UNIVERSIDAD CATOLICA DE LA SANTISIMA CONCEPCION
FACULTAD DE CIENCIAS / II SEMESTRE 2014
U.A. 37 / QUA-6016 / ANALISIS INSTRUMENTAL I
PRÁCTICO 3
ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE: “DETERMINACIÓN DEL pKa DE UN INDICADOR
ÁCIDO – BASE”
I. INTRODUCCIÓN
En este experimento, la espectrofotometría se utiliza para medir el pKa del azul de bromotimol,
indicador ácido – base. El indicador (HIn) es un ácido monoprótico y podemos representar su
disociación como sigue: HIn ↔ H+ + In-
La expresión de equilibrio para esta disociación se puede escribir como:
pH = pKa – log [HIn]
[In-]
-
Se puede reordenar para dar: log [In ] = pH - pKa
[HIn]
La expresión anterior representa la ecuación de una línea recta: y = mx + b
En donde: y = log [In-]/[HIn] m=1 b = - pKa.
Por lo tanto, si el término log se grafica contra pH, la pendiente es 1, la ordenada al origen es –
pKa y la línea debe atravesar el eje del pH en donde pH = pKa (Figura 1). En el último punto
[In-] = [HIn] y, por tanto, el log de la razón de estos términos es cero y pH = -pKa.
Figura 1
Gráfico parta determinar pKa
Log [In-]
[HIn]
2 4 6 8 9 10 pH
pKa
pKa
La razón { [In-]/[HIn] } se puede determinar por medio de espectrofotometría :
1. Se prepara una solución de azul de bromotimol en solución ácida (pH bajo) en la cual el
indicador se encuentra en la forma HIn. Se determina el espectro de absorción para HIn.
2. Luego se prepara el indicador en solución alcalina (pH elevado) en donde se encuentra a la
forma de In-. Se determina el espectro de absorción de In-.
3. Para las mediciones posteriores se seleccionan las longitudes de onda de los espectros de
absorción para la absorbancia máxima de HIn e In-.
4. Finalmente se preparan soluciones amortiguadoras con valores de pH alrededor del pKa del
azul de bromotimol y se miden las absorbancias a las longitudes de onda seleccionadas. Estas
soluciones contienen la misma concentración total del indicador, {[HIn] + [In-]}, pero las
proporciones varían con el pH. La figura 2a muestra un gráfico típico de absorbancia contra pH
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a la longitud de onda de absorbancia máxima para la especie In-. Los términos que se utilizan
en la figura son los siguientes:
Aa = Absorbancia de HIn.
Ab = Absorbancia de In-.
A = Absorbancia de la mezcla.
λ máxima especie In- λ máxima especie HIn
Ab Aa
[HIn] [In-]
A A
Absorbancia Absorbancia
[In-] [HIn]
Aa Ab
pH pH
Figura 2 a. Gráfica de absorbancia contra pH Figura 2 b. Gráfica de absorbancia contra pH
Del gráfico 2a, es evidente que
[In-] = A - Aa (1)
[HIn] Ab - A
log [In-] = log A - Aa = pH – pKa (2)
[HIn] Ab - A
La figura 2b muestra el gráfico de absorbancia contra pH a la longitud de onda de absorbancia
máxima para la especie HIn.
II. PROCEDIMIENTO
Prepare una serie de soluciones amortiguadoras: disponga de 7 matraces volumétricos de 50
mL. Mida 1.0 mL de la solución de azul de bromotimol 0.10% en cada matraz. Luego adicione
los siguientes volúmenes de soluciones de fosfatos a estos matraces.
Solución NaH2PO4 (mL) 0.2M K2HPO4 (mL) 0.2M pH
1 5.0 0.0
2 5.0 1.0
3 10.0 5.0
4 5.0 10.0
5 1.0 5.0
6 1.0 10.0
7 0.0 5.0
Al séptimo matraz adiciónele 2 gotas de solución de NaOH 3.0M. Ahora diluya cada solución
hasta el aforo y mezcle. Mida y registre el valor del pH en cada solución usando un pH-metro.
