MICROSCOPIO

El microscopio, (de micro diminuto y el verbo griego skopeo, examinar) es un

instrumento óptico, compuesto de varias lentes que sirve para observar objetos muy
pequeños que no pueden verse a simple vista, logrando tener así una imagen aumentada. El
microscopio fue inventado por Zacharias Janssen por los años de 1590 y desde que fue
inventado se ha convertido en el instrumento básico y fundamental para la investigación de
la estructura y función de los organismos (célula) permitiendo ampliar el campo de las
investigaciones biológicas. En los últimos cuatro siglos se ha convertido en el instrumento
básico e imprescindible en el laboratorio de biología para investigar la estructura y función
de los organismos permitiendo ampliar el conocimiento en el campo de las investigaciones
biológicas, además de ser utilizado en otras ciencias.
Se han construido microscopios altamente especializado para una gran variedad de
usos. Existen dos tipos fundamentales de microscopios: el simple de un solo lente (lupa) y el
compuesto por constar de dos juegos de lentes. El microscopio compuesto consta de tres
sistemas principales: sistema de iluminación, sistema óptico, y el sistema de mecánico.

El sistema de iluminación consta de las siguientes partes:

Lámpara: el dispositivo incorporado o no en el microscopio como la fuente productora y
emisora de luz artificial que iluminara la muestra colocada en el.
Condensador: es un complejo óptico que tiene como fin recoger la luz dispersa, proveniente
de la lámpara y enviarla condensada para iluminar convenientemente el objeto muestra
hacer observada.
Diafragma: la luz proveniente de la lámpara se regula respecto a su intensidad (brillo),
mediante el diafragma, para dar penumbra o mayor intensidad de luz según el caso lo
requiera.

El sistema óptico es el encargado de reproducir y aumentar las imágenes mediante el

conjunto de lentes que lo componen. Está constituido por, Ocular: lente o sistema de lentes a través
de los cuales el ojo humano recoge la imagen que se observa de la preparación puesta en el
microscopio. Su nombre se debe a la cercanía de la pieza con el ojo del observador. Este situado en
la parte superior del tubo. Tiene como función aumentar la imagen formada por el objetivo. Los
oculares son intercambiables y sus poderes de aumento, por lo general son de 10X y otros que
poseen una escala micrométrica con el la fin de medir el tamaño del objeto observado. Como el haz
de rayos procedentes del objeto penetra en el ocular (habiendo formado la imagen dando lugar a las
aberraciones) es necesario corregir las aberraciones, para lo cual se han diseñado diferentes oculares.

El sistema óptico está constituido por:

Ocular: lente o sistema de lentes (dependiendo del tipo de microscopio, es decir, si es un

modelo monocular o binocular) a través de los cuales el ojo humano recoge la imagen que se
observa de la preparación puesta en el microscopio.
Objetivo: lente o sistema de lentes que recogen el rayo de luz concentrado por el
condensador y que atraviesa el objeto proporcionado una imagen real, invertida y
magnificada. El poder de aumento que presenta, depende de la complicación del sistema de
lentes que tenga el mismo. Los lentes objetivos son una pieza clave del microscopio. El
poder de aumento está marcado en cada uno de ellos (4X, 10X, 40X). De acuerdo a la
naturaleza del medio que separa la lente de la preparación, los objetivos pueden ser secos o
húmedo de inmersión 100X. El objetivo seco se utiliza cuando el aire es el medio que separa
la lente de la preparación. El objetivo de inmersión necesita de un líquido transparente
interpuesto, cuyo índice de refracción sea más elevado que el del aire, tales como el aceite
de inmersión, agua, etc.

