Levaduras
- La levadura número 1 de importancia clínica en Chile es Candida.
Muestra:
- 2 tórulas en NaCl: una para cultivo y otra para examen directo
- Si llega una tórula seca al laboratorio se debe rechazar.
- Puede ser torula oral o vaginal.
En muestras de hemocultivo o secreciones vaginales (candidiasis vulvovaginal) se puede hacer gram → si se observan hifa
se debe hacer otra tinción de gram modificando el tiempo de violeta de metilo y se decolora más tiempo con acetona
éter→ se pueden observar si hay tabiques o no.
En torula oral es mejor examen directo
Es común la candidiasis oral en pacientes oncológicos.
Examen directo → se hace con KOH 20% + tinta
- Se observan levaduras y blastoconidios
- Se informa como→ “Presencia de levaduras con o sin
pseudohifas (estructuras), blastoconidios”.
- No todas las levaduras producen pseudohifas como las C.
glabrata y C. auris.
Cultivo
- Chromagar → Siempre que sospeche de levadura debo sembrar aqui → se incuba a
25-28°C y se lee a las 48 horas.
- Las levaduras se identifican por asimilación de carbohidratos.
- Microcultivo de levaduras → se hace en agar arroz, se le agrega Twin 80, se realizan
3 estrias en el agar y se coloca un cubreobjetos encima → se observa 40x → se
pueden observar artroconidios, blastoconidios, clamidoconidios y pseudohifas.
- Algunas veces los equipos automatizados dan % de especies→ ahí es importante
poder hacer el microcultivo de levaduras para identificar especies.
→ Se utilizan metodos moleculares para diferenciar especies de los distintos complejos.
Por lo general antes se utilizaba en los laboratorios la prueba del tubo germinativo para diagnosticar C. albicans, sin
embargo C. tropicalis y C. dubliniensis también producen el tubo germinativo. Se deja la muestra en plasma de conejo.
Las levaduras se pueden sembrar en chromagar→ 24 horas ya crece y a las 48 horas se puede leer.
- Verde→ Candida complejo Albicans: C. albicans, C. dubliniensis, C. africana
- Azul→ Candida tropicalis.
- Rosado, blanco o lila→ el resto de las levaduras.
- Naranjo→ Rhodotorulla→ es una levadura parte de la microbiota pero puede producir cuadros → hemocultivo y
LCR.
- C. krusei→ colonia rosada y seca, se ve incluso en agar sabouraud.
Candida complejo Albicans
❖ Candida albicans
❖ Candida dubliniensis
❖ Candida africana → única del complejo que no tiene clamidoconidios
Candida complejo Parapsilosis → pseudohifas delgadas y gordas y celulas globosas
❖ C. metapsilosis,
❖ C. orthopsilosis (más resistente)
❖ C. parapsilosis sensu stricto
Candida complejo Glabrata → solo producen blastoconidios, no tiene pseudohifas
❖ C. glabrata
❖ C. bracarensis
❖ C. nivariensis
Candida complejo Guilliermondii
❖ C. fermentati
❖ C. famata
❖ C. guillermondii sensu stricto
- Racimo de uvas donde nacen las pseudohifas.
- Se puede ver en las uñas de pie y manos.
- Elevada resistencia a los antifúngicos sobretodo azoles y equinocandinas (C. fermentati)
- No se ha visto en sepsis.
Candida tropicalis
- Se ve azul en chromagar.
- Tiene pseudohifas flacas
Candida krusei
- Tiene aspecto seco.
- Colonia rosada.
- Pseudohifas y blastoconidios no son redondos, son alargados, son como salchichas.
*Todas las levaduras asimilan glucosa.
**C krusei y C. complejo Glabrata son levaduras muy inertes, krusei solo asimila la glucosa y glabrata la glucosa y trealosa
Candida auris
- En chromagar se ve rosado, blanco o lila.
- Solo produce blastoconidios.
- Es lo peor que puede pasar.
- Es de notificación obligatoria→ ISP, IAAS del
hospital.
- C. auris es termofilico→ crece a 42-45°C→ por eso
puede resistir la temperatura de 37°C del ser
humano. (también albicans)
- Difícil de identificar → metodos automatizados lo condunden con C. haemulonii y pseudohaemulonii
- Hay que sospechar cuando tenga una levadura altamente resistente.
