AGAR MACCONKEY

Este medio se utilizapara el aislamiento de bascilos gramnegativos de fácil desarrollo, aerobios y

facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no lactosa en muestras clínicas, de agua y
alimentos.
INSUMOS EN GRAMOS POR LITRO:
Peptona 17,0
Pluripeptona 3,0
Lactosa 10,0
Sales biliares 1,5
Cloruro de sodio 5,0
Agar 13,5
Rojo Neutro 0,03
Cristal violeta 0,001
INSTRUMENTOS:
Placa Petri con agar agar.
Asa de siembra o material estéril
Estufa de laboratorio
Mechero Bunsen
Agua destilada
Papel secante
Guantes de latex
FUNDAMENTO:
Sales biliares y cristal violeta:
En este sentido, el agar MacConkey tiene una composición compleja. En primer lugar, contiene
sales biliares y cristal violeta.
Estos elementos se encargan de inhibir el crecimiento de bacterias grampositivas y algunos bacilos
gramnegativos exigentes. A su vez, favorece el desarrollo de los bacilos gramnegativos que no son
afectados por estas sustancias. Por ello es un medio selectivo.
Se dice que es ligeramente selectivo en comparación a otros medios que igualmente inhiben el
crecimiento de bacterias grampositivas y también de la mayoría de las bacterias gramnegativas.
Peptonas, polipectonas y lactosa:
Contiene sustancias que aportan los nutrientes necesarios a los microorganismos que se
desarrollan en este medio, como las peptonas, polipectonas y la lactosa.
La lactosa es el punto clave para que el medio sea diferencial, pues los microorganismos que
poseen la capacidad para fermentar la lactosa desarrollarán colonias rosadas fuertes.
Algunas bacterias pueden fermentar la lactosa lenta o débilmente, desarrollando colonias color
rosado pálido, y siguen siendo lactosa positiva.
Las que no fermentan la lactosa utilizan las peptonas como fuente de energía, produciendo
amoníaco, alcalinizando el medio. Por ello las colonias que se originan son incoloras o
transparentes.
Indicador de pH:
El cambio de color se logra a través de otro compuesto esencial que posee el agar MacConkey. Este
compuesto es el indicador de pH, que en este caso es el rojo neutro.
La fermentación de la lactosa genera la producción de ácidos mixtos. Los mismos acidifican el
medio a un pH por debajo de 6,8.
Esto hace que el indicador de pH vire hacia una tonalidad rosada intensa. La intensidad del color
puede variar dependiendo del pH final.
Agua destilada, cloruro de sodio y agar:
Por otra parte, contiene agua destilada y cloruro de sodio que le dan la hidratación y equilibrio
osmótico al medio. Finalmente, el medio contiene agar, que es la base que proporciona la
consistencia de medio sólido.
El medio agar MacConkey preparado debe tener un pH final ajustado a 7,1 ± 0,2.
PREPARACIÓN:
Rehidratar 50 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar
agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para disolverlo por
completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar
aproximadamente a 45°C. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar en refrigeración de 2 a 8ºC.
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Medio de cultivo deshidratado: color beige rosado, homogéneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color rojizo púrpura
INSTRUCCIONES
Suspender 50 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 minutos. Calentar con agitación
frecuente y llevar a ebullición 1 a 2 minutos hasta disolver completamente. Distribuir en
recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Medio de cultivo deshidratado: color beige rosado, homogéneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color rojizo púrpura.
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
PROCEDIMIENTO
Siembra
En superficie: inocular directamente la muestra por estría.
En profundidad: inocular una alícuota de la muestra directa o de su dilución. Verter un volumen
del medio de cultivo fundido y enfriado a 40-45°C. Homogeneizar mediante movimientos de
vaivén y rotación. Dejar solidificar.
Incubación
En aerobiosis, a 33-37 ºC durante 18-48 horas.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Microorganismos fermentadores de lactosa: colonias rosadas, rojizas. Puede observarse halo de
precipitación biliar.
Microorganismos no fermentadores de lactosa: colonias del color del medio, incoloras.