Guía de Trabajos Prácticos -Toxicología y Química Legal – FaCENA - UNNE
TRABAJO PRÁCTICO Nº 3:
DOSAJE DE ETANOL
OBJETIVO
Determinar y cuantificar la presencia de alcohol en una muestra de sangre y/u orina
mediante el empleo de alguno de los métodos que se detallan en la presente guía.
FUNDAMENTOS TEORICOS
El objetivo del análisis del alcohol en el organismo, inmediatamente nos enfrenta con el
objetivo primario de la toxicología forense: la detección y aislamiento de drogas en el
organismo con el expreso propósito de determinar su influencia en el
comportamiento humano. En el caso del alcohol, el problema es más complicado
debido a consideraciones prácticas. El rol predominante del automóvil en nuestra
sociedad ha demandado la imposición de leyes destinadas a proteger al público de los
conductores ebrios. Esto condicionó el desarrollo de la toxicología de tal manera que se
obtengan procedimientos rápidos y específicos para la medición del grado de
intoxicación alcohólica.
El alcohol etílico es un líquido incoloro, que se lo encuentra, normalmente, diluido en
agua y que es consumido como bebida. Lógicamente, la mayoría de las mediciones
están destinadas a determinar la cantidad de licor que una persona ha consumido.
Desafortunadamente, la mayoría de los arrestos se realizan luego de ocurrido el hecho,
cuando tal información no está disponible para las autoridades legales; además, aún si
esta información pudiera ser colectada, numerosos factores relacionados, tales como el
peso corporal y la tasa de absorción de alcohol en el organismo, son tan
extremadamente variables que hacen prácticamente imposible hallar un método
confiable que permita determinar los niveles de intoxicación alcohólica.
Al igual que otros depresores, el alcohol tiene su efecto principal sobre el SNC,
particularmente sobre el cerebro. La gravedad de la depresión es proporcional a la
cantidad de alcohol que se halla dentro de las células nerviosas. Las funciones nerviosas
más susceptibles a los efectos nocivos del alcohol se encuentran en las áreas
superficiales de la corteza cerebral.
El alcohol aparece en la sangre dentro de unos minutos luego de que ha sido ingerido
por vía oral y, lentamente, aumenta su concentración mientras empieza a ser absorbido a
partir del estómago y del intestino delgado, para ser transportado hacia el torrente
sanguíneo. Cuando todo el alcohol ha sido absorbido, se alcanza el nivel máximo en la
sangre y comienza el período post - absortivo. Entonces, la concentración del alcohol
comienza a disminuir lentamente (siempre que no existan ingestas adicionales) hasta
que alcanza, nuevamente, el valor cero.
Existen muchos factores que determinan la tasa a la cual el alcohol es absorbido e
ingresa al torrente sanguíneo. Estos incluyen el tiempo total que lleva la ingesta de la
bebida, el contenido de alcohol de la misma, la cantidad consumida y la cantidad y el
tipo de la comida que puede estar presente en el estómago al momento de producirse
la ingesta. Como puede sospecharse, al haber tantas variables, resulta difícil determinar
con exactitud el tiempo total que demandará la absorción completa del alcohol ingerido.
Por ejemplo, la cerveza se absorbe más lentamente que una cantidad equivalente de
alcohol en agua. Esto se debe, aparentemente, a los carbohidratos presentes en la
cerveza. De igual manera, el alcohol ingerido con el estómago lleno se absorbe más
lentamente que igual cantidad con el estómago vacío.
No obstante ello y, dependiendo de una serie de factores, la alcoholemia máxima puede
no ser alcanzada hasta 2 ó 3 horas después de la ingesta. De cualquier manera, bajo
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condiciones normales de bebida social, el proceso de absorción se completa en 30 a
90 minutos luego de que ha finalizado la ingesta.