Se puede identificar con
- MALDITOF
- Biología molecular → secuenciación → Gold standar
- T2 biosistem: solo en EEUU
- Chromagar Candida plus→ C. auris se ve azul con un halo azul
Candida es ureasa negativa.
Rhodotorula es ureasa positiva.
Auxonograma.
- Se utiliza el medio C sin fuente de carbono.
- Todas las levaduras son glucosa +
- Se usa el azúcar en forma de polvo o glusidiscos.
- Se ve crecimiento o asimilación de la levadura.
- C. lusitanie→ RI a la anfotericina B.
- C. auris→ RI a los azoles y anfotericina B, el 4% de las cepas tiene resistencia a las equinocandinas
- C. glabrata y C. krusei son R a Fluconazol
OTRAS LEVADURAS
Trichosporon
- Produce artroconidios y es ureasa positivo.
- Es parte de la microbiota de la piel e intestino.
- Se debe informar como Trichosporon spp. → el 50% es resistente a la
anfotericina b → Es la única levadura que se informa así.
- Piedra blanca→ tricopatia pura, se ve en los pelos axilares, pubianos y
rara vez pero pasa en el cuero cabelludo.
- Se cortan los pelos, no se sacan y se ponen en una
placa petri, debajo de la placa petri se pone un fondo
blanco se pueden ver los nódulos blancos.
- El tratamiento es cortar los pelos afectados.
- Es complicado en sangre→ muere el 30-70% de las
personas.
- La urea es importante para identificar levaduras→
Basidiomycota.
- El tratamiento es voriconazol.
- Azul y rugoso en Chromagar.
➢ Examen directo: se observa una vaina de microconidios alrededor de pelo → Se informa como pelo parasitado piedra
blanca.
➢ Macroscopico: La colonia es rugosa, cerebriforme, gris azulado
➢ Microscopico de cultivo: artroconidios ovales o rectangulares y blastoconidios solos o agrupados en cadenas
Métodos manuales.
- Api Candida→ puede identificar hasta 16 especies.
- Api 32→ puede identificar hasta 50 especies. La ureasa positivo es de color negro.
Es fundamental hacer microcultivo y Chromagar.
Malassezia
- Causa pitiriasis versicolor.
- No se necesita hacer cultivo, porque son hongos
lipodependientes y cuesta mucho que crezcan
- M. pachydermatis afecta a mascotas.
- Para la toma de muestra→ se pellizca al paciente
para que se inflame y se descame luego se raspa con
un bisturí y salen varias escamas.
- Se utilizan KOH al 20% + muestra + tinta→ se deja un tiempo de clarificación de 12 horas.
- En el caso de caspa→ dermatitis seborreica se verán solo levaduras y se debe cuantificar por campo (promedio de
levaduras en 10 campos).
- Si quisera cultivar lo haría en agar Dixon → tiene lípidos y crecerá una colonia butirosa (como mantequilla)
➢ El examen microscópico directo es diagnóstico→ “levaduras y filamentos cortos del
género Malassezia”
Cryptococcus
- Cryptococcus neoformans→ afecta a pacientes inmunosuprimidos.
- Es una levadura capsulada.
- Se hace tincion negativa para ver la capsula (relación tinta: muestra 1:1)
- Se utiliza tinta china de buena calidad (ojala alemana) que no deje grumos.
- Llega la muestra→ se centrifuga a 3500 rpm por 5 minutos→ se trabaja el sedimento
con tinta china
- Se han visto varios casos en Valdivia en pacientes VIH.
- Afecta pulmón, SNC y produce manifestaciones cutáneas.
- En chromagar se ve color blanco o rosado de aspecto mucoso.
- Se puede sembrar en agar sabouraud o chromagar
- Medio CGB→ C. gatti es CGB positivo (amarillo)→ puede afectar a pacientes
inmunocompetentes.
- Tincion de mucicarmin de Meyer→ específico para cápsula.
- Ureasa positivo
- Algunos producen melanina
- Puede sembrarse en Sabouraud pero sin antibióticos
➢ Examen directo: levadura capsulada → es diagnostico → “presencia de levaduras
capsuladas del genero Cryptococcus”
➢ Macroscopico: colonias limitadas, mucoides, convexas de color blanco amarillento y
aspecto de leche condensada
➢ Microscopico de cultivo: blastoconidios con hija del mitad del tamaño de la madre y
capsulada.
