Ecotoxicological
Bioensayo ecotoxicológico
bioassay with
con la lenteja de agua (Lemna duckweed (Lemna
Minor) en agua superficiales Minor) in surface water
del Río Lurín of the Lurín River
Olivas Favio Porta Joselyn Rodríguez Yerico
1. Facultad de Ciencias Ambientales, Universidad
Aranzaes Laura Coronel Jhoscelyn Campana Mauricio científica del Sur
Pérez Tania Torres Percy
ABSTRACT
An ecotoxicological bioassay was carried out with duckweed (Lemna minor)
with an aquatic sample from the Lurín - Lima river, the tests were carried out
at the Universidad Científica del Sur where it was carried out under
laboratory conditions (temperature 22 ± 2°C; light cold for 7 days) and the
Cita: mmm (2022). Bioensayo results were evaluated with the SPSS and Probit programs to calculate the
ecotoxicologico con la lenteja mean effective concentration (EC50) mmmmmmm finished tomorrow
de agua (lemna minor) en agua
superficiales del Río Lurin. Key words:
South Sustainability, 3(1)
RESUMEN
Se realizo un bioensayo ecotoxicologico con la lenteja de agua (Lemna minor)
con una muestra acuática del río Lurín – Lima, los ensayos se realizaron en la
Universidad Científica del Sur donde se realizo bajo condición de laboratorio
± 2°C; luz fría durante 7 días ) y los resultados
(temperatura 22
fueron evaluados con los programas SPSS y Probit para calcular
la concentración efectiva media (CE50) mmmmmmm mañana
termino
Palabras clave: Lemna minor, bioensay
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Universidad Científica del Sur
.
Introducción recopilada permitirá identificar los efectos
toxicológicos de esta especie, con el fin de ampliar el
Cada año se aplican conjuntamente
conocimiento sobre los aspectos básicos de la especie
aproximadamente millones de toneladas de
y sobre su utilidad en el mejoramiento de la calidad
plaguicidas para el poder de plagas Algunos químicos
ambiental de los ecosistemas acuáticos. La “lenteja
agrícolas persistentes con un insigne factor de
de agua” es utilizada en bioensayos eco toxicológicos
partición alcanzan los cuerpos de fluido y modo
por su alta sensibilidad y simplicidad de uso. Además,
transportados a todos los niveles tróficos.
es empleada para biorremediación de compuestos
Las plantas acuáticas, también conocidas como tóxicos en el agua, por ello, el objetivo de la presente
macrófitas, juegan un papel muy importante en el investigación fue determinar el efecto toxicológico
ecosistema acuático. Proporcionan directa o bajo condiciones de laboratorio.
indirectamente alimento, protección y una gran
cantidad de hábitat para los numerosos organismos Materiales y métodos
de estos ecosistemas. Muchas de estas plantas son Muestra acuática: El área de la toma de muestra es
útiles para el ser humano, ya que se utilizan como en el río Lurín (12°12'50.03"S, 76°52'18.63"O), en el
alimento, como materia prima para la industria y se distrito de Lurín, Provincia de Lima-Perú, cuando el
utilizan en procesos de tratamiento biológico, ya que nivel de agua oscilaba entre los 20 – 30 cm, la zona
pueden absorber parte de las sustancias disueltas, aledaña al río se caracterizó por presentar un
disolverlas y aportar oxígeno a través de la ambiente rocoso de grava mediana.
fotosíntesis. Sin embargo, en algunos cuerpos de
agua artificiales, puede causar problemas, ya que Lugar de Ejecución: El presente trabajo se realizó en
puede impedir el uso humano del agua al impedir su la Facultad de Ciencias Ambientales, Universidad
flujo o tráfico y crear un ambiente propicio para científica del Sur (UCSUR), Villa el Salvador, Lima,
plagas, enfermedades y vectores que afectan la salud Perú.
humana (Cook y Gut 1974).
Organismo bioindicador: La lemna minor se obtuvo
Los macrófitos ocupan diferentes regiones de de un acuario de Chorrillos, en la identificación se
ecosistemas submarinos en el grupo de plantas flotan utilizó propuesta de Daubs, 1965 y Les et al., 2002
y se observan a menudo en lagos poco profundos o clasificación de secciones aceptadas y especies
en áreas de flujo lento en ríos y arroyos, la planta se estudiadas de la familia Lemnaceae (Fig 1).
conoce como Lemna minor, comúnmente conocida
Aclimatación y pruebas ecotoxicologícas: La
como como la lenteja de agua o duckweed (Roldán,
aclimatación se llevó a cabo en el laboratorio de
1992).
