución 0.25 M de KOH a partir
su concentración osmolar será el doble de su de una solución de KOH 0.4 M. ¿Cuántos mL de esta
concentración molar (1 mol/L = 2 osmol/L). solución concentrada deberá utilizar?
b) La presión osmótica normal del plasma es de 290-310 8. ¿Cuántos miliequivalentes están presentes en una
mosm/L. solución de Ca2+ al 0.1%?
2. Preparar 20 mL de una solución de NaCl al 4.5% (etiquetar
como solución 1). Bibliografía
3. A partir de la solución1, preparar 25 mL al 0.9% (solución • Bloomfield, M. (1999). Química de los organismos
2) y 50 mL al 0.045% (solución 3). vivos. México: El Manual Moderno.
• Farias, G. (1999). Química clínica. México: Manual
4. De las 3 soluciones preparadas colocar una gota por
Moderno.
separado en un portaobjetos, adicionar a cada gota de

49
• Hall, E.J. (2016). Guyton y Hall. Tratado de fisiología
médica: Elsevier
• Hernandez, M. (2004). Transtornos clínicos de agua
y electrolitos. McGraw Hill.
• Holum, J. (2001). Fundamentos de química general,
organica y bioquímica para ciencias de la salud.
méxico: Limusa Wiley.
• Martínez, F., Riveros H. & Pardo, J.P. (2018).
Bioquímica de Laguna y Piña. México: Manual
Moderno.
• Montgomery, R. (1988). Bioquímica: casos y texto.
Elsevier.
• Villazón, S., Cárdenas, C. & Sierra, U. (2000). Fluidos
y electrolitos. México: JGH.

50
 Práctica 2 4. Escriba las reacciones de formación del ácido carbónico
(H2CO3) a partir de CO2 y H2O y de su disociación para
formar el ion bicarbonato.
Regulación del equilibrio ácido-base por 5. ¿Qué sistemas amortiguadores participan directamente
los riñones después del ejercicio muscular en la regulación del pH sanguíneo?
intenso y de la ingestión de bicarbonato de 6. ¿Cuáles son los sistemas extra sanguíneos que tienden a
mantener el pH extracelular?
sodio 7.Escriba la ecuación de Henderson y Hasselbach aplicada
al sistema HCO3–/CO2 y, con base en ella, conteste la
siguiente pregunta:
Tiempo de práctica: 3 horas 8. ¿Cómo participan el aparato respiratorio y los riñones en
el control del pH sanguíneo?
Objetivos (Primera parte)
INTRODUCCIÓN
Al terminar la práctica el estudiante:
1. Comprenderá el papel de los riñones en el mantenimiento Entre los mecanismos de regulación de que dispone el
del equilibrio ácido-base en una situación de alcalosis
organismo para mantener la integridad fisiológica, aquellos
metabólica y en una de acidosis metabólica.
2. Observará los datos en la variación de la concentración de involucrados en la homeostasis del pH en los fluidos
hidrogeniones en un individuo que ha realizado ejercicio extracelulares desempeñan un papel crucial para la
muscular intenso y en otro que ha ingerido una carga de supervivencia del individuo. En este sentido cabe señalar
bicarbonato, mediante la determinación del pH en orina. que, como resultado de la oxidación de los alimentos, un
3. Relacionará los resultados obtenidos con los cambios humano adulto promedio produce alrededor de 20 moles de
metabólicos originados por el ejercicio muscular intenso. CO2 al día. Al difundir a la sangre, gran parte de dicho gas
Responda a las siguientes preguntas: se combina con el agua en el interior de los eritrocitos,
1. ¿Por qué es importante que el organismo se mantenga produciendo ácido carbónico (H2CO3) que se disocia para
constante dentro de un intervalo estrecho de pH? producir el anión bicarbonato (HCO3-) y un ion hidrógeno
2. ¿Cuáles son las fuentes de iones H+ en el organismo? (H+). Dado el carácter de ácido débil del H2CO3, la fracción
3. ¿Cuáles son los sistemas reguladores que intervienen en disociada del mismo es pequeña; sin embargo,
la eliminación del H+ producido en el organismo con el fin de considerando la gran cantidad de CO2 que produce el
mantener los valores del pH sanguíneo en el intervalo organismo, la acidificación de los fluidos extracelulares sería
fisiológico?
considerable en ausencia de mecanismos reguladores. En el
hombre, la intervención de los pulmones y los riñones evita

51
que ocurra tal acidificación, lo que permite mantener en un CO2, disuelto en la sangre. Todo proceso o patología que se
nivel constante la concentración de H+ y, por consiguiente, el manifieste en una alteración en la frecuencia y/o profundidad
pH. del proceso de inhalación-exhalación, dará como resultado
Para entender el papel que juegan ambos órganos en una alteración de la PCO2 alveolar – aumentándola o
la homeostasis del equilibrio ácido-base, debe tenerse disminuyéndola – con la consecuente modificación del nivel
presente que el sistema del ácido carbónico implica la de CO2 disuelto en sangre y, por consiguiente, del pH.
participación de un componente gaseoso o volátil (el CO2) y Por lo que respecta a los riñones, su participación en
dos componentes no volátiles (el HCO3- y el H+). En la el mantenimiento de un pH extracelular constante se da a
sangre, el equilibrio entre dichos componentes determina el través de dos mecanismos: la excreción de equivalentes
valor del pH sanguíneo, que puede evaluarse mediante la ácidos (H+) hacia la orina y la regulación de la cantidad de
ecuación de Henderson-Hasselbach. En el individuo normal, HCO3- reabsorbido hacia la sangre desde el filtrado
dicho valor varía en promedio 7.4, siendo la sangre venosa glomerular. A diferencia del intercambio gaseoso en los
– enriquecida en CO2 – ligeramente más ácida en relación pulmones, los mecanismos de regulación renal son de largo
con la sangre arterial. Ahora bien, ya que a temperatura plazo, por lo que su efecto será manifiesto en cuestión de
ambiente el CO2 existe en estado gaseoso, la concentración horas o incluso días. Su importancia se enfatiza en
de CO2 disuelto en la sangre dependerá de la presión parcial situaciones patológicas donde se altera el intercambio de
(PCO2) ejercida por el mismo a nivel de los alvéolos gases pulmonar (es decir, en la acidosis y alcalosis
pulmonares. respiratorias), en cuyo caso es necesario aumentar o
En el humano, la magnitud de dicha PCO2 es de disminuir la tasa de reabsorción del HCO3-, o bien en estados
aproximadamente 40 mm Hg, lo que se traduce en una fisiológicos que producen cantidades importantes de ácidos
concentración de CO2 sanguíneo de aproximadamente 1.2 orgánicos (por ejemplo, en la diabetes no controlada o
mEq/L. Si se incluye además al ácido carbónico y el durante el ejercicio intenso) donde se incrementa la
bicarbonato, el CO2 total disuelto es de 25.2 mEq/L Al excreción de H+. Gran parte de este último aparece en la
considerar el pH sanguíneo normal en sangre venosa (7,4) y orina acomplejado con el amoniaco en forma de ion amonio
el pKa del sistema bicarbonato-ácido carbónico (6.1), la (NH4+), o asociado con el fosfato en forma de fosfato
ecuación de Henderson-Hasselbalch da un cociente [HCO3- monobásico de sodio (NaH2PO4), representando este último
]/[CO2] igual a 20. Es precisamente la PCO2 la que es la llamada acidez titulable.
controlada por los pulmones, ya que durante el proceso de En general, el pH de la orina será un reflejo de la
la exhalación se elimina CO2, manteniendo constante la producción de ácidos no volátiles por el organismo, por lo
PCO2 en los alvéolos y evitando así que aumente el nivel de que su valor dependerá de diversos factores, pudiendo

52
alcanzar un mínimo de 4.5. El resultado final de los
mecanismos fisiológicos que participan en el mantenimiento
del equilibrio ácido-base es el de mantener el pH extracelular
en un intervalo compatible con el funcionamiento adecuado
del organismo.

HIPÓTESIS

Si los riñones contribuyen al mantenimiento del equilibrio

ácido-base del cuerpo al excretar iones hidrógeno (H+) en la
orina y modulando la reabsorción de bicarbonato, entonces
el pH de la orina cambiará en respuesta a procesos que
generan un aumento en la concentración sanguínea de iones
hidrógeno o bicarbonato.

Figura 2.1. Equilibrio ácido base. Los pulmones, los

riñones y los eritrocitos contribuyen a mantener el equilibrio ácido-
base. Los pulmones controlan el intercambio gaseoso con el aire
atmosférico. El dióxido de carbono que se genera en los tejidos se
transporta en el plasma como bicarbonato; la hemoglobina (Hb) del
eritrocito contribuye también al trasporte del CO 2. La hemoglobina
amortigua el ion hidrógeno derivado del ácido carbónico. Los
riñones reabsorben el bicarbonato en los túbulos distales, donde
hay una secreción neta del ion hidrógeno.

53
Material Objetivos (Segunda parte)
• Vasos de precipitado 1. El alumno constatará el papel de los riñones en el
• Orina mantenimiento del equilibrio ácido-base en una situación de
• Potenciómetro alcalosis metabólica (provocada por la ingestión de
• Frasco para muestra
bicarbonato de sodio) y en una de acidosis metabólica
Método (debida al ejercicio intenso)
Un alumno por equipo desayunará o comerá normalmente
Material
(evitar ingestión de jugos ácidos y bebidas alcohólicas);
• Vasos de precipitados
después hará lo que se indica a continuación.
• Orina
1. Tomar 250 mL de agua una hora antes de la clase
• Solución de bicarbonato de sodio al 3%
práctica. Vaciar la vejiga y descartar esa orina.
• Potenciómetro
2. Tomar 250 mL de agua inmediatamente antes de la clase
práctica. Método
3. Recolectar aproximadamente 25 mL de orina en el frasco 1. Tomar 250 mL de agua una hora antes de la clase
para muestra práctica. Vaciar la vejiga y descartar esa orina.
4. Realizar ejercicio muscular intenso, como subir y bajar 2. Tomar 250 mL de agua inmediatamente antes de la clase
varias veces las escaleras de tres o cuatro pisos u otro práctica.
ejercicio sugerido por el profesor. 3. Recolectar aproximadamente 25 mL de orina en el frasco
5. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, hasta para muestra
completar por lo menos cinco muestras. 4. Ingerir 250 mL de agua con 7.5 g de bicarbonato de sodio.
6. A cada muestra se le determinará el pH inmediatamente 5. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, hasta
después de haber sido obtenida, ya que con el tiempo su completar por lo menos 5 muestras.
valor tiende a aumentar debido a la pérdida de dióxido de 6. A cada muestra se le determinará el pH inmediatamente
carbono y a que el crecimiento bacteriano produce amoniaco después de haber sido obtenida.
a partir de la urea.
Resultados
Resultados Una vez obtenido el valor del pH para cada una de las cinco
Una vez obtenido el valor del pH para cada una de las 5 muestras de orina, trazar una gráfica de pH contra tiempo;
muestras de orina, trazar una gráfica de pH contra tiempo; interpretar los resultados y discutirlos en grupo.
interpretar los resultados y discutirlos en grupo.

54
Bibliografía
• Baynes, W. (2011). Bioquímica médica. Elsevier.
• Devlin, M.T. (2015). Bioquímica con aplicación
clínica. Reverte.
• Montgomery, R. (1988). Bioquímica: casos y texto.
Elsevier.
• Villazón, S., Cárdenas, C. & Sierra, U. (2000). Fluidos
y electrolitos. México: JGH.

55
 Práctica 3 INTRODUCCIÓN

Las enzimas desempeñan un papel central en los procesos

Cinética enzimática biológicos, ya que son las responsables de degradar y
Efecto de la concentración del sustrato sintetizar las moléculas del organismo, así como de extraer,
transformar y utilizar la energía relacionada con estos
sobre la velocidad de reacción enzimática procesos. Las enzimas son las proteínas más notables de la
naturaleza; sin ellas, la vida como la conocemos no sería
posible. Las enzimas son catalizadores, esto es, aceleran la
Tiempo de práctica: 2 horas velocidad de las reacciones sin consumirse en el proceso. El
poder catalítico de las enzimas es mucho mayor que el de
Objetivo los catalizadores inorgánicos; en los casos más notables, su
actividad solo está limitada por la velocidad con que
Al terminar la práctica el estudiante: colisionan con sus sustratos.
1. Explicará el efecto de la concentración del sustrato sobre
Aunque muchas de las reacciones que ocurren en la
la velocidad de una reacción enzimática.
2. Calculará por métodos gráficos la velocidad máxima y la célula son termodinámicamente favorables, la velocidad a la
constante de Michaelis de una reacción enzimática. cual transcurre la mayoría de ellas – en ausencia de un
3. Conocerá los diferentes tipos de inhibidores enzimáticos catalizador - es extremadamente lenta; sin la presencia de
que existen y estudiará su efecto sobre la Km y la Vmáx. las enzimas, las reacciones necesarias para sostener la vida
ocurrirían a una velocidad incompatible con ésta. Además de
Responda a las siguientes preguntas:
su enorme poder catalítico, las enzimas son altamente
1. ¿Qué es la velocidad de una reacción enzimática?
2. ¿Cómo se define la constante de Michaelis (Km) de una específicas por sus sustratos y tienen la capacidad de ser
reacción enzimática? reguladas en su actividad en respuesta a las
3. ¿Cómo se define la velocidad máxima (Vmáx) de una concentraciones de sustrato, así como frente a diversos
reacción enzimática? compuestos que actúan como inhibidores, activadores,
4. ¿Para qué le sirve a un médico la determinación de la reguladores alostéricos, etc. Por último, las enzimas son las
actividad de algunas enzimas? responsables de regular y coordinar todas las reacciones
5. ¿Cuáles son las enzimas cuya determinación tiene valor
que ocurren en un organismo para lograr el delicado balance
diagnóstico?
que representa la vida.

