Prueba Rápida en casete OnSite Dengue IgG/IgM3.
0 Combo (Suero/Plasma/Sangre Total) Página 1 de 2
9. No fume, beba ni coma en las áreas donde se manipulen muestras o reactivos del kit.
10. Deseche todas las muestras y los materiales del kit usados como residuos biológicos
peligrosos.
Catálogo Número R0061C 11. Manipule los controles positivos y negativos de la misma forma como a las muestras
de los pacientes.
12. Los resultados de las pruebas pueden ser leídos 25 minutos después de agregar la
muestra al pozo de muestra. Leer los resultados después de los 25 minutos puede
generar resultados erróneos.
Diagnóstico In vitro 13. No procese la muestra en un lugar con fuerte corriente de aire, con ventiladores o aire
acondicionado.
USO
PREPARACION DE REACTIVOS E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO
La prueba rápida OnSite Dengue IgG/IgM3.0 Combo es un inmunoensayo de flujo lateral para
la detección y diferenciación simultánea de IgG e IgM anti-virus del Dengue (DEN1, 2, 3 Todos los reactivos vienen listos para ser usados. El almacenamiento de los dispositivos
and 4) en suero, plasma o sangre total humana. Este es usado por profesionales como tamizaje y cerrados debe ser de 2-30°C. Los controles positivos y negativos deben mantenerse 2-8°C. Si
ayuda diagnóstica de infección con el virus del Dengue. Las muestras reactivas con la prueba se almacena de 2-8°C, asegúrese de que el dispositivo de prueba se lleva a temperatura ambiente
OnSite Dengue IgG/IgM3.0 Combo deben confirmarse con métodos alternativos. antes de la apertura. El dispositivo de prueba es estable hasta la fecha de caducidad impresa en la
bolsa. No congele el kit o exponer el kit a más de 30°C.
RESUMEN Y EXPLICACION DE LA PRUEBA
RECOLECCIÓN Y MANIPULACIÓN DE LA MUESTRA
Los virus del Dengue, una familia con distintos serotipos de (Den 1,2,3,4), de cadena simple,
envuelto, de los virus de ARN positivos. Los virus son transmitidos por picadura en el día or la Considere todos los materiales de origen humano como infecciosos y manipúlelos siguiendo los
familia Stegemyia, principalmente el Aedes aegypti, y Aedes albopictus. Hoy, más de 2.5 procedimientos de bioseguridad.
billiones de personas que viven en áreas tropicales de Asia, Africa, Australia, y las Americas
están en riesgo de infectarse por Dengue. Se estima que100 milliones de casos de Plasma
fiebre del dengue y 250,000 casos de dengue hemorrágico mortal ocurren anualmente 1. Recolecte la muestra en un tubo tapa lila, azul o verde (que contenga EDTA, Citrato o
1-3
en el mundo . Heparina) por venopunción.
2. Separe el plasma por centrifugación.
La detección serológica es el método más común para el diagnóstico de la infección con el virus 3. Cuidadosamente transfiera el plasma a un tubo nuevo.
del Dengue. La IgM anti-dengue aparece 3 días después de la exposición inicial y permanece en
circulación por aproximadamente 30-60 días. Los niveles de IgG anti-dengue virus aumentan a Suero
los 7 días, alcanzan su pico de 2-3 semanas, y permanecen toda la vida4-6. 1. Recolecte por venopunción la muestra en un tubo tapa roja (sin anticoagulantes)
2. Espere la formación del coagulo
3.0 3. Separe el suero por centrifugación
La prueba rápida OnSite Dengue IgG/IgM Combo utiliza proteínas recombinantes del dengue las
4. Cuidadosamente transfiera el suero a un tubo nuevo
cuales reconocen los anticuerpos IgG e IgM de los cuatro serotipos del virus. La prueba es fácil de
usar, sin necesidad de equipo de laboratorio engorroso, requiriendo un mínimo de capacitación
Procesar las pruebas lo más pronto posible a la toma de la muestra. Almacene las muestras de
del personal.
2°C a 8°C si no se van a procesar inmediatamente. Las muestras son estables almacenadas de
PRINCIPIO DE LA PRUEBA 2° a 8°C durante 5 días. Las muestras pueden congelarse a -20°Ċ para almacenamientos
prolongados.
