UNIVERSIDAD POLITECNICA
ESTATAL DEL CARCHI
FACULTAD DE INDUSTRIAS AGROPECUARIAS Y
CIENCIAS AMBIENTALES
PRÁCTICA DE LABORATORIO N°2
TEMA: Espectrofotometría
Nombre de la alumna: Juliana Godoy
Materia: Análisis Instrumental
Docente: MS. Ing. Shirley Chang.
Semestre: Cuarto “B”
Carrera: Ingeniería en Alimentos
Ciclo: abril-agosto 2018
Calificación: …………..
INFORME DE LABORATORIO
FECHA: 31-05-2018 PRÁCTICA N°
2
CURSO/ PARALELO: Cuarto “B”
TEMA DE LA PRÁCTICA
ESPECTROFOTOMETRÍA
Objetivo General
Realizar las disoluciones correspondientes de la Glucosa para luego colocarlas en el
espectrofotómetro.
Objetivos Específicos
Realizar el espectro de absorción Glucosa
Determinar la curva de absorbancia vs concentración.
Seleccionar la longitud de onda más apropiada para analizar la sustancia
absorbente (Glucosa) empleando la ley de Beer
RESUMEN
El objetivo de la práctica se basa en reforzar el aprendizaje de uso del
espectrofotómetro, para ello se ha determinado el espectro de absorción de una
sustancia pura y la concentración de una muestra problema, así como también se realizó
la curva de absorbancia vs concentración. Para realizar las disoluciones se usaron
balones aforados de 100 ml en los cuales se coloco (50 ml) de agua destilada y luego se
realizó la debida disolución madres que fue de la Glucosa (50 ml), hasta que se
complete el balón aforado, para las siguientes disoluciones se puso la mitad de la
cantidad del soluto que se que se obtuvo de la muestra anterior y se procedió a
completar el balón aforado con agua destiladas hasta llegar a 100 ml, así se realizo con
las siguientes muestras. Después de realizar todas las muestras se las llevó ala
espectrofotómetro para medir la absorbancia, transmitancia y concentración de cada uno
de los balones aforados, esto a la longitud de onda máxima, las mimas que arrojaban
cierta concentración. Para ello se colocó en la celda una pequeña muestra de cada
disolución, teniendo cuidado al colocar y manipular el espectrofotómetro para que no
arroje resultados erróneos. Y así una vez ya registrados los datos de cada una de las
disoluciones se graficó una curva de calibrado (absorbancia vs concentración) para la
longitud de onda máxima.
Procedimiento
Espectrofotometría
1. Realizamos un disolución de Glucosa para
determinarreforzar el aprendizaje de uso del
espectrofotómetro
2. Primero se coloca 50 ml de agua destilada en
cada matraz aforado
3. Para realizar las disoluciones se usaron balones
aforados de 100 ml
4. En los cuales se coloco (50 ml) de agua
destilada y luego se realizó la debida disolución
madres que fue de la Glucosa (50 ml), hasta que
se complete el balón aforado.
5. Se coloco la mitad de la cantidad del soluto que se
que se obtuvo de la muestra anterior y se procedió a
completar el balón aforado con agua destiladas hasta
llegar a 100 ml
6. Después de realizar todas las muestras se las llevó ala
espectrofotómetro para medir la absorbancia,
transmitancia y concentración de cada uno de los balones
aforados, esto a la longitud de onda máxima, las mimas
que arrojaban cierta concentración
7. Despíes de tener los se procedió a realizar los cálculos
Resultados
Tabla 1. Datos obtenidos a partir de la glucosa para analizar la absorbancia y
concentración.
Absorbancia Transmitancia
0,000625 0,052
0,00125 0,6
0,0025 0,64
0,005 0,94
Tabla 2. Datos obtenidos por los cálculos de la tabla 1.