Durante la fase de absorción, el alcohol ingresa lentamente al torrente sanguíneo y, a
través de esta vía, alcanza todo el organismo. Cuando se completa el período de
absorción, el alcohol se distribuirá uniformemente a través de las porciones acuosas del
organismo, esto es a través de las dos terceras partes del volumen corporal. La grasa, el
hueso, el pelo, tienen poco contenido de agua, por lo tanto, poseen escaso o nulo
contenido de alcohol. De tal manera, si la sangre no está disponible, como puede ser el
caso de algunas situaciones post - mortem, un examen médico siempre tiene la opción
de seleccionar un órgano rico en agua o en fluidos (por ej: cerebro, LCR, humor
vítreo) para determinar el contenido de alcohol corporal con un cierto grado de
exactitud.
Como el alcohol está circulando, los procesos de eliminación corporal se ponen en
marcha. Los mismos se basan en dos mecanismos: oxidación y excreción.
Aproximadamente todo el alcohol consumido (90-95%) es eventualmente oxidado a
CO2 y agua. La oxidación tiene lugar casi enteramente en el hígado. Aquí, en presencia
de la enzima alcohol deshidrogenasa, el alcohol es convertido en acetaldehído y
posteriormente en ácido acético. Este último, es subsecuentemente oxidado, en
prácticamente todas las partes del organismo, a dióxido de carbono y agua.
La porción remanente de alcohol es excretada con la respiración, orina y perspiración.
Más significativamente, extensa evidencia experimental, ha verificado que la cantidad
de alcohol exhalado en la respiración está en relación directa con la concentración
sanguínea de alcohol.
TÉCNICA OPERATORIA:
Condiciones para la obtención de la muestra en la determinación de alcohol en
sangre:
Está terminantemente contraindicado, usar como antiséptico local para la extracción
de la muestra de sangre cuando se pretende determinar la alcoholemia, alcohol etílico,
metílico, éter, alcohol yodado o cualquier otra sustancia que interfiera en la posterior
realización del análisis. El antiséptico recomendado es el cloruro mercúrico al 0,5 %.
La muestra extraída por punción venosa deberá ser conservada anticoagulada para
facilitar su ulterior manejo. Para este fin se recomienda el empleo de fluoruro de sodio
en una proporción no menor al 1 % v/v. Se prefiere el empleo de fluoruro de sodio ya
que además de actuar como anticoagulante es, al mismo tiempo, conservante de la
muestra.
Existe suficiente consenso respecto del tiempo de conservación que permite el fluoruro
de sodio. En general se admite que la muestra se mantiene inalterada por dos semanas
sin refrigeración y por cuatro meses con ella, lo que da un margen más que suficiente
para trabajar con comodidad.
Una vez obtenida la muestra, deberá ser recogida en un frasco o tubo de material
plástico, preferentemente con cierre de seguridad, o en un tubo de vidrio con tapa a
rosca (hermético). Los envases con tapones de goma no son recomendables ya que
podrían ceder a la muestra sustancias reductoras que posteriormente interferirían en las
técnicas de oxidorreducción o ciertos componentes de ellos que absorben luz UV en una
longitud de onda inconveniente para otros procedimientos.
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METODO DE MICRODIFUSION (MÉTODO DE FELDSTEIN Y KLENDSHOJ
- CÁPSULA DE CONWAY)
Este método se basa en un proceso de partición por el cual una sustancia volátil pasa a
través de la atmósfera generada en un dispositivo cerrado a un solvente puro o a un
reactivo en el cual es considerablemente más soluble que en la muestra que lo contiene.
Este proceso de partición puede ser favorecido y/o acelerado por el empleo de un
reactivo liberador. En el caso que se emplee un solvente colector, el proceso finaliza
cuando se alcanza el equilibrio. En el caso que se opte por el empleo de un reactivo
colector, el proceso finaliza cuando se agota el reaccionante.
El dispositivo más comúnmente utilizado para este tipo de procedimientos es la cápsula
de Conway.