El sistema mecánico sostiene la parte óptica y de iluminación; además, permiten los

desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto a observar, consta de las siguientes
partes:
Tubo o cañón: Cilindro que separa las partes ópticas del objetivo y ocular.
Brazo o asa: Parte en forma curva que permite el libre desplazamiento del tubo o cañón en
sentido vertical y sirve también para trasladar cómodamente el microscopio de un sitio a
otro.
Pie o base: Parte pesada, estable sobre la que descansa todo el peso y estabilidad del
microscopio rectangular, y en ella esta incorporada la lámpara.
Platina: Es la plataforma rígida (a veces móvil) sobre la que se colocan los objetos a
examinar. La posición de la platina debe ser perpendicular el eje óptico de microscopio; en
su centro tiene un orificio que permite el paso de la luz proveniente de un espejo o lámpara
que ilumina la preparación.
Carro: Mecanismo que sujeta en algunos microscopios las pinzas de la platina y que sirve
para mover fácilmente las preparaciones con los tornillos horizontal y vertical.
Pinzas: Están situadas en la platina y sirven para mantener fijas las preparaciones.
Tornillo macrométrico: Sirve para desplazar rápidamente el objetivo, consiguiendo así un
enfoque previo con el objetivo de bajo poder de las preparaciones que se observan.
Tornillo micrométrico: Este tiene la finalidad de conseguir con mayor precisión y más lentitud
el desplazamiento del objetivo, para lograr una imagen más nítida. Se emplea con el objetivo
de alto poder y con el de inmersión.
Revólver o porta objetitos: pieza giratoria provista de orificios que porta los objetivos de
diferentes aumentos, alineándolos con el ocular. Al girar el revólver, los objetivos pasan por
el eje del tubo y se colocan en posición de trabajo, lo que se nota por el ruido de un piñón
que lo fija.
Capacidades de un microscopio. El poder de aumento del microscopio es una de las tres
capacidades del mismo. Está dado por el producto del aumento específico del lente ocular
por cualesquiera de los aumentos de los objetivos, que se esté utilizando (el poder de
aumento específico está marcado en el ocular y objetivos). Ejemplo poder de aumento:
(lente ocular 10X) por (lente objetivo 10X) = poder de aumento: 100X . El microscopio nos
permite hacer mediciones de las preparaciones si incorporamos a éste el micrómetro ocular,
el cual consiste en un disco de vidrio con una pequeña escala graduada y se emplea
conjuntamente con el micrómetro objetivo de escala conocida y que no es más que un
portaobjeto con una pequeña escala graduada. La unidad métrica básica de longitud a nivel
de la microscopia óptica es el micrómetro (μm). En un 1.0 mm hay 1,000 μm.

Los microscopios pueden tener diferentes fuentes de iluminación y distintos principios