Ilustración [Link] en función de la concentración (Curvas de calibración)
Análisis resultados
Como se observa claramente, la recta obtenida no presenta una buena linealidad, pero
tiene mayor pendiente y nos apoyamos encontrando R^2 para tener una base estadística
con un error de 0,74). La muestra tiene una mayor absorbancia en una mayor
concentración de glucosa)
Así que en conclusión si se cumplió el objetivo pues según la ley de Ver debe mostrar
un comportamiento lineal.
Conclusiones
Las curvas de calibración constituyen una herramienta muy útil para la
cuantificación (e identificación) de sustancias a partir de sus espectros de
absorción.
La elección de la longitud de onda óptima para la elaboración de la curva de
calibración es determinante a la hora de cuantificar una sustancia por el método
estudiado en esta práctica, pues es a esta λ en donde la relación entre
Absorbancia y concentración es más marcada (mayor dependencia).
Referencias
Arias. J (2010). Usos del Espectrofotómetro. Recuperado de
[Link]
Méndez, F. (2006). Higiene industrial. Manual para la formación del especialista.
(Quinta edición). España: Lex Nova.
[Link]. (2011). Conocimiento de técnicas análiticas . Recuperado de
[Link]
Olsen, E. (1990). Métodos ópticos de análisis. New York: Reverte, S. A.
Villegas, W., Acereto, P y Vargas, M. (2006). Análisis ultravioleta- Visible. Yucatán,
México: Lib-Uady
Fernández, G. (2015). Espectrofotómetro. Recuperado de:
[Link]
Anexos
Ilustración 1. Materiales que se utilizaron para la realización de la
solución, para usar en la espectrofotometría.
Ilustración 2. Diluciones de la Glucosa para llevar al
espectrofotómetro.
Ilustración 3. Gramera
Cuestionario
1. ¿Por qué es importante introducir el prisma o celda totalmente seco y
limpio?
Es importante introducir el prisma o celda totalmente seco y limpio porque de
esta manera los resultados no se alterarán.
2. ¿Qué es un espectrofotómetro?
“Un espectrofotómetro es un equipo muy especializado y costoso que es usado
en el análisis químico, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de
una misma magnitud fotométrica relativo a dos haces de radiaciones y la concentración
o reacciones químicas que se miden en una muestra”. (Arias. 2010)
3. ¿Cómo se calibra un espectrofotómetro?
Se calibra de la siguiente manera. Primero se oprime la tecla MODE, hasta que la luz
roja se encuentre en A (absorbancia). Luego se selecciona la longitud de onda girando la
perilla, introducir la celda con el blanco (con un volumen por arriba de la mitad; nunca
llena) en la porta-celda, oprime la tecla Λ (0A/100%T) y esperar a que se ponga en
ceros la absorbancia, después tomar la lectura de absorbancia de la solución propuesta a
una longitud de onda baja (λ nm). utilizar como blanco agua destilada. Repetir esto
hasta que haya terminado. ([Link]., 2011)
4. Tipos de espectrofotómetro
Espectrofotómetro Smart espectro
Portátil e ideal para análisis de aguas.
Selección automática de longitud de onda.
40 test preprogramados y memoria para 25 test adicionales
• Especificaciones:
• rango de longitud de ondas: 350-1000nm
• exactitud de longitud de onda: 2nm
• resolución: 1nm
• monocromador: red de difracción de 1200 líneas/mm
• fuente de luz: lámpara halógena
• detector: fotodiodo de silicio
• rango fotométrico: -0,1 a 2,5 abs.
• exactitud fotométrica: 0,005 abs.
• modos de medición: %t, abs. y concentración
• admite celdas de 25mm de diámetro y cubetas de 10mm
• dimensiones: 35 x 28 x 17cm
• peso: 4,65kg
Espectrofotómetro de absorción atómica
Rango de longitud de onda: 190 a 860 nm - Paso de banda espectral: 0,2 n a 200 nm -
Dispersión lineal recíproca: a 200 nm - 0,1 nm/mm. a 800 nm - 0,4 nm/mm - Efecto
Zeeman, longitudinal inverso - Atomización: calentamiento transversal del horno de
grafito, calentamiento eléctrico - Rango de medidas de: Absorbancia -0,5 a 2000.
