REACCIONES Y TÉCNICAS DE Palabras Clave : Aglutinación, técnicas
INMUNOAGLUTINACIÓN inmunológicas, reacción, grupos
sanguíneos.
UNIVERSIDAD DE SUCRE
FACULTAD DE EDUCACIÓN Y ABSTRACT
CIENCIAS The laboratory practice on
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA Y immunoagglutination reactions and
QUÍMICA techniques was carried out at the facilities
BIOLOGÍA of the University of Sucre, on the health
CHIMA . A sciences campus. It should be noted that
[email protected] agglutination and precipitation reactions
are the basis of most immunological
techniques, which is why it stands out in
RESUMEN its principle based on the flu-antibody
La práctica de laboratorio sobre reacciones reaction. This reaction has been used in a
y técnicas de inmunoaglutinación fue wide field due to the ease with which it is
realizada en las instalaciones de la carried out and its high level of
universidad de Sucre , en el campus detectability, both directly and indirectly.
ciencias de la salud. Cabe resaltar que las Immunoagglutination does not allow
reacciones de aglutinación y de quantification in an exact way, the results
precipitación son la base de la mayor parte can be expressed semiquantitatively based
de las técnicas inmunológicas, por el cual on the greatest dilution of the serum that
resalta en su principio basado en la allows observing the agglutination. The
reacción antígeno-anticuerpo. Esta practice was based on two moments; in
reacción se ha usado en un amplio campo which the first one was carried out the
por la facilidad con la que se lleva a cabo y microtechnique for anti-A and anti-B
su alto nivel de detectabilidad ya sea de headline tests in human serum and the
forma directa e indirecta . La second consisted of ABO and Rh typing of
inmunoaglutinación no permite la human erythrocytes with different types of
cuantificación de una manera exacta de blood group samples donated by students.
anticuerpos, los resultados pueden
expresarse semicuantitativamente en Keywords: Agglutination, immunological
función de la dilución mayor del suero que techniques, reaction, blood groups.
permite observar el aglutinado.La practica
se fundamentó en dos momentos ; en el INTRODUCCIÓN
que el primero se realizó la microtécnica La inmunoaglutinación, es conocida como
para titular anticuerpos anti – A y anti – B una reacción que se presenta cuando se
en suero humano y el segundo consto de combinan antígenos aglutinógenos con sus
Tipificación ABO y Rh de eritrocitos anticuerpos específicos aglutininas
humanos con diferentes tipos de muestras .Conociendo la temática, es indispensable
de grupos sanguíneos donadas por resaltar que un antígeno es una sustancia
estudiantes. de alto peso molecular, con cierta rigidez
estructural y que tiene la particularidad de
ser parcialmente “metabolizado” por
células especializadas llamadas MATERIALES Y MÉTODOS
macrófagos, por lo tanto es capaz de ★ Sueros hemoclasificadores anti –
generar una respuesta inmune en un A, anti – B y anti – D
organismo que la detecte como un agente ★ Suero problema
extraño. Mientras que un ★ Sangres humanas de los tipos A y
anticuerpo es una glicoproteína, producida B citrada o heparinizada
por linfocitos B activados, llamados ★ Placa takashi
células plasmáticas, como respuesta a la ★ Tubos de centrífuga
presencia de un antígeno en el organismo y ★ Tubos de ensayo
★ Pipetas
que a su vez los anticuerpos pueden ser
★ Láminas de vidrio o portaobjetos
asociados a producidos por líneas celulares
14
in vitro, como es el caso de la producción
★ Lancetas desechables estériles (o
de anticuerpos monoclonales(González agujas estériles)
A.1999). A su vez los anticuerpos ★ Aplicadores
bivalentes (IgG) o pentavalentes (IgM), y ★ Algodón
se combina cada extremidad de la ★ Alcohol al 70 %
molécula anticuerpo (región Fab) con un ★ Guantes
sitio antigénico idéntico portado por ★ Centrífugo
partículas distintas quedan asociadas por
partículas en el retículo , cabe mencionar
que la aglutinación de los antígenos
nativos insolubles o de las partículas
recubiertas por el antígeno puede evaluarse
a simple vista con o sin la ayuda del
microscopio, lo que una de las ventajas de
las reacciones de aglutinación están su alto
grado de sensibilidad y la enorme variedad
de substancias identificables a través del
uso de partículas que están recubiertas por
antígeno o por anticuerpo.(Perlmann, P.
1971) Figura 1:elemento portaobjeto,sueros entre
Ahora bien en el caso de la otros.
hemoclasificación , este es un sistema
usado para agrupar la sangre de acuerdo METODOLOGÍA
con la presencia o ausencia de antígenos Para la realización de la práctica, en
presentes en la superficie de los glóbulos primera instancia se tomaron varias
rojos, en este caso sistema ABO además muestras de sangre proporcionadas por
del factor Rh. Los objetivos de esta alumnos con diferentes grupos sanguíneos
investigación son reconocer las reacciones tales como; A, B, O, AB luego se llevaron
y técnicas de la aglutinación ( a la centrifuga por 10 minutos a 2500 rpm
inmunoaglutinación ) por medio del uso de para proceder a retirar el plasma con una
diferentes muestras de grupos sanguíneos. pipeta y asegurándonos de que su
tonalidad sea incolora y transparente. en la presencia (+) o ausencia (-) de
Posteriormente , se procedió a preparar aglutinación con los sueros
suspensiones de eritrocitos A y B al 2 % hemoclasificadores( ver figura 2 de los
para luego preparar por duplicado dos resultados).
