SET REACTIVOS

ALCOHOLEMIA

USO Biomediacal Laboratories”, 2da Ed., 1988, HHS

Para la determinación cuantitativa de alcohol etílico en suero o Publication N° (CDC) 88.8395.
sangre total.
Solo para uso de diagnostico in vitro RECOLECCION Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA
1. El sitio de la punción debe ser desinfectado con
SIGNIFICADO CLINICO desinfectantes acuosos como mertiolate. Alcohol u otra
El análisis de alcohol es frecuentemente requerido en pacientes de sustancia volátil no debe ser usada.
sala de emergencia para un diagnostico diferencial de depresión del 2. La sangre completa debe ser recolectada con el uso de
sistema nervioso central que puede ser causada por una intoxicación citrato, oxalato o heparina como anticoagulante. Se debe
por alcohol. Es un análisis requerido también en medicina forense. usar fluoruro a 5 mg/dL como preservante. Las muestras
deben ser almacenada de 2 a 8 °C por varios días no se
HISTORIA DEL METODO observa pérdida significativa del alcohol siempre que la
Un método enzimático para la determinación de alcohol etílico, usa muestra este bien sellada.
la enzima alcohol deshidrogenasa y el NAD, fue primero descrito 3. Las muestras de suero pueden ser usadas sin realizar la
por Bonnishen et al1. Han sido reportadas mejoras y modificaciones desproteinización.
al ensayo. El presente procedimiento es una modificación del 4. La recolección de las muestras debe estar de acuerdo con
procedimiento enzimático original. Debido a su rapidez y fácil uso NCCLS M29-T2. Ningún método puede garantizar que
el análisis enzimático para alcohol etílico se ha convertido en un las muestras de sangre humana no puedan transmitir
método común en laboratorio. Es usado también en medicina legal infecciones. Por lo tanto todas las muestras deben ser
pero debe ser confirmado por cromatografía u otro método para consideradas como patógenas.
estos propósitos.
INTERFERENCIAS
PRINCIPIO 1. La mayor interferencia para el método es el alcohol usado
durante la limpieza y desinfección de la zona de punción.
Etanol + NAD ADH Acetaldehido + NAD + H+ 2. Interferencia relativa de varios alcoholes se enlistan a
continuación.
Alcohol (después de 5 minutos de incubación)
La enzima alcohol deshidrogenasa (ADH) cataliza la oxidación de Etanol 100%
etanol a acetaldehído con la concomitante reducción de NAD a n-Butanol 38.5%
NADH2. El cambio en absorbancia a 340 nm es directamente Isopropanol 6.6%
proporcional a la concentración de alcohol en la muestra. Metanol 0.0%
Etilglicol 1.4%
REACTIVOS Acetona 0.0%
Las concentraciones están referdidas al reactivo reconstituido:
alcohol deshidrogenasa (levadura) 200,000 U/L, NAD 2.6 mM, 3. Una lista completa puede referirse a Young y col.
Buffer, pH 9.2 +/- 0.1, surfactante y preservantes.
MATERIALES PROVISTOS
PREPARACION DEL REACTIVO Reactivo alcohol.
El reactivo debe ser reconstituido con el volumen de agua destilada
y desionizada especificado en el vial. Mezclar suavemente hasta que MATERIALES REQUERIDO – NO PROVISTOS
se disuelva. 1. Micropipetas de volúmenes adecuados.
2. Tubos para la prueba.
ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO 3. Temporizador.
1. Almacenar de 2 a 8 °C. 4. Espectrofotómetro con capacidad de lectura a 340 nm.
2. Una vez reconstituido el reactivo es estable por 7 días. 5. Baño maría o celda de incubación a (30 a 37°C).
Tapado herméticamente y almacenado de 2 a 8 °C. 6. Cloruro de sodio, 0.9% (w/v): Preparar disolviendo 0.9
gramos de cloruro de sodio grado reactivo en agua
PRECAUCIONES destilada y desionizada para un volumen de 100 ml.
1. El reactivo es solo para uso de diagnostico in vitro. 7. Solución de acido tricloroacetico (6.25% w/v) si la prueba
2. El reactivo de alcoholemia es irritante. Manejar con las se realizara en sangre completa.
precauciones normales. En caso de contacto lavar con 8. Centrifuga.
abundante agua. Consultar MSDS para mayor
información. PROCEDIMIENTO
3. El reactivo no debe ser usado si ha penetrado humedad o Filtro 340 nm
si el reactivo presenta una absorbancia inicial de 0.500 Temperatura 37°C o 30°C
frente a blando de agua a 340 nm. Tipo de ensayo Punto final
4. Las muestras y controles deben ser manejadas de acuerdo Ratio Muestra/Reactivo 1:201
a las buenas prácticas de bioseguridad del laboratorio Dirección de la reacción Creciente
usando las precauciones adecuadas descritas en Tiempo de incubación 5 minutos
CDC/NIH. “Biosafety in Microbiological and Valor normal bajo 0 mg/dL
Valor normal alto 100 mg/dL cromatográficos.8 A continuación se muestran los rangos de alcohol
en la sangre con el porcentaje correspondiente de sujetos designados
Los parámetros pueden ser aplicados para varios instrumentos como embriagados. En un estudio de más de 6000 sujetos, las
automatizados. Comunicarse con el servicio técnico para recibir una indicaciones son muy pocas (aproximadamente 4%) las personas
información específica. están embriagados a niveles en sangre de 0.05% .9

