Técnicas en hemoterapia

ABO Directo
El ABO es una prueba de grupo
sanguíneo, se hace para determinar que
antígenos hay en la membrana de los
glóbulos rojos
Para determinar dichos antígenos, es
necesario enfrentarlos a anticuerpos
específicos.
Anti-A
Anti-B
Anti-AB
Anti-D (Sistema Rh)
Esta técnica puede llevarse a cabo en placa
o en tubo.
 Sistema Rh:
Esta prueba se hace para la
determinación del Rh, se deben enfrentar
los hematíes en estudio con el suero
anti-D, generalmente se hace junto al
ABO en placa.
 ABO Directo en placa
Utilizaremos:
O Cuatro placas de vidrio
O Glóbulos rojos en estudio
O Reactivos: anti-A, anti-B, anti-AB
y anti-D
Colocamos una gota de sangre en
cada placa de vidrio, en la primera
colocamos anti-A, en la segunda
anti-B, en la tercera anti-AB y en la
cuarta anti-D, homogenizamos y
leemos.
Las placas en las que se observe
aglutinación son en las que se
encontraron el antígeno con el
anticuerpo.
 Resultados ABO:
Si los hematíes reaccionan aglutinándose
con el suero anti-A y con el suero anti-AB
pero no en el suero Anti-B, este individuo es
grupo A
Si los hematíes reaccionan aglutinándose
con el suero anti-B y con el suero anti-AB
pero no en el suero anti-A, este individuo es
grupo B
Si los hematíes reaccionan aglutinándose
en el suero anti-A, en el suero Anti-B y
en el suero anti-AB, este individuo es
grupo AB
Si los hematíes no reaccionan
aglutinándose con el suero anti-A, ni el
suero anti-B y tampoco en el anti-AB,
este individuo es grupo 0
Resultados ABO:
 Resultados Rh
Si los hematíes reaccionan
aglutinándose con el suero anti-D se
dice que los individuos son Rh
positivos.
Si los hematíes no son aglutinados
por el reactivo anti-D se llaman Rh
negativos.
Reactivos:
 ABO Directo en tubo
Utilizaremos:
O Dos tubos de vidrio
O Glóbulos rojos en estudio
O Reactivos: anti-A y anti-B
 Comenzamos lavando los glóbulos
rojos tres veces con solución
fisiológica, centrifugamos a 3500
revoluciones por minuto durante un
minuto (cada lavado), decantamos el
excedente y agregamos 19 gotas de
solución fisiológica por cada gota de
glóbulos rojos. Así hacemos una
suspensión de glóbulos rojos al 5%
 Colocamos dos gotas de la
suspensión la 5% en cada tubo, los
rotulamos A, B, D y colocamos los
reactivos. En el tubo A colocamos
anti-A y en el tubo B colocamos
anti-B, En el tubo D anti D
centrifugamos los tubos a 3500 RPM
por 15 segundos, pasados estos,
leemos los resultados
 En el tubo donde se observe
aglutinación se encontraron el
antígeno y el anticuerpo.
 ABO Inverso
Es una técnica de confirmación de ABO,
(siempre se hace en tubo).
En el inverso buscamos determinar los
anticuerpos, presentes en el plasma
sanguíneo, por lo cual enfrentamos el
plasma/ suero en estudio contra reactivos
formados de glóbulos rojos.
Reactivos:
Rotulamos dos tubos, uno como alfa y otro
como beta, colocamos dos gotas de
suero/plasma en cada tubo y les agregamos
una gota de reactivo. En el tubo alfa
colocamos una gota de reactivo formado
por células A y en el tubo beta colocamos
una gota de reactivo formado por células B.
 Colocamos ambos tubos en la
centrifugadora y centrifugamos a
3500 revoluciones por minuto
durante 15 segundos, pasados estos
leemos los resultados.
Explicación del inverso:
Cuando los anticuerpos del suero en
estudio se encuentran con los
antígenos que contienen la células
del reactivo se forma un complejo
antígeno-anticuerpo.
Interpretación de los resultados
Si el suero aglutina ante el reactivo con
glóbulos rojos A, tiene anticuerpos anti-A.
El suero que tiene anticuerpos anti-A
corresponde a la sangre de grupo B.
Si el suero aglutina ante el reactivo con
glóbulos rojos B, tiene Ac B. El suero
que tiene Anticuerpos anti-B
corresponde a la sangre del grupo A.
