REPARACIÓN DEL DNA

JORGE ESTEVEZ
 • Introducción
• Categorías
• Reparación directa
CONTENIDO:
• Reparación por escisión
• La reparación por escisión de nucleótidos se utiliza para corregir tipos más extensos de
daños
• Reparación de desajustes: corrección de errores de replicación
• Reparación de roturas de ADN
• Rotura de ADN doble cadena
• Evitar los daños en el ADN durante la replicación del genoma
• La respuesta SOS es una medida de emergencia para hacer frente a un genoma dañado
• Otras funciones de Reca
• SOS como ultima solución
2 • Los defectos en la reparación del ADN subyacen a las enfermedades humanas,
incluyendo el cáncer
REPARACIÓN DEL

INTRODUCCIÓN
DNA

Los genes poseen sistemas de reparación del DNA muy

eficientes debido a que el sin dichos sistemas de reparación
el genoma no podría mantenerse funcional mas que solo por
unas cuantas horas y causaría una inactividad en los genes
por el daño en el DNA y se volverían disfuncionales por
división celular.

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 CATEGORÍAS:
REPARACIÓN DEL

Son 4 categorías de los sistemas de reparación del DNA:

DNA

Reparación directa (A) Reparación por escisión (B) Reparación por desajustes del Unión de extremos no
DNA (C) homólogos (D)
Actúa sobre los nucleótidos Implica la escisión de un Corrige en la replicación Actúa en la reparación de
dañados directamente y segmento del polinucleótido mediante la escisión de un rotura de doble cadena.
restaurándolos a su estructura con un sitio dañado. tramo del ADN monocatenario,
original. Con una DNA polimerasa el cual contiene el nucleótido
realiza una resíntesis faltante y reparándolo.
volviéndola a su secuencia
original

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 REPARACIÓN DIRECTA
REPARACIÓN DEL

Solo unos pocos tipos de nucleótidos dañados pueden repararse directamente:

• Nick: Se reparan mediante un ADN ligasa si ocurre una rotura del enlace fosfodiéster sin afectar los grupos 5´ y
DNA

3´ de los nucleótidos cercanos. (Esto puede ser causado por efectos de la radiación de ionización).

• Daños por alquilación: Se realiza mediante enzimas que transfieren el grupo alquilo del nucleótido a su cadena
polipeptídica. Ejemplos:
❖ Enzima Ada de [Link]: elimina los grupos alquilo unidos al oxigeno 4 y 6 de la timina y guanina y reparar los
enlaces fosfodiéster metilados.
❖ Enzima MGMT humano: Elimina los grupos alquilo unidos al oxigeno 6 de la guanina

• Dímeros de ciclobutilo: Se reparan mediante la fotorreactivación. Ejemplo:

❖ [Link]: Usa la enzima ADN fotoliasa

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 REPARACIÓN POR ESCISIÓN
REPARACIÓN DEL

Tiene 2 categorías:
DNA

• Reparación por escisión de bases: Donde elimina una base nucleotídica dañada,
escisión de un trozo corto del polinucleótido alrededor del sitio AP y resíntesis
con una ADN polimerasa. Vista imagen

• Reparación por escisión de nucleótidos: Es similar a la reparación por escisión de

bases, pero no va precedida de la eliminación de una base dañada y puede
actuar sobre áreas más dañadas del ADN.

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 • La escisión de bases repara muchos tipos de nucleótidos dañados:

Implica la eliminación de 1 o mas nucleótidos seguido de la resíntesis de ADN para cubrir el hueco faltante. ( agentes alquilantes o
radiación de ionización.)

Empieza con una ADN glicosilasa.

Después de eliminar la base dañada voltea la
estructura a una posición fuera de la hélice y
separándola dando lugar al sitio AP. El cuales
convertido y puede llevarse a cabo de siguientes
maneras.