56
 El primer modelo matemático que explicó de manera en el origen, diagnóstico y tratamiento de una gran cantidad
general la cinética de las enzimas no alostéricas – es decir, de patologías, y es claro que en el futuro su preponderancia
aquellas en las cuales la velocidad de la reacción se será cada vez mayor. La actividad anormalmente elevada de
incrementa hiperbólicamente conforme aumenta la una enzima particular en el torrente sanguíneo ayuda a
concentración de sustrato - fue propuesto en 1913 por diagnosticar el daño específico de un cierto tejido; tal es el
Leonor Michaelis y Maud Menten a partir de los trabajos caso de la amilasa y lipasa en las patologías pancreáticas y
previos de Víctor Henri y Archibald Hill. Para el caso más de las transaminasas en las enfermedades hepáticas. Por
simple de una enzima que cataliza una reacción irreversible otra parte, las enzimas también son el blanco de una gran
y que actúa sobre un único sustrato, el modelo postula la cantidad de fármacos. Se estima que alrededor de un 50%
idea central de que la enzima y el sustrato libres forman de los medicamentos disponibles comercialmente ejercen su
rápidamente un complejo enzima-sustrato; en un segundo efecto terapéutico actuando sobre una enzima particular (por
paso más lento, este complejo se rompe liberando el ejemplo, la aspirina inhibe a la ciclooxigenasa, el omeprazol
producto y regenerando la enzima libre. Lo anterior puede a la ATPasa de protones y el captopril a la enzima
resumirse en la siguiente reacción: convertidora de angiotensina). La capacidad de producir
enzimas recombinantes abrió la posibilidad de utilizarlas
E + S ↔ ES → E + P rutinariamente con fines terapéuticos; tal es el caso de la
estreptocinasa para la terapia fibrinolítica en el infarto agudo
La ecuación de Michelis-Menten da la relación entre
al miocardio. Es claro que todas estas aplicaciones no
la velocidad de la reacción catalizada por una enzima y la
hubieran sido posibles sin el conocimiento previo de la
concentración del sustrato a través de los dos parámetros de
estructura y función de estas moléculas fascinantes.
la ecuación, Vmáx y Km (puesta en forma gráfica, la
ecuación describe un segmento de hipérbola que parte del HIPÓTESIS
origen). La ecuación de Michaelis-Menten se puede
modificar matemáticamente para obtener su forma lineal Si la velocidad de una reacción enzimática depende de la
(ecuación de Lineweaver-Burk), lo que permite determinar formación de un complejo activo entre la enzima y el
de manera sencilla los parámetros cinéticos de una enzima. sustrato, entonces la velocidad de la reacción variará en
Esta última ecuación es de gran utilidad en el análisis de las función de la concentración del sustrato, alcanzando un valor
diferentes formas de inhibición enzimática. máximo cuando toda la enzima se sature, es decir, cuando
Dentro de las ciencias médicas, el estudio de las se encuentre en la forma de la máxima formación del
enzimas es de suma importancia, ya que están implicadas complejo enzima-sustrato.

57
 La enzima que sirve de modelo en esta práctica es la El peróxido de hidrógeno que se forma en el curso de
glucosa oxidasa acoplada a la peroxidasa. la reacción se descompone mediante la peroxidasa. Esta
última cataliza la transferencia de oxígeno del peróxido a un
Fundamento aceptor que es cromógeno, como por ejemplo la
Para la práctica se utilizará un ensayo acoplado que implica ortotoluidina, la ortodianisidina, la 2,2-azino-bis (3-
el uso de dos enzimas: aquella cuya actividad se quiere etilbencentiazolin-6-sulfónico) o la 4-amino-antipirina (y
estudiar pero que no es posible monitorear directamente, y fenol), que se colorean al oxidarse, por lo que la intensidad
una enzima que servirá como auxiliar para poner de de la coloración del cromógeno oxidado será proporcional a
manifiesto la actividad de la primera. En el presente caso se la cantidad de glucosa transformada por la glucosa oxidasa.
utilizarán las enzimas glucosa oxidasa y peroxidasa,
fungiendo esta última como enzima auxiliar. Tubo H2O Solución de Solución de
La glucosa oxidasa (ß-D-glucosa:oxígeno óxido- No. (mL) glucosa (mL) enzimas (mL)
reductasa, EC1.1.2.4) es una proteína dimérica con un peso 1 1.0 0.0 3.0
molecular de 160 000 y que contiene dos moles de FAD+ - 2 0.90 dil 1:10 0.10 3.0
como grupo prostético - por mol de enzima. La glucosa 3 0.75 dil 1:10 0.25 3.0
oxidasa es altamente específica, hecho que ha permitido su 4 0.50 dil 1:10 0.50 3.0
empleo para el análisis cuantitativo de la glucosa. El ciclo 5 0.90 0.10 3.0
catalítico de la enzima consiste en dos pasos: 6 0.75 0.25 3.0
1. Glucosa + Glucosa oxidasa − FAD
7 0.50 0.50 3.0
→ 1,5 glucolatona + glucosa oxidasa − FADH2 8 0.0 1.0 3.0
Tabla 3.1. Preparación de tubos.
2. Glucosa oxidasa − FADH2 + O2
Material
→ Glucosa oxidasa − FAD + H2 O2
• 2 Gradillas con 8 tubos de ensayo cada una
• 1 Pipeta de 5 mL
La 1,5-gluconolactona se hidrata espontáneamente
• 2 Pipetas de 1 mL
dando ácido glucónico. La reacción global se expresa:
• Fotocolorímetro con filtro azul
glucosa oxidasa
• Solución estándar de glucosa 40 mmol/L y una dilución 1:10
Glucosa + O2 → Ácido Glucónico + H2 O2 de ésta para los tubos 2, 3 y 4 del experimento.

58
• 2 frascos con solución de enzimas: 41.6 UmL–1 de glucosa Considerar un intervalo de 30 segundos para cada tubo al
oxidasa, 4.6UmL–1 de peroxidasa, ortodianisidina 0.21 agregar el HCl.
mmol/L *Nota: El tiempo de incubación para la reacción enzimática
• Solución de azida de sodio 400 mmol/L (inhibidor). se indicará al inicio de la práctica.
• Gotero con HCl
Resultados
1. Calcular la concentración micromolar inicial de sustrato en
Método I (sin inhibidor)
1. Preparar una serie de tubos como lo indica la tabla 1 cada tubo; tomar en cuenta que la solución concentrada de
2. Considerar un intervalo de 30 segundos entre cada tubo glucosa contiene 40 µmolas mL–1.
antes de agregar la enzima 2. La velocidad será igual a las unidades Klett divididas entre
3. Agitar cada tubo e incubar a temperatura ambiente y el el tiempo de incubación (UK min-1)
tiempo de incubación para la reacción enzimática se indicará 3. Con los datos obtenidos completar el cuadro 5.2 y hacer
al inicio de la práctica; de inmediato detener la reacción las dos gráficas en papel milimétrico.
agregando 3 gotas de HCl concentrado. Considerar un 4. Elaborar una segunda gráfica con los valores de 1/v vs
intervalo de 30 segundos para cada tubo al agregar el HCl. 1/[S] (gráfico de Lineweaver-Burk).
Leer ambas series de tubos en el fotocolorímetro; utilizar 5. A partir del gráfico doble recíproco, calcular el valor de la
como blanco el tubo 1. Todos los tubos en la gradilla son velocidad máxima (Vmax) y de la constante de Michaelis
tubos Klett. (Km) con y sin inhibidor.
6. Determinar el tipo de inhibidor de acuerdo con las gráficas
Método II (con azida de sodio) del punto anterior.
1. Incubar 20 minutos la solución de enzimas con 0.5 mL del 7. Analizar si los resultados obtenidos están de acuerdo con
inhibidor. la hipótesis planteada.
2. Preparar una segunda serie de tubos tal como se preparó
para el experimento en ausencia de inhibidor (tabla 1).
3. Considerar un intervalo de 30 segundos entre cada tubo
al agregar la enzima.
4. Agitar cada tubo e incubar a temperatura ambiente y el
tiempo de incubación para la reacción enzimática se indicará
al inicio de la práctica, transcurrido el tiempo de incubación
detener la reacción agregando 3 gotas de HCl concentrado.

59
 Tubo Concentración de Velocidad de la Velocidad de la
sustrato (molas de reacción reacción con el
glucosa L-1) (unidades inhibidor
ABCISAS (X) Klett/min) (unidades Klett/
ORDENADAS (Y) min)
1
2
3
4
5
6
7
8
Tabla 3.2. Resultados.

Bibliografía
• Devlin, M.T. (2015). Bioquímica con aplicaciónes
clínicas. Reverte.
• Mathews, C. & VanHolde, K. (2003). Bioquímica.
España: McGraw-Hill.
• Nelson, D. & Cox, M. (2009). Principios de
bioquímica. Lehninger. McMillan.
• Voet, D., Voet, J. & Pratt, C. (1999). Fundamentals of
biochemistry. USA: John Willey and Sons.

60
 Práctica 4 6. ¿Cuál es el mecanismo por el cual los protonóforos
desacoplan la fosforilación oxidativa? Describa su efecto
sobre el consumo de O2 y la síntesis del ATP.
Estudio del bombeo de protones por
levaduras. INTRODUCCIÓN

Efecto de los inhibidores y de los Las levaduras Saccharomyces cerevisiae son organismos
desacoplantes sobre la cadena de unicelulares que se dividen por gemación. En común con
transporte de electrones otras células eucariontes, las levaduras tienen un núcleo -en
donde reside la información genética de la célula-,
mitocondrias -en donde se lleva a cabo la síntesis de ATP- y
Tiempo de práctica: 2 horas un retículo endoplásmico y aparato de Golgi que se
encargan de la síntesis de proteínas cuya localización final
Objetivos es la membrana plasmática o el exterior.
A nivel de la membrana plasmática, las levaduras
Al teminar la práctica el estudiante:
tienen una ATPasa de H+ que acopla la hidrólisis del ATP
1. Relacionará el consumo de glucosa con los cambios de
pH producidos por las levaduras. con el bombeo de protones hacia afuera de la célula. Desde
2. Describirá las vías por las cuales la glucosa genera los un punto de vista estructural y funcional, esta proteína es
cambios de pH. semejante a la ATPasa de Na+/K+ de las células animales y,
3. Interpretará el efecto de los inhibidores y los al igual que la bomba de sodio/potasio, se inhibe con
desacoplantes sobre la salida de protones. concentraciones micromolares de vanadato. Como resultado
de la actividad de la ATPasa de H+ en la levadura, se genera
Responda a las siguientes preguntas:
un gradiente electroquímico de protones que se utiliza para
1. ¿Cuáles son las fuentes de carbono que usa la levadura?
2. ¿Cuáles son las vías metabólicas que catabolizan a los impulsar el transporte de nutrientes al interior de la célula,
carbohidratos? proceso catalizado por sistemas de transporte llamados
3. ¿En qué consisten la glucólisis y la fosforilación oxidativa? simportadores o uniportadores. Para darse una idea de la
4. ¿Cuáles son los productos finales del catabolismo de los importancia de esta enzima en la economía celular y en la
carbohidratos en las levaduras? energización de la membrana celular, basta decir que la
5. ¿Cuáles son los inhibidores de los sitios I, II y III de la
ATPasa de H+ de la levadura consume hasta un 25 % del
cadena respiratoria? Describa su efecto sobre el consumo
de O2 y la síntesis del ATP. ATP que se sintetiza en la célula.

61
 Además de esta ATPasa de H+ de la membrana • Solución de glucosa (10%) para una concentración final de
plasmática, las levaduras tienen la ATP sintasa convencional 1%
localizada en la membrana interna de la mitocondria, que se • Solución de dinitrofenol 40 mmol/L en etanol
encarga de la síntesis del ATP. En contraste con la enzima • Solución de azida de sodio 400 mmol/L
de la membrana plasmática, el flujo de protones a través de • Agua destilada
la ATP sintasa induce la síntesis de ATP. Uno de los
inhibidores más efectivos de esta enzima es la oligomicina. Método
Así, se puede proponer uno de los muchos ciclos en Experimento 1 (control)
los que interviene el ATP en la levadura: por un lado, el ATP 1. Diluir 5 mL de la levadura con 35 mL de agua destilada.
se sintetiza en la mitocondria por medio de la ATP sintasa, y 2. Determinar el pH de la solución y repetir la lectura dos
a nivel de la membrana plasmática, la ATPasa de H+ lo veces más con intervalos de 3 minutos para obtener la línea
hidroliza para bombear protones al exterior de la célula. En basal.
ambos casos, el factor común es un flujo de protones a 3. Adicionar 5 mL de glucosa al 10 %, agitar y medir el pH.
través de la membrana. 4. Determinar el pH de la solución 4 veces con intervalos de
5 minutos, y luego cada 10 minutos 2 veces más.
HIPÓTESIS 6. Registrar los datos en la tabla 4.1.

Si las levaduras consumen glucosa para metabolizarla y Experimento 2 (desacoplante)

producir ATP, y un porcentaje importante de este último es 1. Diluir 5 mL de la levadura con 35 mL de agua destilada.
utilizado por la ATPasa de H+ de la membrana plasmática, 2. Añadir por decantación (no pipetear) 0.2 mL de la
entonces se observará una disminución progresiva en la solución de dinitrofenol 40 mmol/L para obtener una
concentración de glucosa en el medio de cultivo, así como concentración final de 200 µmol/L.
en el pH extracelular. 3. Determinar el pH de la solución y repetir la lectura dos
veces más con intervalos de 3 minutos para obtener la línea
Material basal.
• Tres vasos de precipitado de 100 mL 4. Esperar 5 minutos.
• Pipetas de 5 y 10 mL 5. Adicionar 5 mL de glucosa al 10%, agitar y medir el pH.
• Potenciómetro 6. Determinar el pH de la solución 4 veces con intervalos de
• Piceta para enjuagar el electrodo del potenciómetro 5 minutos, y luego cada 10 minutos 2 veces más.
• Levadura (Saccharomyces cerevisiae) 200 mg/mL 7. Registrar los datos en la tabla 4.1.

62
 Glucosa
Experimento 3 (azida)
1. Diluir 5 mL de la levadura con 35 mL de agua destilada.
2. Añadir por decantación (no pipetear) 0.5 mL de la
solución de azida de sodio 400 mmol/L para obtener una
concentración final de 5 mmol/L. Agitar con cuidado. ADP + Pi
Glucosa
3. Determinar el pH de la solución y repetir la lectura dos + +
H H
veces más con intervalos de 3 minutos para obtener la línea
ATP ADP
basal.
ATP
4. Esperar 5 minutos.
Etanol
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
6. Registrar los datos en la tabla 4.1.
+ + +
H H H

Resultados +
1. Hacer una gráfica de cada uno de los experimentos, H
utilizando los valores de las lecturas de pH contra tiempo. NAD NADH ADP + Pi
2. Analizar el significado de los cambios de pH en el
experimento control, con dinitrofenol como desacoplante y ATP
con azida de sodio.
3. Hacer una relación de las vías que producen estos Acetaldehído
cambios; tomar en cuenta que las levaduras poseen una
Mitocondria ADP
ATPasa de protones en la membrana mitocondrial que se
encarga de sintetizar ATP y que tienen otra ATPasa de ADP
protones en la membrana plasmática cuya función es similar
a la bomba de Na+/K+ en las células de los mamíferos (ver
figura 4.1). Figura 4.1. Generación de ATP en la levadura

63
Resultados

pH
Tiempo (min) Control Dinitrofenol Azida de Na+
0 (basal)
3 (basal)
6 (basal)
Adicionar 5 mL de glucosa
0
5
10
15
20
30
40
Tabla 4.1. Resultados de la determinación del pH en la levadura.

Bibliografía
• Pardo, J. (1990). La ATPasa de H+ de la membrana
plasmática de los hongos. Mensaje bioquímico, 119-
172.
• Peña, A. (1975). Studies on the mechanism of K
transport in yeast. Arch Biochem Biophys, 397-409.

