FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y
LA SALUD
CARRERA DE MEDICINA HUMANA
Taller Práctico de Biología Celular
Informe N° “07”
Tema:
Metabolismo celular: proceso de respiración celular
GRUPO N° 4
Integrantes Apellidos y nombres Porcentaje de
participación
1 Ignacio Bazan Sebastian 100%
2 Inga Sosa María Fernanda 90%
3 Milla Olivera Ronaldo Jhosty 80%
4 Montalvo Altamirano Nayeli María 0%
5 Ormeño Tipismana Maria Alejandra 80%
SECCIÓN Y HORARIO: 1H2 03:00pm - 05:00pm
DOCENTE: Luz Veronica Solorzano Espinoza, Karen Isabel Rodríguez Velásquez
NOTA:
LIMA- PERÚ
2023
Universidad Científica del Sur
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Introducción
La respiración celular es un proceso metabólico esencial que ocurre en nuestras
células para obtener energía a partir de los nutrientes que consumimos. Cuando
comemos alimentos, nuestro cuerpo descompone las moléculas de proteínas,
carbohidratos y lípidos a través de la digestión. Estas moléculas son luego
sometidas a diversas reacciones metabólicas en las células, entre las cuales
destaca el proceso de respiración.
La respiración celular es una reacción catabólica en la cual se libera energía en
forma de ATP (adenosín trifosfato). Existen dos tipos principales de respiración
celular: la aeróbica, que requiere la presencia de oxígeno, y la anaeróbica, que se
lleva a cabo en ausencia de oxígeno.
En este informe, nos centraremos en la respiración anaeróbica, específicamente en
un tipo de proceso conocido como fermentación alcohólica. Durante la fermentación
alcohólica, ciertos microorganismos, como las levaduras, utilizan este tipo de
respiración anaeróbica para obtener energía a partir de los nutrientes presentes en
los alimentos.
La fermentación alcohólica es un proceso metabólico en el cual las moléculas de
carbohidratos se descomponen en ausencia de oxígeno, generando alcohol (etanol)
y dióxido de carbono como subproductos. Las levaduras desempeñan un papel
fundamental en los procesos de fermentación utilizados para elaborar cerveza y
pan. Estos procesos biológicos están íntimamente ligados a las levaduras, lo cual
explica por qué se les conoce como "hongos ascomicetos fermentadores"
(Kurtzman et al, 2011).
En este informe, llevaremos a cabo un experimento para observar y comprender
cómo ocurre la fermentación alcohólica como un ejemplo de respiración anaeróbica.
Objetivos
1. Comparar la efeciencia de diferentes carbohidratos en el proceso de
fermentación alcoholica y determinar cuáles son degradados con mayor
velocidad.
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2. Evaluar el impacto del inhibidor NaF en la eficacia de la fermentación
alcohólica, determinando si hay una disminución en la generación de CO2 en
presencia del NaF y si esta disminución varía según la concentración
utilizada.
3. Comparar los resultados obtenidos en ambos experimentos para identificar
las diferencias en el proceso de fermentación al utilizar carbohidratos como
sustratos, y cuando se les agrega inhibidores.
Materiales
Materiales del laboratorio
● 9 tubos de ensayo 13x100mm: Son pequeños cilindros de vidrio utilizados
en laboratorios para contener y manipular muestras líquidas o sólidas.
● 9 tubos de ensayo 16x150mm : Son pequeños recipientes de vidrio que se
utilizan en el laboratorio para contener y realizar diversas pruebas y
experimentos.
● 1 L Agua destilada: Es agua purificada mediante un proceso de destilación.
● 3 mL de Solución de glucosa al 5%: Es una mezcla de agua y glucosa en
la que la concentración de glucosa es del 5%.
● 3 mL de Solución de fructosa al 5%: Es una mezcla de agua y fructosa en
la que la concentración de fructosa es del 5%
● 3 mL de Solución de sacarosa al 5%: Es una mezcla de agua y sacarosa
en la que la concentración de sacarosa es del 5%.
● 3 mL de Solución de almidón al 5%: Es una mezcla de agua y almidón en
la que la concentración de almidón es del 5%.