La prueba rápida OnSite Dengue IgG/IgM Banda de Líneas de Pozo de Pozo de
Control Prueba muestra buffer
es un inmunoensayo de cromatografía de Evite múltiples ciclos de congelación y descongelación de las muestras. Antes del ensayo, lleve
flujo lateral el cual detecta anticuerpos las muestras congeladas a temperatura ambiente lentamente y mezcle con suavidad. Las
contra los cuatro serotipos del virus del muestras que contengan partículas visibles, deben ser eliminadas por centrifugación antes de la
Dengue. La prueba de casete consiste prueba. No use muestras con altas lipemias, hemolisis o turbidez ya que pueden interferir en la
en: 1) una almohadilla de conjugado de interpretación de los resultados.
color borgoña que contiene antígenos de
la envoltura del dengue recombinante Sangre
conjugado con oro coloidal (conjugados Las gotas de sangre pueden obtenerse por punción digital o venopunción. No use sangre
dengue) y conjugados de IgG-oro de conejo, 2) una membrana de nitrocelulosa que contiene hemolizada para realizar la prueba.
anti IgG humano, banda M está revestida con IgM anti-humano, y la banda C previamente
recubiertas con anticuerpo de cabra anti IgG de conejo. Las muestra de sangre total se pueden almacenar en (2°Ċ-8°Ċ) si no va a ser procesada la
muestra inmediatamente. Debe hacerse la prueba antes de cumplir 24 horas después de la
Cuando un volumen adecuado de muestra es dispensada en el pozo de muestra del recolección.
casete, la muestra migra por acción capilar a través del casete. Si la IgG anti-dengue está
presente, se unirá con los conjugados del dengue. El inmunocomplejo es capturado por la PROCESAMIENTO
banda con anti IgG humana, formando una coloración borgoña indicando presencia de IgG
Paso 1: Lleve las muestras y componentes del ensayo a temperatura ambiente si es
contra el dengue positiva, resultado de resultado que sugiere una infección de dengue
refrigerada o congelada. Mezcle bien la muestra antes del ensayo una vez
secundaria o infección por Dengue anterior. La IgM anti-dengue, si está presente en la muestra,
descongelado.
se une con los conjugados del dengue. El inmunocomplejo es capturado por la banda con anti
IgM humana, formando una banda color borgoña en la línea M, indicando una IgM positiva contra
Paso 2: Cuando esté preparado para realizar la prueba, abra el empaque y saque el
el dengue, resultado de una infección primaria reciente. Si se colorea la banda G y la M, los
dispositivo. Colóquelo sobre una superficie limpia y plana.
resultados sugieren que se trata de una infección primaria y secundaria con el virus del Dengue.
La ausencia de las bandas (G y M) sugiere un resultado negativo.
Paso 3: Asegúrese de marcar el dispositivo con la identificación del paciente.
La prueba contiene un control interno (banda C), la cual muestra una coloración borgoña por la Paso 4: Llene el tubo capilar con el suero, plasma o sangre, no exceda la línea de muestra
formación de un inmunocomplejo de cabra anti IgG de conejo / conjugado IgG- oro de conejo, como se muestra en la imagen. El volumen es aprox 5µL. Para mayor precisión,
independientemente del desarrollo de color en cualquiera de las bandas de prueba (G y M). De transfiera la muestra con una pipeta que de exacto el volumen.
lo contrario, el resultado de la prueba no es válida y la muestra debe ser analizada de nuevo
con otro dispositivo. Con el tubo capilar en posición vertical, dispense la muestra en el centro del pozo de
muestra (pozo S) asegurándose de que no hayan burbujas de aire.
REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS
Inmediatamente agregar 3 gotas (aprox.110-130 µL) de Diluyente de Muestra en el
1. Bolsa de aluminio sellada que contiene: pozo de Buffer (pozo B).
a. Un dispositivo de casete
b. Un desecante
2. Tubos capilares de 5 µL
3. Diluyente de Muestra (1 vial, 5 mL)
4. Un inserto (instrucciones de uso)
Linea de muestra
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SE SUMINISTRAN
1. Reloj o cronómetro
2. Lanceta Resultado
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 25 minutos
Linea de muestra
Pozo B
Para uso de Diagnóstico in Vitro
1. Este inserto debe ser leído completamente antes de la realización de la prueba. Si no
se sigue el inserto se pueden generar resultados erróneos Pozo S
2. No abra el empaque sellado hasta que no se vaya a realizar la prueba.
3. No use los dispositivos si se encuentran vencidos. 5 µL de muestra en el pozo S 3 gotas de Diluyente de
4. Atempere los reactivos de 15 a 30°C antes de usarlos Muestra en el pozo B
5. No utilice los componentes de otro tipo de prueba como sustituto de los componentes
de este kit.