físicos para obtener así una mayor resolución. El poder de resolución de un microscopio es
la capacidad para separar dos puntos que estén juntos y observarlos como puntos
separados. Los microscopios que tienen mayor poder de resolución son aquellos que
perciben la distancia más pequeña entre dos puntos. La limitación de un microscopio óptico
no es cuestión de amplificación o de aumento, sino de poder de resolución y éste depende
de la abertura. La abertura es el valor angular del cono de luz que entra en el objetivo
procedente de cualquier punto del objeto. El poder de penetración es la capacidad de un
objetivo del microscopio de presentar perfectamente detallados los diversos planos de
espesor de una preparación sin variar el enfoque. Los microscopios pueden tener lentes
objetivos con diferente poder de penetración y producir algunas distorsiones de imagen
como la distorsión cromática y la esférica. Como el haz de rayos procedentes del objeto
penetra en el ocular (habiendo formado la imagen esto da lugar a las distorsiones) es
necesario corregir las mismas. Las distorsione de imágenes, pueden ser corregidas usando
diferentes tipos de lentes como son los lentes objetivos apocromático. Para esto se han
diseñado diferentes oculares.
Los microscopios pueden tener objetivos con diferente poder de penetración y presentar
algunas aberraciones como las aberraciones cromáticas y aberraciones esféricas. En
microscopia las aberraciones son un conjunto de defectos de los sistemas ópticos que no dan
imágenes nítidas, pero pueden ser corregidas usando diferentes tipos de lentes, como los
lentes apocromáticos. Una aberración cromática es el defecto de algunos lentes de presentar
los bordes coloreados de las imágenes, debido a la dispersión de la luz blanca que pasa a
través de un lente. La aberración esférica es el defecto que se presenta en los objetivos al
utilizar cubre objetos de diferente espesor. Una distorsión cromática es el defecto de algunos
lentes de presentar los bordes coloreados de las imágenes, debido a la dispersión de la luz
blanca que pasa a través de un lente. La distorsión esférica es el defecto que se presenta en
los objetivos al utilizar cubre objetos de diferente espesor.
El microscopio es un instrumento muy valioso y a la vez costoso, por eso debemos darle
el mejor cuido posible. Los cuidados y mantenimiento del microscopio que debemos
procurar son los siguientes siga siempre estas instrucciones generales cuando lo esté
utilizando:
1. El microscopio debe transportarse por el brazo o asa con una mano y sosteniéndole
por debajo de la base con la otra, es decir, transporte el microscopio siempre con ayuda de
ambas manos.
2. Siempre coloque el microscopio alejado del borde de la mesa de trabajo. Cuando
utilice el microscopio quite de la mesa de trabajo aquellas cosas que no sean absolutamente
necesarias.
3. Los lentes deben mantenerse limpios. Use sólo papel de lente para limpiar los
mismos.
4. Nunca coloque preparaciones sobre la platina con el objetivo de mayor poder en
posición.
 5. Nunca permita que los lentes toquen el cubreobjetos. Evite rayar los lentes. Para tal
fin siempre enfoque con el objetivo de menor poder y luego pase al de mayor poder.
6. Siempre que el microscopio no esté en uso deberá mantenerse la lámpara apagada y
el objetivo de menor poder en posición.
7. Cuando termine de utilizar el microscopio guárdelo en su respectivo anaquel, cúbralo
con su funda, no sin antes colocar el objetivo de menor aumento en la posición de enfoque.
Materiales.
 Microscopio compuesto  Papel de periódico con la
 Portaobjeto letra “e”
 Cubreobjeto  Preparación con hilos de
 Gotero colores
 Micrómetro ocular  Papel absorbente
 Micrómetro objetivo  Preparaciones fijas
 Papel de lente  Aceite de inmersión
ADN

Extracción de ADN de células vegetales.

Objetivos de la experiencia. Conocer la estructura y función de la molécula de ADN.

Extraer ADN a partir de una muestra vegetal (cebolla, banano, fresas, tomates, etc.).
Comprender el procedimiento ejecutado para extraer ADN vegetal.
Conocer la función de cada uno de los materiales y reactivos utilizados en la extracción.

La extracción del ADN es el método por el cual se obtiene ADN a partir de material
biológico (ej.: células eucariotas vegetales y animales de algún tejido) utilizando técnicas
físicas y químicas. La extracción consiste en la separación y purificación del ADN con el fin
de poder estudiarlo, analizarlo o manipularlo. El primer aislamiento de ácido
desoxirribonucleico (nucleína) fue realizado por el Dr. Johan Friedrich Miescher en 1869.
Actualmente es un procedimiento rutinario en biología molecular.

El ADN es la molécula que permite ya sea a una célula procariota o eucariota transmitir la
información genética de una generación a la siguiente. El ADN se estructura a partir de
tres componentes que son: una de cuatro bases nitrogenadas, adenina y guanina (purinas)
y citosina, timina (pirimidinas), un azúcar pentosa, la desoxirribosa y un grupo fosfato. En
conjunto forman un bloque estructural denominado nucleótido. El ADN es una molécula
muy grande y larga que tiende a agruparse y separarse de los distintos componentes
celulares, de ahí la sencillez para poderla extraer.
La extracción del ADN, en células eucariotas, es el primer paso para el estudio de la
estructura y función del mismo.