● 3 mL de NaF 0.01 molar: Es una solución acuosa de fluoruro de sodio (NaF)
en la que la concentración de NaF es de 0.01 moles por litro de solución
● 3 mL de NaF 0.05 molar: Es una solución acuosa de fluoruro de sodio (NaF)
en la que la concentración de NaF es de 0.05 moles por litro de solución
● 3 mL de NaF 0.10 molar: Es una solución acuosa de fluoruro de sodio (NaF)
en la que la concentración de NaF es de 0.10 moles por litro de solución.
● 8 pipetas de plástico: Son instrumentos de laboratorio utilizados para medir
y transferir volúmenes precisos de líquidos
● 4 gradillas: Son soportes utilizados en el laboratorio para sostener y
organizar tubos de ensayo.
● 1 placa petri grande: Es un recipiente redondo y poco profundo hecho de
vidrio o plástico que se utiliza en laboratorios para el cultivo y crecimiento de
microorganismos, como bacterias o hongos.
● 4 baguetas de vidrio: Son herramientas de laboratorio utilizadas para
mezclar o agitar sustancias en recipientes de vidrio.
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● 1 hervidor:Es un electrodoméstico utilizado para calentar agua de manera
rápida y eficiente.
Materiales del estudiante por mesa
● Paquete de 100 gr de levadura seca: Es un tipo de levadura utilizada en la
cocina y la panadería para hacer que la masa de pan y otros productos
horneados se eleve. Se presenta en forma de pequeños granulos secos de
color marron claro.
● 1 regla milimetrada: Es una herramienta de medición utilizada para medir
distancias con precisión en milímetros.
● Plumón marcador: Es un instrumento de escritura que utiliza tinta líquida o
tinta de base de alcohol para hacer marcas duraderas y resistentes al agua.
Procedimiento experimental
Tabla 1
Primer experimento de fermentación alcoholica con distintos carbohidratos.
REACTIVO 1 2 3 4 5
Levadura 3 mL 3mL 3 mL 3 mL 3 mL
Agua destilada 5 mL
Glucosa 5 mL
Fructosa 5 mL
Almidón 5 mL
Sacarosa 5 mL
Tabla 2
Segundo experimento de fermentación alcoholica usando como sustrato a la
glucosa y al NaF como inhibidor de la reacción.
REACTIVO 1 2 3 4 5
Levadura 3 mL 3mL 3 mL 3 mL 3 mL
Agua destilada 5 mL
Glucosa 5 mL 2 mL 2 mL 2 mL
NaF (0,01 M) 3 mL
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NaF (0,05 M) 3 mL
NaF (0,10 M) 3 mL
En el experimento realizado, llevamos a cabo la fermentación alcohólica para
observar el efecto del inhibidor NaF en este proceso anaeróbico. Para ello, se
construyó un respirómetro artesanal utilizando tubos de ensayo pequeños y
grandes. Se dispusieron 4 tubos de ensayo pequeños y 4 tubos de ensayo grandes,
en donde los tubos pequeños fueron etiquetados con diferentes concentraciones de
NaF: 0,01 M, 0,05 M y 0,10 M, mientras que el último tubo fue etiquetado con la
palabra "H2O" .
Para comenzar el experimento, se llenaron todos los tubos de ensayo con 3 ml de
levadura y posteriormente se añadieron 2 ml de glucosa a los tubos que contenían
las diferentes concentraciones de NaF, mientras que al tubo etiquetado como "H2O"
se le agregó agua en lugar de glucosa (tabla 2).
Una vez preparados los tubos de ensayo pequeños, se ensambló el respirómetro
artesanal colocando los tubos pequeños dentro de los tubos grandes empujándolos
hacia el fondo con la ayuda de una bagueta. Luego, se invirtieron rápidamente para
evitar derrames y se observó si se generaban burbujas en la mezcla. Se registró la
longitud de las burbujas como medida inicial.
Posteriormente, se creó un baño María artesanal utilizando una placa de Petri y
agua caliente, donde se colocaron las gradillas con los tubos de ensayo para
mantenerlos a temperatura ambiente durante 30 minutos. Transcurrido este tiempo,
se registró la longitud final, que correspondía al aumento de la generación de
burbujas. Seguidamente, restamos las longitudes obteniendo la longitud que se
libero de CO2 como se muestra en la sección de resultados.
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Figura 1
Los tres tubos con NaF, levadura y glucosa a diferentes concentraciones y el último
solo con agua y levadura, en el baño María casero a temperatura ambiente.
