I.
INTRODUCCIÓN
Las hemolisinas son anticuerpos del suero que cuando actúan con el complemento tienen el
poder de usar o destruir los glóbulos rojos, o alterar su membrana permitiendo la salida de
hemoglobina. La naturaleza de las hemolisinas es desconocida; no son sustancias
químicas; algunos autores creen que son de la naturaleza de los fermentos lipolíticos; para
otros, las hemolisinas son identificadas con la fracción globulina del suero, en contradicción
con las hemolisinas producidas por bacterias, que en el concepto de Cornell y Holby, y
otros, son considerados como grasas bacteriales en estado coloidal.
Las iso-hemolisinas naturales son muy poco frecuentes, se ha señalado en algunos de los
sistemas de grupos sanguíneos las iso hemolisinas inmunes se observan después de
inyectar sangre incompatible Las autohemólisis bitérmicas se ven en la hemoglobinuria
paroxística por enfriamiento; son globulinas anormales del suero, capaces de hemolizar los
glóbulos rojos del paciente mismo y de otras personas, se combinan los eritrocitos a
temperaturas inferiores a los 20°C y no lo hacen por arriba de esta temperatura, cuando
aumenta a 25°C empieza la hemólisis, que es óptima a los 40°C las auto-hemolisinas
monotérmicas con un margen de temperatura de 15 a 30°C, son causa de una destrucción
excesiva de hematíes, anemias hemolíticas, el complemento es termolábil y se destruye a
56°C, de 20 a 30 minutos el almacenamiento a 4°C significa pérdida de ésta actividad de 2
a 3 días.
Muchas bacterias producen hemolisinas que pueden detectarse en el laboratorio. Ahora se
cree que muchos hongos clínicamente relevantes también producen hemolisinas.
hemolisinas se pueden identificar por su capacidad para lisar los glóbulos rojos in vitro
No solo los eritrocitos se ven afectados por las hemolisinas, sino que también hay algunos
efectos entre otros glóbulos, como los leucocitos (glóbulos blancos). La hemolisina de
Escherichia coli es potencialmente citotóxica para los monocitos, linfocitos y macrófagos , lo
que los lleva a la autolisis y la muerte.
Muchas hemolisinas son toxinas formadoras de poros (PFT), que pueden causar la lisis de
eritrocitos, leucocitos y plaquetas al producir poros en la membrana citoplasmática .
La hemolisina normalmente es secretada por las bacterias de forma soluble en agua. Estos
monómeros se difunden a las células objetivo y se unen a ellas mediante receptores
específicos. Una vez hecho esto, se oligomeriza, creando complejos heptámeros en forma
de anillo. Las hemolisinas pueden ser secretadas por muchos tipos diferentes de bacterias
como Staphylococcus aureus , Escherichia coli o Vibrio parahaemolyticus, entre otros
patógenos. Podemos echar un vistazo a la bacteria Staphylococcus
II. OBJETIVOS.
● Determinar la presencia de hemolisinas en sangre de grupo O+
● Realizar la titulación, en caso de presentar hemolisinas positivas.
III. MATERIALES.
1. Muestra sangre.
2. Tubos de ensayo de 12 x 75 mm
3. Gradilla
4. Pipetas graduadas de 1, 0.1 y 0.2 ml
5. Solución salina isotónica
6. Gradilla.
7. Centrífuga.
IV. PROCEDIMIENTO.
1. Extraer una muestra de sangre en tubo rojo.
2. Centrifugar la muestra a 3500 rpm durante 5 minutos, para separar los eritrocitos,
plasma y células blancas. Para preparar una suspensión al 5% en solución salina de
eritrocitos.
3. Enseguida etiquetar los tubos de trabajo, de la siguiente manera:
4. Pasar a realizar la tipificación inversa de acuerdo a lo establecido en la técnica
correspondiente: Colocar 50 microlitros o 2 gotas de suero problema ( O + ) en cada
uno de los tres tubos.
5. Depositar 2 gotas de la suspensión de eritrocitos. Centrifugar a 3500 rpm durante 4
minutos.
6. Una vez realizada, colocar los 3 tubos en un baño maría a 37°C e incubar durante
30 min. Es importante llevar la cuenta del tiempo.
7. Retirar los tubos del baño maría y revisar la presencia de hemólisis en cada uno de
los tubos.
EN CASO DE PRESENCIA DE HEMÓLISIS SE HACE UNA TITULACIÓN.
“TITULACIÓN ANTI-A”.
Proceder a la titulación o rotular tanto el paquete globular como al plasma. Transfundir solo
a su grupo.
1. Lavar los eritrocitos tres veces en solución salina y suspenderlos al 5%..
2. Rotular 10 tubos de 12 x 75 mm con números consecutivos del 1 al 10.
3. Colocar 0.1 ml (100 microlitros) de SSI en cada uno de los tubos del 2 al 10 con la
pipeta graduada de 1 ml.
4. Agregar 0.1 ml del suero con los Ac's por titular en los tubos 1 y 2 con la pipeta de
0.1 ml.
5. Mezclar con la misma pipeta el suero con la solución salina en el tubo cuidando de
no formar espuma. Transferir O.1 ml de esta mezcla al tubo 3, mezclar y transferir
0.1 ml al tubo 4, y así sucesivamente hasta el tubo después de mezclar, se
descartan 0,1 ml.