El método estándar utiliza una endonucleasa AP, como la exonucleasa III o la endonucleasa IV de E. coli o la APE1 de los humanos,
que corta el enlace fosfodiéster en el lado 5´del sitio AP.

Una vía alternativa para convertir el sitio AP en un hueco(gap) utilizar la actividad endonucleasa que poseen algunas ADN
glicosilasas, que pueden hacer un corte en el lado 3´ del sitio AP.
REPARACIÓN DEL
DNA

Cabe resaltar que Cada ADN glicosilasa tiene una especifidad limitada, donde la especifidad de cada glicosilasa que
posee una célula determina el rango de los nucleótidos dañados que puede separar por la vía de escisión de bases.

La mayoría de los organismos son capaces de tratar bases desaminadas como el uracilo (citosina desaminada) y la
hipoxantina (adenina desaminada), productos de oxidación como la 5-hidroxicitosina, bases metiladas como la 3-
metiladenina.

8 Otras ADN glicosilasas eliminan bases normales como parte del sistema de reparación de emparejamientos erróneos.
 LA REPARACIÓN POR ESCISIÓN DE
NUCLEÓTIDOS SE UTILIZA PARA CORREGIR
REPARACIÓN DEL

TIPOS MÁS EXTENSOS DE DAÑOS

DNA

Es mas amplia y con una Un segmento de ADN que contiene

capacidad alta para enfrentar nucleótido(s) dañados se sustituyen por
formas extremas de daño del DNA, ADN nuevo.
como: Un ejemplo: es el proceso de parche corto
enlaces cruzados intracadena y las de E. coli, llamado así porque la región de
bases modificadas por la unión de polinucleótido que se escisión y posterior
grandes grupos químicos. corregir "parcheado" es relativamente corta,
los dímeros de ciclobutilo normalmente de 12 nucleótidos de
mediante un proceso llamado longitud.
DARK REPAIR, lo que proporciona También tiene un sistema de reparación
a los organismos que no disponen de parche largo en el que intervienen las
del sistema de fotorreactivación proteínas Uvr, pero que difiere en que el
(como los humanos) un medio fragmento de ADN que se elimina puede
para reparar este tipo de daños. tener una longitud de hasta 2 kb.
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 Parches cortos proceso:
El proceso empieza formando un trímero de 2 proteínas UvrA y una copia de UvrB
uniéndose al ADN sin dañarlo. Donde la amplia especifidad del proceso indica que no
se detectan directamente los tipos individuales de daño mas bien busca una distorsión
en la doble hélice.

UvrA sale y entra UvrC formando un dimero UvrBC cortando el sitio dañado por ambas
partes.

UvrB realiza el primer corte en el 5to enlace fosfodiéster debajo del nucleótido
dañado. El segundo lo realiza UvrC en el 8vo enlace fosfodiéster por arriba del
nucleótido dañando.

Se remueve le sitio cortado por la ADN helicasa II rompiendo los pares de bases de la
segunda cadena que lo sostiene

UvrC sale pero UvrB sirve de puente impidiendo que se empareje consigo misma, o
impedir que se dañe asi el DNA, o dirigir a la ADN polimerasa al lugar de reparación.

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Finalmente el gap se rellena por la ADN polimerasa I y el ultimo enlace fosfodiéster es
sintetizado por la ADN ligasa.
REPARACIÓN DEL DNA
LOS CORTES SON REALIZADOS POR ENDONUCLEASAS QUE ATACAN EL ADN
MONOCATENARIO PERO ANTES DE QUE SE REALICEN LOS CORTES EL ADN
ALREDEDOR SE FUNDIÓ PRESUNTAMENTE POR UNA HELICASA.

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 REPARACIÓN DE DESAJUSTES: CORRECCIÓN DE
ERRORES DE REPLICACIÓN
PRESENTACIÓN
TÍTULO DE LA

La hija esta en base inframetilada por eso se distingue del polinucleótido

original que contiene complemento completo de grupos metilo.