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Resultados
Se realizaron dos conjuntos de pruebas donde el primero evaluó la fermentación
utilizando levadura con diferentes glúcidos: glucosa, fructosa, sacarosa y almidón,
mientras que en el segundo se centró en el efecto del inhibidor NaF en la
fermentación usando la glucosa como sustrato.
Tabla 3
Cantidad de CO2 liberado en la fermentación alcohólica de distintos
carbohidratos.
TUBO Longitud Inicial Longitud Final (L. Final – L. Inicial)
(mm) (mm) (Producción de CO2)
Tubo 1: Agua 1.2 mm 1.2 mm 0(no varía)
destilada
Tubo 2: Glucosa 3.5 mm 12.7 mm 9.2 mm
Tubo 3: Fructosa 2 mm 13 mm 11 mm
Tubo 4: Almidón 3.7 mm 4.8 mm 1.1 mm
Tubo 5: Sacarosa 3.3 mm 13.6 mm 10.3 mm
Tabla 4
Efecto del inhibidor NaF en la efectividad de la fermentación alcohólica usando
como sustrato a la glucosa.
TUBO Longitud Inicial Longitud Final (L. Final – L. Inicial)
(mm) (mm) (Producción de CO2)
Tubo 1: Agua 1.2 mm 1.2 mm 0(no varía)
destilada
Tubo 2: NaF (0.01 M) 3 mm 9 mm 6 mm
Tubo 3: NaF (0.05 M) 3.2 mm 6 mm 2.8 mm
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Tubo 4: NaF (0.10 M) 3 mm 4.2 mm 1.2 mm
Discusión
Los resultados obtenidos en el primer experimento revelan el comportamiento de la
levadura en presencia de diferentes glúcidos, como la fructosa, glucosa, sacarosa y
almidón, y su capacidad para producir una fermentación. Se observó un aumento en
la longitud de la burbuja de CO2 en los tubos que contenían los distintos glúcidos.
En el caso del tubo 2 (levadura + glucosa), se observó un incremento significativo en
la longitud de la burbuja de CO2, pasando de 3.5 mm al inicio a 12.7 mm después
de 30 minutos, lo que indica una liberación de 9.2 mm de CO2. De manera similar,
en el tubo 3 (levadura + fructosa), se observó un aumento de 11 mm en la longitud
de la burbuja de CO2, con una longitud inicial de 2 mm y una longitud final de 13
mm. Asimismo, en el tubo 5 (levadura + sacarosa), se registró un incremento de
10.3 mm en la longitud de la burbuja de CO2.
En contraste, los tubos que contenían agua destilada (tubo 1) y almidón (tubo 4), los
cuales, no mostraron una reacción significativa. En el caso del tubo 1, no se observó
un cambio en la longitud de la burbuja de CO2, manteniéndose en 1.2 mm, mientras
que en el tubo 4 se registró un incremento de 1.1 m (tabla 3).
Estos resultados nos muestran que los monosacáridos desprenden una mayor
cantidad de CO2 durante la fermentación por ser degradados con mayor rapidez en
contraste con los disacáridos y polisacáridos, esto se demostró en los tubos que
contenían fructosa y glucosa. El mayor aumento en la longitud de la burbuja de CO2
fue en el tubo 3 que contenía fructosa; sin embargo, este no era el resultado
esperado. Puesto que, en un estudio realizado por Reynolds et al. (2001) sobre la
vinificación de vinos blancos utilizando diferentes cepas de S. cerevisiae, se
encontraron valores de fructosa que oscilaron entre 3,3 y 5,8 g/l después de 48 días
de fermentación, dependiendo de la cepa utilizada1. En el mismo período, la
concentración de glucosa fue tan baja que en algunos casos no fue detectada2. Esto
nos confirma que los resultados contradicen nuestras expectativas iniciales en este
primer experimento ya que, se esperaba que la glucosa generará mayor cantidad de
CO2 en comparación con la fructosa pasado los 30 minutos. En el proceso de
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fermentación alcohólica, se observa una diferencia en la forma en que la glucosa y
la fructosa son metabolizadas por las levaduras.