series de diluciones dobles de un suero RESULTADOS
problema . Seguidamente se añadieron 50
Realizado cada procedimiento con las
uL de suero fisiológico (SF) a partir del
medidas de seguridad requeridas, fueron
segundo pozo en todos los pozos de 4
obtenidos los siguientes resultados de
hileras con la pipeta desechando 50 uL del
hemoaglutinación directa e indirecta
último pozo. Seguidamente, se prepararon
respectivamente.
por duplicado dos controles con 50 uL de
SF y 50 uL de cada una de las figura 2:Hemoaglutinación directa(a)
suspensiones (control de eritrocitos del aglutinación de los eritrocitos del grupo
grupo A y control de eritrocito del grupo B O por antisueros antiA y antiB; (b)
para proceder a añadir a todos los pozos de aglutinación de los eritrocitos del grupo
dos hileras (E y F ) 50 uL de la suspensión A por antisueros antiA; (c) no hubo
de eritrocitos del grupo A y a todos los aglutinación de los eritrocitos del grupo
pozos de las otras dos hileras (G y H), 50 B por antisueros anti A;(d)
uL de la suspensión de eritrocitos del aglutinación de los eritrocitos del grupo
grupo B, luego se mezclaron los inmuno AB por antisueros antiA y antiB.
reactantes dotándola varias veces sobre el
mesón por 1 minuto, pasado el tiempo se
cubrió dejándola en reposo a temperatura
ambiente entre 40-45 minutos para la
observación pertinente ( ver fig 3 de los
resultados obtenidos). Para el segundo
procedimiento referente a la tipificación de
eritrocitos ABO y RH , se Limpio la yema figura 3 hemoaglutinación indirecta
del dedo medio de la mano con alcohol , (no se observó aglutinación)
seguidamente con una lanceta se pinchó el
dedo desechando la primera gota de
sangre. Posteriormente , se dejó caer 3
gotas de sangre en un portaobjetos
separadas una de la otra aproximadamente
2 cm una de la otra,luego se le fue añadido
1 gota de cada uno de los sueros ANÁLISIS
tipificadores anti A y anti B monoclonal en Las técnicas de aglutinación son
las respectivas gotas de sangre para su determinadas de dos tipos en las que se
homogeneización .El proceso se repitió 3 reconocen como directas y por otro lado
veces de las cuatro muestras,; una de ellas las indirectas. La primera técnica fue el
se tomó de la extracción de sangre suero hemoclasificador.; el análisis que
realizada del primer procedimiento tipo utilizan estos reactivos de grupo sanguíneo
AB para la observación de los aglutinados se basa en el principio de aglutinación
determinando el grupo sanguíneo basado directa. La incubación de los eritrocitos
que se analizan con Anti-A, Anti-B o Anti- anteriores el factor (+ y -) no fue posible
A,B dará lugar a una reacción antígeno- identificarlo por falta de reactivos.técnica
anticuerpo específica si el antígeno A o B indirecta, aglutinación indirecta más
correspondiente está presente en los ampliamente empleadas se basan en la
glóbulos rojos. La detección visible de sensibilización de la partícula inerte con el
esta reacción Ag, por lo que resultan útiles para la
se pone de manifiesto por hemaglutinación detección y titulación de Ac en distintos
y la ausencia de aglutinación indica un fluidos biológicos. En pocas palabras se
resultado negativo por lo que demuestra la debe a que en exceso de Ac se forman
ausencia del antígeno correspondiente preferentemente complejos Ag-Ac
dentro de las limitaciones aceptadas del solubles En este caso, el título de Ac sigue
procedimiento de análisis.Por otra parte, siendo la máxima dilución de suero que
cabe mencionar que los reactivos produce aglutinación visible.
ocasionan una aglutinación directa
(agrupamiento)de los glóbulos rojos CONCLUSIONES
examinados portadores del antígeno ABO ● Para concluir, se puede resaltar la
correspondiente. La no aglutinación es importancia de las reacciones
indicadora de la ausencia del antígeno de aglutinación y de
ABO correspondiente: Anti-A, Anti-B o precipitación como base de la
Anti-A,B. mayor parte de las técnicas
En la fig 2(b) de referente del grupo inmunológicas y su principio
sanguíneo A+ utilizando suero que se basa en la reacción
hemoclasificador se observó una antígeno-anticuerpo.
aglutinación en la muestra determinando la ● Una de las grandes ventajas de las
muestra sanguínea , en la detección del reacciones de aglutinación es la de
grupo sanguíneo B+ con el uso de suero su alto grado de sensibilidad y la
hemoclasificador se observó una enorme variedad de substancias
aglutinación en determinando la muestra identificables a través del uso
sanguínea. de partículas que están recubiertas
En el portaobjeto (a) se utilizaron los por antígeno o por un anticuerpo.
sueros en una muestra O, lo cual no se
observó aglutinación alguna ya que está; BIBLIOGRAFÍA
en su membrana no presentan los ● Radillo González A. Medicina
antígenos correspondientes, en el Transfusional. Editorial Prado.
portaobjeto (c) se observó una México.1999.
hemoaglutinación con el suero anti B, lo ● Inmunología Básica y Clínica,
que demuestra que este individuo tenía autor Daniel P: Stites y H. Hugh
como factor RH B. En el portaobjetos (b) Fuden 9ª Edición 1998
se observó una hemoaglutinación con el ● Raichle TL, Paranto ME.
suero anti A por lo cual el paciente es de Compatibility testing. En:
factor RH A. Por último en el portaobjetos Hardening MD. Modern blood
(d) se obtuvo una aglutinación parcial para banking and transfusión
los dos sueros lo que indica que el paciente practices. Philadelphia:FA
era factor RH AB. En las muestras Davis; 1994.p.256-75.
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=AOvVaw37s0VToIasYYdf21pB
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