El ADN de E. coli esta metilado por la ADN adenina metilasa(DAM) que

convierte las adeninas en 6-metiladeninas en 5´-GATC-3´, y de la ADN citosina
metilasa (Dcm), que convierte las citosinas en 5 metilcitosinas en 5´-CCAGG-
3´ y 5´-CCTGG-3´.

Hay un retraso entre la replicación del ADN y la metilación de la hebra hija, y

es durante esta ventana de oportunidad cuando el sistema de reparación
escanea el ADN en busca de desajustes y realiza las correcciones necesarias
en la hebra submetilada. correcciones necesarias en la cadena hija
insuficientemente metilada.

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REPARACIÓN DEL

E. Coli cuenta con tres sistemas de MutH corta el enlace fosfodiéster

reparación de desajuste: antes de la G en la sec. de met. Y la
Parche largo, parche corto y parche muy ADN helicasa II separa la cadena
largo. sencilla.
DNA

Donde en parche largo ocupa las proteínas Al parecer no hay una enzima que
Parche corto: menos de 10
mutH, MutL y MutS asi como la ADN helicasa corte la cadena por debajo del
nucleótidos de longitud comienza
II, desajuste, por lo que la región
con MutY el cual reconoce un
monocateriana desprendida se
desajuste A-G A-C
• MutS: Reconoce el desajuste degrada (exonucleasa) y continua mas
allá del desajuste.
Parche muy corto: Corrige
• MutH: Distingue las 2 cadenas en
desajustes G-T que son reconocidos
secuencia 5´GATC 3´no metiladas. La ADN polimerasa y ligasa I rellenan
por la endonucleasa Vsr.
el gap.
• MutL: No esta clara su función (coordina Ver imagen
las actividades de las otras 2 proteínas Se cree que ocurre lo mismo para
para que MutH se una a secuencia parche corto y muy corto con
5´GATC 3´no met, en las zonas diferencia en las especifidades de las
13 desajustadas reconocidas por MutS. proteínas que reconocen el desajuste.
 EN EUCARIONTES
PRESENTACIÓN
TÍTULO DE LA

Tienen homologas de MutS y MutL por lo que se entiende que tienen el mismo funcionamiento, aunque tiene
ausencia de MutH por lo que no se metila para poder distinguir polinucleótidos padre e hija.

Pese a estar en metilaciones de algunas reparacióne de los errores de emparejamiento en las células de mamíferos,
pero el ADN de algunos eucariotas, como las moscas de la fruta y las levaduras, no está muy metilado, Se cree que
en estos organismos debe utilizarse un método diferente para identificar la cadena hija.

Como la asociación de enzimas de reparación y complejo de replicación de modo que la reparación se acopla a la
síntesis de ADN, o el uso de proteínas de unión de hebra única que marcan la hebra madre.

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 REPARACIÓN DE ROTURAS DE ADN
REPARACIÓN DEL

Una rotura de una sola hebra en una molécula de ADN de doble hebra, como la producida por algunos tipos de
daño oxidativo, no supone un problema crítico para la célula, ya que la doble hélice conserva su integridad general.
DNA

Esta hebra simple expuesta se recubre con proteínas PARP1, que protege esta hebra intacta de la rotura y evitan
que participe en eventos de recombinación no deseados.

Y finalmente las enzimas implicadas en la via de reparación por escisión rellenan el hueco.

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 Por otro lado una rotura de doble cadena es más grave porque
convierte la doble hélice original en dos fragmentos separados
REPARACIÓN DEL

que deben volver a unirse para reparar la rotura.

Lo cual los dos extremos rotos deben protegerse de una mayor

degradación que podría dar lugar a una mutación de deleción en
DNA

el punto de rotura reparado.

Los procesos de reparación también deben garantizar que se unan

los extremos correctos ya que si hay dos cromosomas rotos en el
núcleo, deben unirse los pares correctos para que se restauren las
estructuras originales.

