AUMENTO DEL MICROSCOPIO
El aumento de un microscopio es una de sus características esenciales que define su calidad y el
tipo de muestras que se podrán observar. El aumento total de un microscopio indica en qué medida
este puede aumentar la imagen de la muestra observada.
En el caso del microscopio óptico compuesto, el aumento de la muestra se produce en dos etapas,
primero en las lentes del objetivo y a continuación en las lentes del ocular. De este modo, es
necesario conocer el aumento de estas dos partes del microscopio para conocer el aumento total
que se obtiene. El aumento total del microscopio se puede calcular fácilmente multiplicando el
aumento del objetivo por el aumento del ocular:
Aumento microscopio = Aumento objetivo × Aumento ocular
Por ejemplo combinando un objetivo con un aumento de 60x con un ocular de 10x se obtiene un
aumento total de 600x.
Este proceso de aumento se puede explicar en base a la naturaleza de las lentes, que no son más
que cuerpos con la capacidad de desviar los rayos de luz. En el caso de las lentes convergentes,
los rayos que inciden de forma paralela son desviados de modo que convergen en un punto
llamada foco.
Rayos de luz a través de una lente convergente
Al mirar una objeto a través de este tipo de lentes, este efecto de convergencia genera una imagen
virtual de manera que el objeto es observado a mayor tamaño que el original.
Imagen virtual aumentada obtenida mediante una lente convergente
El principio óptico de un microscopio se basa en aplicar este proceso con dos lentes. La imagen
intermedia que se genera entre el objetivo y el ocular recibe el nombre de imagen real. La siguiente
figura muestra de forma esquemática como se genera la imagen virtual de la muestra que es
observada a través del ocular del microscopio.
Esquema de funcionamiento de un microscopio considerando una lente objetivo y una lente ocular
Aunque la figura anterior muestra solo dos lentes, los microscopios reales utilizan siempre un
mayor número de lentes. Estas otras lentes se utilizan para corregir aberraciones ópticas y así
obtener una imagen más nítida.
Aumento útil y aumento vacío
El aumento de una imagen debe ir siempre asociado con una buena resolución, de lo contrario
obtenemos una imagen aumentada en la que no se pueden apreciar los detalles. Esto ocurre si se
combinan distintas lentes con la intención obtener una imagen de gran aumento. Llega un punto en
que se aumenta la imagen pero no la resolución, de modo que la imagen aumentada no añade
nueva información. Sería equivalente a hacer zoom en una imagen digital, a partir de un momento
la imagen se ve pixelada y al seguir aumentándola solo se ven los pixeles a mayor tamaño.
La resolución obtenida mediante una lente viene definida por su apertura numérica. En un
microscopio, tanto el aumento como la apertura numérica de los objetivos están indicados en la
parte lateral de cada objetivo. Para observar una muestra con buena resolución se debe observar
con un aumento que esté entre 500 y 1000 veces la apertura numérica del objetivo. Este rango de
aumento se conoce como aumento útil. Si se sigue aumentando la imagen por encima de este
rango la imagen aparecerá borrosa sin ganancia de resolución. En este caso el aumento se conoce
como aumento vacío.
Por ejemplo, si un objetivo tiene una apertura numérica de 0.70 deberíamos observar la muestra
con un aumento total de entre 350 (0.70 x 500) y 700 (0.70 x 1000).
La máxima apertura numérica de los objetivos está limitada a valores de aproximadamente 1.50
(utilizando objetivos de inmersión). Por este motivo, el máximo aumento útil que se puede obtener
con un microscopio óptico es 1500 (1.50 x 1000). Este es un dato importante porque existen
microscopios que se anuncian con un aumento de 2000x. Hay que tener en cuenta que cualquier
valor de aumento superior a 1500 se refiere a aumento vacío y es por lo tanto inútil en cuanto a la
información que aporta.
Indicación de aumento y apertura numérica en un objetivo (Fuente: Zeiss Microscopy)
Tabla de aumentos
La siguiente tabla muestra el aumento total de un microscopio para distintos valores estándar del
aumento de los objetivos y del ocular. Los valores que corresponden a un aumento útil están
resaltados en color verde, mientras que la zona de aumento vacío está indicada en color rojo. Solo
se indican aquellos aumentos contenidos entre 500 y 1000 veces la apertura numérica. El valor
entre paréntesis en la columna de los objetivos es la apertura numérica habitual correspondiente al
número de aumentos.