Ecotoxicología de la Universidad Científica del Sur,
En el presente trabajo se muestra la aplicación de donde se separó manualmente las lemna minor de la
Lemna minor en aguas del Rio Lurín. La información siguiente manera: se aclimato durante 7 días (168 h)
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y temperatura ambiente (22± 2 °C) con 12 horas de 43° C para posteriormente poder determinar el peso
luz – oscuridad (Tabla 1). seco.
Preparación de Concentraciones : La muestra Determinación de la concentración Efectiva Media
tomada del río Lurín se prepararon en cinco (CE50): La determinación de la CE50 se empleó el
concentraciones sucesivas con un factor de dilución programa computarizado Probit versión 1,5 (Throne
de 0,5 se utilizó agua embotellada Tottus. Las et al., 1995), el cual permite estimar la intensidad
diluciones son 100 % (C5), 50% (C4), 25% (C3), necesaria para afectar al 50% de la lemna minor
12,5%(C2) Y 6,25% (C1) y un control (C0). dentro de un lapso de tiempo determinado (Obispo,
et al., 1981).
Numero de frondas: En la identificación de manera
visual y fotográfica mediante el conteo de las frondas Procesamiento de datos: El análisis estadístico se
al inicio y después de 7 días (168 h). La necrosis realizó mediante el programa estadístico SPPS
(frondas con tejido muerto) y clorosis (frondas versión 21, de los 7 parámetros observados (Numero
amarillas y blancas) fueron identificados con el de hojas, formación de hojas, necrosis, clorosis,
mismo método. ruptura de colonias, peso húmedo y peso seco), se
empleó las pruebas de normalidad con el fin de
Peso húmedo: Se colocaron las muestras en una
conocer su distribución normal y de comprobar si los
estufa (Thermo Electron Corporation) durante 24 h a
datos son pruebas paramétricas o no paramétricas, lo
A B
Figura 1. A) Dibujo lineal detallado de la especie Lemna Minor (Daubs, 1965). B) Identificación y elección de la especie c) Envases con
diluciones de 100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 0% con 10 réplicas de Lemna minor.
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.
Tabla 1. Resumen de condiciones del ensayo con Lemna minor
Tipo de prueba Estática crónica
Duración Siete días (168 h)
Temperatura Ambiente 22 [± 2] °C
Calidad de luz Luz fría en ambiente de laboratorio
Fotoperiodo 12 h luz - 12 h oscuridad
Volumen de cada envase 250 mL
Número de colonias por envase 10
Numero de colonias por concentración 40
Edad de los organismos Colonia de dos frondas
DBCA 6x4
Concentraciones de la prueba 0%,6,25%, 12,5%, 25%, 50%, 100%
Agua de control y dilución Agua embotellada
Régimen de alimentación No requiere alimentación
Parámetros medidos pH, T°, CE
Número total de frondas,
Formación de hojas u hojitas nuevas,
necrosis,
clorosis,
ruptura de colonias,
peso húmedo,
peso seco
Se observó que el parámetro de necrosis (Sig.=0.000)
cual si se presenta una distribución normal se paso a
fue el único que no siguió una distribución de datos
realizar ANOVA para ver las variables relacionadas, en
normal. Los demás parámetros analizado si
caso contrario se realizo las pruebas de Kruskall Wallis
mostraron una distribución de datos normal.
y Welch Brown -Forsythe.
Tabla 3. Nivel de significancia en la prueba de homogeneidad
Resultados de varianzas en Lemna minor.
Parámetros Sig
Validación de ensayos: Para el análisis de los efectos
Número de hojas ,625
de agua contaminada a diferentes concentraciones
Formación de hojas ,694
en Lemna minor se realizó la prueba de normalidad
Clorosis ,713
Shapiro Wilk en los siguientes parámetros.
Ruptura de Colonias ,246
Tabla 2. Nivel de significancia en la prueba de normalidad de Peso Húmedo ,007*
Shapiro-Wilk en Lemna minor.