El LCR o LBA→ a los sedimentos hacerle tincion negativa y cultivo en Sabouraud (NO MYCOSEL) o CHROMagar.
Rhodotorula
- Levadura capsulada.
- Levadura con pigmento carotenoide
- Es parte de la microbiota
- Se ha aislado de microcultivos
- Blastoconidios al microscopio
- Colonia lisa y brillante con pigmento naranjo
MICOSIS ENDÉMICAS
25°C forma filamentosa: infectante
37°C forma levaduriforme: no infectante
TODOS en general tiene un foco pulmonar primario
TODOS se cultivas en 8 tubos, 2 sabouraud y 2 mycosel a 25°C y 2 y 2 a 37°C
Histoplasma
- Tiene focos pulmonares primarios.
- Vía inhalatoria→ neumonía y en forma diseminada compromete el sistema
reticuloendotelial
- Es la micosis endemica mas prevalente el chile
- En los inmunocompetentes quedan en los pulmones hasta por 40 años en granulomas
y en caso de alguna inmunosupresión→ se activa el hongo que estaba en el pulmón.
- Llega la muestra de LBA→ se centrifuga→ del sedimento se siembran 4 tubos a 25°C
y 4 tubos a 35°C 2 sabouraud y 2 mycosel cada uno.
- Nunca se siembra en placas, siempre en tubos.
- A 25°C es infectante filamentoso → no se debe trabajar. Se vera macroconidios
tuberculados
- A 37°C es levaduriforme→ se trabaja.
- La forma levaduriforme se coloca en malditof.
- Itraconazol por 3 meses
- Difícil de ver en directo con KOH pq es intracelular
Coccidioides
- Es el hongo más peligroso del mundo.
- Se encuentra en regiones áridas y semiaridas
- Depende de la sospecha clínica el material que
llegue al laboratorio.
- Si llega LBA→ se hace examen microscópico
directo→ a 37°C se observan esférulas y
endosporas. Es diagnóstico de coccidioides
- A 35°C solo crecen en caldo cerebro corazón. (se hacen 4 tubos pero de caldo)
- A 25°C Artroconidios de conidiogenesis talica y separacion rexolitica (se sacarifica una celula intermedia)
- Se pueden ver esférulas hasta 300 um.
- UNICA MICOSIS QUE HACE ESFERULAS EN EL PULMON
Paracoccidioides brasiliensis
- Lesión parecida a cáncer
- Regiones tropicales o subtropicales
- Infarta ganglios linfaticos en su forma aguda
- A 37°C levadura multibrotante (dx).
- A 25°C la colonia parece una palomita de maíz y a
37°C parece maruchan.
- Lesión de mucosas→ encías, frambuesas, se tocan y
se raspan con un bisturí→ se pone en un
portaobjetos y se ven las levaduras multibrotantes.
Blastomyces dermatitidis
- La célula madre es igual a la célula hija.
- Foco endemico en norteamerica con areas de
hiperendemicidad cerca de zonas ribereñas o lagos.
- Por lo general infectan a perros→ el 100% muere al
igual como ocurre con Coccidioides→ ocurre porque
salen a cazar con perros y se infectan.
- 37°C forma levaduriforme forma una pequeña capsula
- En examen directo: blastoconidios monogemantes de pared gruesa donde madre tiene el mismo tamaño que la
hija.
- A 25°C colonia presentara Coremium o asociacion de hifas aereas
Talaromyces marneffei
- La colonia es de color verde con un pigmento rojo.
- Preferencia por el sistema reticulo endotelial.
- Es un hongo parecido a Penicillium.
- Es frecuente en Asia→ Tailandia, Indonesia.
- a 37°C levadura intracelular tiene un septo, parece un didimoconidio.
- A 25°C colonia presenta reverso con pigmento difusible rojo-violeta. Microscopicamente tendra fialides con
microconidios.
- A 37°C desarrollara colonias levaduriformes cremosas en un inicio blanco rosadas y
luego con pigmento rojo café menos difusible. Al microscopio tendra blastoconidios
redondos y alargados