Tabla de aumento útil y aumento vacío habitual en un microscopio óptico
Aumento del microscopio electrónico
Debido a la difracción de la luz, los microscopios ópticos están limitados a un aumento máximo de
1500x. En términos físicos esta limitación es una consecuencia de la longitud de onda de la luz. En
el caso de los microscopios electrónicos, la muestra no es iluminada con luz sino con electrones.
Este permite iluminar la muestra con longitudes de onda 100000 veces más pequeñas que en el
caso del microscopio óptico. Esto se traduce en unos aumentos muy superiores que pueden llegar
a 10000000x.
Resumen
El aumento total de un microscopio se calcula multiplicando el aumento del objetivo por el
aumento del ocular.
Debido a la naturaleza de la luz y de las lentes, el máximo aumento útil que se puede
conseguir con un microscopio óptico está alrededor de 1500x.
Las combinaciones de objetivo y ocular que generen en aumento superior a 1500x
resultarán en un aumento vacío, es decir, sin ganancia de resolución y, por lo tanto, sin
añadir detalles a la imagen.
Para un uso óptimo, el aumento total (objetivo + ocular) debería estar comprendido entre
500 y 1000 veces el valor de la apertura numérica del objetivo.
La apertura numérica de un objetivo tiene una relación proporcional con su aumento.
Los microscopios electrónicos iluminan las muestras con un haz de electrones en lugar de
con luz. De este modo, se pueden conseguir aumentos de hasta 10000000x.
PARTES del MICROSCOPIO OPTICO
Oculares. Son las lentes que forman la imagen que observaremos con nuestros ojos (Figura 1).
Todos los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para cada ojo. Por eso a los
microscopios actuales se les llama binoculares. Los primeros microscopios eran monoculares, es
decir, poseían un solo ocular. Hay que tener en cuenta que en los microscopios más avanzados
tanto el objetivo como el ocular suelen estar compuestos por varias lentes. Al menos uno de los
oculares puede regularse para alejar o acercar la lente al objetivo, permitiendo ajustar el enfoque
a las condiciones de visión, dioptrías, de cada observador.
Objetivos. Los objetivos son las lentes que reciben la lux directamente tras atravesar la sección
histológica y quizá sean los elementos más importantes del microscopio. Hoy en día los
microscopios ópticos poseen un tambor o revólver donde se encuentran varios objetivos. Cada uno
de ellos posee lentes que permiten diferentes aumentos. Las magnificaciones de los objetivos más
usados suelen ser de 4x, 10x, 20x, 40x y 100x. Rotando el revólver se puede seleccionar el
objetivo y por tanto el aumento al que queremos observar la preparación.
Cuando se usan objetivos de 100 aumentos (100x) es necesario emplear un líquido
denominado aceite de inmersión , que se añade entre el objetivo y la muestra. Esto es debido a
que la refracción de la luz es alta en el aire y provoca alteraciones en la imagen que se manifiestan
cuando se usan objetivos con esta capacidad de aumento. El aceite de inmersión reduce
enormemente esta refracción permitiendo imágenes mucho más nítidas.
Platina. Es la plataforma donde se coloca el portaobjetos con nuestro tejido. Posee un dispositivo
para sujetar el portaobjetos, el cual se puede desplazar en el plano de la platina, movimiento
controlado manualmente.
Condensador. Es un dispositivo con una lente que concentra y focaliza la luz proveniente de la
fuente sobre la sección de tejido.
Diafragma. Se sitúa entre la fuente luminosa y el condensador. Permite aumentar el contraste de
la muestra y la profundidad de campo, es decir, el espesor de la muestra que está enfocado.
Lámpara luminosa. Es la que proporciona la luz que atraviesa la sección de tejido. Inicialmente se
usaba la luz natural, la cual se podía concentrar en la sección de tejido mediante espejos
cóncavos. Actualmente se usa una lámpara cuyo haz de luz atraviesa el diafragma, el
condensador, la muestra, y tras ello penetra por el objetivo y atraviesa los oculares hasta nuestros
ojos (Figura 3). La intensidad de la fuente luminosa se puede regular mediante un reostato.
Macrométrico y micrométrico. El enfoque de la muestra se consigue variando la distancia de la
muestra a la lente del objetivo. Esta distancia depende de los aumentos que produzca el objetivo,
mayor distancia cuanto menores aumentos, y del tipo de objetivo. La distancia se controla mediante
dos ruedas denominadas macrométrico y micrométrico, respectivamente. La primera permite
movimientos ascendentes y descendentes amplios de la platina y la segunda ajustes finos.