Peso seco ,002*
Parámetros Sig
*Sig < 0.05 à Hay diferencia significativa
Número de hojas ,079
Formación de hojas ,571 En el análisis de homogeneidad de varianzas para
Necrosis ,000* Lemna minor, los parámetros Peso Húmedo
Clorosis ,184
Ruptura de Colonias ,164 (Sig.=0.007) y Peso Seco (Sig.=0.002) presentaron
Peso Húmedo ,840 varianzas de datos diferente, mientras que los demás
Peso seco ,321 parámetros presentaron varianza de datos similares.
*Sig < 0.05 à No se distribuye de manera normal
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.
Tabla 4. Nivel de significancia en la prueba ANOVA en Lemna Para los parámetros que presentaron varianzas
minor.
diferentes se les aplico las pruebas robustas Welch y
Parámetros Sig
Brown-Forsythe.
Número de hojas ,591
Tabla 6. Nivel de significancia en las pruebas robustas Welch y
Formación de hojas ,622 Brown-Forsythe en Lemna minor.
Clorosis ,446
Parámetros Prueba Welch Prueba Brown-
Ruptura de Colonias ,706 Forsythe
Peso Húmedo ,746 Peso Húmedo ,544 ,745
Peso seco ,424 ,804
Peso seco ,809
*Sig < 0.05 à Hay diferencia significativa
*Sig < 0.05 à Hay diferencia significativa
Los resultados indican que los parámetros de Peso
Para los parámetros que tuvieron una distribución
Húmedo y Peso seco no presentaron diferencia
normal de datos se aplicó la prueba ANOVA. No hubo
significativa en ninguna de las concentraciones.
diferencia significativa para las distintas
concentraciones de agua contaminada, en Tabla 7. Nivel de significancia en la prueba Kruskal-Wallis en
Lemna minor.
parámetros analizados de Lemna minor.
Parámetros Sig
Los parámetros que presentaron varianzas similares
Necrosis ,238
se les aplicó las pruebas de comparación múltiple
*Sig < 0.05 à Hay diferencia significativa
Tukey y Dunnett para Lemna minor.
Tabla 5. Nivel de significancia en las pruebas de comparaciones múltiple Tukey y Dunnett en Lemna minor.
Comparación Prueba Tukey Prueba Dunnett
de Concentración NH FH Clorosis RC NH FH Clorosis RC
0% 6.25% ,571 1,000 1,000 ,999 ,355 ,998 1,000 ,993
0% 12.5% ,744 1,000 ,998 ,999 ,529 1,000 ,993 ,993
0% 25% ,991 ,901 ,745 ,950 ,964 ,754 ,531 ,853
0% 50% ,996 ,974 ,604 ,979 ,983 ,914 ,385 ,926
0% 100% ,991 ,997 ,745 ,999 ,964 ,989 ,531 ,993
*Sig < 0.05 à Hay diferencia significativa
NH = Número de hojas, FH = Formación de hojas, RC Para el parámetro de necrosis se aplicó la prueba no
= Ruptura de colonias. paramétrica Kruskal-Wallis. Se observo que no hubo
Se observó que no hubo diferencia significativa en la diferencia significativa (Sig.= 0.238) entre las distintas
comparación de las concentraciones con respecto al concentraciones de agua contaminada para Lemna
control para ningún parámetro. minor
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.
Tabla 8. Calculo
N° de hojas NECROSIS PROBIT
DOSIS
CONC.
R1 R2 R3 R4 R1 R2 R3 R4 LOG. R1 R2 R3 R4
14 10 10 15 0 3 0 0 0 0 0 4.47 0 0
16 20 18 12 2 3 0 0 1 0 3.85 3.96 0 0
10 24 14 15 6 0 0 0 2 0.30 5.25 0 0 0
15 17 11 12 1 1 1 1 3 0.47 3.49 3.43 3.66 3.61
13 18 10 13 1 0 0 0 4 0.60 3.57 0 0 0
14 17 11 13 2 1 2 4 5 0.69 3.93 3.43 4.09 4.49
En esta tabla se puede observar la dosis logarítmica, una ecuación (y=mx+b) y es con esta fórmula que
el cual fue calculada para de esta manera hallar el finalmente se halló el CE 50.