Existen diferentes variaciones en cuanto a los detalles de los procedimientos de extracción

y aislamiento de ADN, pero todos ellos coinciden, como primer paso, en la ruptura de la
membrana de las células y núcleos. Para este propósito se incuba la suspensión celular
con detergentes (LSS o SDS) o con enzimas proteolíticas, los cuales disuelven las proteínas
y emulsifican a los lípidos de la membrana al romper los enlaces no covalentes. La mayor
parte de los protocolos utilizan una enzima proteolítica fuerte, como la proteinaza K. Este
paso inactiva y neutraliza también las nucleasas celulares que degradan el ADN. El paso
siguiente es la disociación del ADN de proteínas que lleva unidas, es decir, limpiarlo de las
histonas. A continuación, el ADN se separa de la disolución por medio de la adición de
alcohol etílico al 95% frío. El conglomerado de fibras de ADN precipitado en forma de
grumos mucosos puede recogerse con una varilla de vidrio (policial), se seca y se disuelve
de nuevo en un amortiguador acuoso adecuado o bien en una solución de NaCl al 4.0% en
frío y de esta manera, permanece estable durante largo tiempo. En la actualidad, existen
extractores automáticos de ADN capaces de preparar varias muestras en pocas horas. Una
vez obtenido el ADN este puede ser utilizado en otras técnicas moleculares como la
electroforesis, PCR, secuenciación, clonación, hibridación y otras.

La estructura de doble hélice del ADN,

El ADN se compone de dos cadenas, cada una formada por nucleótidos. Cada nucleótido,
a su vez, está compuesto por un azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base
nitrogenada. Las bases nitrogenadas son cuatro: adenina (A), timina (T), citosina (C), y
guanina (G), y siempre una A se enfrenta a una T y una C se enfrenta a una G en la doble
cadena. Las bases enfrentadas se dice que son complementarias. El ADN adopta una
forma de doble hélice, como una escalera caracol donde los lados son cadenas de
azúcares y fosfatos conectadas por “escalones”, que son las bases nitrogenadas. La
molécula de ADN se asocia a proteínas, llamadas histonas, y se encuentra muy enrollada y
compactada para formar el cromosoma.

FUNCION

El ADN tiene la función de “guardar información”. Es decir, contiene las

instrucciones que determinan la forma y características de un organismo y sus
funciones. Además, a través del ADN se transmiten esas características a los
descendientes durante la reproducción, tanto sexual como asexual. Todas las
células, procariotas y eucariotas, contienen ADN en sus células. En las células
eucariotas el ADN está contenido dentro del núcleo celular, mientras que en las
células procariotas, que no tienen un núcleo definido, el material genético está
disperso en el citoplasma celular.

Célula (del latín cellula), es la unidad anatómica, estructural y funcional más pequeña de
todos
los organismos vivos capaz de crecimiento, irritabilidad, realizar metabolismo,
autorregularse y de
reproducción autónoma. Todas las células básicamente son semejantes. La célula está
rodeada en su
totalidad por una membrana celular y algunas por una pared celular. Contienen un
citoplasma de
apariencia homogénea y gelatinosa compuesto de lípidos y proteínas en el cual están los
organelos. A
pesar de la gran diversidad existente, las células pueden ser ubicadas con base a sus
ultraestructuras
en uno de dos grupos: procariotas o eucariotas.
Las células procariotas constituyen un grupo de organismos unicelulares microscópicos
que se
caracterizan por carecer de una envoltura nuclear (núcleo), presentar un ADN único,
circular no
asociado a la histonas, ausencia de organelos membranosos (sistemas de
endomembranas),su división
celular es mediante fisión binaria, presencia de ribosomas esenciales para la síntesis de
proteínas y la
presencia en la pared celular de casi todas las células bacterianas de peptidoglicano (ácido
murámico)
un polisacárido complejo, que le confiere rigidez y solidez a la célula bacteriana. Las
células procariotas
son mucho más pequeñas y simples. Desde el punto de vista evolutivo los procariotas se
consideran

antecesores de los eucariotas. Las cianobacterias (bacterias fotosintéticas) mal llamadas

algas verdes-
azules, las eubacterias, o bacterias no fotosintéticas, las micoplasmas y las
arqueobacterias son

representantes de organismos procariotas.

Las bacterias fotosintéticas son organismos esencialmente aeróbicos fotosintéticos cuyas
células son de un tamaño relativamente más grande en comparación a las eubacterias.
Carecen de
núcleo, su membrana celular se invagina para dar los tilacoides. Se considera a las
cianobacterias como
los primeros organismos que liberaron oxígeno como producto residual de la fotosíntesis.
Su
morfología es variada. Se observan formas unicelulares que se dividen por simple fisión,
formas
coloniales que se dividen por fisión múltiple (ejm Merismopedia) y formas filamentosas
que se

reproducen mediante fragmentación. Como representantes de éstas últimas podemos

mencionar a
Nostoc, Oscilatoria y Tolypothrix ver Fig. 6.1.
El color verde-azulado de estas células se debe a la preponderancia del pigmento
ficocianina
junto con la clorofila. Presentan una pared celular compuesta por ácido murámico,
glucosamina y
glucopiranosa. Su forma de almacenar energía es por medio de gránulos de almidón
cianofíceo
parecido al glicógeno.
Fig. 6.1 Ejemplos de cianobacterias.

Fig. 6.2 Estructura típica de una Cianobacteria

Aunque, en general, las células procariotas

carecen de estructuras internas delimitadas por
membrana, las cianobacterias, como la ilustrada
aquí, sí contienen numerosas membranas
llamadas tilacoides, que contienen clorofila y
pigmentos fotosintéticos que utilizan para captar
la energía de la luz solar y sintetizar azúcares.

Las bacterias no fotosintéticas/eubacterias son organismos unicelulares carentes de

clorofila
y heterótrofos. Carecen de núcleo celular y demás orgánulos delimitados por membranas
biológicas.
Contiene una gran molécula circular de ADN (cromosoma bacteriano) en una región del
citoplasma
denominada nucleoide. En el citoplasma se pueden apreciar plásmidos, pequeñas
moléculas circulares
de ADN y también contiene ribosomas para la síntesis de proteínas. Tienen una
membrana celular
formada por una bicapa lipídica. Encima de la membrana hay una cubierta formada de un
polisacárido
complejo denominado peptidoglicano.
Fig. 6.3 Una bacteria sencilla

Una bacteria simplificada está formada por tres capas externas que envuelven
las estructuras internas; la capa pegajosa protege la pared celular rígida, que
a su vez cubre la membrana celular semipermeable. El material genético está
contenido en el ADN que forma el nucleoide; no hay membrana nuclear ni, por
tanto, núcleo diferenciado. Las moléculas circulares de ADN están en contacto
directo con el citoplasma. Los ribosomas que flotan en el citoplasma
intervienen en la síntesis de proteínas. Las bacterias carecen casi siempre de
muchas de las estructuras internas propias de las células eucariotas, las
organelas celulares. Así, el citoplasma de las procariotas está rodeado por una
membrana plasmática y una pared celular. El flagelo es un medio de
locomoción y los pelos que se extienden por fuera de la cápsula ayudan a la bacteria a
sujetarse a las superficies.
Dependiendo de su estructura y a la afinidad por la tinción de Gram, se clasifican a las
bacterias
en Gram positivas y Gram negativas. Las bacterias también pueden ser clasificadas de
acuerdo a su
morfología en cocos (formas esféricas), bacilos(formas de bastón) y formas de espirales.
Streptococos,
E. coli, y espirilos representan respectivamente ejemplos de las formas antes mencionadas
ver Fig. 6.4.
Fig. 6.4 Morfología de células bacterianas.