64
 Práctica 5 La concentración de glucosa en sangre está
determinada por factores como el estado de alimentación del
individuo, situaciones que generen estrés, los niveles de
Determinación de glucosa en sangre
hormonas e incluso la edad.
Algunos minutos después de la ingesta de una
Tiempo de la práctica: 3 horas comida, aumentan los niveles de insulina sanguínea. La
glucosa y algunos aminoácidos de la dieta – tales como la
Objetivos leucina, la isoleucina y la lisina – son estimulantes potentes
de las células beta del páncreas, haciendo que éstas
Al terminar la práctica el estudiante:
secreten insulina. La mayor parte de las células del cuerpo
1. Describirá el metabolismo de la glucosa en sujetos sanos
en diferentes condiciones. responden al aumento en la concentración de la glucosa
2. Discutirá los cambios de la glucosa y la insulina después sanguínea con un incremento en la velocidad de transporte
de la ingesta de alimentos y en condiciones de ayuno. de ésta hacia el interior de las células. De esta manera, los
3. Interpretará las curvas de índice glicémico obtenidas con niveles de glucosa sanguínea aumentan solamente de un
glucosa de diferentes fuentes. 20% a un 40% en los individuos no diabéticos. Es importante
señalar que aproximadamente el 80% de la captación de
INTRODUCCIÓN
glucosa por los tejidos no depende de la insulina (por
La glucosa representa una fuente de energía importante en ejemplo: el cerebro, los glóbulos rojos, el hígado y los
el humano; el funcionamiento adecuado de órganos como el intestinos) El músculo y el tejido adiposo son los tejidos más
cerebro y células como los eritrocitos depende de un aporte importantes que dependen de insulina (ver Tabla 5.1). Por
continuo de dicho carbohidrato. Por consiguiente, la otra parte, los niveles crecientes de insulina y glucosa
concentración de glucosa en sangre (glucemia) debe sanguíneas inhiben la lipólisis, así como aproximadamente
mantenerse dentro de un intervalo de 70 a 90 mg/dL para el 60% de la liberación normal de glucosa producida por la
satisfacer los requerimientos energéticos del organismo. gluconeogénesis hepática.
En la práctica clínica, la determinación de la
concentración de glucosa sanguínea – en condiciones de
ayuno – le permite al médico realizar un diagnóstico
adecuado acerca de la homeostasis de la glucosa en un
individuo, ayudándole a detectar alteraciones potenciales en
dicha homeostasis (por ejemplo: diabetes).

65
 Transportador Órgano o Tejido Propiedades insulina en sangre y se incrementa la concentración de
Eritrocitos, barrera
glucagón, por lo que baja la relación insulina/glucagon
hematoencefálica, Ingreso basal de
Glut 1 sanguínea, favoreciendo que el glucógeno muscular y
placenta, retina, riñón glucosa Km 1.6 mM
cerebro hepático sea degradado como una fuente de glucosa. Si el
Transportador de
glucosa, galactosa y ayuno es de largo plazo, entonces ocurre la degradación de
Hígado, páncreas e
Glut 2
intestino
fructosa Sensor de las proteínas a aminoácidos en el músculo esquelético, y la
glucosa Km 15 mM o
más
lipólisis de los triacilgliceroles a ácidos grasos y glicerol en el
Cerebro, placenta, Ingreso basal de tejido adiposo. El aminoácido alanina y el glicerol son usados
Glut 3
hígado, riñon y corazón glucosa Km 2 mM para sintetizar glucosa por medio de la gluconeogénesis
Tejido adiposo, corazón y Dependiente de insulina
Glut 4
músculo esquelético Km de 5 mM estimulada por glucagón. Por otra parte, los ácidos grasos
Yeyuno, riñón, cerebro y Transportador de libres pueden ser usados como combustible por el corazón,
Glut 5
espermetazoides fructosa los músculos esqueléticos y el hígado.
Tabla 5.1. Presencia de GLUTs en diferentes tejidos.

La velocidad con la que aumenta la concentración de

glucosa en sangre depende notablemente de la fuente del
azúcar en la dieta, así como de su abundancia. Así, la
ingesta de una solución de glucosa se manifestará más
rápidamente en el nivel de glucosa en sangre en
comparación con la ingesta de una comida sólida rica en
carbohidratos. Ello se debe a que la glucosa contenida en
los alimentos no se encuentra en forma libre, sino que está
unida en forma covalente a otras moléculas, ya sea a otros
monosacáridos como la galactosa o la fructosa – como en la
lactosa y la sacarosa, respectivamente – o a otras moléculas
de glucosa – como en el almidón – y los enlaces
correspondientes deben ser hidrolizados por enzimas
específicas en el intestino delgado antes de quedar
disponible para su absorción.
En el estado de postabsorción (ayuno temprano) de
los individuos normales, disminuye la concentración de

66
 concentración de glucosa se mantiene dentro de un margen
relativamente estrecho durante el día.

Determinación de glucosa
Requisito para la práctica: ayuno de 6-8 horas.
Podrá participar un integrante por equipo, de manera que en
todo el grupo se puedan trabajar las diferentes condiciones.

Materiales
• Glucómetros “One Touch Ultra”
• Tiras reactivas “One Touch Ultra” [Glucosa Oxidasa
(Aspergillus níger)]
• Lancetas estériles.
• Recipiente para material punzo cortante
• Recipiente para material biológico infeccioso
• Jabón para manos
• Torundas de algodón con alcohol

Tres voluntarios que hayan ingerido alguna de las siguientes

fuentes de glucosa:
a) 15 gramos de glucosa (1er Equipo).
b) 15 gramos de sacarosa (2° Equipo).
c) 15 gramos de cereal (3er Equipo).

Método
Figura 5.1. Control hormonal de la homeostasis de la glucosa. La Determinación de glucosa
concentración de glucosa plasmática refleja el equilibrio entre la A cada uno de los sujetos se le determinará la concentración
acción hipoglucemiante (disminución de la glucosa) de la insulina
de glucosa en sangre total – por medio de un glucómetro –
y la acción hipergluceminate (aumento de glucosa) de las
hormonas anti-insulinicas. En el gráfico inferior se muestra el en los siguientes tiempos: 0 minutos (antes de ingerir la
patrón diario de secreción de la insulina y del glucagón, así como carga de los diferentes carbohidratos) y a los 30, 60 y 90
las variaciones correspondientes en la concentración de glucosa minutos, después de la ingesta.
plasmática como resultado de la ingesta de alimentos. La

67
 Para realizar la determinación de glucosa en sangre • Deseche las tiras reactivas, junto con las torundas de
total seguir los siguientes pasos: algodón empleadas en la práctica, en una bolsa para
material biológico-infeccioso.
1. Inserte la tira reactiva en el puerto de análisis, con Con los datos obtenidos completar el cuadro anexo y hacer
el extremo de las barras de contacto al frente y mirando una gráfica en papel milimétrico de todas las variantes
hacia arriba. Empújela hasta que no avance más. usadas en la práctica.
2. Los estudiantes voluntarios deben lavar sus manos
con agua y jabón y desinfectar la zona donde se realizará la Nombre:
punción utilizando una torunda con alcohol. Edad:
3. Puncione el dedo con una lanceta y aplique un Sexo:
Tiempo (min) Glucosa (mg/dL)
masaje suave a la punta de su dedo, lo que le ayudará a
0
obtener una gota de sangre adecuada; no exprima en
30
exceso el área de punción. 60
4. Acerque y mantenga la gota de sangre en el canal 90
estrecho del borde superior de la tira reactiva. Tabla 5.2. Resultados.
Para asegurarse de que la cantidad de sangre es adecuada,
utilice como guía los esquemas adjuntos: Bibliografía
a) Muestra adecuada. • Baynes, W. (2011). Bioquímica médica. elsevier.
• Kaplan, L. & Pesce, A. (2002). Química clínica.
b) Muestra insuficiente.
Teoria , análisis y correlación. Pesce .
5. Llene el capilar del glucómetro, lo que inicia la
• NOM-030-SSA2-1999, N.O. (1999). Para la
cuenta regresiva para dar la concentración de glucosa. prevención, tratamiento y control de la hipertensión
arterial. Obtenido de para la prevención, tratamiento
Es importante desechar con mucho cuidado la y control de la hipertensión arterial:
lanceta usada, con el fin de evitar que se produzcan lesiones http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/030ssa2
accidentales con la punta de éstas. 9.html.
Para el desecho de las lancetas y del material • SSA (2001). manual para el manejo de las insulinas.
contaminado con sangre siga los siguientes pasos: Obtenido de Secretaría de salud:
http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/documentos/
• Deposite la lanceta en un recipiente para material punzo
DOCSAL6250.pdf.
cortante.

68
 Práctica 6 la partícula, y por una sola monocapa de fosfolípidos,
colesterol y proteínas o polipéptidos que rodean al núcleo y
estabilizan la partícula para que permanezca en solución
Determinación de colesterol y
dentro del plasma. Las principales lipoproteínas que circulan
lipoproteínas plasmáticas
en el plasma humano son los quilomicrones, las
lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL), las lipoproteínas
Tiempo de práctica: 2 horas de baja densidad (LDL) y las lipoproteínas de alta densidad
(HDL). La cantidad de colesterol y triacilgliceroles presentes
Objetivos en cada tipo de lipoproteína es variable.
El colesterol es esencial para el crecimiento y la
Al terminar la práctica el estudiante: viabilidad de las células de los organismos superiores; sin
1. Identificará la estructura de los diferentes lípidos
embargo, los niveles elevados de colesterol sérico se
circulantes y sus funciones.
2. Describirá las diferentes fuentes de colesterol, su función consideran como un factor de riesgo importante de
y la dinámica del colesterol plasmático. enfermedad y muerte ya que contribuyen a la formación de
3. Determinará el papel del colesterol y otros lípidos en el placas ateroscleróticas. La mayor parte del colesterol
desarrollo de la aterosclerosis. sanguíneo es transportado por tres diferentes lipoproteínas:
4. Describirá la composición y la función de las lipoproteínas. LDL, HDL y VLDL. Los estudios epidemiológicos han
5. Describirá los principios analíticos para la determinación
establecido con claridad que mientras mayor sea el valor del
del colesterol total, colesterol de HDL y de LDL,
apolipoproteínas y triacilgliceroles plasmáticos. colesterol asociado a las LDL, mayor será el riesgo de
6. Calculará la concentración de colesterol de VLDL y de LDL enfermedad cardiaca aterosclerótica; por el contrario,
a partir de las concentraciones de colesterol total, de mientras mayor sea la concentración del colesterol asociado
colesterol de HDL y triacilgliceroles. a las HDL, menor será el riesgo de enfermedad cardiaca
coronaria. En otras palabras, las cifras elevadas de LDL son
INTRODUCCIÓN indicadores aterogénicos, en tanto que las de HDL son
protectoras, por lo que el cálculo del cociente colesterol-
Los dos lípidos de la sangre con un gran interés en el
HDL/colesterol-LDL – que normalmente es de 0.34 ± 0.11 –
diagnóstico clínico son el colesterol y los triacilgliceroles
constituye un índice de aterogenicidad (mientras menor sea
(TAG); ambos se transportan en las lipoproteínas, que son
dicho cociente, mayor es el riesgo de enfermedad cardiaca
partículas globulares de alto peso molecular con un núcleo
aterosclerótica). En general, se cree que las lipoproteínas
formado por lípidos hidrofóbicos -TAG y ésteres de
colesterol-, los cuales aportan la mayor parte de la masa de

69
que contienen apoB 100 – un tipo de proteína asociado con padecimientos. De ahí el interés actual por el diagnóstico
las LDL y las VLDL – son potencialmente aterogénicas. temprano y el tratamiento de estas hiperlipoproteinemias.
Se desconoce el mecanismo exacto por el cual la
Alteraciones de las lipoproteínas plasmáticas y hipercolesterolemia conduce a la aterosclerosis. Sin
aterogénesis embargo, se cree que al alterarse la relación
Desde el punto de vista clínico, se ha atribuido a
colesterol/fosfolípido – que lleva consigo un incremento en la
determinadas lipoproteínas el papel de factores esenciales
viscosidad y maleabilidad de las membranas – se inducen
directos en el desarrollo o en la prevención de ciertas cambios en el endotelio y en los monocitos con un aumento
enfermedades, principalmente de tipo vascular. Las
en su migración y adherencia, probablemente la primera
anomalías en el transporte de lípidos ocurren en los sitios de
anomalía celular de la aterogénesis.
producción o en los de utilización de las lipoproteínas del
Según la hipótesis más aceptada sobre la
plasma y provocan varios tipos de hipo e
patogénesis de la aterosclerosis (hipótesis de respuesta a la
hiperlipoproteinemias; es decir, disminución o elevación de
lesión), cualquier lesión en el endotelio o en el músculo liso
los niveles plasmáticos de lipoproteínas.
de la pared vascular – causada por diversos factores tales
El análisis de las lipoproteínas plasmáticas tiene valor
como la hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, el estrés
diagnóstico, ya que permite el reconocimiento de defectos mecánico de la hipertensión arterial, agresiones químicas
primarios – por ejemplo: hipertrigliceridemia e
como el tabaquismo, etc. – produce una alteración en la
hipercolesterolemia familiares, deficiencia familiar de
relación existente entre el endotelio vascular, las células del
lipoproteína lipasa o apoproteína CII, entre otras – y es de
músculo liso, los monocitos, los macrófagos, las plaquetas y
gran valor para describir la alteración lipoproteica
los componentes de la sangre circulante (en particular los
subyacente a otros trastornos clínicos, como la diabetes, la
lípidos) y genera una respuesta inflamatoria
obesidad, la hepatitis, el hipotiroidismo, el consumo de
fibroproliferativa, que implica la participación de un gran
alcohol, el uso de anticonceptivos orales.
número de factores de crecimiento, citocinas y moléculas
Cabe destacar que la mayor parte de las hiperlipo- vasorreguladoras, que dan origen a las placas
proteinemias – aquellas que consisten en una elevación en
ateroscleróticas.
la concentración de colesterol de LDL, de VLDL y de Lp(a) –
Por otro lado, se ha observado que las partículas LDL
conllevan un alto riesgo de producir accidentes cardio y
oxidadas por los macrófagos – que es un proceso que ocurre
cerebrovasculares, necrosis o pérdida de la función en las normalmente – causan lesión al endotelio, lo que puede ser
extremidades, lo cual se debe a que el colesterol es el
aterógeno. La formación de anticuerpos contra las LDL
agente causal de la aterosclerosis subyacente en dichos
oxidadas también puede ser un factor importante en la