6. Agregar 2 gotas de la suspensión de eritrocitos al 5 % a cada uno de los tubos y
mezclar.
7. Incubar a 37% durante 1 hora.
8. Centrifugar a 3400 rpm durante 30-seg.
9. Observar la presencia de hemólisis.
V. RESULTADOS.
Paciente: Bryan Ocampo de la Rosa; Sexo: Masculino; Edad: 18 años
Hemolisina:
Hemólisis en A: Positiva
Hemólisis en B: Negativa
Hemólisis en O: Negativa
Titulación de A:
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32
1:64 1:128 1:256 1:512
Hemólisis en 1:256 y [Link] Negativo
Resultado: Negativo
VI. DISCUSIÓN DE RESULTADOS.
La prueba o estudio efectuado en está práctica se realiza solamente en personas del grupo
0 o también conocido como O. Las hemolisinas son anticuerpos, los cuales tienen el poder
de usar o destruir los eritrocitos, incluso alterar su membrana permitiendo la salida de la
hemoglobina; las hemolisinas son anticuerpos que tienen la capacidad de fijar complemento
cuando reaccionan a 37°C, causando hemólisis eritrocitaria.
La prueba realizada y los resultados presentados demuestran que el paciente no presenta
anticuerpos irregulares o que causan hemólisis en los eritrocitos, debido a que en la
titulación efectuada en la dilución 1:256 no hay presencia ya de hemólisis. La titulación con
presencia de hemólisis sugiere que los anticuerpos están presentes cuando el paciente ha
estado expuesto a una inmunización como transfusiones o embarazos. La presencia de
estas hemolisinas está relacionada con la producción de una reacción hemolítica
especialmente en el uso de concentrados plaquetarios de donantes grupo “o” con presencia
inusual de altos títulos de anti-A y anti-B y transfundidas a donantes grupo A y B.
VII. CONCLUSIÓN.
La incompatibilidad del grupo sanguíneo es un rechazo por medio de respuesta
inmunológica gracias a la ausencia del anticuerpo que el cuerpo reconoce como
propio, haciendo que se reconozca como extraño, ocasionando la hemólisis.
Como era de esperarse no presentó hemólisis en ninguno de los grupos BO a
excepción del grupo A, que presentó una ligera reacción de hemólisis, sin embargo,
fue descartada con la titulación llevada a cabo, por lo tanto, podemos deducir que se
logró observar la compatibilidad entre los grupos sanguíneos de manera práctica y
sencilla, por lo que pudimos demostrar resultados correctos tanto al paciente como
al docente encargado de dirigir la práctica planteada.
VIII. CUESTIONARIO.
1. ¿Qué son las hemolisinas?
R= Son anticuerpos del suero que cuando actúan con el complemento tienen el
poder de usar o destruir los glóbulos rojos, o alterar su membrana permitiendo la
salida de la hemoglobina.
2. ¿Qué bacterias producen hemolisinas?
R= Bacterias que pueden tener hemolisinas se incluye Streptococcus salivaris,
Micrococcus luteus, Bacillus cereus, E. coli, Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas
aeruginosa.
3. ¿Cómo se clasifican las hemólisis?
R= La hemólisis puede ser extravascular (en el sistema retículo-endotelial del bazo o
del hígado) o intravascular, produciéndose directamente dentro de los vasos
sanguíneos, clínicamente se caracterizan por tres signos que son los siguientes:
reticulocitosis, esplenomegalia e ictericia.
4. ¿Cómo se generan las hemolisinas?
R= Se produce cuando el bazo y el hígado eliminan de la circulación eritrocitos
dañados.
5. ¿Qué causa la destrucción de los glóbulos rojos?
R= Pueden ser destruidos debido a un problema autoinmunitario en el cual el
sistema inmunitario equivocadamente ve a sus propios glóbulos rojos como algunas
sustancias extrañas y las destruye.
6. ¿Qué efectos puede tener en una infección que un microorganismo produzca
hemolisinas?
R= La posesión de hemolisina podría facilitar la implantación de la bacteria en vías
urinarias bajas, causando necrosis de células epiteliales y dando lugar a la
formación de microabscesos, que servirían de focos iniciales de la infección
7. ¿Cuál es el origen de las hemolisinas?
R= La naturaleza de las Hemolisinas es desconocida, no son sustancias químicas
pero algunos autores creen que son de la naturaleza de los fermentos lipolíticos.
8. ¿Cómo se detectan las hemolisinas?
R= La hemólisis es visible después de centrifugar la muestra, se observa una
coloración roja. La especificación en el estudio se encuentra en la concentración de
hemoglobina libre, la cual viene indicada por una coloración roja en el plasma/suero
que varía entre 100 y 300mg/l.
9. ¿Qué hace la solución isotónica en la sangre?
R= El volumen celular tiende a permanecer constante a pesar de la partícula
permanente y el flujo de agua existente entre las áreas intra y extracelulares.
10. ¿Qué ocurre con los glóbulos rojos en una solución isotónica?
R= Los glóbulos rojos colocados en una solución isotónica conservan su tamaño
debido a que el flujo de agua dentro y fuera de la célula es el mismo.
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA
CARRERA DE BIOQUÍMICA CLÍNICA DISERTACIÓN PREVIA A LA OBTENCIÓN
DEL TÍTULO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA PRESENCIA DE HEMOLISINAS ANTI-A Y
ANTI-B EN CONCENTRADOS. (n.d.).
[Link]
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