En ese sentido, la cinética de utilización de los azúcares por parte de la S.
cerevisiae durante las fermentaciones se lleva a cabo en gran parte a través del
transporte de los azúcares y, por regla general, la glucosa es consumida a mayor
velocidad que la fructosa. En las fermentaciones lentas, la velocidad máxima de
fermentación se reduce cuando la mayor parte de la glucosa ha sido consumida, y la
fermentación se puede parar cuando queda una concentración considerable de
fructosa. Según las publicaciones, el nivel de glucosa residual en los vinos con
paradas de fermentación es 10 veces menor que la concentración de fructosa
(Gafner y Schûtz, 1996).3
La posible influencia de sesgos en los resultados podría estar relacionada con el
uso de un respirómetro artesanal, el cual presenta dificultades para mantener un
control exhaustivo de las variables experimentales. Es importante destacar que
durante el experimento se observó un derrame significativo de líquido en el tubo 2.
Por tal razón, en futuros experimentos, se sugiere emplear un respirómetro de
laboratorio especialmente diseñado para mediciones de respiración o fermentación,
con el fin de garantizar una mayor precisión y control de las variables.
En el segundo experimento, se evaluaron los resultados al combinar la glucosa
como sustrato con el inhibidor NaF en diferentes concentraciones. En el tubo 1
(H2O), no se observaron cambios en la longitud de las burbujas, que se
mantuvieron en 1.2 mm debido a la falta de producción de CO2. En el tubo 2 (NaF
0.01 M), se registró una longitud de burbuja de CO2 de 6 mm, lo cual fue
significativamente diferente en comparación a los tubos 2 (levadura + glucosa) y 3
(levadura + fructosa), se observaron longitudes de burbuja de CO2 de 9.2 mm y 11
mm, respectivamente. Sin embargo, las mayores diferencias se observaron en el
tubo 3 (NaF 0.05 M) y el tubo 4 (NaF 0.10 M). En el tubo 3, la longitud de la burbuja
de CO2 fue de 2.8 mm, mientras que en el tubo 4 fue de 1.2 mm, lo que nos
muestra una gran disminución en la producción de CO2 (tabla 4).
En esta prueba, se evidenció que el fluoruro de sodio cuando se encuentra en una
solución acuosa y dentro de la célula, tiene la capacidad de formar un complejo con
el ión de magnesio y el anión de fosfato, lo cual tiene un efecto inhibidor sobre la
enzima enolasa (representada en la figura 2). La enolasa es responsable de la
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reacción que convierte el 2-fosfoglicerato en 2-fosfoenolpiruvato, liberando una
molécula de agua en el proceso. Cuando se presentan concentraciones elevadas
del inhibidor fluoruro, este compite de manera activa con el sustrato propio de la
enzima (Baynes y Dominiczak, 2007)4, lo que resulta en una reducción en la
producción de piruvato y una restricción en el proceso catabólico de
respiración/fermentación. En resumen, las concentraciones elevadas de fluoruro
actúan como un obstáculo para la producción adecuada de piruvato y el
funcionamiento óptimo de este proceso catabólico.
Conclusiones
En conclusión, los resultados obtenidos en este estudio nos revelan que la
fermentación alcohólica es influenciada por el tipo de sustrato utilizado y la
presencia de inhibidores. Los monosacáridos, como la glucosa y la fructosa, son
metabolizados de manera más rápida y generan una mayor producción de CO2 en
comparación con los disacáridos y polisacáridos. Esto indica que la estructura y la
composición de los glúcidos tienen un impacto significativo en la eficiencia de la
fermentación.
Además, se observó que la adición del inhibidor NaF a diferentes concentraciones
afectó la producción de CO2 durante la fermentación de la glucosa. A medida que
se incrementaba la concentración de NaF, se observó una disminución en la
producción de CO2. Esto sugiere que el NaF tiene un efecto inhibitorio en el proceso
de fermentación y puede afectar negativamente la actividad enzimática responsable
de la conversión de los sustratos en productos finales.
Es importante destacar que el uso de un respirómetro artesanal en este estudio
puede introducir limitaciones y sesgos en la medición y control de variables
experimentales.
Estos hallazgos destacan la importancia de considerar la naturaleza de los sustratos
utilizados y la presencia de inhibidores en la fermentación alcohólica. Comprender el
impacto de estos factores es fundamental para optimizar los procesos de
fermentación en diferentes aplicaciones, como la industria alimentaria y enológica.
Además, se debe tener en cuenta la selección adecuada de equipos y métodos
experimentales para obtener resultados más precisos y confiables.
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Referencias bibliográficas
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entacion-de-la-fructosa-en-la-elaboracion-del-vino/
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