Si el suero aglutina ante los reactivos con
glóbulos rojos A y B, tiene anticuerpos
anti-A y anti-B. El suero que tiene
anticuerpos anti-A y anti-B corresponde a
la sangre del grupo O.
Si el suero no aglutina ante los reactivos
formados por glóbulos rojos A y B, no
tiene anticuerpos anti-A ni anti-B, por lo
tanto el suero pertenece a una sangre del
grupo AB.
Pruebas de compatibilidad
sanguínea
 Prueba de compatibilidad
mayor
La prueba de compatibilidad mayor se
hace para transfundir glóbulos rojos, para
ello hay que determinar si en el suero del
paciente no hay anticuerpos dirigidos a
los antígenos de los glóbulos rojos, de la
unidad de sangre.
 Lavamos los glóbulos rojos de la
unidad de sangre, una vez, con
solución fisiológica, centrifugamos a
3500 revoluciones por un minuto,
decantamos el excedente y
agregamos 19 gotas de suspensión
fisiológica por cada gota de glóbulos
rojos.
 Salino:
En un tubo colocamos cuatro gotas de
suero/plasma del paciente, mas dos gotas
de suspensión al 5%, lo centrifugamos a
3500 RPM por 15 segundos y leemos.
Si hay aglutinación es incompatibilidad
por ABO.
si no hay aglutinación continuamos en el
medio.
 Medio:
Aplicamos dos gotas de Liss y llevamos a
incubar por 10 minutos.
Luego de incubar lo centrifugamos a 3500
RPM por 15 segundos y leemos.
Si hay aglutinación es incompatible por
igG.
Si no hay aglutinación continuamos en
Coombs.
Reactivo Liss
 Coombs:
Hacemos tres lavados a los glóbulos rojos
con solución fisiológica, centrifugamos a
3500RPM por un minuto (por cada
lavado).
Agregamos dos gotas de reactivo
Coombs, centrifugamos a 3500PRM por
15 segundos y leemos.
Si la prueba da positivo es incompatible
por igG o C3d así que hay que repetir la
prueba a 37°C o usamos un reactivo
monoespecifico.
Si da negativo es compatible y lo
verificamos con el reactivo control de
Coombs.
Reactivo Coombs:
 Control de Coombs
Agregamos dos gotas de control de
Coombs, centrifugamos a 3500
revoluciones por minuto por 15 segundos
y leemos:
Si hay aglutinación la técnica esta bien
hecha, la unidad es compatible y se puede
transfundir.
Si no hay aglutinación es necesario repetir
toda la técnica.
Reactivo control de Coombs:
Prueba de compatibilidad menor:
La prueba de compatibilidad menor se
hace para transfundir plasma, para ello
hay que determinar si en el plasma a
transfundir no hay anticuerpos dirigidos a
los antígenos de los glóbulos rojos del
paciente.
 Lavamos los glóbulos rojos del
paciente, una vez, con solución
fisiológica, centrifugamos a 3500
revoluciones por un minuto,
decantamos el excedente y
agregamos 19 gotas de suspensión
fisiológica por cada gota de glóbulos
rojos.
 Salino:
En un tubo colocamos cuatro gotas del
plasma de la unidad, mas dos gotas de
suspensión al 5%, lo centrifugamos a
3500 RPM por 15 segundos y leemos.
Si hay aglutinación es incompatibilidad
por ABO.
si no hay aglutinación continuamos en el
medio.
 Medio:
Aplicamos dos gotas de Liss y llevamos a
incubar por 10 minutos.
Luego de incubar lo centrifugamos a 3500
RPM por 15 segundos y leemos.
Si hay aglutinación es incompatible por
igG.
Si no hay aglutinación continuamos en
Coombs.
 Coombs:
Hacemos tres lavados a los glóbulos rojos
con solución fisiológica, centrifugamos a
3500RPM por un minuto (por cada
lavado).
Agregamos dos gotas de reactivo
Coombs, centrifugamos a 3500PRM por
15 segundos y leemos.
 Si la prueba da positivo es
incompatible por igG o C3b así que
hay que repetir la prueba a 37°C o
usamos un reactivo monoespecifico.
Si da negativo es compatible y lo
verificamos con el reactivo control
de Coombs.
 Control de Coombs:
Agregamos dos gotas de control de
Coombs, centrifugamos a 3500
revoluciones por minuto por 15 segundos
y leemos:
Si hay aglutinación la técnica esta bien
hecha, la unidad es compatible y se puede
transfundir.
Si no hay aglutinación es necesario repetir
toda la técnica.
 Profesora:
Yesica Bertolin