Noveno grado experimentos:
Práctica. Extracción de ADN
El ADN de organismos eucariotas se puede extraer fácilmente de cualquier
célula que presente núcleo. Para la presente práctica se recomienda usar
hígado de pollo, cebolla y plátano,
pues se puede obtener en grandes
cantidades de dichos materiales.
También se propone extraer ADN
humano (del carrillo) que, aunque
no se puede obtener en grandes
cantidades de las pocas células
que se desprenden del carrillo,
siempre resulta de interés al
alumno, poder observar su propio
ADN o de algún compañero y poder comprobar que el de los vegetales y
animales, al menos a simple vista resultan semejantes.
Objetivo. Obtener ADN de diferentes tipos de células vegetales y animales
(en estos últimos, se incluye a los humanos), para observarlo a simple vista,
identificarlo y compararlos entre sí.
Una sesión antes de hacer la práctica se debe de encargar a los alumnos
una investigación sobre cómo identificar ADN mediante algún reactivo
para estar seguros que las hebras que obtengan son de ADN. Se deberán
presentar las propuestas en clase antes de empezar la práctica en una
sesión grupal y, el profesor seleccionará la más adecuada para incluirla en
el material.
Material para la extracción del ADN en cebolla, plátano e hígado de
pollo:
Plátano
Cebolla
Hígado de pollo
Cloruro de sodio (sal)
Agua tibia
1 licuadora
Jabón líquido
Palillo de dientes
1 coladera fina
3 tubos de ensaye
Etanol de 96º
Mechero y soporte universal
1 vaso de precipitado de 250 ml.
4 portaobjetos
Procedimiento.
1. Cortar por separado el plátano en rebanadas delgadas, la cebolla y el
hígado en porciones de 2 gramos aproximadamente. Se necesitará
aproximadamente un cuarto de plátano y un cuarto de cebolla de mediano
tamaño. El hígado será suficiente con el de un solo pollo.
2. Poner en la licuadora por separado cada material, agregar un gramo de
cloruro de sodio y cubrir con agua tibia.
3. Licuar entre 5 y 10 segundos a baja intensidad, con la finalidad de no
romper mucho las fibras de ADN.
4. Se cuela y se coloca en un tubo de ensaye aproximadamente llenando
hasta la mitad.
5. Agregar dos cucharaditas de jabón líquido y revolver con suavidad
evitando la formación de burbujas.
6. Con cuidado verter el alcohol por las paredes del tubo sin que se
revuelva con la mezcla anteriormente colocada, para formar dos fases.
7. Esperar (aproximadamente cinco minutos) a que las fibras de ADN se
desprendan de la capa inferior y se desplacen (suban) a la superior (se ven
como fibras o hilos de color blanco). Cuando haya suficientes se deberán
extraer el ADN que flota en el líquido con un palillo haciéndolo girar para
que se enrolle en él el ADN y se coloca en un portaobjetos.
El mismo procedimiento se realiza para la cebolla y el hígado de pollo.
Recomendaciones.
1. Cuando se vierta el alcohol, asegúrese de que queden dos capas separadas
(en la parte de abajo el plátano, cebolla o hígado y arriba el alcohol)
2. Cuando se extraiga el ADN, girar el palillo lentamente para evitar que se
rompa la molécula de ADN.
Extracción de ADN Humano
Material
Cloruro de sodio
Jabón líquido
2 vasos desechables
1 botella de agua para beber
agua destilada
2 tubos de ensayo
1 tapón para tubo de ensaye
1 probeta de 100 ml
Etanol de 96º
Balanza
Agua destilada
Palillos
Procedimiento.
1. Poner 8 gramos de cloruro de sodio en uno de los vasos desechables y
disolver en 92 ml de agua destilada.
2. En el segundo vaso desechable poner 25 ml. de jabón líquido con 75 ml
de agua destilada.
3. Poner un mililitro de la solución de cloruro de sodio en un tubo de
ensaye
4. Con el agua embotellada hacer un buche de aproximadamente 10 ml.,
enjugarse la boca vigorosamente por 30 segundos (para desprender células
del epitelio del carrillo).
5. Poner el agua del buche en el segundo vaso desechable y vaciarlo en el
tubo de ensaye que contiene la solución de cloruro de sodio.
6. Agregar un mililitro de jabón líquido al tubo de ensaye
7. Cubrir el tubo con el tapón y mezclar agitando el tubo suavemente.
8. Dejar resbalar por las paredes del tubo 5 mililitros de alcohol, inclinando
un poco el tubo de ensaye y, como se procedió con los materiales
anteriores no se debe mezclar el alcohol con el agua del buche y se deben
formar dos capas, quedando el alcohol por encima de la primera.
9. Esperar aproximadamente cinco minutos a que suban las fibras de ADN.
En este caso, por el escaso número de células desprendidas del carrillo no
se obtendrán muchas hebras de ADN.
10. Con un palillo sacar las hebras de ADN y colocarlas en un portaobjetos.
Cuestionario:
¿Para qué se usa el cloruro de sodio?
¿Qué objetivo tiene utilizar el jabón líquido?
¿Por qué se deben formar dos fases en los tubos de ensaye antes de que
floten las hebras de ADN?
