Biología Molecular Estructura de ácidos nucleicos

1. ¿En qué parte de la célula se encuentran los ácidos nucleicos y

cómo están almacenados u organizados? Los ácidos nucleicos § Grupo fosfato: monofosfatos, difosfatos o trifosfatos. En la parte
son ADN y ARN. El ADN se localiza en los cromosomas central tiene el fosforo alrededor oxigenos.
condensados (ultimo nivel de condensación de la cromatina) del § Pentosa (5C): puede ser ribosa o desoxirribosa. Se diferencian
núcleo, las mitocondrias y los cloroplastos de células eucariotas, por la presencia (ribosa) o ausencia (desoxi) de un grupo OH en
mientras que en las células procariotas se encuentra en su único el carbono 2.
cromosoma y, de forma extra cromosómica, en forma de
§ Base nitrogenada: derivado de los compuestos heterocíclicoss
plásmidos. El ARN se encuentra SOLO (libre) en el núcleo, el
aromáticos de las purinas y pirimidinas. Esto cambiará en cada
citoplasma, la matriz mitocondrial y el estroma de cloroplastos de
nucleotido como lo muestra la imagen inferior.
células eucariotas y en el citosol de células procariotas. Puede
formar estructuras secundarias y puede estar asociado a algunas Cuando hablamos de los
proteínas de transporte. ácidos nucleicos estamos
Están organizados por largas cadenas de nucleótidos, enlazados entre hablando de monómeros
sí por grupos fosfato. Los nucleótidos que conforman el ADN son con una base nitrogenada,
Adenina (A), Citocina (C), Guanina (G) y Timina (T); difieren con el ARN, una pentosa y una azúcar.
puesto que se cambia la Timina (T) por Uracilo (U). Tenemos las purinas (A,G)
y pirimidinas (C,T).

3. ¿Cuál es la estructura básica de un ácido nucleico? La estructura

básica de los ácidos nucleicos son las cadenas de nucleótidos,
las cuales se enlazan para formar polímeros que propiamente son
los ácidos nucleicos, también conocidos como polinucleótidos.

Las bases nitrogenadas (4) del Las bases nitrogenadas (4) del
ADN: ARN:

Purinas* Purinas
§ Adenina § Adenina
§ Guanina § Guanina
Tener en cuenta el nucleosoma el cual es la forma más básica de Pirimidinas
Pirimidinas
condensación de la cromatina § