INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA
INFORME DE PRÁCTICAS
LABORATORIO DE MÉTODOS CUANTITATIVOS 2LM2
PRÁCTICA 13. ANÁLISIS CUALITATIVO Y
CUANTITATIVO DE UNO Y MULTICOMPONENTES DE
COMPUESTOS ORGÁNICOS E INORGÁNICOS MEDIANTE
ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE
DOCENTES
Aguilar Doroteo Leticia
Bolaños Valerio Emma
FECHA DE ENTREGA
09/05/2023
EQUIPO 2
o Hernández Campos Melina
o Hernández Tarango Erandi Natalia
o Luna Borja Vianey
Objetivos
a) Obtener el espectro de absorción del verde de bromocresol y el espectro de absorción del
anaranjado de metilo.
b) Determinar la longitud de onda de máxima absorción del verde de bromocresol y del
anaranjado de metilo.
c) Trazar la curvade calibración del verde de bromocresol y del anaranjado de metilo.
d) Determinar el coeficiente de absortividad molar, , del verde de bromocresol y del
anaranjado de metilo.
e) Realizar un análisis cuantitativo para determinar la concentración de verde de
bromocresol y anaranjado de metilo cuando estos componentes forman parte de una
muestra problema.
Introducción
La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las
investigaciones biológicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite
comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una
cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la
misma sustancia.
Las radiaciones electromagnéticas tienen distintas frecuencias, de las cuales nuestro
ojo es capaz de percibir apenas un segmento: el correspondiente a las longitudes de
onda entre 380 y 750 nanómetros aproximadamente. Fuera del espectro visible se
encuentran las radiaciones con las longitudes de onda propias de la luz infrarroja (por
encima de 750 nm aprox.) y las de la luz ultravioleta (por debajo de 400 nm aprox.),
ambos extremos ya invisibles para el ojo humano.
Ley de Beer–Lambert
La ley de Beer–Lambert relaciona la absorción de la luz de una solución con las
propiedades de la solución según la siguiente ecuación:
A = εbc
Donde:
ε es la absortividad molar de las especies absorbentes.
b es la longitud del recorrido.
c es la concentración de las especies absorbentes.
En esta práctica se trabajó con dos indicadores, los cuáles fueron: Verde de
Bromocresol (VBC) y Anaranjado de Metilo (ANM)
Verde de bromocresol (VBC)
El verde de bromocresol es un colorante orgánico perteneciente a la familia del
trifenilmetano. Su nombre científico es 3,3’,5,5’-tetrabromo m-cresolsulfonftaleína. Su
fórmula química es C21H14Br4O5S.
Tiene la capacidad de reaccionar frente al cambio de pH en el rango entre 3.8 a 5.4,
donde cambia de amarillo a azul verdoso, el indicador de pH verde de bromocresol
posee un punto isosbéstico a 515 nm. Esto quiere decir que en esa longitud de ondas
la sustancia mantiene su absorbancia, sin importar el pH en el que se encuentre.
Anaranjado de Metilo (ANM)
El naranja de metilo (anaranjado de metilo, heliantina, anaranjado de Poivrier, naranja
gold o anaranjado III) de fórmula molecular (C14H14N3NaO3S) es una sal sódica de
un diazocompuesto. El nombre sistemático de la IUPAC es 4-[[4-
(dimetilamino)fenil]diazenil]benceno-1-sulfonato de sodio.
La principal característica estructural del naranja de metilo es que presenta un grupo
azo (–N=N–) unido a dos anillos aromáticos sustituidos.
El cambio de color que experimenta el naranja de metilo, a diferente pH de debe a las
distintas especies que se forman. Así como en la forma en que los electrones se
reagrupan molécula cuando se une o desprende un protón (H+).
En la zona de pH (>4.4) ácida débil, neutra y básica, su coloración es amarilla naranja,
y para pH (<3.1) fuertemente ácido cambia a rojo.
Diagrama de bloques
Espectro de absorción de verde de bromocresol
Realizar los cálculos para Trazar el diagrama de
Obtener espectro de absorción de
preparar soluciones de Tomar una alícuota de 10 mL de absorbancia en función de la .
la disolución de 15 ppm en un
concentración 10, 15, 10, 25 y 30 verde bromocresol y aforar con Obtener la longitud de onda
intervalo de 400 a 500 nm.
ppm. HCl 0.1 N. máxima, max.
Considerar una solución stock de
100 ppm de verde de bromocresol.
Obtener la curva de calibración
de cada colorante, a las dos
longitudes de onda leer
absorbancia.
Espectro de absorción de anaranjado de metilo
Realizar los cálculos para Trazar el diagrama de
Obtener espectro de absorción de
preparar soluciones de Tomar una alícuota de 10 mL de absorbancia en función de la .
la disolución de 6 ppm en un
concentración 2, 4, 6, 8 y 10 ppm. anaranjado de metilo y aforar con Obtener la longitud de onda
intervalo de 460 a 560 nm.
HCl 0.1 N. máxima, max.
Considerar una solución stock de
100 ppm de anaranjado de metilo.
Obtener la curva de calibración
de cada colorante, a las dos
longitudes de onda leer
absorbancia.
