SEIMC 2023 - Libro de comunicaciones
Código ISBN 978-84-09-50940-9
Enlace publicación https://intranet.pacifico-meetings.com/amsysweb/faces/publicacionOnlineLIBRO.xhtml?id=830
Tema 10. Nuevas tecnologías, incluyendo técnicas de imagen, y biomarcadores en el diagnóstico y tratamiento de las EEII
Sesión SP-22. Métodos fenotípicos y moleculares de diagnóstico en microbiología, nuevas tecnologías y biomarcadores
Código de presentación 1158
Lisbeth Gonçalves De Freitas, María Rodríguez Velasco, Sonia Paredes Gómez, Elena Cantón Benito, María Antonia
Autor(es)
Sánchez Álvarez, Carlos Fuster Foz
Centros Hospital el Bierzo, Ponferrada
Evaluación de nueva prueba diagnóstica de M. tuberculosis, M. tuberculosis
Título: complex y micobacterias no tuberculosas
Texto:
Introducción/Objetivos
El diagnóstico microbiológico tradicional y gold estándar de Mycobacterium tuberculosis (MT) y
micobacterias no tuberculosas (NTM) es el cultivo.
El MTBC-NTM Real Time (Vitro S.A.) es un kit de diagnóstico in vitro para la detección cualitativa del
ADN de especies del complejo Mycobacterium tuberculosis (MTBC), NTM y MT a partir de muestras
clínicas humanas.
El objetivo de este estudio es evaluar este nuevo kit de PCR para identificar en muestras clínicas y
en cepas aisladas de muestras clínicas la presencia MT, NTM y MTBC.
Material y Métodos
Se utilizaron 39 muestras clínicas para estudio de micobacterias: respiratorias, líquido ascítico, orina
y biopsias. Las muestras clínicas fueron procesadas siguiendo el procedimiento establecido:
tinciones, cultivo en medio sólido (Löwenstein-Jensen®) y en medio líquido (BACT/ALERT®). La
identificación de micobacterias se basó en tinciones, características morfológicas e identificaciones
por Genotype® MTBC, CM ó AS según correspondiera. En 15 muestras se realizaron PCR con el kit
Xpert® MTB/RIF Ultra. En 19 muestras se identificaron cepas de MT y NTM.
Se procedió a extraer el ADN de las muestras clínicas y las cepas siguiendo el protocolo de
extracción para muestras respiratorias y para biopsias de NUCLISENS® EASYMAG®. La
amplificación de las muestras y cepas se realizó con el kit comercial MTBC-NTM Real Time de
acuerdo con la ficha técnica del kit (MAD-003963M-50W). Se utilizó el termociclador qPCR NEOS-
96®. Los canales de detección de los fluoróforos fueron: Cy5 (NTM), ROX (MTBC), FAM (MT) y HEX
(control Interno). Se añadió un control negativo y un control positivo. Los resultados de las muestras
clínicas y cepas se interpretaron de acuerdo con la ficha técnica. Se consideró positivo cuando el Ct
fue igual o menor a 38.
Resultados
Se utilizó para la evaluación de esta PCR el resultado definitivo del cultivo para micobacterias. La
sensibilidad global fue de 91.1%, la especificidad fue del 100%, el valor predictivo positivo (VPP) fue
del 100% y el valor predictivo negativo (VPN) del 81.2%. Los falsos negativos ocurrieron en tres
aspirados bronquiales (BAS) cuyos cultivos definitivos fueron MT, M. intracellulare y M. gordonae. En
un lavado bronqioalveolar no hubo amplificación de ninguna diana. Las micobacterias previamentes
identificadas fueron: M. avium (1), M. europeaum (1), M. gordonae (5), M. intracellulare (3), M.
malmoense (1) y M. shimoidei (1) y MT (13).
14 de 15 muestras clínicas o cepas fueron concordantes entre MTBC-NTM Real Time frente a la
técnica Xpert® MTB/RIF Ultra. El índice Kappa fue de 0.911, por tanto, la concordancia es alta. El
falso negativo fue en un BAS cuyo control interno fue positivo (Cts: 20,402).
Conclusiones
Este estudio preliminar ha permitido valorar el rendimiento del kit tanto en muestras clínicas
humanas como en cepas identificadas previamente. La sensibilidad, especificidad, VPP y VPN son
adecuados y permiten plantear que puede constituirse en otra herramienta más para contribuir al
diagnóstico molecular de MT, MTCB y NTM. Sus ventajas son: identificar la presencia de NTM en
muestra directa, menor complicación técnica, sistema abierto para su uso en diferentes
amplificadores y tiempo de ejecución aceptable.