70
formación de la placa. Por lo tanto, hay un interés clínico determinación del colesterol total, se utiliza una serie de
cada vez mayor en la función de los compuestos reacciones enzimáticas que comienza con una hidrólisis
antioxidantes, como las vitaminas C, E y el β-caroteno. Los para dejar libre el grupo 3-OH del colesterol. En la segunda
estrógenos también pueden actuar como antioxidantes en la reacción dicho grupo se oxida y se obtiene, como uno de los
prevención de aterosclerosis. Inclusive, se ha reportado que productos, el peróxido de hidrógeno el cual, por efecto de la
las lipoproteínas HDL tienen efectos antioxidantes in vitro. peroxidasa, transfiere uno de sus oxígenos a un aceptor
Tradicionalmente, las anomalías en la concentración cromógeno. La absorbencia del cromógeno (4-
de los lípidos sanguíneos se han valorado con un examen benzoquinona-monoimino-fenazona) se determina a 520 nm
global de colesterol y TAG. En la actualidad, estos datos son y es proporcional a la concentración de colesterol. Las
insuficientes para valorar correctamente una hiperlipidemia, reacciones correspondientes, así como las enzimas
por lo que se deben investigar también las diferentes involucradas, son:
fracciones lipoproteicas.
Ésteres de colesterol
Fundamento de las determinaciones Colesterol esterasa
La evaluación de pacientes en los que se sospecha alguna Ésteres de colesterol → Colesterol + ácido grasos
alteración en los lípidos plasmáticos puede incluir la
Colesterol oxidasa
determinación de colesterol total y TAG, así como de una o Colesterol + O2 → 4 colestoma + H2 O2
más lipoproteínas. Adicionalmente, la cuantificación de
Lp(a), apoAI y apoB, o la actividad de la lipoproteína lipasa peroxidasa
2H2 O2 + 4 aminoantipirina + fenol → cromógeno + H2 O
u otras enzimas, está siendo ampliamente valorada para
incluirla como procedimiento clínico de rutina.
Determinación de triacilgliceroles. El método utilizado se
Determinación del colesterol plasmático total. El colesterol basa en la hidrólisis completa de los TAG por una lipasa,
total en plasma es igual a la suma del colesterol contenido seguido de la determinación del glicerol liberado en la
en las tres lipoproteínas que lo transportan: reacción. Esta última etapa implica la fosforilación del
compuesto por la enzima glicerol cinasa, formando glicerol-
Colesterol total = Colesterol VLDL + Colesterol HDL + Colesterol LDL 3-fosfato, el cual es oxidado por la glicerolfosfato oxidasa a
fosfato de dihidroxiacetona, generando en la reacción
Además, el colesterol existe en el organismo en dos peróxido de hidrógeno. Finalmente, la peroxidasa cataliza la
fracciones: una en estado libre y otra esterificado – esta transferencia de oxígeno del peróxido a un aceptor que es
última representa del 60 al 75%– por lo que, para la

71
 cromógeno – como la 4-aminoantipirina (4-AAP) o el 3,5- ricas en TAG como las VLDL. Esta apreciación parte de que
dicloro-2-hidroxibencensulfonato (DHBS) – que se colorea al en condiciones de ayuno no se encuentran quilomicrones en
oxidarse. La absorbencia del cromógeno oxidado a 520 nm el plasma, y la relación TAG/colesterol de las VLDL es
es proporcional a la concentración de TAG. La secuencia invariable – de 5:1 en mg/dL o de 2.2:1 en mmol/L –, de tal
completa de reacciones es: modo que la cuantificación de la concentración de TAG es
lipasa suficiente para calcular la concentración de las VLDL con un
TAG → glicerol + ácidos grasos
glicerol cinasa porcentaje de error pequeño en la estimación. Si la
Glicerol + ATP → glicerol − 3 − fosfato + ADP concentración de colesterol-VLDL es la quinta parte de la
glicerolfosfato oxidasa
Glicerol − 3 − fosfato + O2 → dihidroxiacetona fosfato + H2 O2 concentración de TAG cuando ésta se expresa en mg/dL,
peroxidasa
H2 O2 + 4AAP + DHBS → cromógeno oxidado + H2 O entonces:

Determinación de colesterol-HDL. Por regla general, el TAG

Colesterol VLDL =
análisis de las lipoproteínas del plasma requiere de la 5
separación de las diferentes clases de lipoproteínas, seguido
o si las concentraciones se expresan en mmol/L:
de la determinación de la lipoproteína o del componente
lipoproteico de interés. TAG
La determinación es relativamente simple si se Colesterol VLDL =
2.2
precipitan con un polianión (por ejemplo, heparina, dextrano
o fosfotungstato acomplejados con Mn2+ o Mg2+) todas las Es importante enfatizar que estas relaciones no son
lipoproteínas que contienen apoB100 – es decir, VLDL, IDL, apropiadas para muestras con una concentración de TAG
LDL y Lp(a) – y se determina el colesterol-HDL que queda mayor a 400 mg/dL (10.39 mmol/L) o en muestras que
en solución por el método descrito para el colesterol total. contengan quilomicrones.
La relación colesterol total/colesterol-HDL se
considera como un indicador de riesgo coronario. Determinación del colesterol-LDL. Aproximadamente las dos
Normalmente esta relación es menor de cinco; mientras terceras partes del colesterol plasmático total son
menor sea el valor, mejor será el pronóstico para el paciente. transportadas en las LDL, de tal manera que la
concentración de dicho esteroide proporciona una
Determinación de colesterol-VLDL. En general, la estimación bastante precisa del nivel sanguíneo de las LDL
concentración de TAG en el plasma sanguíneo es un en la mayoría de las personas. Por ello es posible evaluar,
indicador excelente de la concentración de las lipoproteínas con bastante exactitud, la concentración de las LDL sobre la

72
base de la cuantificación de la concentración de las VLDL – revestidas de anticuerpos contra apolipoproteínas de las
estimada por los TAG – y la del colesterol total. No obstante, LDL. Estas partículas se separan del resto y se determina el
para determinar con mayor exactitud la concentración de las colesterol.
LDL, debe cuantificarse la concentración de colesterol
contenido en las HDL, lo cual es relativamente simple. La Quilomicrones. Cuando existen quilomicrones pueden ser
concentración de las LDL se estima como sigue: detectados si el tubo de ensayo que contiene el plasma
sanguíneo se almacena en el refrigerador durante una
Colesterol-LDL = Colesterol Total – (Colesterol-HDL + Colesterol VLDL) noche. Los quilomicrones, de mayor tamaño y menor
densidad – pero no las VLDL – se ubicarán en la superficie
Si se determina la concentración de lípidos en
del tubo formando una capa cremosa que puede detectarse
moles/L en lugar de en masa/dL y se sustituye el valor
visualmente. La presencia de quilomicrones en el plasma de
estimado de las VLDL – a partir de la concentración de TAG
un individuo en ayunas se considera anormal.
– la fórmula equivalente se transforma en la expresión
descrita por Fridewald (1972):
Determinación de Lp(a). Al igual que las LDL, la
cuantificación de la Lp(a) se realiza directamente por
métodos inmunoquímicos y, como ya se dijo, su evaluación
constituye un factor independiente de riesgo coronario.
Otra forma sencilla de determinación del colesterol- Normalmente, la Lp(a) se precipita junto con las
LDL, aunque indirecta, es el método que utiliza lipoproteínas que contienen apoB, por lo que la
polivinilsulfato (PVS). El PVS provoca la precipitación de las determinación del colesterol de las LDL incluye la
LDL y deja en el sobrenadante las VLDL y las HDL. El valor contribución de colesterol de la Lp(a).
del colesterol-LDL se calcula restando al valor del colesterol
total (colesterol en VLDL, LDL y HDL) el valor del colesterol Determinación de apoAI y apoB. La determinación de
en el sobrenadante obtenido por la precipitación (colesterol apolipoproteínas – particularmente la apoA y la apoB – es un
contenido en las VLDL y las HDL). dato complementario que ayuda a evaluar si un individuo
La determinación de las LDL se puede hacer tiene un riesgo aumentado de cardiopatía coronaria, sobre
directamente mediante procesos inmunoquímicos que todo en los estados hiperlipidémicos donde hay un aumento
requieren una destreza especial y un equipo específico, por de TAG en los quilomicrones o en las VLDL, así como
lo que resulta de difícil adaptación para su uso en docencia. cuando las LDL y las HDL contienen menor cantidad de
La técnica consiste en hacer reaccionar esferas de látex ésteres de colesterol y más TAG en su núcleo debido al

73
intercambio de dichos componentes entre las lipoproteínas. Metabolismo de lípidos
En tales circunstancias, la cuantificación de las apoproteínas
proporciona cálculos más seguros y útiles de la Material
• Gradilla con 6 tubos de ensayo
concentración de partículas lipoproteicas.
• Pipetas de 5 y 10 mL
La mayoría de los métodos de cuantificación, todos
• Pipetas automáticas
los cuales requieren un equipo especial, se basan en la
• Puntas para pipetas automáticas
identificación inmunológica de las apolipoproteínas. La
técnica más usada es el inmunoanálisis ligado a enzimas y • Solución de enzimas para la determinación de colesterol,
que contiene: amortiguador Tris 100 mmol/L (pH 7.7); MgCl2
a compuestos fluorescentes (ELIHDL).
50 mmol/L; 4-amino-antipirina 1 mmol/L; fenol 6 mmol/L;
colesterol esterasa ≥ 160 U/L; colesterol oxidasa ≥ 100 U/L
y peroxidasa ≥ 2 000 U/L
• Solución patrón de colesterol para la determinación de
colesterol total (200 mg/dL = 5.17 mmol/L)
• Solución de enzimas para la determinación de TAG, que
contiene: amortiguador Tris 100 mmol/L (pH 6.7); ATP 0.7
mmol/L; MgCl2 4 mmol/L; 4-aminoantipirina 0.4 mmol/L; 3,5-
dicloro-2-hidroxibencen-sulfonato 0.8 mmol/L; lipasa ≥1000
U/L; glicerol cinasa ≥ 1000 U/L, glicerol fosfato oxidasa
4000U/L y peroxidasa ≥ 2000 U/L
• Solución patrón de TAG (trioleína) (200 mg/dL = 2.8
mmol/L).
• Reactivo precipitante para la determinación de HDL: sulfato
de dextrano 10g/l, MgCl2 0.5 mol/L
Figura 6.1. Transporte de colesterol. - Suero comercial bovino patológico y normal
• Espectrofotómetro para leer densidad óptica

Método
Determinar colesterol total, TAG y colesterol-HDL como se
describe a continuación:

74
1. A un tubo Eppendorf que ya contiene 20 µL de la solución 1 mL de solución de enzimas para colesterol
precipitante agregarle 50 µL de plasma; mezclar
perfectamente y dejar reposar 10 minutos. Transcurrido
dicho lapso, centrifugar durante 10 minutos a 3 000 rpm. El
sobrenadante que contiene solamente a las HDL será
utilizado para determinar el colesterol-HDL.
2. Para la determinación de colesterol total y colesterol-HDL
preparar la siguiente serie de tubos:

Preparación de los tubos (volumen en µL)

Tubo 1 2 3
Estándar de colesterol 10 L - -
Suero - 10 L
Sobrenadante con HDL - - 20 L

3. Agregar a todos los tubos 1 mL de la solución de enzimas

para la determinación de colesterol. Mezclar e incubar a 10 µL
temperatura ambiente durante 10 min. Estándar 10 µL 20 µL Sobrenadante
de Plasma con HDL
colesterol

4.Leer la absorbancia (A) a 520 nm en el espectrofotómetro;

calibrar a cero con el blanco.

Para determinar los TAG preparar la siguiente serie de

tubos:

Preparación de los tubos (volumen en L).

Tubo 1 2
Estandar de TAG 10 L -
Suero - 10 L

75
Agregar a todos los tubos 1 mL de solución de enzimas para correspondiente a los tubos 2 y 3 (tubos que contienen el
TAG. plasma y el sobrenadante) de la siguiente manera:

1 mL de solución de enzimas para TAG

Cs
[Colesterol total] = x AP
As
Cs = Concentración del estándar en mg/dL o mmol/L.
As = Absorbancia del estándar.
Ap = Absorbancia del problema.

2. Para el cálculo de la concentración de triacilgliceroles se

procede de un modo similar:

Cs = Concentración del estándar en mg/dL o mmol/L.

As = Absorbencia del estándar.
Ap = Absorbencia del problema
10 µL 10 µL
Estándar de TAG Plasma 3. Compare los resultados obtenidos con los valores
normales de colesterol total, del colesterol-HDL y de los
triacilgliceroles en el plasma.
4. Calcule la concentración de colesterol-VLDL mediante la
Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 10 min. fórmula:
5. Leer la absorbancia (A) a 520 nm en el espectrofotómetro; TAG
[Colesterol]VDL =
calibrar a cero con el blanco. 5
5. Calcule la concentración de colesterol-LDL a partir de las
Resultados
1. Utilizando la concentración de colesterol de la solución concentraciones de colesterol total, HDL y VLDL utilizando
estándar, calcule la concentración de colesterol la fórmula correspondiente incluida en la introducción de la
práctica.

76
6. Con los datos obtenidos, estime los cocientes colesterol- • Samaniego, V. & López, D. (1999). Lipidos. Sinopsis
HDL/colesterol-LDL y colesterol total/colesterol-HDL (índices del informe del papel de expertos sobre niveles de
aterogénicos). colesterol en niños y adolescentes. Aterosclerosis,
7. Analice el significado de los datos obtenidos y haga un 22-24.
• Vélazquez, C. (2000). Papel de las especies
informe de los resultados y de las conclusiones que de éstos
reactivas de oxígeno en la ateroesclerosis. IATREIA.
se deriven.
• Vogel, A. (1997). Coronary risk factors, endothelial
function and atherosclerosis. Clin Cardiol, 426-432.
Bibliografía
• Allain, C., Poon, L., Chan, C. & Richmond, W. (1974).
Enzymatic detrmination of total serum cholesterol.
Clin Chem, 470-475.
• Alba Zayas, E., Pereira, R. & Aguilar, B. (2003).
Lipoproteína(a): estructura, metabolismo, genetica y
mecanismos patogénicos. Rev cubana Invest
Biomed, 32-40.
• Friedewald, W.T.(1972). Estimation of the
concentration of low density lipoprotein cholesterol in
plasma, without use of preparative ultracentrifuge.
Clin Chem, 499-502
• Masa-aki, K. & Rader, J. (2000). Gene therapy for
lipid disorers. Cardiovasc Med, 120-127.
• Mohammed, H. & Frohlich, J. (1999). Effects od
dietary phytosterols on cholesterol metabolism and
atherosclerosis: clinical and experimental evidence.
Am J Med, 588-592.
• Montgomery, R. (1988). Bioquímica: casos y texto.
Elsevier.
• Pennachio, D. (1997). Lineaminetos para la
detección de hipercolesterolemia . Atención Médica ,
30-43.
• Russet, G. (1982). Dextran sulfate-Mg+ precipitation
procedure for quantitation of HDL cholesterol. Clin
Chem, 1379-88.

