ALP
Fosfatasa alcalina
p-Nitrofenilfosfato. Cinético. DGKC
Determinación cuantitativa de fosfatasa alcalina (FAL) CÁLCULOS
IVD A/min x 3300 = U/L de FAL
Conservar a 2-8ºC Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1
mol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se
PRINCIPIO DEL MÉTODO expresa en unidades por litro (U/L).
La fosfatasa alcalina (FAL) cataliza la hidrólisis del p-nitrofenilfosfato
(pNPP) a pH 10,4 liberando p-nitrofenol y fosfato, según la siguiente Factores de conversión de temperaturas
reacción: Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por:
FAL Temperatura Factor para convertir a
p-Nitrofenilfosfato + H2O p-Nitrofenol + Fosfato de medición 25ºC 30ºC 37ºC
La velocidad de formación del p-Nitrofenol, determinado fotométricamente, 25ºC 1,00 1,22 1,64
es proporcional a la concentración catalítica de fosfatasa alcalina en la 30ºC 0,82 1,00 1,33
muestra ensayada1,2. 37ºC 0,61 0,75 1,00
SIGNIFICADO CLÍNICO CONTROL DE CALIDAD
Las fosfatasas alcalinas son enzimas que se encuentran presentes en Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente alta en SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
huesos, hígado, placenta, intestinos y riñón. Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
Tanto el aumento como la disminución de los niveles en plasma, tienen revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.
significado clínico. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
Causas más probables de aumento del nivel de FAL: correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
Enfermedad ósea de Paget, obstrucciones hepáticas, hepatitis, VALORES DE REFERENCIA1
hepatotoxicidad por medicamentos y osteomalacia. 25ºC 30ºC 37ºC
Causas más probables de disminución del nivel de FAL: Niños (1-14 años) < 400 U/L < 480 U/L < 645 U/L
Cretinismo y déficit de vitamina C1,5,6. Adultos 60 -170 U/L 73 - 207 U/L 98 - 279 U/L
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos Factores que pueden afectar los valores de referencia son: ejercicio, periodos de
clínicos y de laboratorio. crecimiento en niños y embarazo.
REACTIVOS Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
R1 establezca sus propios valores de referencia.
Dietanolamina (DEA) pH 10,4 1 mmol/L
Tampón Cloruro de magnesio 0,5 mmol/L CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
R2 Rango de medida: Desde el límite de detección 0 U/L hasta el límite de
p-Nitrofenilfosfato (pNPP) 10 mmol/L linealidad 1200 U/L.
Substrato
Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/10
PREPARACIÓN con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10.
Reactivo de trabajo (RT): Precisión:
Ref: 1001130 Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
Disolver ( ) un comprimido de R 2 Substrato en un vial de R 1 Tampón. Media (U/L) 167 424 166 430
Ref: 1001131 SD 0,94 1,93 3,44 5,92
Disolver ( ) un comprimido de R 2 Substrato en 15 mL de R 1 Tampón. CV (%) 0,56 0,46 2,07 1,38
Ref: 1001132 Sensibilidad analítica: 1 U/L = 0,0003 A/min.
Disolver ( ) el contenido de un vial de R 2 Substrato en 50 mL de R 1. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
Estabilidad: 21 días a 2-8ºC o 5 días a temperatura ambiente (15-25ºC). Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
Coeficiente de correlación (r)2: 0,999.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Ecuación de la recta de regresión: y=0,999x - 0,918.
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a
2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. INTERFERENCIAS
No usar las tabletas si aparecen fragmentadas. El fluoruro, oxalato, citrato y EDTA inhiben la actividad de la fosfatasa alcalina,
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. por lo que no deben ser utilizados como anticoagulantes.
Indicadores de deterioro de los reactivos: La hemólisis interfiere debido a la elevada concentración de fosfatasa alcalina en
- Presencia de partículas y turbidez. los hematíes1,2. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren
- Absorbancias del Blanco a 405 nm 1,30. en la determinación de la fosfatasa alcalina3,4.
MATERIAL ADICIONAL NOTAS
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 405 nm. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este
- Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC ( 0,1ºC) reactivo en distintos analizadores.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio. BIBLIOGRAFÍA
1. Wenger C. et al. Alkaline phosphatase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
MUESTRAS Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1094-1098.
Suero o plasma heparinizado1. 2. Rosalki S et al. Clin Chem 1993; 39/4: 648-652.
Suero libre de hemólisis, separado de los hematíes lo antes posible. 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
Estabilidad: 3 días a 2-8ºC. 1995.
PROCEDIMIENTO 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
1. Condiciones del ensayo: 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 405 nm 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
Temperatura constante: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25ºC / 30ºC / 37ºC PRESENTACIÓN
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire. Ref: 1001130 R1: 20 x 3 mL , R2: 20 3 mL
3. Pipetear en una cubeta: Ref: 1001131 Cont. R1: 1 x 150 mL, R2: 10 15 mL
RT (mL) 1,2 Ref: 1001132 R1: 10 x 50 mL, R2: 10 50 mL
Muestra ( L) 20
4. Mezclar, incubar 1 minuto.
5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el
cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto
( A/min).
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