6. No utilice sangre sangre hemolizada para la prueba. Paso 5: Contabilice el tiempo.
7. Use ropa protectora y guantes desechables mientras manipule los reactivos del kit y las
muestras clínicas. Lave sus manos después de realizar la prueba. Paso 6: Lea los resultados en 25 minutos.
8. Los usuarios de esta prueba deben seguir las precauciones universales del CDC de
Estados Unidos para la prevención de transmisión del VIH, VHB y otros patógenos de No lea los resultados después de 25 minutos. Para evitar confusiones descarte el
transmisión sanguínea. casete después de leer el resultado.
Prueba Rápida en casete OnSite Dengue IgG/IgM3.0 Combo (Suero/Plasma/Sangre Total) Página 2 de 2
CONTROL DE CALIDAD 2. Rendimiento Clínico para la prueba IgG
Un total de 326 muestras de pacientes susceptibles fueron probadas con la prueba rápida OnSite
1. Control Interno: Esta prueba contiene un control incluido, la banda C. esta se
Dengue IgG/IgM3.0 Combo con una prueba de EIA como referencia. La comparación se
desarrolla después de adicionar la muestra. De lo contrario, revise el procedimiento y
encuentra en la siguiente tabla:
repita la prueba con un nuevo dispositivo.
2. Control Externo: las Buenas Prácticas de Laboratorio recomiendan el uso de Prueba Rápida OnSite Dengue IgG/IgM3.0 Combo
controles externos, positivos y negativos, para asegurar el funcionamiento adecuado IgG EIA Test Positivo Negativo Total
de la prueba, particularmente en las siguientes circunstancias: Positivo 36 1 37
a. Cuando un Nuevo operador utiliza el kit, antes de que procese las muestras.
Negativo 2 287 289
b. Cuando se inicia un nuevo kit.
c. Un nuevo envío de kits es utilizado. Total 38 288 326
d. Cuando la temperatura de almacenamiento se sale del rango de 2°C - 30°C.
Sensibilidad Relativa: 97.3% , Especificidad Relativa: 99.3%, Concordancia: 99.1%
e. La temperatura del sitio de procesamiento esta por fuera de 15°C -30°C.
f. Para verificar una frecuencia mayor que la esperada de los resultados positivos o
LIMITACIONES DE LA PRUEBA
negativos.
g. Investigar la causa de resultados no válidos repetidos. 1. El procedimiento de la prueba y la interpretación de los resultados debe ser analizada
cuando se detectan anticuerpos contra el dengue en suero, plasma o sangre total.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS Cualquier falla en el procedimiento puede llevar a resultados erróneos.
1. RESULTADO NEGATIVO: Si solo se colorea la banda C, hay ausencia de las bandas G y 2. La prueba Rápida OnSite Dengue IgG/IgM3.0 Combo se limita a la detección cualitativa de
M indica que no hay anticuerpos anti- dengue en la muestra. El resultado es Negativo o anticuerpos contra el virus del Dengue en suero, plasma o sangre total humana. La
no-reactivo. intensidad de la banda de prueba no tiene correlación con el título de anticuerpos en la
muestra.
3. La información de los serotipos del dengue no es proporcionado con este examen.
4. La prueba Rápida OnSite Dengue IgG/IgM3.0 Combo no se puede usar para diferenciar
infección primaria de la secundaria.
5. La reactividad cruzada con otros flavivirus es común (ej: Encefalitis japonesa, Virus del
Nilo, Fiebre amarilla, etc) por lo tanto, es posible que los pacientes infectados con estos
virus muestren cierto grado de reactividad con esta prueba.
