Determinación de coliformes totales por la técnica de NMP en
aguas residuales
INTEGRANTES:
Daniela Barragan Ruas
Universidad popular del cesar
Ingeniería ambiental y sanitaria
Microbiología ambiental
Profesora: Sandra Rodríguez Puerta
2023 – 1
INTRODUCCION
Las bacterias Coliformes, un grupo de bacterias estrechamente relacionadas al
suelo (siembra), el agua y el tracto intestinal de los animales, se han utilizado como
indicadores de condiciones insalubres en la producción de alimentos y bebidas
durante más de un siglo. Hoy en día, el recuento de Coliformes es un indicador
higiénico frecuente en varias industrias de alimentos y bebidas.
El término Coliforme no tiene un estado taxonómico, pero los Coliformes se
caracterizan por ser barras anaerobias gramnegativas que no forman esporas,
definidas por su capacidad para fermentar la lactosa para producir ácido y / o
dióxido de carbono gaseoso. Ejemplos de géneros considerados como coliformes
incluyen: Citrobacter, Enterobacter, Escherichia y Klebsiella.
La Coliforme más conocida, Escherichia coli (E. coli), se puede encontrar en los
intestinos de los animales de sangre caliente al igual que en los humanos, como
también la podemos encontrar en el entorno natural y fuentes de agua potable,
aunque E. Coli es inofensiva puede causar enfermedades e intoxicación alimentaria
severa.
Existen diversas técnicas para identificar coliformes, como lo son el número más
probable (NMP) el cual consiste en determinar la presencia o ausencia (positivo o
negativo) de bacterias específicos de microorganismos en copias obtenidas por
diluciones consecutivas a partir de la muestra de agua en este caso 1ml. Se basa en
el principio de que una única célula viva puede desarrollarse y producir un cultivo
turbio. El método requiere la realización de una serie de diluciones en serie de la
muestra de cultivo, en un medio líquido adecuado para el crecimiento de dicho
organismo de un volumen diez veces mayor. En este laboratorio se realizó una
dilución de agua del rio, con 9ml de solución salina al 0.85% donde cada medio de
cultivo liquido (tubos para este procedimiento) tenía una campana de Durham y una
solución de caldo brila, la cual nos servirá para identificar los coliformes en la
respectiva lectura, luego de ser incubados por 24 horas.
OBJETIVOS GENERALES
Determinar la presencia de coliformes totales en una muestra de agua
residual por la técnica de NMP (Número Más Probable).
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Determinar la capacidad de fermentación de la lactosa y producción de gas y
ácido por parte de las bacterias coliformes a 35°C durante un período de
incubación de 48 horas.
Comparar la presencia y abundancia de coliformes fecales en diferentes
fuentes de agua o tipos de alimentos para identificar posibles fuentes de
contaminación fecal.
Evaluar la presencia y abundancia de coliformes fecales en muestras de
microbiota del tracto gastrointestinal de seres humanos y animales
homeotermos.
MATERIALES Y EQUIPOS
Muestra de agua residual del sitio de donde se toma la muestra son 500 ml.
Frasco tapa rosca con capacidad de 250 ml con 90 mL agua peptonada
estéril.
Tubos de ensayo grandes tapa rosca con 9 mL de agua peptonada estéril.
Tubos de ensayo grandes tapa rosca con 10mL caldo lactosado estéril y
campana de Durham.
Pipetas de vidrio estéril de 10 mL.
Puntas azules estériles.
Pipeta automática de 100 - 1000µL
Incubadora a 35ºC
MARCO TEÓRICO
Características de los coliformes: Los coliformes pertenecen a la familia
Enterobacteriaceae y son bacterias aerobias facultativas, bacilos Gram negativos y
no formadoras de esporas. Estas bacterias tienen la capacidad de fermentar la
lactosa, produciendo gas y ácido dentro de un período de 48 horas a 35°C. Algunos
géneros de coliformes incluyen Escherichia coli, Citrobacter, Enterobacter y
Klebsiella (Carrillo y Lozano, 2008; Delgado y Acevez, 2016).
Coliformes Totales: Los coliformes totales son un grupo de bacterias Gram
negativas que tienen la capacidad de fermentar la lactosa a 35°C, produciendo
dióxido de carbono (CO2) que se atrapa en una campana de Durham en forma de
burbuja. Estas bacterias se utilizan como indicadores generales de contaminación
fecal, aunque su utilidad actualmente es limitada (Delgado y Acevez, 2016).
Coliformes Fecales: Los coliformes fecales son un subgrupo específico de bacterias
coliformes que se encuentran principalmente en los intestinos de animales de
sangre caliente, incluyendo humanos. Estas bacterias son consideradas indicadores
más precisos de contaminación fecal reciente (Delgado y Acevez, 2016).
Escherichia coli (E. coli): es una especie de bacteria que se encuentra en los
intestinos de animales de sangre caliente, incluyendo humanos. E. coli es
ampliamente utilizada como indicador de contaminación fecal y su presencia en
muestras de agua, alimentos o suelos puede indicar la posible contaminación con
materia fecal y un mayor riesgo para la salud humana (Delgado y Acevez, 2016).
MONTAJE DEL PROCEDIMIENTO
● En el laboratorio se miden 100 ml en una probeta, de la cual se toman los
primeros 10 ml para realizar la primera dilución 1:10
● A partir de la primera dilución, deben realizar las posteriores diluciones
consecutivas (en serie).
● Posteriormente, se mezcla cada dilución que se vaya a sembrar, tomando
con la pipeta automática 1ml.
● Se vierte en el tubo con caldo lactosado, se toma otro mL y se vierte, también
en otro tubo con caldo lactosado, es decir, se siembra cada dilución por
triplicado en caldo lactosado.
● Incubar los tubos a 37°C por 24 y 48 horas. Pasadas las primeras 24 horas
anotar los tubos positivos y re incubar por 24 horas más, los negativos.
● Tubos positivos, son los que muestran producción de gas en la campana de
Durham.
ANÁLISIS DE RESULTADOS
Dilución 10-1 Dilución 10-2 Dilución 10-3
No. tubos positivos
3 3 3
(coliformes)
Para obtener el NMP usar la siguiente fórmula:
• (NMP de la tabla/ 100) factor de dilución intermedia.
(24000/100) *
En cada una de las diluciones dieron 3 tubos positivos lo cual nos indica que existen
microorganismos capaces de fermentar la lactosa por lo tanto producen gases lo
cual refleja el objetivo de la campana de Durham, que es indicarnos la presencia de
estos microorganismos indicadores.