77
 Práctica 7 Metabolismo de los carbohidratos

Aproximadamente entre el 40 y el 45% de nuestra ingesta

Integración Metabólica calórica diaria proviene del consumo de carbohidratos
complejos los cuales, al ser digeridos, dan lugar a los
Tiempo de práctica: 3 horas diferentes monosacáridos entre los que sobresale la
glucosa. Esta última se distribuye por la sangre a las células,
Objetivos siendo la principal fuente de energía. Algunos tipos celulares
dependen de la insulina liberada por el páncreas para captar
Al terminar la práctica el estudiante: la glucosa, como es el caso de las células musculares. Si el
1. Integrará las vías metabólicas de los carbohidratos, de los nivel de insulina no es el adecuado, la glucosa permanece
lípidos y proteínas en una persona sana.
en la sangre causando un aumento en su concentración; a
2. Identificará los sitios denominados encrucijadas
metabólicas y las enzimas reguladoras de las distintas vías. esto se le denomina hiperglucemia valores de glucosa
3. Correlacionará el papel que tienen las hormonas en la sanguínea en ayuno por arriba de 100 mg/dL. Una de las
regulación de las vías. enfermedades que se caracteriza por la hiperglucemia es la
4. Analizará los datos de las pruebas clínicas en un sujeto Diabetes Mellitus, la cual se caracteriza por un defecto en la
normal. secreción de insulina, en la acción de la insulina o en ambas.
5. Identificará las vías que están alteradas en un paciente
La hiperglucemia crónica de la diabetes puede conducir a
diabético.
lesiones, así como disfunción y fallo de varios órganos
INTRODUCCIÓN (especialmente de los ojos, los riñones, el corazón y los
vasos sanguíneos).
Los alimentos que ingiere el ser humano deben contener los En el desarrollo de la diabetes están implicados
seis componentes básicos: proteínas, carbohidratos, lípidos, varios procesos patogénicos; estos van desde una
vitaminas, minerales y agua. La cantidad que se requiere destrucción autoinmune de las células β del páncreas – con
ingerir de cada uno varía de acuerdo con la constitución, la la consiguiente deficiencia de insulina – hasta
edad y la actividad física que se realiza; tanto la falta como anormalidades en las que el páncreas produce suficiente
el exceso de consumo de alguno – o algunos – de los insulina, pero los tejidos dependientes no responden a ella.
componentes básicos lleva a diversos trastornos La acción deficiente de la insulina en los tejidos diana es la
metabólicos. responsable del metabolismo anómalo de los carbohidratos,
las grasas y las proteínas en la diabetes. Frecuentemente

78
coexisten en el mismo paciente una secreción inadecuada Metabolismo de los lípidos
de insulina, así como defectos de la acción de ésta.
A nivel celular, la acción deficiente de la insulina El exceso en la ingesta de carbohidratos no solamente
ocasiona una respuesta inadecuada en uno o más puntos de mantiene la reserva de energía en forma de glucógeno, sino
la compleja red de señalización en la que esta hormona tiene que una parte importante de dicho exceso es convertido en
un papel esencial. triacilgliceroles. En el hígado, los triacilgliceroles se
La mayoría de los casos de diabetes pueden incluirse sintetizan a partir de acil-CoA y glicerol 3-fosfato, son
en dos amplias categorías etiopatogénicas. En el primer empaquetados para su exportación en lipoproteínas de muy
caso (diabetes tipo I) la causa es una deficiencia absoluta en baja densidad (VLDL) y secretados al torrente sanguíneo.
la secreción de insulina debido a la destrucción de las células Cuando las VLDL llegan al tejido adiposo, los triacilgliceroles
β de los islotes de Langerhans. Los individuos con alto riesgo son degradados y los ácidos grasos que se liberan se
de desarrollar este tipo de diabetes pueden ser identificados incorporan nuevamente en triacilgliceroles para su
mediante evidencias serológicas de un proceso autoinmune almacenamiento. Para su utilización, los triacilgliceroles son
que se produce en los islotes pancreáticos y también hidrolizados a glicerol y ácidos grasos. En la dieta es crucial
mediante marcadores genéticos. En la segunda categoría la presencia de lípidos, ya que son precursores de diferentes
(diabetes tipo II), mucho más prevalente, la causa es una componentes de la célula (por ejemplo: los fosfolípidos). Un
combinación de una resistencia a la acción de la insulina y lípido particularmente importante es el colesterol, ya que
de una inadecuada respuesta secretora compensadora. La disminuye la fluidez de las membranas celulares y es
diabetes tipo II se caracteriza por estar presente muchos precursor de las sales biliares, así como de hormonas
años antes de que aparezcan los síntomas clínicos (sed, esteroides. El colesterol se puede obtener mediante la
pérdida de peso), pero suficiente para ocasionar cambios alimentación y por la síntesis de novo en el propio
patológicos y funcionales sobre los órganos blanco. Durante organismo, siendo las células hepáticas y las suprarrenales
este período asintomático es posible demostrar trastornos las de mayor actividad biosintética. Para llevar a cabo la
en el metabolismo de los carbohidratos determinando la síntesis de colesterol se requiere de acetil-CoA, el cual
glucosa plasmática en ayunas o después de una sobrecarga proviene de la degradación de glucosa, ácidos grasos y
de glucosa por vía oral. aminoácidos. Debido a que el acetil-CoA puede tener
diferentes destinos en su metabolismo, se le denomina un
metabolito de encrucijada metabólica.
El colesterol es insoluble en agua, por lo que su
transporte en la sangre requiere de tres tipos de

79
lipoproteínas, que son las de muy baja densidad (VLDL), las Otro de los componentes del metabolismo
de baja densidad (LDL) y las de alta densidad (HDL). En un nitrogenado son los nucleótidos, que contienen purinas y
individuo adulto, los niveles normales de colesterol total en pirimidinas. Los nucleótidos son precursores del DNA y el
sangre en un adulto son de <200 mg/dL; cuando estos RNA, forman parte de la estructura de muchas coenzimas, y
valores se ven aumentados se asocian a la formación de participan en el metabolismo energético, como el ATP. La
placas ateroscleróticas, que pueden ocluir los vasos degradación de las purinas no genera energía y el producto
sanguíneos y provocar alteraciones cardiovasculares e de la degradación del anillo purínico es el ácido úrico, que se
incluso infarto al miocardio. elimina por la orina. Debido a que tiene una solubilidad
Por lo anterior, es importante la cuantificación de las limitada, su exceso da como resultado la formación de
LDL en sangre, ya que concentraciones elevadas indican el cristales en regiones del organismo como los dedos gordos
desarrollo de la aterosclerosis. del pie, trastorno que se conoce como gota. Los valores
En el caso de las HDL se presenta una situación elevados de ácido úrico se presentan en: ingestión de
inversa, ya que al disminuir su concentración aumenta el alimentos ricos en nucleoproteínas, insuficiencia renal,
riesgo de desarrollar aterosclerosis. azoemias prerrenales.
En los componentes del metabolismo nitrogenado
Metabolismo de los compuestos nitrogenados también está la creatina que en el músculo en su forma
fosforilada sirve como almacén de alta energía y se
Las proteínas constituyen la fuente primaria del nitrógeno en
transforma con facilidad en ATP por la enzima creatina
el organismo. Los aminoácidos producidos por la digestión
fosfocinasa. La creatina es inestable y se cicla
de las proteínas que se consumen en los alimentos son
espontáneamente para formar la creatinina que se elimina
utilizados por el cuerpo para la síntesis de sus propias
en la orina. La producción de creatinina es proporcional a la
proteínas y de compuestos nitrogenados, o bien pueden ser
masa muscular corporal. La cantidad de creatinina que se
oxidados para producir energía.
elimina diariamente puede utilizarse como indicador de la
El hígado es el órgano principal en donde se realiza normalidad de la función renal.
la oxidación de los aminoácidos. El nitrógeno de los
aminoácidos forma amoniaco, el cual es tóxico para el
organismo. El amoniaco y los grupos amino se convierten en
urea en el hígado, molécula que no es tóxica y se elimina
fácilmente por la orina, ya que es hidrosoluble.

80
Material Determinación de urea
Determinación de glucosa • Pipetas automáticas (10 a 200µL)
• Glucómetros One Touch Ultra • Puntas para micropipetas
• Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa oxidasa • Propipetas
(Aspergillus níger)] • Reactivo para determinación de urea
• Lancetas estériles • Estándar de urea (50 mg/dL)
• Recipiente para material punzo cortante • Espectrofotómetro
• Recipiente para material biológico-infeccioso • Celdas
• Jabón para manos • Agua destilada
• Torundas de algodón con alcohol
Determinación de ácido úrico
Determinación de colesterol y triacilgliceroles • Pipetas de 5 ml
Dichas determinaciones solo se realizarán al tiempo 0. • Gradilla con 2 tubos de ensaye
• Accutrend Roche para determinación de colesterol y • Reactivo para ácido úrico
triacilgliceroles • Estándar de ácido úrico (6 mg/dL)
• Tiras reactivas para determinación de colesterol
• Tiras reactivas para determinación de triacilgliceroles Método
• Lancetas estériles Determinación de glucosa
Podrá participar un integrante por equipo, de manera que en
Determinación de urea y ácido úrico en orina todo el grupo se puedan trabajar las diferentes condiciones.
Las muestras de orina se realizarán solo al tiempo 0 y a los 1.-Dos sujetos, uno de los cuales consumirá una dieta rica
120 minutos. en carbohidratos y el otro una dieta rica en proteínas.
Nota: La muestra de orina del tiempo 0 es a la que se le 2.-A cada uno de los sujetos se les determinará la
realizará el EGO. concentración de glucosa en sangre total por medio de un
glucómetro en los siguientes tiempos:
La muestra de orina deberá ser del alumno a quien 0 minutos (antes de ingerir los alimentos).
se le haya determinado glucosa, colesterol y triacilgliceroles 30 minutos, 60 minutos y 120 minutos, después de
para poder discutir todos los valores en conjunto y poder ingerir los alimentos.
enlazar en un mismo individuo el efecto que tiene la dieta Para realizar la determinación de glucosa en sangre
sobre el metabolismo. total seguir los siguientes pasos:

81
1. Lave sus manos y limpie con una torunda de algodón con Fecha: ___________________________________
alcohol la zona donde se realizará la punción. Nombre: __________________________________
2. Aplique un suave masaje a la punta de su dedo que le Edad: __________ Sexo: __________
ayudará a obtener una gota de sangre adecuada. No Tiempo (min) [Glucosa mg/dL]
exprima en exceso el área de punción. 0
3. Acerque y mantenga la gota de sangre en el canal 30
estrecho del borde superior de la tira reactiva. 60
4. a) Muestra adecuada. 120
Cuadro 7.1 Resultados
b) Muestra insuficiente.
5. Inserte la tira reactiva en el puerto de análisis, con el Determinación de colesterol y triacilgliceroles
extremo de las barras de contacto de primero y mirando 1. Lavarse las manos cuidadosamente esto es con la
hacia arriba. Empújela hasta que no avance más. finalidad de retirar residuos de crema o grasa en las manos
6. Hasta que la ventana de confirmación este completamente para evitar determinaciones erróneas, principalmente
llena de sangre, antes que el medidor comience la cuenta cuando se realiza la determinación de triacilgliceroles.
regresiva. 2. Con la ayuda de unas pinzas extraer una tira reactiva del
7. Lectura el resultado de la prueba de glucosa de su sangre envase y taparlo inmediatamente para evitar que las tiras se
aparecerá después de que el medidor cuente en forma sequen.
regresiva de 5 a 1. Anotar el resultado en la tabla 3. Con la tapa cerrada inserte en la ranura, en la dirección
correspondiente. indicada por la flecha, la tira reactiva con el cuadrado
8. Es importante desechar con mucho cuidado la lanceta amarillo hacia arriba hasta que encaje y deje verse la marca
usada luego de cada uso, con el fin de evitar que se TG o CHOL impresa en la tira reactiva.
produzcan lesiones accidentales con las puntas de la 4. Frote y masajee la yema del dedo para facilitar la
lanceta, colóquelas en un recipiente para material punzo extracción y aplicación de la sangre.
cortante. 5. Con la lanceta introduzca para hacer la punción y realice
9. Deseche las tiras reactivas en una bolsa para material la toma de muestra.
biológico-infeccioso junto con las torundas de algodón 6. Aplicar directamente la gota de sangre a la tira reactiva.
empleadas en la práctica. 7. Abrir la tapa y colocar la tira reactiva con la muestra de
10. Con los datos obtenidos completar el cuadro 10.1 y hacer sangre.
una gráfica de todas las variantes en papel milimétrico. 8. Bajar la tapa.

82
9. Realice la lectura de la concentración de colesterol y Estándar de ácido úrico (6 mg/dl). Mezclar e incubar 10
triacilgliceroles según sea el caso. minutos a temperatura ambiente. Leer la absorbancia (A) en
Nota: Tener cuidado al realizar la determinación, ya que solo el espectrofotómetro frente a blanco de reactivos a 520 mn.
cuentan con una tira reactiva para cada prueba. Cálculo de la concentración de ácido úrico.
8. Anote la lectura.
Abs muestra
[ácido úrico] = x [Estándar mg/mL]
Determinación de urea en orina Abs estandar
La urea presente en la muestra reacciona con el o-ftaldehído
en medio ácido originando un complejo coloreado puede Bibliografía
• Kaplan, L. & Pesce, A. (2002). Química clínica.
identificarse espectrofotométricamente.
Teoria, análisis y correlación. Pesce .
La urea es estable 5 días a 2-8 °C.
• Koolma, J. & Roehm, K. (2004). Bioquímica Texto y
1.-Para la determinación de urea en orina, tomar la muestra Atlas. Médica Panamericana.
como se esquematiza en el cuadro. • NOM-030-SSA2-1999, N. O. (1999). Para la
prevención, tratamiento y control de la hipertensión
Tubo 1 2 arterial. Obtenido de Para la prevención, tratamiento
Muestra 25 µL - y control de la hipertensión arterial.:
Estándar - 25 µL http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/030ssa2
Solución de reactiva para urea 1 mL 1 mL 9.html.
• NOM-015-SSA2-1994 (1994).Para la prevencion,
La determinación se realiza en tubos de ensaye tratamiento y control de la diabetes mellitus en la
Estándar de urea (50 mg/dlL). atencion primaria:
Mezclar e incubar 20 minutos a temperatura ambiente. http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/015ssa2
4.html.
• Smith, C. & Liberman, M. (2005). Bioquímica médica
Tubo 1 2
Orina 100 µL - basica. Marks. 2005: LWW.
Estándar - 100 µL • SSA (2001). manual para el manejo de las insulinas.
Solución reactiva de ácido úrico 1 mL 1 mL Obtenido de Secretaría de salud:
http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/documentos/
Determinación de ácido úrico en orina DOCSAL6250.pdf.
1.-Para la determinación de ácido úrico en orina, tomar la
muestra como se esquematiza en el cuadro.
La determinación se realiza en tubos de ensaye.

83
 Práctica 8 bilirrubina, proteínas, nitritos, leucocitos, indicios de sangre,
pH y densidad.
Examen general de orina (EGO)
La realización del Examen General de Orina (EGO),
proporciona información que puede ser útil en el diagnóstico
Tiempo de práctica: 2 horas diferencial de enfermedades que se pueden presentar no
solo a nivel renal, sino también a nivel hepático, la diabetes,
Objetivos así como la preeclampsia.

