Departamento de Bioanálisis Clínico
Guía de laboratorio # 5
Asignatura: Bioquímica Clínica I
Tema: Determinación de proteínas en suero.
Objetivos:
1. Aplicar los métodos y técnicas para la cuantificación de las proteínas de interés clínico.
2. Interpretar los resultados de las proteínas con base a los valores de referencia y del método
utilizado.
3. Establecer la correlación de los resultados de las proteínas con otras pruebas diagnósticas
como parte del control de calidad.
4. Sugerir posibles condiciones clínicas relacionadas con los resultados, dados los valores del
paciente para proteínas.
I. INTRODUCCIÓN
Para la síntesis de las proteínas séricas se requiere un hígado sano en plenas funciones,
excepto en el caso de las gamma globulinas. El hígado tiene la capacidad de duplicar la
producción y salida de proteínas durante las enfermedades asociadas con pérdida de
proteínas. En consecuencia, no debe sorprender que las mediciones de proteínas totales no se
alteren sino hasta que haya ocurrido una disminución extensiva de la función hepática.
La albúmina se disminuye en la enfermedad hepática crónica y generalmente se acompaña
por un incremento en las globulinas beta y gamma, debido a la producción de IgG e IgM en
la hepatitis crónica activa y de la IgM e IgA en la cirrosis biliar o alcohólica respectivamente.
Se debe hacer énfasis en que estas inmunoglobulinas no son producidas en el hígado sino por
las células plasmáticas del sistema reticuloendotelial. Se puede facilitar la identificación de
estas subclases de gamma globulinas mediante la inmunoelectroforesis. Sin embargo, una
disminución en la albúmina sérica no es específica para la enfermedad hepática, puesto que
la albúmina también disminuye en la malabsorción, la desnutrición, la enfermedad renal, el
alcoholismo y las enfermedades malignas.
II. DESARROLLO
• ACTIVIDADES
1. Formar grupos de trabajo ya establecidos.
2. Organizar los materiales a utilizar (gradillas, tubos, pipetas, sueros controles).
3. Encender el espectrofotómetro.
4. Llevar a cabo todas las medidas de bioseguridad establecidas para un laboratorio
clínico.
5. Realizar las determinaciones en orden y con disciplina siguiendo exactamente los
procedimientos para cada una, realizando una corrida analítica con una muestra.
6. Al finalizar, dejar el área de trabajo limpia y en orden.
MSc. Nadiezda Cisneros, docente dpto Bioanálisis Clínico 2023 Página 1 de 5
Departamento de Bioanálisis Clínico
• DETERMINACIONES
➢ Proteínas totales
Las proteínas son un gran grupo de macromoléculas formadas por aminoácidos, cuya función
es primordial en la vida, siendo parte de estructuras celulares, medios de transporte,
mecanismos de defensa, catalizadores y en combinación con otras moléculas. Su presencia
se advierte al estudio de enzimas, anticuerpos, hormonas, factores de coagulación,
hemoglobina y transportadores como en el caso de lipoproteínas, haptoglobina, transferrina
y una serie de elementos que requieren de su presencia al no ser solubles en sangre. Entre los
componentes de mayor presencia, la albúmina producida en el hígado reviste una importancia
especial por las diversas funciones asignadas, así como por las patologías asociadas a su
descenso.
Principio del método
Los enlaces peptídicos, formados por los aminoácidos presentes en las proteínas se unen al
ión cúprico y, en medio alcalino, dan lugar a la formación de un compuesto coloreado de
tonalidad violeta. La medición de este complejo a 540 nm es proporcional a la concentración
de proteínas totales.
Preparación de reactivos
RGT y STD están listos para su uso.
Muestras
Suero, plasma con heparina o EDTA.
Interfieren: bilirrubina (> 10 mg/dl), provocando falso aumento. No se ha observado
mayor interferencia con hemólisis ligera a moderada ni turbidez por presencia de
triglicéridos.
Procedimiento:
1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: Hg 546 nm, 520-580 nm
2. Cubeta: 1 cm paso de luz
3. Temperatura: 20-25°C
4. Medición: Frente a un blanco de reactivo. Sólo se requiere un blanco de reactivo por
serie.
5. Esquema de pipeteo:
MSc. Nadiezda Cisneros, docente dpto Bioanálisis Clínico 2023 Página 2 de 5
Departamento de Bioanálisis Clínico
6. Cálculos
Nota: El blanco de muestras para sueros claros o incoloros es equivalente a 0,2 g/dl y es por
lo tanto insignificante. Un blanco de muestras debe ser determinado para sueros visiblemente
hemolíticos, ictéricos o lipémicos, pipeteando 20 µl de muestra en 1000 µl de solución salina
fisiológica y leer frente a agua destilada. La absorbancia del blanco de muestra debe ser
restada de la absorbancia de la muestra.
Características de la prueba
La prueba es lineal hasta concentraciones de 12 g/dl o 120 g/l. Diluya las muestras con altas
concentraciones 1+1 con solución salina fisiológica (0,9%). Multiplicar el resultado por dos.