2. RESULTADO POSITIVO: 6. Un resultado negativo o no-reactivo indica la ausencia de anticuerpos detectables del
2.1 Además de la presencia de la banda C, si se colorea la banda G, el resultado indica virus del dengue. Sin embargo los resultados no concluyen la posibilidad de la exposición
la presencia de IgG anti-dengue; el resultado es IgG positiva o reactiva, sugiriendo o infección con el virus.
etapa primaria tardía, secundaria o principios de la infección. 7. Un resultado negativo o no-reactivo puede ocurrir si la cantidad de anticuerpos contra el
dengue presentes en la muestra son menores al límite de detección de la prueba, o los
anticuerpos detectados no están presentes en el estadio de la infección cuando es
recolectada la muestra.
8. Algunas muestras contienen anticuerpos heterófilos o factor reumatoideo lo cual puede
afectar los resultados.
9. Si los síntomas persisten y la prueba Rápida OnSite Dengue IgG/IgM3.0 Combo da
resultado negativo o no-reactivo, es recomendable tomar una nueva muestra días despues
2.2 Además de la presencia de la banda C, si se colorea la banda M, el resultado indica o usar algún método diagnóstico alternativo.
la presencia de IgM anti-dengue; el resultado es IgM positiva o reactiva, sugiriendo 10. Los resultados obtenidos deben ser interpretados junto con otros métodos diagnósticos y
una infección primaria por el virus del dengue. la historia clínica del paciente.
REFERENCIAS
1. Gubler DJ, Clark GG. Dengue/dengue hemorrhagic fever. The emergence of a global
health problem. Emerg Infect Dis 1995;1(2):55–57.
2. Gubler DJ, Trent DW. Emergence of epidemic dengue/dengue hemorrhagic fever as a
public health problem in the Americas. Infect Agents Dis 1994;2:383–393
2.3 Además de la presencia de la banda C, tanto la banda G como la M se colorean, la 3. Monath TP. Dengue: The risk to developed and developing countries. Proc Natl Acad Sci U
prueba indica la presencia de IgG e IgM anti-dengue. El resultado es IgG e IgM S A 1994;91:2395–2400.
positiva o reactiva, señalando una infección por el virus del dengue primaria o
4. Price DD, Wilson SR, Dengue Fever, e-medicine,
secundaria temprana.
[Link] Jan, 2002.
5. Innis BL, and Nisalak A, et al: An enzyme-linked immunosorbent assay to characterize
dengue infections where denude and Japanese encephalitis co-circulate. Am. J. Trap.
Med. Hygiene. 1989: 40: 418-427.
6. Anonymous. Dengue hemorrhagic fever: diagnosis, treatment, prevention and control. 2nd
ed. Geneva: World Health Organization, 1997.
Las muestras con resultados positivos deben ser confirmados con métodos alternativos y
junto con la sintomatología clínica antes de hacer una determinación diagnóstica.
Índice de Símbolos
3. INVALIDO: Si la banda C no se colorea, el ensayo se considera inválido a pesar de que
Consulte las Para uso diagnóstico
las otras bandas se tiñan. Se debe realizar nuevamente la prueba en otro casete. Utilice por
instrucciones de uso in vitro únicamente
Pruebas por
REF Catálogo número Número de Lote N kit
Almacenar de 2 a Representante
No reutilizar
30°C Autorizado
Fabricante Fecha de fabricación
CTK Biotech, Inc. MDSS GmbH
CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO 10110 Mesa Rim Road Schiffgraben 41, 30175 Hannover, Germany
San Diego, CA 92121, USA Tel.: (+49)-511-6262 8630
1. Rendimiento Clínico para la prueba IgM Tel: 858-457-8698
Fax: 858-535-1739
Un total de 314 muestras de pacientes susceptibles fueron evaluados con la Prueba Rápida E-mail: info@[Link]
OnSite Dengue IgG/IgM3.0 Combo y un EIA de Referencia. La comparación se observa en la
siguiente tabla: PI-R0061C Rev. I
Effective date: 201303-25
Prueba Rápida OnSite Dengue IgG/IgM 3.0
Combo Versión en Español
IgM EIA Test Positivo Negativo Total For Export Only, Not For Re-sale In the USA
Positivo 31 1 32
Negativo 3 279 282
Total 34 280 314
Sensibilidad Relativa: 96.9% , Especificidad Relativa: 98.9%, Concordancia: 98.7%