Los estudios experimentales con células de ratón indican que es

difícil conseguir este resultado y si se rompen dos cromosomas se
producen con frecuencia errores de reparación que dan lugar a
estructuras híbridas.
Incluso si solo se rompe un cromosoma, sigue existiendo la
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posibilidad de que un extremo natural del cromosoma se confunda
con una rotura y se realice una reparación incorrecta.
 ROTURA DE ADN DOBLE
REPARACIÓN DEL

CADENA
DNA

Estas se generan por la radiación de Estos genes especifican un

ionizante o mutágenos químicos, a complejo proteico
multicomponente que dirige una Ku se une al ADN en asociación
veces sucede hasta en la replicación con la proteína quinasa DNA-
del DNA. ADN ligasa a la rotura.
PKCS, que activa una tercera
Donde dicho complejo incluye 2 proteína llamada XRCC4, la cual
Tienen 2 vías para la reparación de interactúa con la ADN ligasa IV
la doble cadena: copias de la proteína Ku (unión a
sitios cortados) no puede unirse a de mamíferos, llevando a esta
regiones internas porque la proteína reparadora a la rotura
• Recombinación Homologa de la doble cadena.
• Union de extremos no molécula de ADN debe encajar en
homólogos( NHEJ). un bucle formado por la
asociación entre las dos
subunidades que componen cada
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proteína Ku.
Véase la imagen
 EVITAR LOS DAÑOS EN EL ADN DURANTE
LA REPLICACIÓN DEL GENOMA
REPARACIÓN DEL

Si una región del genoma ha sufrido daños importantes, es

DNA

concebible que los procesos de reparación se vean desbordados.

La célula se enfrenta entonces a la disyuntiva de morir o intentar

replicar la región dañada, aunque esta replicación sea propensa a
errores y dé lugar a moléculas hijas mutadas.

Ejemplo:
Las células de E. coli optan invariablemente por la segunda opción,
induciendo uno de los varios procedimientos de emergencia para
eludir los puntos de mayor daño.

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 LA RESPUESTA SOS ES UNA MEDIDA DE
EMERGENCIA PARA HACER FRENTE A UN
REPARACIÓN DEL

GENOMA DAÑADO
DNA

El mas estudiado de estos procesos de Se requiere la construcción de un mutasoma

restauración como parte de la respuesta conformado por el complejo UmuD´2C ((también
SOS, es la que permite a una célula de E. llamado ADN polimerasa V ) que es un trímero
coli replicar su ADN aunque los formado por dos proteínas UmuD´ y una copia de
polinucleótidos molde contengan sitios UmuC) y varias copias de la proteína RecA.
Pasos
AP y/o dímeros de ciclobutilo y otros
fotoproductos resultantes de la Donde, RecA recubre las hebras de polinucleótidos
exposición a mutágenos químicos o dañadas, lo que permite al complejo UmuD´2C
radiación UV que normalmente desplazar a la ADN polimerasa III y llevar a cabo la
bloquearían, o al menos retrasarían, el síntesis de ADN propensa a errores hasta que la
complejo de replicación. región dañada haya pasado y la ADN polimerasa III
pueda tomar el relevo de nuevo.

19 Vea imagen
 OTRAS FUNCIONES DE RECA
REPARACIÓN DEL

RecA además de actuar como proteína de unión de una sola hebra que facilita el proceso de restauración del
mutasoma, también tiene una segunda función como activador de la respuesta SOS global.
DNA

Donde:
La proteína es estimulada por señales químicas (aún no identificadas) que indican la presencia de daños extensos en
el ADN y RecA en respuesta a esto separa una serie de proteínas diana, directa o indirectamente, incluyendo UmuD,
convirtiendo esta proteína en su forma activa UmuD´, e iniciando el proceso de reparación del mutasoma.