Ilustraciones
Ilustración 1.1 Reactivos de la práctica: VBC 100 ppm, Ilustración 1.2. Preparaciones de ANM y VBC.
ANM 10 ppm y HCl 0.1 N.
Resultados
Espectro de absorción
Ilustración 2.1. Espectro de absorción de verde de bromocresol.
Ilustración 2.2. Espectro de absorción de anaranjado de metilo.
a) Obtener la longitud de onda máxima, max, para cada uno de los colorantes.
Colorante max
Verde de bromocresol 442 nm
Anaranjado de metilo 510 nm
b) Llenar la siguiente tabla con la información que se solicita.
Tabla 1.1. Absorbancias experimentales para una serie de Tabla 1.2. Absorbancias experimentales para una serie de
disoluciones de verde de bromocresol en HCl 0.1 N. disoluciones de anaranjado de metilo en HCl 0.1 N.
ppm A=442 A=510 ppm A=442 A=510
10 0.272 0.098 2 0.056 0.248
15 0.444 0.155 4 0.112 0.516
20 0.591 0.202 6 0.154 0.732
25 0.731 0.242 8 0.210 0.993
30 0.867 0.289 10 0.255 1.214
Tabla 1.3. Absorbancias experimentales para una
mezcla de anaranjado de metilo y verde de bromocresol.
A=442 A=510
0.565 0.754
c) Transformar la concentración de las disoluciones de verde de bromocresol y
anaranjado de metilo de ppm a [mol L–1].
Para el verde de bromocresol, se utiliza el siguiente factor,
Peso molecular de verde de bromocresol: 698.01 g/mol
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
| | =
𝐿 698.01 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
Para el anaranjado de metilo se utiliza el siguiente factor,
Peso molecular de anaranjado de metilo: 327.34 g/mol
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
| | =
𝐿 327.34 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
Tabla 2.1. Absorbancia en función de la concentración de
verde de bromocresol. (Molaridad).
Mol/L ppm A =442 A =510
1.43264E-05 10 0.272 0.098
2.14897E-05 15 0.444 0.155
2.86529E-05 20 0.591 0.202
3.58161E-05 25 0.731 0.242
4.29793E-05 30 0.867 0.289
Tabla 2.2. Absorbancia en función de la concentración de
anaranjado de metilo. (Molaridad).
Mol/L ppm A =442 A =510
6.10986E-06 2 0.056 0.248
1.22197E-05 4 0.112 0.516
1.83296E-05 6 0.154 0.732
2.44394E-05 8 0.21 0.993
3.05493E-05 10 0.255 1.214
d) Trazar la curva de calibración para el verde de bromocresol y el anaranjado de
metilo usando la concentración en [mol L–1].
Curva de calibración: Verde de bromocresol
1
0.9 y = 20619x - 0.0098
0.8 R² = 0.9977
0.7
Absorbancia
0.6
0.5
0.4 y = 6547.3x + 0.0096
0.3 R² = 0.9963
0.2
0.1
0
0 0.00001 0.00002 0.00003 0.00004 0.00005
Mol/L
Gráfica 1.1 Curva de calibración del verde de bromocresol.
Curva de calibración: Anaranjado de metilo
1.4
1.2 y = 39428x + 0.0179
R² = 0.9989
1
Absorbancia
0.8
0.6
0.4 y = 8118x + 0.0086
R² = 0.9981
0.2
0
0 0.000005 0.00001 0.000015 0.00002 0.000025 0.00003 0.000035
Mol/L
Gráfica 1.2. Curva de calibración del anaranjado de metilo
e) Calcular los coeficientes de absortividad molar en [cm–1L mol–1] del verde de
bromocresol y del anaranjado de metilo a las dos longitudes de onda máximas.
𝐴 = 𝑒𝑏𝐶
𝐴 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
𝑒 = 𝐶𝑜𝑒𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝐷 𝑚𝑜𝑙𝑎𝑟 (𝑀−1 𝑐𝑚 −1 )
𝑀𝑜𝑙
𝐶 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 ( )
𝐿
𝑏 = 𝐿𝑜𝑛𝑔𝑖𝑡𝑢𝑑 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑒𝑙𝑑𝑎 (𝑐𝑚)
Considerando b = 1 cm
𝐴 = 𝑒𝑏𝐶
𝑚 = 𝑒𝑏 (𝑀−1 𝑐𝑚 −1 )
𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏
Verde de bromocresol max=442 ((M-1 cm-1)
A=442 20619
A=510 6547.3
Anaranjado de metilo max=510 ((M-1 cm-1)
A=442 39428
A=510 8118
f) Calcular la concentración de verde de bromocresol y anaranjado de metilo de la
mezcla problema en [mol L–1] y en ppm.
Por la ley de actividades en un sistema de dos componentes se propone un sistema
de ecuaciones para hallar la concentración,
A=A1 (Verde de bromocresol) + A2 (Anaranjado de metilo)
Considerando las absorbancias de la muestra a la longitud máxima,
20619 𝐶1 + 6547.3 𝐶2 = 0.565
39428 𝐶1 + 8118 𝐶2 = 0.754
Resolviendo el sistema y hallando las concentraciones,
Colorante Concentración (Mol/L) ppm
Verde de bromocresol 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑔
3.7220𝑥10−6 2.5979
𝐿 𝐿
Anaranjado de metilo 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑔
7.4802𝑥10−5 24.4856
𝐿 𝐿
Tabla 2.3 Concentraciones de los compuesto
Factor de conversión ppm para el verde de bromocresol,
𝑚𝑜𝑙 698.01 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝑚𝑔
| | =
𝐿 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝐿
Factor de conversión ppm para anaranjado de metilo,
𝑚𝑜𝑙 327.34 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝑚𝑔
| | =
𝐿 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝐿
Análisis de resultados y discusión
A diferencia de la práctica anterior de la cafeína, en esta práctica se realizó un análisis
de dos compuestos, por lo que se hizo un análisis de multicomponentes en el
espectrofotómetro en luz visible. Se trabajó con anaranjado de metilo y verde de
bromocresol.
Para obtener la longitud de onda máxima de cada colorante, se realizaron diferentes
concentraciones ( Ver en tabla 1.1. y tala 1.2). Posteriormente, se transformaron la
ppm a g/ mol para obtener la curva de calibración con ambos compuestos. Dando un
valor de
Verde de bromocresol 20619x-0.0098 con un factor de correlación 0.9977
Anaranjado de metilo 39428x+0.0179 con un factor de correlación 0.09989
Con ayuda de la ley de Beer-Lambert se calcularon los coeficientes de absortividad
molar, del verde bromocresol y anaranjado de metilo, tomando como referencia las
dos ondas de longitud máxima obtenidas. Con los datos obtenidos en ambos
compuestos, el coeficiente de absortividad es mayor en la longitud de onda menor
que es de 442.
Una vez calculando la concentración, los valores obtenidos se muestran en la tabla
2.4. Nos podemos dar cuenta de que el anaranjado de metilo tuvo una concentración
𝑚𝑔
mas alta, con un valor de de 24.4856 𝐿 , en cambio, el verde de bromocresol tuvo un
𝑚𝑔
valor menor de 2.5979 𝐿
La diferencia de las concentraciones se debe a la composición química de los
compuestos, también depende mucho en que longitud de onda se mide la
absorbancia . Probablemente al plantear un sistema d ecuaciones diferente, pueda
cambiar un poco el valor d lo resultados.
Conclusiones
Se logró identificar la longitud máxima de absorción de ambos compuestos, así como
obtener la curva de calibración para el verde bromocresol y el anaranjado de metilo.
Referencias
• Skoog, D. A., & West, D. M. (2015). Fundamentos de Química Analítica (9.a ed.). Cengage
Learning.
• Isac-García, J.; Dobado, J. A.; Calvo-Flores, F. G.; and Martínez-García, H. (2015). Experimental
Organic Chemistry Laboratory Manual. Elsevier Science & Technology. ISBN: 978-0-12-803893-
2
Memoria de cálculo
Verde de bromocresol
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
10 | | = 1.4326x10−5
𝐿 698.01 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
15 | | = 2.1489x10−5
𝐿 698.01 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
20 | | = 2.8652x10−5
𝐿 698.01 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
25 | | = 3.5816x10−5
𝐿 698.01 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
30 | | = 4.2979x10−5
𝐿 698.01 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
Anaranjado de metilo
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
2 | | = 6.1098x10−6
𝐿 327.34 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
4 | | = 1.2219x10−5
𝐿 327.34 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
6 | | = 1.8329x10−5
𝐿 327.34 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
8 | | = 2.4439x10−5
𝐿 327.34 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
𝑚𝑔 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝑚𝑜𝑙
10 | | = 3.0549x10−5
𝐿 327.34 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝐿
Concentración
Por la ley de actividades en un sistema de dos componentes se propone un sistema
de ecuaciones para hallar la concentración,
A=A1 (Verde de bromocresol) + A2 (Anaranjado de metilo)
A1= max1bC1 + max2bC2
A2= max1bC1 + max2bC2
Sustituyendo los valores de por cada longitud máximas en las ecuaciones,
𝐴1 = 20619 𝐶1 + 6547.3 𝐶2
𝐴2 = 39428 𝐶1 + 8118 𝐶2
Considerando las absorbancias de la muestra a la longitud máxima,
20619 𝐶1 + 6547.3 𝐶2 = 0.565
39428 𝐶1 + 8118 𝐶2 = 0.754
Resolviendo el sistema y hallando las concentraciones,
𝑚𝑜𝑙
𝑪𝟏 = 3.7220𝑥10−6
𝐿
𝑚𝑜𝑙
𝑪𝟐 = 7.4802𝑥10−5
𝐿
Convirtiendo a ppm,
𝑚𝑜𝑙 698.01 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝑚𝑔
3.7220𝑥10−6 | | = 2.5979
𝐿 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝐿
𝑚𝑜𝑙 327.34 𝑔 1000 𝑚𝑔 𝑚𝑔
7.4802𝑥10−5 | | = 24.4856
𝐿 𝑚𝑜𝑙 1𝑔 𝐿