Al terminar la práctica el estudiante: Examen Físico

1. Interpretará y analizará los resultados de un examen
El examen comprende la evaluación de color, olor, volumen
general de orina (EGO).
2. Correlacionará los resultados del examen general de orina y densidad.
(EGO) en un sujeto sano. Color: el color normal de la orina es amarilla y transparente,
3. Identificará la utilidad del empleo de las tiras reactivas la presencia de otros colores sugiere una patología. En la
para un diagnóstico presuntivo de las diversas patologías. Tabla 8.1 se presentan una serie de colores que puede
presentar la orina y su posible causa.
INTRODUCCIÓN
Color Posible causa
Los riñones excretan de 0.5 a 10 L aproximadamente de
Pálido Orina diluida
orina al día, siendo 0.5 L el mínimo necesario para eliminar Obscuro Fosfatos, uratos, oxalatos, leucocituria,
los productos del metabolismo, en condiciones fisiológicas bacteriruria y contaminación fecal
normales la orina no presenta glucosa, así como tampoco Blanquecino Leucocituria, lipiduria y quiluria
aminoácidos y pueden presentarse mayores cantidades de Amarillo- Orina concentrada o la presencia de
aminoácidos debido a diversas fisiopatologías el riñón naranja bilirrubina
permite la salida de diferentes compuestos como proteínas. Amarillo Presencia de bilirrubina-biliverdina
El análisis de orina se puede llevar a cabo con tiras reactivas, verdoso
Rojizo Hemoglobina, eritrocituria,
éstas contienen los reactivos y las enzimas en un soporte de
mioglobinuria, porfiria, contaminación
plástico que al interaccionar con la orina se desencadena menstrual, así como ingestión de
una reacción que se manifiesta con un producto coloreado. betabel o tratamiento con rifampicina
En una tira reactiva se llevan a cabo las siguientes Café-negruzco Metahemoglobina y melanina
determinaciones: urobilinógeno, glucosa, cuerpos cetónicos, Tabla 8.1. Posibles colores de la orina y su causa probable.

84
 pH de la orina: Riñones y pulmones trabajan de manera
El olor de la orina en condiciones normales es equilibrada para mantener un equilibrio ácido-base en todos
característico (Tabla 8.2); sin embargo, algunos los líquidos corporales. La orina es normalmente ácida, los
padecimientos pueden alterarlo valores de pH oscilan entre 4.5 a 8.5

Olor amoniacal Infección urinaria Alteraciones del pH urinario

Olor a rancio Tirosinemia Como se observa en la Tabla 8.3, el pH de la orina se puede
Olor a ratón Fenilcetonuria modificar baja ciertas condiciones.
Jarabe de arce Enfermedad de jarabe de arce
Olor a pies Acidemia glutárica
Disminución en el pH Aumento en el pH
Tabla 8.2. Olor que puede presentar la orina.
Acidosis metabólicas Ingestión de bicarbonato
El volumen de la orina solo es influido por la ingesta Dietas ricas en proteínas Utilización de acetozolamida
Cetoacidosis diabética Neomicina, kanamicina
de agua. Un adulto puede presentar un volumen urinario de
Alcalosis hipocalémica Kanamicina
600 a 2,000 mL al día; sin embargo, algunas patologías Tabla 8.3. Alteraciones del pH de la orina.
pueden aumentar el volumen de orina como es el caso de la
diabetes, también la diuresis osmótica, por el contrario, en Proteínas: Las proteínas circulantes acceden a las células
algunos casos el volumen de excreción puede ser menor y renales y no deben de excretarse más de 150 mg de proteína
esto como consecuencia de la obstrucción del tracto urinario en la orina de 24 horas, de esta cantidad aproximadamente
o la disminución del volumen plasmático. la tercera parte es albúmina y el resto se refiere a α, β y γ-
globulinas.
Gravedad o densidad específica: Indica la cantidad relativa La proteína de Tamm-Horsfall (uromucoide) se
de solutos que contiene un volumen definido de orina, del 70 investiga para confirmar si el sitio de sangrado se localiza a
al 80 % de estos solutos corresponde a la urea. Electrolitos nivel renal.
como el sodio, cloro, urea, fosfatos y sulfatos intervienen de La presencia en la orina de un exceso de albúmina
manera importante en la densidad de la orina. es un indicador de lesión glomerular o tubular. Por la
cantidad de proteína excretada se puede clasificar en:
El examen químico comprende: pH, proteínas, glucosa, Proteinuria leve: menos de 1 g/día
cetonas, hematuria, bilirrubina, urobilinógeno, nitritos y Proteinuria moderada: entre 1 y 4 g/día
leucocitos. Proteinuria grave: mayor de 4 g/día

85
Patologías que presentan proteinuria musculares y la patología asociada es el daño muscular
• Glomerulonefritis severo que puede ser causado por convulsiones, ejercicio
• Enfermedad renal poliquística prolongado, shock eléctrico.
• Fiebre • Hemoglobinuria: Es secundaria a crisis hemolíticas
• Diabetes mellitus de cualquier etiología.
• Lupus eritematoso generalizado
• Síndrome nefrótico Bilirrubina: Una reacción positiva indica enfermedades
• Intoxicación con mercurio, opiáceos hepáticas. La presencia de trazas refiere realizar una
• Obstrucción crónica de las vías urinarias investigación con enzimas hepáticas. Este metabolito
• Trombosis de la vena renal proviene de la hemoglobina de los eritrocitos que son
destruidos en el sistema retículo endotelial distribuido en
Glucosa: Se presentan cantidades detectables de glucosa todo el organismo, la Hb es transportada al hígado donde se
en la orina, cuando los valores de glucosa sérica se lleva a cabo su conjugación, misma que le permite ser
encuentran por arriba de los 180 mg/dL, debido a que filtrada a través del glomérulo renal. Por el contrario, la
superan la capacidad de reabsorción tubular. bilirrubina no conjugada o indirecta no es capaz de pasar a
la orina.
Cetonas: La presencia de cuerpos cetónicos como el acetato
y el hidroxibutirato productos del metabolismo de ácidos Urobilinógeno: Éste deriva principalmente de la bilirrubina
grasos, refieren algún defecto en la utilización de los transformada por acción de bacterias intestinales, parte del
carbohidratos de la dieta, por lo que se asocia a diabetes urobilinógeno es excretada por las heces y una mínima
mellitus descontrolada. fracción es removida por el hígado, llevado al riñón para ser
excretada y finalmente dar color a la orina. Se encuentra en
Sangre: La tira reactiva positiva índica tres posibilidades la orina cuando hay un aumento de bilirrubina no conjugada
• Hematuria: La presencia de células sanguíneas en en sangre, por ejemplo, en anemias hemolíticas.
orina y puede presentarse en traumatismos de los órganos
urinarios, lesiones neoplásicas, hemofilia, glomerulopatías,
cálculos, lupus eritematoso generalizado, así como en
padecimientos hematológicos y pacientes que utilizan
anticoagulantes.
• Mioglobinuria: Indica la presencia de mioglobina en
orina y es una proteína que se libera de las células

86
 Método
Enfermedad Enfermedad
Enfermeda 1. Para la toma de muestra: El alumno deberá recolectar del
Color d
hemolítica hepática
obstructiva
chorro intermedio de la orina y deberá ser la primera orina
Urobilinógen Incrementad Incrementad Bajo o de la mañana
Normal
o urinario o o ausente 2. Una vez obtenida la muestra, observar el color y la
Bilirrubina Negativ Positiva o
Negativa Positiva claridad de la muestra.
urinaria a negativa
Tabla 8.4. Alteraciones del urobilinógeno y la bilirrubina. 3. Tomar con una pinza la tira reactiva.
4. Poner en contacto la tira reactiva con la orina evitando el
Nitritos: Su presencia en orina sugiere la posibilidad de exceso de ésta. Leer los resultados de acuerdo con la
infección urinaria, incluso en pacientes asintomáticos. El etiqueta de colores del frasco.
ácido ascórbico puede dar resultados falsos negativos y esto 5. Anotar los datos en la tabla de resultados.
no indica ausencia de infección, ya que algunos gérmenes
no producen nitritos. La enzima reductasa bacteriana
metaboliza los nitratos urinarios en nitritos, lo que indica
presencia de bacterias.

Leucocitos y bacteriuria: Se aceptan cinco células por campo

y cuando esta cifra es superada se sugiere infección, la
presencia de leucocitos en orina, se denomina piuria. Las
tiras reactivas detectan a estas células por la presencia de
esterasas producidas por los neutrófilos. La leucocituria es
muy valiosa para detectar infección.

Material
• Vaso con tapa para la muestra de orina
• Muestra de orina
• Tira reactiva para examen general de orina
• Recipiente para desechos biológicos

87
 Prueba Valores de referencia Resultados Bibliografía
Densidad 1.016 a 1.0035 • Baynes, W. (2011). Bioquímica médica. Elsevier.
• Nicoll, D., McPhee, S. & Pignone, M. (2014). Guia de
pH 4.5 a 8.5 pruebas diagnósticas. McGraw-Hill.
Sangre Ausencia • Ruiz-Reyes, G. & Ruiz-Arguelles, A. (2010).
Fundamentos de interpretación clínica de los
Leucocitos (esterasa) Ausencia
examenes de laboratorio. Panamericana.
Nitritos Ausencia • Synder, L. & Williamson, M. (2013). Wallach.
Proteína Ausencia Interpretación clínica de pruebas diagnósticas. LWW.
Bilirrubina Ausencia
Glucosa Ausencia
Cuerpos cetónicos Ausencia
Urobilinógeno Ausencia
Tabla 8.5. Resultados

Nota: Debido a los horarios en que se realizan las prácticas

y considerando que en la práctica de integración se requiere
de una muestra de orina, la determinación de EGO se
realizará en dicha práctica con la muestra del tiempo cero,
sin olvidar las condiciones en que debe ser tomada la
muestra; sin embargo, por fines prácticos no se podrá
cumplir con este requisito para todos los grupos.

88
 Práctica 9 • Tubo naranja con 10 μl DNA del sospechoso 2
• Tubo violeta con 10 μl DNA del sospechoso 3
• Tubo rojo con 10 μl DNA del sospechoso 4
Pipeteo
• Tubo amarillo con10 μl DNA del sospechoso 5
• Mezcla de enzimas de restricción EcoRI/Pstl, 1800 U, con
Tiempo de práctica: 1 hora 80 μl
• Marcador de DNA de fago lambda digerido con Hind III
Objetivos 0.2µg /µl, 12 µL
• Geles de agarosa al 1.0%.
Al terminar la práctica el estudiante:
• Amortiguador de electroforesis TAE (Tris-Acetato-EDTA)
1. Desarrollará la habilidad de pipetear cantidades de
volúmenes pequeños, del orden de microlitros (μL). Tris-base 39 mM, ácido acético glacial 18 mM, EDTA 10 mM
2. Adquirirá la destreza para colocar la muestra en los pozos • Gradillas para microtubos
del gel de agarosa. • Recipiente para teñir geles
3. Conocerá la importancia de seguir correctamente los • Pipeta automática de 10-100 µL
métodos de laboratorio para obtener los resultados • Puntas para pipetas automáticas
confiables y reproducibles. • Marcador indeleble.
JUSTIFICACIÓN • Cámara horizontal de electroforesis.
• Microcentrífuga
Para realizar la práctica de pipeteo es importante que los
alumnos consideren las cantidades de volúmenes que van a Procedimiento
1. Se le proporcionará a cada equipo una gradilla con cada
manejar, por lo que la siguiente práctica les proporcionará un
ensayo previo de la original, con la idea de tomen en cuenta uno de los tubos conteniendo los 10 μl de la muestra.
pequeños detalles que pueden modificar el resultado Rotular cada uno de los microtubos de la siguiente forma:
deseado.
Color Muestra Abreviatura
Nota: Todo el material que se proporcione será una
Verde Escena del crimen EC
simulación del original. Azul Sospechoso 1 S1
Naranja Sospechoso 2 S2
Material Violeta Sospechoso 3 S3
• Tubo verde con 10 μl de DNA de la escena del crimen Rojo Sospechoso 4 S4
• Tubo azul con 10 μl DNA del sospechoso 1 Amarillo Sospechoso 5 S5

89
 EC S1 S2 S3 S4 S5

2. Observar cuidadosamente que los 10 μl de la muestra se

encuentren en el fondo del tubo, si se encuentra dispersa en
las paredes del mismo, con la ayuda de una centrífuga, dar
un pulso para que todo el líquido quede en el fondo del tubo.

4. Tapar los tubos y mezclar los componentes golpeando

suavemente los tubos con el dedo, posterior a la agitación,
proceder como lo indica el punto 2. Golpear con el dedo.

Microcentrífuga

3. Pipetear 10 μL de la mezcla de enzimas en el fondo de

cada tubo. Tener cuidado de cambiar la punta para cada
muestra, para evitar contaminación.
Golpear con el dedo

5. Colocar los tubos en una gradilla e incubar a 37º C por 45

minutos.
Nota: en este caso no se realizará, pero si considerarlo para
la práctica original, ya que en este caso es solo una
simulación

90
 (-)

(+)
6. Utilizando una pipeta diferente para cada muestra, añadir 8. Utilizando una punta de pipeta diferente para cada
10 µL del amortiguador de carga en cada tubo. Cerrar los muestra, cargar el gel de la siguiente manera:
tubos y mezclar los componentes golpeando suavemente
con los dedos y repetir lo indicado en el punto 2. Pozo 1: Marcador de peso molecular (PM)
Pozo 2: Sin muestra
Pozo 3: Verde EC= Escena del crimen
Pozo 4: Azul S1= Sospechoso 1
Pozo 5: Naranja S2=Sospechoso 2
Pozo 6: Violeta S3=Sospechoso 3
Pozo 7: Rojo S4=Sospechoso 4
Pozo 8: Amarillo S5=Sospechoso 5

Nota: En el momento de depositar la muestra en el pozo,

tomar la micropipeta de manera normal (con la mano
derecha) y apoyar con la mano izquierda la punta de la
7. Colocar un gel de agarosa en la cámara de electroforesis. micropipeta para obtener mayor equilibrio, introducir la punta
Llenar la cámara con buffer de corrida hasta cubrir el gel, de la micropipeta en el pozo de forma que no se rompa el
compruebe que los pozos del gel están del lado del electrodo gel, ya que de esta manera el pozo se quedaría vacío.
negro (-) y que la base del gel está del lado del electrodo rojo
(+).

91
 Otra indicación es que cuando la punta de la
micropipeta se encuentre en el pozo irla subiendo poco a
poco y al mismo tiempo dejar caer la muestra lentamente
para que el espacio que ocupa la punta no obstruya el
espacio del pozo y la muestra no salga del mismo. Tratar de
no contaminar los pozos con las otras muestras a la hora de
cargar el gel.

Hasta este paso se considera la simulación de la

práctica con el objetivo de obtener los siguientes resultados:

PM EC S1 S2 S3 S4 S5
Nota: Considerar que el patrón puede ser modificado.

Bibliografía
• BioRad (2017). Bio-Rad Explorer™ Forensic DNA
Fingerprinting Kit. Obtenido de https://www.bio-
rad.com/webroot/web/pdf/lse/literature/1660077EDU
.pdf.