PROCEDIMIENTO MANUAL Niveles de alcohol Porcentaje diagnosticado

1. Reconstituir el reactivo de acuerdo a las instrucciones. en la sangre  como embriagado
2. Pipetee 1 ml de reactivo en los tubos requeridos para la
prueba. 0.1 - 0.15% 63%
3. Coloque el reactivo en los tubos a la temperatura 0.15 - 0.2% 89%
seleccionada (30° C es recomendado para el ensayo 0.2 - 0.25% 95%
manual) y agregue 5 uL del estándar, prueba y muestras
control a los respectivos tubos. Al tubo “blanco”, agregue Arriba basado en los resultados promediados de varios estudios. 9
5 uL de solución de cloruro de sodio 0,9. Las concentraciones de Alcohol sérico son usualmente unos 16%
4. Mezcle suavemente. Incubar durante 5 minutos. más altas que las muestras de sangre de las cuales son derivadas. 10
5. Al final del período de incubación, lea y registre la
absorbancia de todos los tubos contra el reactivo RENDIMIENTO
1. Rango del ensayo: 0 - 400 mg / dl
NOTA: Para medir muestras de sangre total, la muestra debe ser 2. Comparación: pruebas realizadas en 100 muestras en
desproteiniza de la siguiente manera: comparación con un método similar para el etanol arrojó un
1. Pipetee 1,8 ml de solución de ácido tricloroacético en un tubo de coeficiente de correlación de 0.999 con una ecuación de regresión
centrífuga. y = 1.01x - 1.01. Los valores de muestras variaron de 2 a 412. (Sy.x
2. Mientras se agita el tubo, agregue lentamente 0,2 ml de muestra. =12.84)
3. Tape el tubo y mezcle vigorosamente. Llevar a temperatura 3. Precisión: los estudios de precisión se realizaron después de una
ambiente durante aproximadamente cinco minutos. modificación de las directrices contenidas en el documento EP5-T2
4. Centrifugar (2000 rpm) durante cinco minutos para obtener un de NCCLS.11
sobrenadante transparente. Dentro una corrida Corrida a corrida
5. Este sobrenadante puede analizarse como se indica anteriormente. Media D.S. C.V%. Media D.S. C.V%
Sin embargo, para tener en cuenta la dilución de la muestra se 40.3 0.72 1.78% 40.6 1.36 3.34%
recomienda utilizar una dilución 1:10 de estándar para la calibración 93.4 1.04 1.11% 89.0 3.27 3.67%
del ensayo. 219.8 2.17 0.99% 224.7 3.71 1.65%
4. Sensibilidad: La sensibilidad para el reactivo de alcohol se
LIMITACIONES investigó mediante la lectura del cambio en la absorbancia a 340 nm
Las concentraciones de alcohol superiores a 400 mg / dl se deben para una muestra de solución salina, y sueros con concentraciones
diluir 1: 1 con solución salina normal. Multiplique los resultados conocidas. Se realizaron diez repeticiones de cada muestra. Los
por 2 para compensar la dilución. resultados de esta investigación indicaron que, en el analizador
utilizado, el reactivo de alcohol mostró poca o ninguna deriva de
CALIBRACION reactivo en una muestra cero. Además, que un cambio de
Use un estándar de etanol con trazabilidad NIST o calibrador de absorbancia de 0.006 era aproximadamente equivalente a un mg / dl
suero. El procedimiento debe calibrarse de acuerdo con las de etanol.
instrucciones de calibración del fabricante del instrumento. Si se
encuentra que los resultados de control están fuera de rango, el Referencias
procedimiento debe ser recalibrado. 1. Bonnishen, R.K., Theorell, H., Scand. J. Clin. Lab. Invest. 3:58,
1951.
CALCULOS 2. Lundquist, F., The Determination of Ethyl Alcohol in Blood and
Conc. Etanol (mg/dl) = Abs. Muestra x conc. del STD Tissues, IN
Abs. STD Methods of Biochemical Analysis, Vol. VII, D. Glick, Editor, In-
terscience, New
Ejemplo de cálculo: Abs del paciente = 0.450, Abs del estándar = York, pp. 217-251, 1957.
0.500, Conc. del estándar = 100 3. Jones, D., Gerber, L.P., Drell, W., Clin. Chem. 16:402, 1970.
4. Hepler, O.E., Manual of Clinical Laboratory Methods, 4th Ed.,
0.450 x 100 = 90 mg/dl C.C. Thomas,
0.500 Springfield, IL, p. 329, 1949.
5. NCCLS document “Protection of Laboratory Workers form In-
CONTROL DE CALIDAD fectious Disease
Se recomiendan controles para monitorear el rendimiento del Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue”, 2nd Ed., 1991.
ensayo, proporcionando una detección constante del instrumento, 6. Data obtained by the manufacturer.
reactivos y técnicas. 7. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests,
Material de control disponible comercialmente con valores AACC Press,
establecidos para el alcohol puede ser usado. Los controles deben Washington, D.C.; Supplement No., 1991.
ejecutarse al menos con cada turno de trabajo que se realizan 8. Dubowski, K.M., Laboratory Management 4:27, 1982.
ensayos de etanol. Se recomienda que cada laboratorio establecer su 9. American Medical Association: Alcohol and the Impaired Driver,
propia frecuencia de determinación de control. 1968.
10. Shoemaker, M.J., Pathologist, 2:6, 1985.
VALORES ESPERADOS 11. NCCLS document “Evaluation of Precision Performance of Cli-
Los pacientes que se abstengan del alcohol tienen niveles no nical
detectables por la mayoría de métodos enzimáticos o Chemistry Devices”, 2nd Ed., 1992.