Procedimiento:
En una cápsula de Conway colocar
a- En el compartimiento interior: 1 ml de solución 0,4 N Cr2O7K2 en H2SO4 10 N.
b- Cubrir la placa con la tapa correspondiente, previa lubricación con grasa de silicona,
hasta las ¾ partes de su superficie.
c-Por el espacio libre se agrega en el compartimento exterior: 0,5 - 1 ml de sangre más 1
ml de solución saturada de CO3K2.
d-Se tapa rápidamente la placa y se la agita suavemente con movimientos circulares
sobre una superficie plana, hasta homogeneizar los agregados.
e- Se deja reaccionar:
24 h a temperatura ambiente
10 h a 25ºC
6 h a 37ºC
2 h a 50ºC
Una vez cumplido el tiempo de la microdifusión, trasvasar 0,5 mL del contenido del
compartimento interno a un matraz de 25 ml de capacidad. Llevar a volumen con agua
destilada, mezclar por inversión.
Preparar un blanco en matraz de 25 mL, colocando 0,5 ml de solución sulfúrica de
dicromato de potasio y llevar a volumen con agua. Mezclar por inversión.
Leer en espectrofotómetro a 450 nm llevando a cero con agua destilada.
Construir una curva de calibrado con concentraciones de etanol en el rango de 0,5 a 2,5
g/l. Con la ecuación de la recta calcular el valor para las muestras analizadas.
Observaciones: La presencia de acetaldehido o alcohol isopropílico da lugar a
reacciones similares con formación de ácido acético y acetona respectivamente, con la
consiguiente reducción del dicromato de potasio.
La posibilidad de que ocurran estas reacciones le restan especificidad al método, siendo
por ello conveniente informar los resultados de las determinaciones como “contenido
en sustancias reductoras volátiles”. Ante la sospecha de estar frente a una
intoxicación por otro alcohol o sustancias reductoras deben efectuares previamente
reacciones de identificación de estos compuestos mediante reacciones específicas.
RESULTADOS EXPERIMENTALES
En este punto el alumno deberá consignar los resultados obtenidos: concentración de
etanol en muestra biológica (sangre y/u orina) expresado en g/l.
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CUESTIONARIO GUIA
1- Explique la forma en que debe tomarse la muestra de sangre para la determinación de
la alcoholemia.
2- Mencione y explique brevemente el principio o fundamento mediante el cual trabaja
el método analítico empleado en la presente guía.
3- Explique la función de cada uno de los reactivos utilizados.
4-Explique la forma en que varía la relación tiempo de reacción – temperatura de
trabajo al emplear el método de microdifusión.
5-Mencione ventajas y desventajas del método de microdifusión vs enzimático,
espirometría y otros.
BIBLIOGRAFIA
FABRE y TRUHAUT “Toxicología” 1 Ed. Paraninfo. Madrid. (1976). p. 223 – 241
FERRARI, L.A. “Análisis toxicológico de etanol y su interpretación forense.
Cálculos retrospectivos, pérdida o generación en tejidos humanos e indicadores
biológicos de ingesta”. Breve revisión. Ciencia forense latinoamericana. (2008). 2. 20-
35.
GIANNUZZI L. y FERRARI L.A. “Manual De Técnicas de laboratorio en
Toxicología y Química Forense”. Ed. Praia, Buenos Aires (2003). 211 – 221.
IOVINE– SELVA. “El laboratorio en la clínica”. Ed. Panamericana. Buenos Aires.
(1993). p. 1357 – 1367.
MOFFATT, A. (ed.): “CLARKE’S Analyi of Drug and Poion” in pharmaceuticals,
body fluids, and post mortem material. 4th ed. The Pharmaceutical Press, London (2011)
p. 94- 110.
SAFERSTEIN, R. “Criminalistics: And Introduction to forensic science” Ed.
Regents/Prentice Hall. New Jersey. 4a ed., (1990), p. 247 – 260.
TORRES, A.M. y CAMARGO, F. “Toxicología del alcohol etílico. Dosaje en
muestras biológicas” 1ra ed., Ed. Elemento. Ciudad Autónoma de Bs As (2017).