92
 Práctica 10 nucleótidos, de tal manera que cada tres bases forman un
codón que corresponde a su vez a uno de los 20
aminoácidos. Hay un total de 64 codones, los cuales
Huella génica
conforman el código genético. En ciertas regiones del DNA
una de las hebras tiene la misma secuencia del RNA
Tiempo de práctica: 3 hora mensajero y se le llama hebra sentido o codificante y a la
complementaria hebra antisentido o molde. La hebra que se
Objetivos transcribe para dar al RNAm es la antisentido o hebra molde.
Algunas de las secuencias de nucleótidos no
Al terminar la práctica el estudiante debe:
codificantes se caracterizan por ser cortas, estar alineadas
1. Conocerá la aplicación de las técnicas de DNA
recombinante. en tándem y repetirse miles de veces de manera constante
2. Analizará e interpretará los datos generados a partir de a lo largo del DNA. Un ejemplo de esta secuencia puede ser
una prueba de huella génica. la siguiente: ATTCGGTATTCGGTATTCGGT. A estas
3. Conocerá el manejo de muestras para el análisis de secuencias se les denomina STR por sus siglas en inglés
ácidos nucleicos. (Short Tandem Repeat). El genoma eucariótico contiene
4. Desarrollará destreza en la interpretación de resultados de muchas de estas secuencias de DNA, y se ha visto que el
métodos básicos de análisis molecular.
número de unidades repetidas presenta diferencias de
INTRODUCCIÓN individuo a individuo, por lo que se consideran como las
huellas digitales. En el caso de gemelos idénticos estas
El DNA es un polímero lineal formado por secuencias son idénticas. Estas regiones pueden ser
desoxirribonucleótidos que contienen a las bases aisladas del DNA con enzimas de restricción apropiadas y
nitrogenadas adenina, guanina, citosina y timidina. La separadas de acuerdo con su longitud mediante
interacción de las bases nitrogenadas por puentes de electroforesis en gel. Cuando se completa el proceso de
hidrógeno permite la formación de la doble cadena de DNA. separación, el resultado se parece a un código de barras de
Cada grupo fosfato está unido al carbono 5´ de una un envase de supermercado. Este código de barras de DNA
desoxirribosa y al carbono 3´ de la otra desoxirribosa del “huella génica”, ha permitido esclarecer algunos hechos
nucleótido contiguo. Las cadenas se mantienen unidas por criminales y pruebas de paternidad, a la cual se denomina
puentes de hidrógeno entre las bases. técnica de “Huella génica”.
En la molécula de DNA reside la información genética Es muy frecuente que en la escena de un crimen se
de un organismo, específicamente en la secuencia de los encuentren, en pequeñas cantidades, muestras de

93
naturaleza biológica como son la sangre, la saliva, la piel, el repetidos ciclos de calentamiento. Esta enzima se aisló
músculo, el cabello, el semen, los dientes y el hueso, entre originalmente de la bacteria termófila Thermus aquaticus.
otros, a partir de las cuales se puede extraer el DNA. La base de la técnica conocida como huella génica
Un método que permite tomar una pequeña cantidad se basa en las diferencias individuales de estas secuencias.
de DNA y en pocas horas sintetizar millones de copias de Generalmente se trata de cambios en un solo par de bases
una región de éste, es el conocido como PCR (reacción en pertenecientes a diferentes individuos, que se presentan una
cadena de la polimerasa), el cual fue desarrollado por K. vez cada 500 a 1,000 pares de bases, como promedio.
Mullis (1990). En este método se requiere conocer la
secuencia de nucleótidos de los extremos del fragmento que Bibliografía
se desea amplificar. Estas secuencias se usan para diseñar • Lewin, B. (2000). Genes. Oxford.
desoxioligonucleótidos sintéticos de DNA complementarios • Curtis, H. & Barnes, N. (2008). Biología. Médica
panamericana.
a cada uno de estos extremos de la cadena de la doble hélice
• Jeffreys, A. (2005). Genetic fingerprinting. Nature
(CEBADOR). La muestra de DNA se coloca en una solución
medicine, 1035-1039.
que contiene una DNA polimerasa, grandes cantidades de • Mullis, K. (1990). Unusual origen of polymerase chain
los cuatro y los dos desoxioligonucleótidos sintetizados reaction. Science Am, 56-65.
previamente. El método se basa en un ciclo de tres • Nelson, D. & Cox, M. (2009). Principios de
reacciones sucesivas: en la primera reacción, la solución se bioquímica. Lehninger. McMillan.
calienta para que el molde de DNA se separe en sus dos • Piedra-Bernal, L. (1999). El análisis de DNA para
cadenas. En la segunda reacción, la temperatura se reduce pruebas de paternidad e identificación forence . Acta
cientifica venezolana, 24-28.
para permitir que los desoxioligonucleótidos se apareen por
• Sivolap, Y., Krivda, G., Kozhuhova, S., Chebotar, S.
complementariedad de bases con el DNA molde y en la
& Benecke, M. (2001). DNA-based identification of a
tercera reacción, la DNA polimerasa cataliza la síntesis Boiled.skeletozined. The american journal of forensic
simultánea de las dos cadenas a partir de cada medicine and pathology, 412-414.
desoxioligonucleótido que actúa como cebador. Al cabo del • Souza, G., DaSilva, D., Santana, D. & Marreiro, S.
primer ciclo de tres reacciones, el fragmento de DNA elegido (2002). identification of a criminal by DNA typing in a
se ha duplicado y por lo tanto, la cantidad de DNA molde rape case in Rio de Jainero , Brazil. Sao Paulo
disponible para el segundo ciclo es doble. medical journal, 77-80.
La obtención de múltiples copias requiere 20 a 40
ciclos. El éxito de esta técnica radica en el uso de una DNA
polimerasa termoestable, que no se desnaturaliza por los

94
SESIÓN 1 DE LABORATORIO PARA LA PRÁCTICA DE algunas piezas de valor, lo que sugiere que el móvil fue el
HUELLA GÉNICA robo.
La policía cuenta con varios sospechosos, entre los
Escena del crimen
que se encuentra el esposo, con el cual la víctima tuvo una
El crimen se lleva a cabo en la calle Lago Manitoba No. 520,
discusión la noche anterior. Se desconoce el tema de la
Col. Ampliación Granada, Delegación Miguel Hidalgo. En el
discusión y el paradero del esposo. Otros sospechosos son
sofá de la sala se encuentra el cuerpo de la dueña de la casa,
los dos repartidores del gas, que una hora antes habían
una mujer de 42 años. El cadáver presenta signos de
proporcionado el servicio. Uno de ellos tiene problemas con
estrangulamiento, pero sin marcas de sogas o cinturones;
la dentadura y aclara que se encuentra en tratamiento
tampoco se encuentran huellas digitales en su cuello. La
dental, ya que ha presentado sangrado y pérdida de algunas
víctima presenta una lesión defensiva en el brazo derecho
piezas dentales. Los otros sospechosos son los dos
con arma punzo cortante. En el sofá se observan varias
empleados de la casa, el jardinero, que tiene una antigüedad
manchas de sangre, algunas de ellas secas. Las más
de 4 años y presenta una lesión en el brazo que confiesa se
abundantes todavía están frescas. Se ignora si la sangre
hizo arreglando el jardín, y la cocinera, quien tiene sólo 3
pertenece a la víctima o a sus agresores.
meses laborando en la casa.
El laboratorio forense se encarga de recopilar la
Con esta evidencia se compara el DNA de cada
información de la escena dando a conocer los siguientes
sospechoso para encontrar al culpable(s) del crimen, por lo
aspectos: el cuerpo de la víctima se descubrió 20 minutos
que debe determinar si las muestras de sangre, cabellos,
después del asesinato. Presentaba un golpe en la cabeza, y
pieza dental y saliva sirven para estudiar el DNA y establecer
había señales de forcejeo en su brazo; debajo de las uñas
las características que permitan utilizar alguna o todas las
se encuentran depositados restos de piel, sangre, y de
muestras para el estudio. Cada equipo escogerá alguna de
cabellos. Algunos de ellos presentan folículos. Todo señala
las evidencias previamente descritas y justificar su elección.
que la víctima forcejeó con su o sus agresores.
Para realizar la comparación entre el DNA
En el lugar también se halló un florero con restos de
encontrado en la escena con el DNA de los sospechosos
sangre, la cual no se sabe es de la víctima o de los
deben contarse con muestras proporcionadas por los
agresores. En un extremo del sofá se encuentra una pieza
mismos. Mencione de dónde obtendría dicho material. En el
dental y, debido a que la víctima conserva su dentadura
caso del esposo debe tenerse en cuenta que no se conoce
completa, es probable que el diente sea del victimario. En el
su paradero, por lo cual la muestra debe ser extraída de
brazo izquierdo, la victima presenta varias mordidas,
algún objeto de uso personal; defina cuál sería éste y
algunas con sangre coagulada y otras con restos de saliva
justifique la elección del mismo.
mezclados con sangre. En el interior de la casa faltan

95
 SESION 2 DE LABORATORIO PARA LA Procedimiento
1. Cada uno de los microtubos de colores que se les
PRÁCTICA HUELLA GÉNICA
proporcionen ya contienen los 10 µL de la muestra:
Material a) Tubo verde (muestra de la escena)
• DNA de la escena del crimen con amortiguador b) Tubo azul (sospechoso 1)
• DNA del sospechoso 1 con amortiguador c) Tubo naranja (sospechoso 2)
• DNA del sospechoso 2 con amortiguador d) Tubo violeta (sospechoso 3)
• DNA del sospechoso 3 con amortiguador e) Tubo rojo (sospechoso 4)
• DNA del sospechoso 4 con amortiguador f) Tubo amarillo (sospechoso 5)
• DNA del sospechoso 5 con amortiguador 2. Colocar los microtubos marcados en la gradilla.
• Mezcla de enzimas de restricción EcoRI/Pstl, 1800 U 3. Adicionar 10 µL de la mezcla de enzimas de restricción a
• Agua estéril, 2.5 ml cada uno de los tubos que contienen la muestra de DNA. Se
• Colorante de DNA (Biorad biosafe) debe tener cuidado de no contaminar la mezcla de enzimas,
• Microtubos de colores por lo cual se sugiere el empleo de una punta nueva por cada
• Microtubos blancos tubo.
• Geles de agarosa al 1.0%
• Amortiguador de electroforesis TAE (Tris-Acetato-EDTA). Muestra Enzima Volumen
Muestra de DNA EcoRI y final
Tris-base 39 mM, ácido acético glacial 18 mM, EDTA 10 mM PstI
• Amortiguador de carga Escena del
• Gradillas para microtubos 10 µL 10 µL 20 µL
crimen
• Recipiente para teñir geles Sospechoso 1 10 µL 10 µL 20 µL
• Pipeta automática de 10-100 µL Sospechoso 2 10 µL 10 µL 20 µL
• Puntas para pipetas automáticas Sospechoso 3 10 µL 10 µL 20 µL
• Marcador indeleble Sospechoso 4 10 µL 10 µL 20 µL
Sospechoso 5 10 µL 10 µL 20 µL
• Fuente de poder
• Cámara horizontal de electroforesis 4. Cierre los microtubos y mezcle la muestra golpeando
• Parrilla para baño maría suavemente los tubos con los dedos. Si se cuenta con una
• Vaso de precipitado de 300 mL
microfuga aplique un pulso de 2 segundos para asegurarse
• Recipiente con hielo
que toda la muestra se quede en el fondo del microtubo,
• Microcentrífuga

96
permitiendo que se mezcle adecuadamente y se lleve a cabo 12. Detenga la electroforesis cuando el colorante muestra
la reacción. llegue a una distancia aproximada de 2 cm del final del gel.
5. Coloque los microtubos en la gradilla e incúbelos a 37ºC Apague la fuente de poder, remueva la tapa y retire
por 30 minutos. cuidadosamente el gel.
6. Transcurrido el tiempo de incubación, adicione 10 µL del 13. Coloque en una charola 120 mL de la solución teñidora
amortiguador de carga a cada tubo tápelos y agítelos 100X y el gel, asegurándose que se encuentre sumergido en
suavemente con los dedos. la solución. Tiña los geles por 2 minutos y recupere el
7. Coloque en la cámara de electroforesis el gel de agarosa, colorante en el envase original.
teniendo cuidado que los pozos se encuentren orientados 14. Después se deben colocar los geles en una charola que
hacia el cátodo [polo negativo (terminal negra). contenga 500–700 mL de agua limpia y caliente (40-55ºC),
8. Adicione 275 mL del amortiguador de corrida o lo que se agite suavemente el gel por aproximadamente 10 segundos
requiera para que se cubran los pozos. y retire el agua, realizar los lavados que sean necesarios con
9. Coloque 10 µL de las muestras en el gel empleando una agua limpia, hasta la aparición de las bandas de DNA para
punta nueva para cada muestra, las cuales se depositan de poder hacer la comparación de las muestras.
izquierda a derecha en el siguiente orden: Cortar en pequeñas
piezas con enzimas -ve Más
de restricción grandes
Carril Lugar Color Volumen
1 Escena del crimen Verde 10 µL DNA total Fragmentos
2 Sospechoso 1 Azul 10 µL de una de DNA en el
persona gel Más
3 Sospechoso 2 Naranja 10 µL pequeñas
4 Sospechoso 3 Violeta 10 µL
+ve
5 Sospechoso 4 Rojo 10 µL
6 Sospechoso 5 Amarillo 10 µL Fragmentos separados y
transf eridos a membrana
10. Cierre la cámara de electroforesis y asegúrese que de nylon

concuerden la terminal roja con la roja y la negra con la

negra. Conecte la cámara a la fuente de poder, manteniendo Bibliografía
la orientación de las terminales. • BioRad (2017). Bio-Rad Explorer™ Forensic DNA
11. Encienda la fuente de poder. Ajuste el voltaje a 120 V y Fingerprinting Kit. Obtenido de https://www.bio-
realice la electroforesis por 40 – 60 minutos. rad.com/webroot/web/pdf/lse/literature/1660077EDU
.pdf.

97
IV. APÉNDICE

98
SOLUCIONES
Concentración normal de electrólitos
Para el tratamiento de los pacientes en la clínica se utilizan
básicamente 2 familias o grupos de soluciones: cristaloides
Plasma Líquido intersricial
y coloides. En el grupo de cristaloides se encuentran Cationes
soluciones con base en dextrosa, soluciones con base en el Electrólito mg/dL meq/L meq/L
contenido de cloruro de sodio y otros líquidos incluyendo Sodio 326.0 142.0 144.0
Lactato de Ringer. La concentración de electrolitos, tonicidad Potasio 16.0 4.0 4.0
y osmolaridad pueden variar según cada formulación (Tabla Calcio 10.0 2.5 2.5
Magnesio 2.5 1.5 1.5
1). En la familia de los coloides se encuentran la albumina,
Aniones
almidones, dextranes y gelatinas.
mg/dL meq/L meq/L
Cloro 362.0 103.0 114.0
Bicarbonato 60.0 25.0 30.0
Fosfato 3.5 2.0 2.0
Sulfato 1.5 1.0 1.0
Ácidos 15.0 5.0 5.0
orgánicos
Proteínas 7000.0 14.0 0.0

Tabla 1. Composición de soluciones parenterales

comerciales

Pero no solamente el manejo de soluciones se encuentra

dentro de la clínica, sino que, en el laboratorio, el trabajo con
órganos aislados también exige la preparación de un medio
artificial (solución fisiológica) que reúna en el aspecto
osmótico y en la concentración individual de cada ion, las
condiciones próximas a la normalidad fisiológica.

