21/06/2023
CURSO: INMUNOLOGIA PRÁCTICA
CICLO: IV
DOCENTES RESPONSABLES DE PRACTICA: SEMESTRE: 2023-I
Mg. AYDA L. REYES R.
Mg. NOELIA M. HERNANDEZ A.
UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
“Dr. Wilfredo Erwin Gardini Tuesta”
ACREDITADA POR SINEAUCE
RE ACREDITADA INTERNACIONALMENTE POR RIEV
DOCEAVA SEMANA
TEST DE COOMBS DIRECTO E INDIRECTO
OBJETIVOS:
Detectar la presencia de anticuerpos o complemento en la membrana de
los eritrocitos mediante la prueba de Coombs directa.
Realizar la detección de anticuerpos irregulares presentes en el suero del
paciente mediante la técnica de Coombs indirecta.
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TEST DE COOMBS DIRECTO E INDIRECTO
TEST DE COOMBS DIRECTO
El Test de Antiglobulina Directa (TAD) o Coombs Directo, es un método
simple que permite verificar la presencia de Inmunoglobulina G (IgG) y/o
Complemento recubriendo la superficie de los eritrocitos in vivo.
Para este ensayo glóbulos rojos son lavados con solución salina hasta tres
veces, luego son enfrentados al Suero de Coombs (antiglobulina humana),
para evidenciar la presencia o ausencia de aglutinación. El suero de
Coombs utilizado para estos ensayos puede tener actividad contra apenas
una Inmunoglobulina humana o contra una combinación de las mismas (Ig
A, IgM, IgG) y/o tener actividad contra los componentes del Complemento
(C3b, C3c, C3d).
TEST DE COOMBS INDIRECTO
El test de Anti globulina Indirecta (TAI) o Coombs indirecto
consiste en la detección de anticuerpos contra los antígenos
de grupos sanguíneos, no incluyendo el grupo sanguíneo
ABO. La importancia de este estudio recae en la capacidad de
estos anticuerpos de atravesar la barrera placentaria y
destrucción de los glóbulos rojos del feto, siendo utilizado en
el triaje de gestantes Rh negativas (Rh-). Este ensayo permite
la investigación de la enfermedad hemolítica del recién
nacido, selección de sangre para transfusión sanguínea y
pacientes con sospecha de anemia hemolítica.
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MATERIAL DIDACTICO
• Tubos de ensayo 12x75
• Muestra de sangre
• Suero fisiológico
• Control: O Rh+ 5%
• Centrífuga
• Suero de Coombs
• Papel absorbente
TEST DE COOMBS DIRECTO
PROCEDIMIENTO:
1. En un tubo de ensayo, colocar 1 ml de solución
salina y 50 ul de la muestra de sangre del
paciente (suspensión 5% de glóbulos rojos),
2. En otro tubo de ensayo, colocar 100 ul de la
suspensión preparada adicionar 2 ml de suero
fisiológico,
3. Centrifugar a 3000 rpm x 1 minutos y
descartar el sobrenadante.
4. Repetir el paso anterior dos veces más.
5. Eliminar el sobrenadante completamente,
asegurarse de no dejar resto del mismo, secar a
boca del tubo con ayuda de un papel filtro.
6. Adicionar dos gotas de suero de Coombs.
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PROCEDIMIENTO (CONT.)
7. Mezcla la suspensión agitando el tubo
levemente, centrifugar a 1000 rpm por 15
segundos.
8. Agite el tubo con cuidado, verifique si hay
presencia (+, 4+) o ausencia (-) de
aglutinación.
9. Ante la ausencia de aglutinación, incubar el
tubo a 37°C en baño maría por 15 segundos
10. Mezclar la suspensión agitando el tubo
levemente, centrifugar a 1000 rpm por 15
segundos. RESULTADOS
Positivo: Presencia de aglutinación, +, ++, +++ o ++++
11. Verifique si hay presencia o ausencia (-) de cruces (observar al microscopio)
aglutinación, la presencia de aglutinación en este Negativo: ausencia de aglutinación
punto es debido al complemento.
TEST DECOOMBS DIRECTO
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TEST DE COOMBS INDIRECTO
PROCEDIMIENTO
1. En un tubo de ensayo, preparar una suspensión al 5%
de glóbulos rojos del grupo O, Rh positivo.
2. En otro tubo de ensayo, colocar 100 ul de la suspensión
preparada, adicionar 2 ml de suero fisiológico,
3. Centrifugar a 3000 rpm x 1 minutos y descartar el sobrenadante.
4. Repetir el paso anterior dos veces más.
5. Eliminar el sobrenadante completamente, asegurarse de no dejar
resto del mismo, secar con ayuda de un papel filtro.
6. Adicionar dos gotas del suero del paciente
7. Mezclar e incubar en baño maría a 37°C x 45 min.
8. Lavar los glóbulos rojos tres veces con solución salina
9. Adicionar dos gotas de suero de Coombs.
10. Mezcla la suspensión agitando el tubo levemente, centrifugar a 1000 rpm x 15 segundos.
11. Agite el tubo con cuidado, verifique si hay presencia o ausencia de aglutinación.
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RESULTADO:
Positivo: Presencia de aglutinación
Negativo: Ausencia de aglutinación.
Prueba de Coombs directa e indirecta
https://www.youtube.com/watch?v=4yQk__wXj80&t=259s
CUESTIONARIO
1. Caracterice los tipos de anemias hemolíticas y sus causas.
2 .¿Qué es la enfermedad hemolítica del recién nacido?
3. Explique el fundamento del test de Coombs, señalando las
diferencias entre el test directo e indirecto de Coombs.
4. ¿En qué otras situaciones el test de Coombs es indicado (Explique)?
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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Male.David, Inmunología Edit. Elsevier, Ed. 9, año 2021.
Murphy, Kenneth - Weaver, Casey - Mowat, Allan, Inmunología de Janeway,
Edit. Manual Moderno, Ed. 9, Año 2019. Elibro.
https://elibro.net/es/ereader/upsjb/131274?page=1
Gracias