método Probit, este consiste en ajustar los datos o
Discusión
variables sobre la toxicidad o que tanto afectó el
La L. minor es una pequeña macrófita ampliamente
contaminante, en este caso se calculó que tanto
distribuida en ambientes dulceacuícolas en zonas
afecto el contaminante a las hojas de la Lemna Minor;
tropicales y temperadas (APHA 1995). Debido a que
el método probit no trabaja con los números 0, por lo
presenta un crecimiento más rápido en comparación
cual solo se tomó en consideración aquellos números
con otras plantas fanerógamas y presenta un rol
mayores a este; se aplicó la siguiente formula:
fundamental en los ecosistemas acuáticos como
Probit = (5+INV.NORM. ESTAND(N° hojas con productora de oxígeno, en los ciclos biogeoquímicos,
necrosis / N° hojas en total)) en el control de la calidad del agua, en la
Tabla 8. Resultados de CE 50 por cada replica
R1 R2 R3 R4
y=mx+b y = -0.691x + 4.309 y = -1.2451x + 4.1935 y = 1.9235x + 2.7471 y = 3.9693x + 1.7232
m -0.691 -1.245 1.924 3.969
b 4.309 4.194 2.747 1.723
y 50 50 50 50
CE 50 x=(y-b)/m -66.123 -36.789 24.566 12.163
Una vez hallado los valores en cada replica en la tabla estabilización de nutrientes, en ser un soporte físico
anterior y la dosis logarítmica, se procedió a hallar el para una variedad de invertebrados y en proveer
CE 50 para lo cual se hizo la intersección de la dosis hábitats para la vida acuática, principalmente peces
logarítmica con los valores de Probit, de lo cual nos da (Lewis,1995).
Para realizar el análisis estadístico de los resultados
se utilizó el programa estadístico SPSS Statistics 25,
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donde se emplearon diversas pruebas como petróleo crudo en especies acuáticas (Caja et al.,
normalidad, homogeneidad, ANOVA, comparaciones 2021)
múltiples Tukey y Dunnett, pruebas robustas Welch y
Referencia Bibliográficas
Brown-Forsythe y la prueba de Kruskal Wallis con la
Caja-Molina, A. V., & Iannacone, J. (2021).
finalidad de evaluar 7 parámetros (número de hojas,
Evaluación del riesgo ambiental por
formación de hojas, necrosis, clorosis, ruptura de
petróleo crudo en las especies acuáticas
colonias, peso húmedo y peso seco).
Lemna minor, Daphnia magna y Danio rerio.
En los resultados obtenidos de la prueba ANOVA de Revista de la Academia Colombiana de
los números de hojas, formación de hojas, clorosis y Ciencias Exactas, Físicas y Naturales,
ruptura de colonias no hubo diferencias significativas 45(176), 777-794.
en la comparación de las concentraciones con Daubs, H. E. (1965). Una monografia de Lemnaceae.
respecto al control para ningún parámetro, indicando Parasitology of Fishes., 24(1905), 1–21.
según (Artetxe et al., 2002) no hay cantidad https://sci-hub.tw/10.1002/iroh.19620470121
significativas de metales pesados en el rio donde se
Les, D. H., Crawford, D. J., Landolt, E., Gabel, J. D., &
sacaron las muestras, ya que por parte de la clorosis
Kimball, R. T. (2002). Phylogeny and systematics
(despigmentación) de la L. minor son sensibles a estos
of Lemnaceae, the duckweed family. Systematic
metales con tan solo 7 días de exposición (Song,
Botany, 27(2), 221–240.
2016). Además, el rio no presenta altas
concentraciones de pesticidas, ya que la formación de Obispo, WE y Perry, RL (1981). Desarrollo y
hojas y formación de clorosis se hubieran inhibido por evaluación de una prueba de inhibición del
24 horas a 96 horas de exposición de contaminante crecimiento de flujo continuo con lenteja de
(Iannacone at al., 2011). agua (Lemna minor) (págs. 421-435). ASTM
Internacional.
En cuanto al peso húmedo y el peso seco ambos
presentaron varianzas de datos diferentes por lo que Throne, J. E., Weaver, D. K., Chew, V., & Baker, J. E.
se aplicaron pruebas robustas Welch y Brown- (1995). Probit Analysis of Correlated Data:
Forsythe en donde no se encontraron diferencias Multiple Observations Over Time at One
significativas como en la investigación de Caja que Concentration. Journal of Economic
tampoco obtuvo diferencias significativas en su Entomology, 88(5), 1510–1512.
investigación de evaluación del riesgo ambiental por https://doi.org/10.1093/jee/88.5.1510
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