MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES
¿Qué es el microscopio de contraste de fase?
Para observar células o tejidos bajo microscopía de campo brillante convencional, deben fijarse y
teñirse, lo que significa que las células en cuestión han muerto. Esto ha preocupado a los expertos
en investigación celular porque ciertas estructuras pueden dañarse o cambiar de forma durante
todos estos procesos. Para ello se utiliza la microscopía de contraste de fase (entre otras técnicas
más avanzadas), que permite el examen y visualización inmediata de las células vivas. La
microscopía de contraste de fase fue desarrollada principalmente por Fritz Zernike entre 1930 y
1932. Se basa básicamente en el retraso que se produce cuando las ondas de luz viajan a través de
objetos con diferentes índices de refracción, y aprovecha y amplifica este retraso. El microscopio
de contraste de fase permite la observación de células sin tinción y es particularmente útil para las
células vivas.
Este aprovecha pequeñas diferencias en el índice de refracción en diferentes partes de una célula
y en diferentes partes de una muestra de tejido. La luz que pasa a través de la región de mayor
índice se desvía y está desfasada con respecto al haz de luz principal que pasa a través de la
muestra. Coincide con las longitudes de onda desfasadas utilizando una serie de anillos ópticos en
la lente y el condensador, cancelando la magnitud de la porción inicialmente desfasada del haz y
produciendo un contraste de imagen útil. Las partes oscuras de la imagen corresponden a las
partes densas de la muestra; las partes brillantes de la imagen corresponden a partes menos
densas. Por lo tanto, estos microscopios se utilizan para ver células vivas, tejidos vivos y secciones
semidelgadas sin teñir. Dos mejoras a la microscopía de fase son la microscopía de interferencia y
la microscopía de interferencia diferencial.
Constitución del microscopio de contraste de fase
Básicamente, un microscopio de contraste de fase es un microscopio óptico de campo brillante
con algunas modificaciones, como objetivos especiales y condensadores. El condensador tiene un
disco que proyecta un haz anular, y la lente de salida del objetivo tiene "anillos de fase" adjuntos,
que son discos transparentes con un diseño elevado. Es importante tener en cuenta que hay dos
tipos diferentes: un conjunto de anillos de fase, conocidos como anillos de fase positiva, y anillos
de fase negativa, que afectan la luz de manera diferente para que la imagen se vea diferente.
La imagen de arriba muestra la ubicación del condensador de fase y de anillo en el microscopio.
También a la derecha hay una imagen recortada del objetivo que muestra el disco de fase.
También se debe tener en cuenta que cada una de estas partes no es única, sino que tiene varios
juegos de condensador y lente según el caso y el zoom deseado.
Fundamentos físicos
El microscopio se basa en que la luz experimenta retrasos (o retraso) al atravesar objetos con
diferentes índices de refracción, sin embargo, estos retrasos no son tan pronunciados como para
ser observables, el microscopio de contraste de fase ha sido adaptada por los dos métodos
mencionados anteriormente. ocurre, amplifica estos retrasos, dando como resultado regiones de
diferentes índices de refracción que se traducen en cambios de contraste observables.
El principio de su funcionamiento es el siguiente: los rayos de luz que no son interrumpidos por el
objeto pueden separarse de los rayos de luz que no son dispersados por el objeto a través del
condensador. Retraso de un cuarto de lambda, cuando estos rayos pasan por el anillo de fase,
debido a la forma del anillo de fase, las ondas se retrasan un cuarto de lambda, en cambio, las
ondas que no se retrasan pasan por el anillo de fase Partes delgadas, no hay mas demora. Estos
cambios en las ondas de luz se perciben como diferencias de contraste para diferentes escalas de
grises. Además, la fase también reduce la intensidad de la luz.
Aplicaciones
Debido a sus propiedades, el microscopio de contraste de fase se puede utilizar para estudios en el
punto de atención (o in vivo). Este tipo de microscopio sustituye al de campo claro utilizado. Un
inconveniente para tener en cuenta es el halo o halo brillante alrededor de los objetos en caso de
contraste de fase positivo o sombras alrededor de los objetos en caso de contraste negativo, que
es un defecto causado por la forma en que se dibuja la imagen. fue producido..
