UNIVERSIDAD TÉCNICA
PARTICULAR DE LOJA
La Universidad Católica de Loja
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y SIEMBRA DE
MICROORGANISMOS EN MEDIOS SELECTIVOS
Sigcho Wagner, Samaniego Armijos Erika Michelle
[email protected] RESUMEN
La presente practica se realizó en el laboratorio de Microbiología de Alimentos, en el
cual se efectuó la preparación de medios de cultivo específico para dos tipos de
bacterias que son: Staphylococcus Aureus y E. Coli. Para ello cada uno se manejó con
un medio de cultivo distinto y específico para el desarrollo del microorganismo. Por
ello requieren distintas especificaciones para la preparación de los dos medios de
cultivo a ocupar.
Para el cultivo de la bacteria E. Coli utilizamos el agar rojo violeta o agar glucosa bilis
rojo violeta es el mayormente utilizado para la determinación y recuento de
microorganismos de la familia Enterobacteriaceae específicamente.
Mientras que para la bacteria Sthapylococcus Aureus se requirió ciertos requisitos
para la elaboración de los medios de cultivo, en consecuencia que se ocupó el agar
Byparken, mas una solución enriquecida de Telurito de huevo. Haciendo que este agar
más el Telurito de huevo sea un medio propio selectivo para la identificación de
Staphylococcus coagulasa positivo.
Por consiguiente, se utilizó una técnica de estriado en placa Petri con medios sólidos,
esta técnica se basa en utilizar una aza previamente esteril, donde implica una sola
inoculación de una sección de la placa Petri y a continuación disminuir la colonia
arrastrando microorganismos de la sección inicial de dos a tres secciones.
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Como último paso tenemos la incubación de las bacterias en caja Petri por medio
solido donde se procederá a colocarlas en la estufa, después de su correcto etiquetado
y a sus temperaturas correctas para su correcto desarrollo en el tiempo establecido.
INTRODUCCIÓN
Medios De Cultivo
Agar Rojo Violeta o Bilis Glucosa
El agar glucosa bilis rojo violeta es utilizado para la determinación y recuento de
microorganismos de la familia Entero bacterias en alimentos y otros productos.
Preparación:
Suspender 41,5 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada. Mezclar
vigorosamente. Calentar con agitación frecuente y hervir durante un minuto para su completa
disolución. Este medio no debe esterilizarse en autoclave. Distribuir y enfriar a temperatura
ambiente antes de su utilización.
El Digerido Enzimático de Gelatina es una fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y
minerales en el Agar Bilis Rojo Violeta. El Extracto de Levadura provee vitaminas del
complejo B que estimulan el crecimiento bacteriano. La Mezcla de Sales Biliares y Cristal
Violeta inhiben la mayoría de las bacterias Gram positivas. (Manual DifcoT)
Agar Byparken más Telurito de Huevo.
Medio de alta especificidad diagnóstica, selectivo y diferencial para el aislamiento y
recuento de estafilococos coagulasa positiva en alimentos y otros materiales de
importancia sanitaria.
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Preparación:
Suspender 60 g del polvo en 940 ml de agua purificada. Dejar en reposo 5 a 10
minutos. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante 1 minuto, hasta disolución
total. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante
15 minutos. Enfriar a 45°-50°C y agregar 50 ml de emulsión de yema de huevo y 10
ml de la solución de telurito (Emulsión Yema de Huevo con Telurito). Homogeneizar
y distribuir en placas de Petri estériles.
Medio altamente nutritivo, en el cual la peptona de caseína y el extracto de carne
constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de levadura aporta vitaminas
del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos.
El agar es el agente solidificante. Permite el crecimiento selectivo de estafilococos ya
que el telurito de potasio y el cloruro de litio inhiben el desarrollo de la flora
acompañante presente en la muestra. La yema de huevo permite demostrar la
actividad lecitinásica de los microorganismos. (European Pharmacopoeia 6.0, volume 1.
2007)
Método de Estriado:
Estriar para aislar implica una sola inoculación de una sección de la placa de Petri y a
continuación, disminuir la colonia arrastrando microorganismos de la sección inicial
de dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la población de
microorganismos. Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las
bacterias, los bacteriólogos también utilizan este método para aislar una línea de
bacterias que nacen de un solo progenitor.
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Estriado por cuadrantes:
Este es también un método de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro
secciones en lugar de tres. Divide la parte inferior de la placa de Petri en cuatro partes
iguales con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos básicos de estriado
para inocular el primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las agujas del reloj,
llevando los microorganismos de un cuadrante a otro, como lo hiciste con el método
del estratificado en T y calentando el asa antes de inocular el siguiente cuadrante.
Calienta el asa y barre en forma de S desde el primero hasta el cuadrante adyacente.
(Microbiología Médica, 2010)
OBJETIVOS
• Preparar medios de cultivo líquidos y sólidos.
• Aplicación de fundamentos de sembrío de microorganismos.
• Desarrollo del método de estriado.
• Cultivo de microorganismos en medios selectivos.
MATERIALES Y REACTIVOS
Cajas de cultivo de 10ml Mechero Bunsen
Probeta Espátula
Mechero Autoclave
Matraces Manta de calentamiento
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Agar rojo bilis violeta Telurito de huevo
Agar Byparken Agua destilada
METODOLOGÍA
Para la presente practica se utilizo el Agar Plate Count, Para ello se utilizó la balanza
analítica y se procedió a pesar 5,8g del agar, posterior a ello se coloco 140ml de agua
destilada y se puso en un recipiente de vidrio para ser homogenizado, se agito y se ubicó
sobre la manta de calentamiento hasta llegar al punto de ebullición, una vez que obtuvimos la
homogenización del agar se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura aproximada de 25ºC
y finalmente se procedió a distribuir 25ml en cada caja Petri, cabe señalar que para la
distribución del agar se debe prender los mecheros bunsen y esterilizar con alcohol el espacio
que será utilizado para el procedimiento mencionado.
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Mediante la presente practica se logro conocer el procedimiento necesario para la
elaboración de medios de cultivo, así mismo se identifico los diferentes tipos de agares
(básicos, diferenciales y selectivos) los cuales nos ayudaran al estudio de los
microorganismos presentes en los alimentos.
Se recomienda tener una correcta manipulación de los equipos del laboratorio y tomar en
cuenta las condiciones generales que se indican en las etiquetas para la preparación de los
medios de cultivo.
BIBLIOGRAFÍA
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5. H. Benson. 1990
Microbiological Applications. A
laboratory Manual in General
Microbiology WCB
Wm.C.Brown Publishers
ANEXOS
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Figura 1. Método de Estriado.
Figura 2. Homogeneización de Figura 3. distribución del agar en
medios de cultivo. cajas Petri.
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Figura 4. Siembra de E. Coli. En Figura 5. Siembra de S. Aureus. En
medio sólido específico (agar rojo medio sólido específico (agar
violeta). Byparken más telurito de huevo).
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