99
INSTRUCCIONES PARA EL USO DEL MICROSCOPIO
MARCA LEICA 9. Gire el revólver hasta situar el objetivo 4X en la posición
de trabajo.
1. Nunca use un adaptador entre el cable y la fuente de
alimentación. 10. Suba la platina girando el mando de enfoque
macrométrico hasta que observe la preparación y,
2. Use siempre el microscopio sobre una superficie dura y finalmente, enfoque la muestra con precisión utilizando el
estable. mando de enfoque micrométrico.

3. Conecte el cable de alimentación del microscopio a una 11. Ajuste los tubos oculares a la distancia de los ojos.
toma de corriente con conexión a tierra. Se suministra un
cable de tres terminales con toma a tierra. 12. Al término del uso del microscopio retirar la muestra de
la platina.
4. Encienda el microscopio girando el interruptor de control
de la iluminación situado en la parte inferior izquierda del 13. Bajar la platina hasta el tope y regresarla a su posición
instrumento. original si es necesario.

5. Coloque el interruptor de control de la iluminación en el 14. Colocar el revolver de los objetivos de manera que el
nivel más bajo. El control de iluminación le permite ajustar la objetivo de 4X sea el que quede en dirección de la lámpara.
intensidad de luz.
15. Desconectar el equipo y enrollar el cable.
6. Abra completamente el diafragma de apertura del
condensador girando el anillo hacia el extremo derecho. 16. Limpiar la platina y oculares con un paño humedecido
con metanol o con un limpia cristal comercial.
7. Usando el botón de enfoque del condensador, suba el
condensador hasta el extremo superior de su 17. Colocar al microscopio la funda contra el polvo para
desplazamiento. Iluminación critica únicamente: si el mantenerlo en buenas condiciones físicas y mecánicas.
desplazamiento del condensador es excesivo, limítelo con
el tornillo situado debajo de la platina hasta que la lente
superior del condensador se encuentre debajo de la
superficie de la platina.

8. Coloque la preparación de la muestra con la muestra en

la platina.

100
 Partes del microscopio:

1) Oculares.
2) Revolver con 4 objetivos 4X, 10X, 40X y 100X.
1 3) Platina.
4) Diafragma.
2 5) Lámpara.
6) Tornillo de la platina para desplazar la muestra.
7) Interruptor de control de la iluminación.
6 8) Tornillo macrométrico.
9) Tornillo micrométrico.

9 3

4
8

7 5

101
 únicamente hasta la marca más próxima. Cualquier
Instrucciones para la operación del fotocolorímetro intento de apreciar mayor exactitud es innecesario, pues
Klett-Summerson la construcción del instrumento no proporciona una
precisión mayor.
1. Antes de encender el fotocolorímetro cerciórese que el
7. Continúe con la lectura de otros problemas y, de vez en
filtro (F) está en su sitio. La luz sin el filtro puede dañar la
cuando, compruebe el cero con el “blanco.”
fotocelda.
2. Asegúrese que la aguja indicadora (C) está en cero. En
caso contrario, ajústese a cero con la perilla (D) que sólo
debe usarse cuando la lámpara del colorímetro esté
apagada.
3. Ajuste la escala del potenciómetro (B) a cero usando la
perilla (A).
4. Ponga una cubeta limpia llena con el blanco de reactivos
en el hueco del instrumento en tal forma que la marca del
tubo (ej. Pyrex) se sitúe directamente al frente. Es una
buena práctica limpiar la superficie externa de la cubeta
con un pañuelo desechable antes de cada lectura. Sólo
deben usarse tubos seleccionados como "cubetas" para
las determinaciones.
5 Por medio de la perilla (G) ajuste la lectura del
galvanómetro a cero; esto es, la aguja (C) debe coincidir
con el trazo central y, al mismo tiempo, con la escala (B)
en cero.
6. Para leer las soluciones problema retire el “blanco” y
ponga en el hueco del instrumento la cubeta con la
solución problema. La aguja (C) se desviará de su
posición en la línea de cero; por medio de la perilla (A)
gírese la escala (B) hasta que la aguja (C) sea llevada
exactamente a cero. La lectura de la escala (B) se anota
y corresponde a la lectura del problema; léase

102
USO DE GLUCÓMETRO Paso 1.
Inserte una tira reactiva en
Partes del glucómetro el puerto de análisis, con las
barras de contacto de
primero y mirando hacia
arriba.
Introdúzcala firmemente
hasta que no avance más.
El medidor se encenderá y
aparecerán brevemente
todos los segmentos de la
pantalla. Luego aparecerá
el número de código,
seguido por el símbolo y
mg/dL.

Paso 2. Aplique la muestra.

Obtenga una gota de
sangre utilizando el
Lancetas dispositivo de punción. La
muestra de sangre debe
tener al menos un microlitro
(1 µl) de volumen (gota de
sangre en tamaño real)
para llenar la ventana de
confirmación.

103
 Mantenga la gota de MENSAJES ESPECIALES
sangre en el borde superior
de la tira reactiva hasta que Si el resultado de su prueba
la ventana de es inferior a 20 mg/dL,
confirmación esté aparecerá lo (Bajo) en la
completamente llena de pantalla del medidor. Esta
sangre, antes de que el condición podría indicar una
medidor comience la cuenta hipoglucemia grave.
regresiva. Si la ventana de Aunque este mensaje
confirmación no se hubiera podría deberse a un error de
llenado por completo antes la prueba
de que el medidor comience
la cuenta regresiva, no Si el resultado de su prueba
añada más sangre a la tira es superior a 600 mg/dL,
reactiva; deseche la tira y aparecerá
comience de nuevo la h1 (Alto) en la pantalla del
prueba medidor.
Esto podría indicar una
Paso 3 hiperglucemia grave (alto
El resultado de la prueba de contenido de glucosa en
glucosa de su sangre sangre).
aparecerá después de que
el medidor cuente en forma
regresiva de 5 a 1. Es importante desechar con mucho cuidado la lanceta
usada luego de cada uso, con el fin de evitar que se
produzcan lesiones accidentales con las puntas de las
lancetas. Las tiras reactivas y las lancetas usadas
posiblemente se consideren en su área como un
desecho de riesgo biológico.

104
 segundos.
USO DEL ACCUTREND
PASO 5. Extraiga una tira
reactiva del tubo y ciérrelo
de inmediato para evitar
que el desecante pierda
su efecto.

PASO 6. Sujete la tira reactiva según se indica e

introdúzcala a hasta el tope. Si la tira se ha introducido
PASO 1. Coloque el correctamente, el
instrumento sobre instrumento emitirá dos pitidos.
una superficie plana y sin
vibraciones, a PASO 7. Abra la tapa de
continuación, enciéndalo la cámara de medición.
presionando el botón.

PASO 2. Asegúrese de
que la pantalla está
iluminada.
PASO 8. Utilice el dispositivo de punción, para obtener
una muestra de sangre del dedo o del lóbulo de la oreja

PASO 3. Con la tapa

cerrada, introduzca la tira
de codificación, hasta el
tope y luego retírela de
inmediato.

ASO 4. Si la codificación se ha realizado correctamente,

el instrumento emitirá un breve pitido. Si se ha producido
un error, repita el proceso transcurridos unos

105
 sangre directamente
PASO 9. Para la desde el lugar de la
aplicación de la muestra punción.
de sangre en el NO toque la zona de
instrumento: aplicación con la piel.
Aplique la gota de sangre
directamente en la zona PASO 11. Vuelva a
de introducir la tira reactiva
aplicación amarilla de la en el instrumento y cierre
tira la tapa.
reactiva, la zona amarilla
debe quedar
completamente cubierta.
NO toque la zona de
aplicación con el dedo.
NO aplicar una segunda
gota. La sangre debe
aplicarse en un espacio
de 15 segundos tras la
punción para evitar un
resultado incorrecto
debido al inicio de la
coagulación.

PASO 10. Para la

aplicación de la muestra
de sangre fuera del
instrumento:
Extraiga la tira reactiva y
deje la tapa abierta.
Aplique la

VALORES DE REFERENCIA

106
Metabolito Sexo
Glucosa 70 -100 mg/dL
Urea 6 – 20 mg/dL
Creatinina 0,5 - 1,2 mg/dL
Masculino 107 – 139 mL/min
Depuración de Creatinina
Femenino 87 – 107 mL/min
Masculino 4 – 8.5 mg/dL
Ácido úrico
Femenino 2.5 – 7.5 mg/dL
LCR 6,6 - 8,7 mg/dL
Proteínas totales Orina 28 - 141 mg/24H 15 – 45 mg/dL
1,0 - 15,0 mg/dL
Albúmina 3,5 - 5,5 mg/dL
Total 0,32 - 1,08 mg/100 mL
Bilirrubina Conjugada 0,10 - 0,50 mg/100 mL
No conjugada 0,08 - 0,72 mg/100 mL
Globulina 1,46 - 2,54 mg/dL
Mucoproteínas 1,9 - 4,9 mg/dL
Microalbuminuria Negativo
Fibrinógeno 180 – 350 mg%
Saturación de trasferrina 20 – 50%
Fijación del hierro 250 – 410 µg/dL
Colesterol 140 – 200 mg/dL
Hombres 55 mg/dL
HDL
Mujeres 65 mg/dL
LDL 130 mg/dL
Triglicéridos 80 – 150 mg/dL
Lípidos totales 400 – 800 mg/dL
Fosfolípidos 150 – 200 mg/dL
Fructosamina Hasta 285 µmol/L
Hb Glicosilada Total Total 5,3 - 9,0%
Hb Glicosilada A1C A1C 4 – 5%
Calcio iónico 4,0 - 5,4 mg/dL
Calcio Orina 8,8 - 11,0 mg/dL

107
Calcio Sangre 60 – 180 mg/24 h
Hierro sérico 250 - 460 µg/dL
Sodio Orina 40 – 220 mg/24 h
Sodio Sangre 136 -145 mEq/L
Potasio Sangre 3,6 - 5,5 mmol/L
Cloro Orina 98 – 107 mmol/L
Cloro Orina 110 – 250 mg/24 h
Fósforo Niños 3,0 - 7,0 mg/dL
Fósforo Adultos 2,5 - 4,8 mg/dL
Amilasa Orina 340 – 1000 mg/24 h
Hasta 95 U/L
Lipasa 10 -150 U/L
Fosfatasa ácida total Hombres Hasta 6,50 U/L
Fosfatasa ácida total Mujeres Hasta 5,50 U/L
Fosfatasa ácida prostática Hasta 2,6 U/L
Fosfatasa alcalina Adultos 98 – 279 U/L
Fosfatasa alcalina Niños 151 – 471 U/L
TGO, transaminasa glutámico-oxalacética 10 – 34 U/L
TGP, transaminasa glutámico-pirúvica 5 – 59 U/L
Colinesterasa 1000 – 4000 U/L
Deshidrogenasa láctica DHL 210 – 420 U/L
CPK Hombres 24 – 195 U/L
CPK Mujeres 24 – 170 U/L
Gamma GT 0 – 51 Ul/L
Aldolasa Hasta 5,7 U/L
Análisis clínicos de diferentes metabolitos y elementos

108
V. COLABORADORES

109
 Rebeca Milán Chávez (equilibrio hidroelectrolítico).
OBJETIVOS DEL CURSO
Sara Morales López (agua, química y metabolismo de
Guillermo Álvarez Llera
carbohidratos, química y metabolismo de lípidos).
Patricia del Arenal Mena
Alicia Cea Bonilla Celia Virginia Sánchez Meza (tabla periódica, enlaces,
Leonor Fernández Rivera Río fundamentos del metabolismo, equilibrio hidroelectrolítico,
Rebeca Milán Chávez proteínas, radicales libres, descarboxilación del piruvato,
Sara Morales López regulación de la glucemia, síntesis y degradación de
Celia Virginia Sánchez Meza fosfolípidos, metabolismo del colesterol, estructura y
metabolismo de las lipoproteínas, regulación del
SYLLABUS metabolismo de lípidos).
Guillermo Álvarez Llera (agua, ciclo de Krebs, oxidación de los
Haydée Torres Guerrero (modificaciones postraduccionales).
aminoácidos, química y metabolismo de carbohidratos,
química y metabolismo de lípidos). Aída Uribe Medina (características de la materia viva).
Alejandro Zentella Dehesa (virus, oncogenes y transformación).
Patricia del Arenal Mena (ciclo celular).
Alicia Cea Bonilla (fundamentos del metabolismo, proteínas,
enzimas y coenzimas, estructura de carbohidratos, INTRODUCCIÓN AL MANUAL DE PRÁCTICAS
metabolismo de carbohidratos, regulación de la glucemia, DE LABORATORIO
regulación del metabolismo de lípidos, síntesis y
degradación de fosfolípidos, regulación e integración Alicia Cea Bonilla (potenciometría y electroforesis).
metabólica, biología molecular). Rebeca Milán Chávez (gota).
Celia Virginia Sánchez Meza.
Leonor Fernández Rivera Río (nucleótidos).
Óscar Flores Herrera (figuras: ciclo energético, vías que siguen ELABORACIÓN O REVISIÓN DE LAS PRÁCTICAS DE
los protones en las levaduras, ciclo de Krebs y esquema de LABORATORIO
un potenciómetro).
Alberto Hamabata Nishimuta (aspectos básicos de 1. Soluciones. Celia Virginia Sánchez Meza y Rebeca Milán
fisicoquímica, niveles de regulación de la expresión Chávez, Norma Lilia Morales García.
genética). 2. Regulación del equilibrio ácido-base después de ejercicio
Noemí Meraz Cruz (síntesis y degradación de fosfolípidos, muscular intenso y de la ingestión de bicarbonato de sodio.
regulación del metabolismo de lípidos).

110
 Concepción González López, Celia Virginia Sánchez Meza Corrección y cuidado de la edición 2020-2021: Rebeca
y Juan Luis Rendón Gómez. Millán Chávez, Sara Morales López, Norma Lilia Morales
García, Federico Martínez Montes.
3. Cinética enzimática. Efecto de la concentración del sustrato
en la velocidad de la reacción enzimática. Celia Virginia
Sánchez Meza, Rebeca Milán Chávez y Jesús Antonio Oria
Hernández.
4. Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de los
inhibidores de la cadena de transporte de electrones y de los
desacoplantes. Juan Pablo Pardo Vázquez y Federico
Martínez Montes.
5. Determinación de glucosa en sangre total. Rebeca Milán
Chávez y Eugenia Flores Robles.
6. Determinación de colesterol y lipoproteínas. Celia Virginia
Sánchez Meza y Rebeca Milán Chávez.

7. Integración Metabólica. Rebeca Milán Chávez y Eugenia

Flores Robles.
8. Examen General de Orina (EGO). Rebeca Milán Chávez y
Eugenia Flores Robles.
9. Pipeteo. Rebeca Milán Chávez y Eugenia Flores Robles.
10. Huella génica. Rebeca Milán Chávez y Eugenia Flores
Robles.
La revisión y la actualización de los Objetivos del curso se
realizó en colaboración con el proyecto: Mejoramiento de la
Enseñanza de la Bioquímica y Biología Molecular (EN-206603)
del Programa de Apoyo a Proyectos Institucionales para el
Mejoramiento de la Enseñanza (PAPIME), siendo el
responsable del proyecto el doctor Federico Martínez Montes.

111