Las células micoplasmas son las procariotas más pequeñas, miden aproximadamente una
micra de diámetro y se caracterizan por la ausencia de una pared celular. Por tal razón no
son
susceptibles a los antibióticos (penicilina) que bloquean la síntesis de la pared celular
Tienen un
genoma muy pequeño, son parásitos, requieren de este para la estabilidad de la
membrana celular.
Son causantes de enfermedades infecciosas graves como la micoplasmosis, producida por
la bacteria
Mycoplasma.
Las arqueobacterias. Investigaciones realizadas durante la década de 1970 revelaron la
existencia de varias clases de bacterias que poseen las características estructurales
generales de las
procariotas, carecen de núcleo, no tienen membranas internas que delimiten orgánulos,
presentan un
solo cromosoma circular, y ribosomas, pero presentan algunas características moleculares
incompatibles con el reino procariótico, como por ejemplo, la secuencia de nucleótidos
del ARN
ribosomal de 16S y que le sirvieron al Dr C. Woese y otros investigadores para crear un
nuevo dominio
el Archaea. Las células procariotas pertenecientes al dominio Archaea, (se sabe que son
organismos
bacterianos muy antiguos) son conocidas como organismos extremófilos. Son capaces de
crecer en
condiciones extremas de ausencia de oxígeno, condiciones extremas de salinidad y de
altas
temperaturas y bajos niveles de pH. Así tenemos las conocidas metanogénicas, la mayoría
de halófilas
y las termoácidofilas.

Las células eucariotas en general presentan una estructura más compleja. Normalmente
son
de mayor tamaño. Las características más notables de estas células es la existencia de
compartimientos delimitados por membranas, las cuales separan el contenido de éstos
del resto del
citoplasma. El compartimiento más notable es el núcleo, en el cual el ADN se encuentra
asociado con
proteínas básicas del tipo de las histonas formando estructuras complejas denominadas
cromosomas.
En eucariotas a diferencia de los procariotas existe más de un cromosoma, que no es
circular sino lineal
en los que se encuentran los genes. Otros compartimientos menos evidentes son: retículo
endoplasmático, aparato de Golgi, mitocondrias, cloroplastos, vacuolas, lisosomas,
peroxisomas y
otros. La mitosis es el tipo de división celular característica de los eucariotas. Los protistas,
los hongos,
los organismos vegetales y animales son eucariotas.
Los protistas son un grupo diverso de organismos microscópicos, generalmente acuáticos,
que
agrupa organismos muy sencillos que no son ni plantas, ni animales, ni hongos. La mayoría
de los
protistas son organismos unicelulares (formados por una sola célula) y solo pueden ser
vistos con ayuda
de un microscopio. También se encuentran en el suelo, e incluso, en el tracto intestinal de
los animales.
Tienen formas muy características y se les puede observar en muestras de agua
estancada. Algunos
protistas están rodeados solo por una membrana plasmática, pero muchas especies
presentan también
paredes celulares alrededor de la membrana. Los protistas presentan una gran diversidad
de formas y
tamaños. Muchos son diminutos. La gran mayoría de protistas se reproducen
asexualmente mediante
división binaria o por gemación. Algunos se reproducen asexualmente por división
múltiple. En algunos
casos puede haber recombinación genética. Algunos protistas son capaces de realizar la
fotosíntesis y
presentan, unos orgánulos rodeados de doble membrana que reciben el nombre de
plastos. Estos
orgánulos son capaces de atrapar la energía solar y convertirla en energía química, que la
célula puede
utilizar. Los plastos también pueden capturar el dióxido de carbono de la atmósfera y
transformarlo en
compuestos de carbono que la célula necesita para crecer. Los pigmentos, incluida la
clorofila, que se
encuentran en el interior de los plastos, capturan la luz solar y proporcionan a los protistas
fotosintéticos su característico color. Otras, en cambio, son heterótrofas. Aunque algunos
protistas son
completamente inmóviles, la mayoría tienen diversos medios de locomoción. Los protistas
denominados flagelados poseen unas prolongaciones en forma de látigo, denominadas
flagelos, que
les sirven para desplazarse. Otros protistas, llamados ciliados, utilizan unas prolongaciones
similares a
pelos, muy numerosas y algo más pequeñas, que reciben el nombre de cilios; los cilios se
baten de
forma coordinada para locomoción de las células y recolección de alimento. Los rizopodos
se pueden
mover utilizando seudópodos, extensiones hacia fuera de su citoplasma que les sirven
también para
engullir a sus presas. Entre sus representantes más conocidos podemos citar: Euglenoides,
un
flagelado, Paramecium, un ciliado, Amoeba un rizopodo. El Plasmodium, un esporozoarios
unicelular
y parásito, que se reproduce por esporas, y otros como los mixomicetos.