2. Determinación de espectro de absorción.
Para determinar el espectro de absorción del azul de bromotimol a pH bajo (el espectro de HIn),
mida la absorbancia de la solución 1 desde 400 hasta 640 nm, utilizando agua como referencia.
Lea la absorbancia a intervalos de 20 nm excepto alrededor del máximo del espectro, en donde
las lecturas se deben tomar a intervalos de 5 nm. Grafique la absorbancia contra la longitud de
onda.
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Para determinar el espectro de absorción a pH alto (el espectro de In-), mida la absorbancia de
la solución 7 en la misma forma como se indicó antes.
Utilizando el espectro que se obtuvo antes, seleccione las dos longitudes de onda en las cuales
HIn e In- presenten una absorbancia máxima.
Ahora mida la absorbancia de las sietes soluciones a las longitudes de onda seleccionadas.
La ley de Lambert-Beer puede también aplicarse al análisis cuantitativo para una mezcla de
sustancias, la absorbancia total se obtiene de la suma de las contribuciones individuales. Para
sistema del indicador las dos especies envueltas contribuyen a la absorbencia total en la región
visible porque hay una mezcla de ambos La absorbencia total es: ATOTAL = AHIn+AIn-
Hay que registrar el espectro de absorción de cada una de ellas por separado, con lo que nos
podremos encontrarnos en una de las dos situaciones:
a) Ambos espectros no presentan solapamiento en el margen de longitudes de onda de trabajo.
Los análisis se realizan por separado, cada uno en la zona del espectro en donde cada
componente de la mezcla se presenta como único absorbente.
ATOTAL = aHnbcHIn + aIn-bcIn- = aHn b[HIn] + aIn-b [In-]
b) Ambos espectros presentan solapamiento en una zona determinada de longitudes de onda.
En este caso se han de seleccionar dos longitudes de onda diferentes, y obtener, con
disoluciones de las sustancias puras, los respectivos coeficientes de extinción molares a cada
longitud de onda:
ATOTAL, lHIn = a Hn, lHIn [HIn] + aIn-, lHIn [In-] b=1 cm
ATOTAL, lIn- = aHIn, lIn- [HIn] + aIn-, lIn- [In-]
NOTAS
1. El pH de esta solución es lo suficientemente bajo para que la mayor parte del indicador
se encuentre en la forma HIn. Si la lectura de absorbancia en cualquier longitud de onda
es muy elevada (entre 0.8 y 1.0), la solución se debe diluir o se debe utilizar menos azul
de bromotimol en cada matraz.
III. CALCULOS
1.
a) K2HPO4 100 mL 0.2M
b) NaH2PO4 100 mL 0.2M
c) Azul de bromotimol 100 mL 0.10%
d) NaOH 25 mL 3.0 M
e) Coeficientes de extinción molar para lHIn y lIn-
f) [HIn] y [In-] para las soluciones de la 2 a la 6 a lIn-
g) [In-]/[HIn] para las soluciones de la 2 a la 6 a lIn-
h) pKa del indicador desde gráfico 3 (ambos valores).
Tabla Nº1: Nº solución - NaH2PO4 (mL) - K2HPO4 (mL) - pH - color observado
Tabla Nº2 : Nº solución - pH - A (lHIn) - A (lIn-)
Tabla Nº3: Nº solución - pH - [In-] - [HIn] - [In-]/[HIn]- log [In-]/[HIn] para lIn-
Gráfico Nº1: l (nm) vs A (para solución 1 y 7) superponer
Gráfico Nº2: A vs pH para lHIn y lIn- (Figura 2ay 2b) superponer.
Gráfico Nº3: pH vs log [In-]/[HIn] (Figura 1)
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