RecA también corta una proteína represora llamada LexA, aumentando la expresión de una serie de genes
normalmente reprimidos por LexA, entre los que se incluyen el propio gen RecA y otros genes cuyos productos están
implicados en las vías de reparación del ADN.

Y separa el represor cI del bacteriófago lambda, de modo que si un profago lambda integrado está presente en el
genoma, puede extirparse y abandonar el hundimiento. puede extirparse y salir.

20
 SOS COMO ULTIMA SOLUCIÓN
REPARACIÓN DEL

El precio de la supervivencia es una mayor

Bacterias Eucariontes
DNA

tasa de mutación porque el mutasoma no

repara el daño, simplemente permite que -ADN polimerasa II, que puede eludir -ADN polimerasas épsilon y eta: que
se replique una región dañada de un nucleótidos unidos a productos pueden evitar los dímeros de
polinucleótido. químicos mutagénicos como el N-2- ciclobutilo.
acetilaminofluoreno.
-ADN polimerasas iota y zeta: que
Cuando encuentra una posición dañada en -ADN polimerasa IV (también trabajan juntas para replicarse a
el ADN molde, la polimerasa selecciona un llamada DinB), que puede replicarse través de fotoproductos y sitios AP.
nucleótido más o menos al azar, aunque a través de una región de ADN molde
con cierta preferencia por colocar una A en la que los dos polinucleótidos
frente a un sitio AP. parentales se han desalineado.

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 LOS DEFECTOS EN LA REPARACIÓN DEL ADN
SUBYACEN A LAS ENFERMEDADES HUMANAS,
REPARACIÓN DEL

INCLUYENDO EL CÁNCER
DNA

Una de las mejor caracterizadas es el La tricotiodistrofia

xeroderma pigmentoso:

extrema sensibilidad a los rayos aunque no implica cáncer, suele

ultravioleta, como los del sol, y un incluir problemas tanto en la
riesgo alto de cáncer piel como en el sistema nervioso
y cabello.

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 Algunas enfermedades se han relacionado con defectos en el
componente de reparación por escisión de nucleótidos
REPARACIÓN DEL

acoplado a la transcripción. -Síndromes de Bloom y Werner:

1.-estatura más baja que el
promedio, cara estrecha, erupción
-cánceres de mama y ovario, el gen -síndrome de susceptibilidad al roja en la piel.(cancer)
DNA

BRCA1 que confiere susceptibilidad cáncer denominado HNPCC

a estos cánceres y codifica una (cáncer colorrectal hereditario no 2.-envejecimiento rápido que
proteína que se ha relacionado, al polipósico), aunque esta comienza al principio de la
menos indirectamente, con la enfermedad se identificó adolescencia o de la
reparación acoplada a la originalmente como un defecto adultez.(cancer)
transcripción. en la reparación de
emparejamientos erróneos. -La anemia de Fanconi:
el síndrome de Cockayne, una la médula ósea no produce
enfermedad compleja que se La ataxia y telangiectasia, cuyos suficientes células sanguíneas,
manifiesta por trastornos síntomas son movimientos hemorragias frecuentes e
neurológicos y del crecimiento. descoordinados, como caminar. infecciones.
Las telangiectasias son los
agrandamientos de los vasos -La ataxia espinocerebelosa:
sanguíneos . degeneración de las células que
23
componen el cerebelo.
 BIBLIOGRAFÍA:
REPARACIÓN DEL

BROWN, T. A. (2007). GENOMES 3 (3.a ed.) [Electronico].

Garland Science Publishing.
DNA

[Link]
ontent/1/Genomes_3%20-%20T.A.%20Brown_.pdf

24
MUCHAS GRACIAS POR SU
ATENCIÓN :)
REPARACIÓN DEL

(A)
DNA

(B)

(C)

(D) Categorías
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REPARACIÓN DEL
DNA

Reparación por escisión

Reparación directa

27
REPARACIÓN DEL
DNA

28 Mismatch
Rotura DNA
 REPARACIÓN DEL

29
DNA

SOS