Concentración 0,0001 a 9999 unidades de concentración. Factor de expansión 0,01 a
100. Tiempo de lectura 1 a 60 segundos. Tiempo de demora 0 a 60 segundos. (Bermejo
& Moreno, s,f)
Ilustración 4. Espectrofotómetro de absorción
atómica
Espectrofotómetro UV-Visible UVmini-1240
Con el modo fotométrico, se puede medir la absorbancia o la transmitancia en la
longitud de onda fija. Análisis cuantitativo fijo usando el método Factor-K puede
también ser usado. Resultados son automáticamente impresos o son mandados a la
puerta RS-232C. Con varios posicionadores de celda opcionales o con configuración
sipper/auto-muestra, medidas continuas de muestras también es posible. (Bermejo &
Moreno, s,f)
Ilustración 5. Espectrofotómetro UV-Visible UVmini-
1240
Espectrofotómetro Infrarrojo
Equipo que permutación de y la identificación de grupos funcionales de materiales
orgánicos, pinturas y determinadas estructuras de muestras sólidas y liquidas por
transmisión espectroscopia de infrarrojo por transformada de Fourier (FTIR), en el
rango espectral comprendido entre 400 y 4000 cm-1. (Olsen, 1990).
Ilustración 5. Espectrofotómetro de infrarrojo
5. Función del espectrofotómetro
Tiene dos funciones principales:
Ofrece información de una muestra sobre la naturaleza de la sustancia que
contiene.
Señala indirectamente la cantidad de la sustancia a investigar que se encuentra
presente en la muestra.
6. Dibuje un esquema del funcionamiento del espectrofotómetro y explíquelo
de manera sencilla.
Gráfico 1 Esquema del espectrómetro
El espectrofotómetro se encuentra compuesta de una fuente de luz (bombilla) que
produce luz blanca. La primera rendija selecciona un rayo que contiene todas las
frecuencias emitidas. Este rayo pasa a través de un prisma de vidrio que descompone la
luz blanca en sus diferentes frecuencias (del rojo al violeta). Una segunda rendija
selecciona una de las frecuencias (luz monocromática) que incidirá sobre la cubeta que
contiene la muestra. Al conjunto del prisma y segunda rendija se la denomina
monocromador. Luego el rayo monocromático que atraviesa la muestra incide sobre el
detector, que transfiere los datos a un sistema informático donde se genera el espectro.
Si la frecuencia seleccionada en la segunda rendija no es absorbida por la muestra se
produce un punto de la línea base del espectro. Cuando la frecuencia de la radiación es
adecuada para producir una transición (vibracional, electrónica...) se observa un pico de
absorción en el espectro. (Méndez. 2006).
7. Describa la función de cada parte del espectrofotómetro
Monocromador
El monocromador de un espectrofotómetro aísla las radiaciones de longitud de onda
deseada, logrando obtener luz monocromática. Un monocromador está constituido por
las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersión.
Colimador
El colimador es un lente que lleva el haz de luz entrante con una determinada longitud
de onda hacia un prisma, el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz logrando
que se redireccione hacia la rendija de salida
Compartimiento de muestra
En el compartimento de muestra es donde se lleva a cabo la interacción R.E.M. con la
materia.
Detector
El detector se encarga de evidenciar una radiación para que posteriormente sea
estudiada y saber a qué tipo de respuesta se enfrentarán (fotones o calor).
Registrador
Convierte el fenómeno físico en números proporcionales al analito en cuestión.
Fotodetectores
Los fotodetectores de un espectrofotómetro perciben la señal en forma simultánea en 16
longitudes de onda y cubren al espectro visible, de esta manera se reduce el tiempo de
medida y minimiza las partes móviles del equipo.
Fuente de luz
La misma ilumina la muestra. Debe cumplir con las condiciones de estabilidad,
direccionalidad, distribución de energía espectral continua y larga vida. Las fuentes
empleadas son lámpara de tungsteno y lámpara de arco de xenón.
