PRACTICA Nº 11
METODO PARA LA DETERMINACION DE Listeria monocytogenes EN ALIMENTOS
I. OBJETIVOS
- Conocer las técnicas más comunes en alimentos para le detección de Listeria
monocytogenes.
II. INTRODUCCION
Listeria monocytogenes es un cocobacilo que responde positivamente a la tinción de
Gram, es aerobio, es catalasa positivo y no presenta cápsula ni espora. Es móvil a 25
ºC pero inmóvil a 37 ºC por inactivación del flagelo. Produce la fermentación láctica y
bacteriocinas (toxinas capaces de matar a otras bacterias).
La Listeria monocytogenes es un patógeno emergente causante de una enfermedad
transmitida a través de los alimentos conocida como listeriosis, que cursa de forma
grave y generalmente deja secuelas en las personas que la sobreviven. La detección de
la L. monocytogenes en los alimentos de mayor riesgo, como son los listos para el
consumo reviste gran importancia.
La listeriosis es una enfermedad poco frecuente pero grave que afecta al hombre y a
los animales, se reveló como un fenómeno de gran interés a partir de la década del
ochenta del siglo XX, donde se comenzaron a apreciar diversos episodios asociados a
la alimentación. Su incidencia es diferente de un país a otro y se presenta tanto en
forma epidémica como esporádica. Afecta a niños (incluyendo recién nacidos y
lactantes), embarazadas y sus fetos, ancianos y personas inmunocomprometidas;4
tiene un prolongado período de incubación y sus manifestaciones clínicas son muy
variadas, por lo que se dificulta el diagnóstico y se eleva la letalidad. Las principales
formas clinicopatológicas de la listeriosis son: encefalitis, septicemia, meningitis
(fundamentalmente del feto o del recién nacido), aborto y muerte neonatal; existen
formas de listeriosis, menos frecuentes: queratoconjuntivitis, mamitis, dermatitis,
endocarditis, y recientemente se han documentado casos de enfermedad
gastrointestinal leve tras la ingestión de alimentos.
III. MATERIAL Y EQUIPOS
- 225 mL. de agua de LEB
- Agar Oxford y Agar Palcam
- Pipetas estériles
- Mecheros de bunsen
- Gradillas porta tubos
- 1 incubadora bacteriológica
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IV. PROCEDIMIENTO
Preenriquecimiento: Tomar 25 g de muestra, con ayuda de un
cuchillo y una bandeja estériles, luego se homogeniza con 225
mL de caldo de Enriquecimiento Base Listeria (LEB) (Merck
®), en un agitador Stomacher Seward ® durante un minuto;
posteriormente, se incuba a 30 ºC durante cuatro horas.
Enriquecimiento: Después de la incubación, se adiciona 0,9
mL del suplemento selectivo para caldo LEB a cada una de las
muestras, y se continua con la incubación a 30 ºC hasta
completar las 24 y 48 horas.
Aislamiento: A partir del caldo LEB incubado por 24 y 48
horas, sembrar en agar Oxford y Palcam (Merck) ® por estría y
agotamiento, luego se incuba a 35 ºC durante 24 y 48 horas.
Identificación: Examinar macroscópicamente a las colonias que crecieron
en los medios selectivos Oxford y Palcam, y que presentaron las
características principales como degradar la esculina, ser pequeñas y
presentar borde entero y depresión central. También se debe realizar un
estudio microscópico en muestras coloreadas con la
técnica de Gram en la que se bservaran cocobacilos
Gram positivos. Las colonias aisladas se siembran en
TSAYE (agar tripticasa soya- extracto de levadura
0,6%) y TSBYE (caldo tripticasa soya-extracto de
levadura 0,6%) para la realización de las pruebas
bioquímicas.
Pruebas bioquímicas para diferenciar el género: Se realizan las siguientes pruebas
bioquímicas: catalasa, oxidasa, motilidad, ureasa, reducción de nitrato y rojo de metilo-
Voges Proskauer.
Pruebas bioquímicas para diferenciar las especies de Listeria: Se usan: el agar
cromogénico para Listeria, la prueba del CAMP (Christie-Atring-Munch-Peterson),
asimilación de carbohidratos y el sistema de identificación Api Listeria marca
BioMériux ®. Para el análisis se tomó en cuenta a los criterios microbiológicos emitidos
por la Dirección General de Salud (DIGESA) del Ministerio de Salud del Perú.
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DIAGRAMA DE TRABAJO
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V.- RESULTADOS Y DISCUCIONES
Comparar los resultados obtenidos en laboratorio con:
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VI. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
- Se encontró una gran cantidad de colonias de listeria monocytogenes, lo cual
nos muestra que el queso utilizado como muestra en el laboratorio se encontraría
con full bacterias siendo el causante de enfermedades en el caso que lo consuman.
VII.- CUESTIONARIO
• ¿Cuál es el fundamento de los diferentes medios empleados en la práctica
indicando su composición?
FUNDAMENTO DEL MEDIO DE CULTIVO AGAR OXFORD
Para asegurar el crecimiento normal de las bacterias,
se requiere un medio basal que proporcione los
nutrientes esenciales. Sin embargo, para Listeria, el
medio también debe contener hidrolizado de escina e
iones Fe3+, ya que estos crean compuestos fenólicos
negros. Para promover específicamente el crecimiento
de Listeria y distinguir sus colonias, se agregan
suplementos selectivos al medio de agar Oxford
modificado, evitando simultáneamente que la flora acompañante se desarrolle
en la muestra de prueba.
FUNDAMENTO DEL MEDIO DE CULTIVO AGAR PALCAM
El medio de cultivo está diseñado para promover el
crecimiento bacteriano y distinguir Listeria spp. Esto
se logra a través de la reacción de hidrólisis de esculina
con iones Fe3+, lo que resulta en la formación de un
compuesto fenólico negro. El medio también inhibe
selectivamente el desarrollo de otra flora, gracias a la
inclusión de la Base de Agar Palcam suplementada con
antibióticos.
• ¿Por qué es importante detectar la presencia de Listeria monocytogenes?
en los alimentos?
Los análisis de Listeria monocytogenes
permiten la reducción del riesgo de nuevas
alertas sanitarias por brotes de Listeriosis, ya
que las bacterias de este género pueden
encontrarse prácticamente en cualquier
ambiente y puede producirse a través de los
zapatos o ropa de los trabajadores que se
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encuentran en un sector alimentario, haciendo que esta contaminación produzca
una fácil transmisión por medio del contacto con superficies y la manipulación
de alimentos.
• Analiza el artículo comparando los resultados según: Norma Nacional y
Norma Internacional: “DETERMINACIÓN DE LISTERIA SPP. EN QUESOS Y
EMBUTIDOS COMERCIALIZADOS EN CUBA”
[Link]
00300007
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VIII.- BIBLIOGRAFIA
Slideshare. (2012, January 30). Oxford modificado agar base. Slideshare. from
[Link]
Slideshare. (2012, January 30). Palcam agar base. Slideshare. from
[Link]
Britania. (n.d.). Oxford Modificado Agar Base. Britania Lab. from
[Link]
Bioser. (2021, July 7). Diferentes métodos de análisis de Listeria monocytogenes.
Bioser. from [Link]
monocytogenes/
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