Valores de referencia
Recién nacidos: 4,6 – 7,0 g/dl o 46 – 70 g/l
Niños de 3 años y adultos: 6,6 – 8,7 g/dl o 66 – 87 g/l
Control de calidad
Pueden emplearse todos los sueros controles con valores de proteínas determinados por este
método.
➢ Albúmina
La albúmina constituye la proteína más abundante en el plasma, aproximadamente 60 % de
las proteínas totales. Tiene como función principal el mantener la presión oncótica del
plasma, evitando la salida del componente líquido por fuera del mismo (causante de edemas).
Además, es proteína transportadora y fuente de aminoácidos no provenientes de la dieta. Su
alteración, básicamente en forma de descenso tiene significado clínico en numerosas
patologías.
Principio del método
La albúmina se une cuantitativamente con el verde de bromocresol en medio ácido,
resultando en la formación de un color verde el cual puede ser medido a 630 nm o en filtro
rojo. Al diluir el suero con verde de bromocresol, se lee la disminución de la absorbancia con
respecto a la concentración de albúmina, no siendo interferida bajo el filtro de lectura por la
hemoglobina, bilirrubina ni lipemia.
Preparación de reactivos
RGT y STD listos para usar.
MSc. Nadiezda Cisneros, docente dpto Bioanálisis Clínico 2023 Página 3 de 5
Departamento de Bioanálisis Clínico
Muestras
Suero o plasma con heparina o EDTA.
Interfieren: triglicéridos (> 1250 mg/dl), hemoglobina (> 0.125 g/dl). La bilirrubina no
interfiere.
Procedimiento:
1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: Hg 546 nm, 578 nm
2. Cubeta: 1 cm paso de luz
3. Temperatura: 20-25°C
4. Medición: Frente a un blanco de reactivo. Sólo se requiere un blanco de reactivo por
serie.
5. Esquema de pipeteo:
6. Cálculos
Nota: Por cada 100 mg/dl de hemoglobina se observa un incremento de albúmina de 0,1 g/dl,
por lo que debe evitarse la hemólisis marcada.
La hemólisis y la lipemia marcada interfieren. Se debe realizar un blanco de muestra
pipeteando 10 µ de muestra con 1000 µl de solución salina fisiológica (NaCl 0,9%) y medirse
frente a agua destilada. La absorbancia de este blanco de muestra debe restarse a la
absorbancia de la muestra.
Características de la prueba
La prueba es lineal hasta concentraciones de albúmina de 7 g/dl o 70 g/l. Para
concentraciones más elevadas diluir la muestra 1+1 con solución salina fisiológica (NaCl
0,9%). Multiplicar el resultado por 2.
Valores de referencia
3,8 – 5,1 g/dl o 38 – 51 g/l
MSc. Nadiezda Cisneros, docente dpto Bioanálisis Clínico 2023 Página 4 de 5
Departamento de Bioanálisis Clínico
Control de calidad
Pueden emplearse todos los sueros controles con valores de albúmina determinados por este
método.
➢ Fraccionamiento, identificación y cuantificación de proteínas específicas
En el ensayo de proteínas séricas totales, se puede obtener información diagnóstica útil para
determinar la fracción de albúmina y las globulinas. Una inversión o cambio significativo en
la relación de albúmina y la globulina total se notó primero en enfermedades del riñón y el
hígado. Para determinar la relación de albúmina a globulina (A/G), es común determinar
proteína total y albúmina. Las globulinas se calculan al restar la proteína total de la albúmina
(proteína total - albúmina = globulinas) y la relación A/G se calcula al dividir la albúmina
entre la globulina.
Valores de referencia para globulina por colorimetría:
0 - 100 años: 2 - 3.0 g/dL o 20 - 30 g/L
* g/dL x 10 = g/L
** g/L x 0.1 = g/dL
Valores de referencia relación A/G:
Cordón: Prematuros: 0 - 1 mes: 7 - 11 1 - 2 años: 3 - 17 años: Adultos:
meses:
4.8 - 8.0 3.6 - 6.0 4.6 - 7.0 5.1 - 7.3 5.6 - 7.5 6.0 - 8.0 6.0 - 8.3
g/dL g/dL g/dL g/dL g/dL g/dL g/dL
48 - 80 g/L 36 - 60 g/L 46 - 70 g/L 51 - 73 g/L 56 - 75 g/L 60 - 80 g/L 60 - 83 g/L
* g/dL x 10 = g/L
** g/L x 0.1 = g/dL
III. BIBLIOGRAFÍA
− Bishop M. Química Clínica. Principios, procedimientos y correlaciones. Quinta edición.
Ed, Mc Graw Hill.
− Gaw A., Murphy M., Srivastava R., Cowan R., & O’ Reilly D. Bioquímica Clínica. Texto
y atlas en color. Quinta edición. Ed, Elsevier.
− Inserto human de proteínas totales
− Inserto human de albúmina.
MSc. Nadiezda Cisneros, docente dpto Bioanálisis Clínico 2023 Página 5 de 5
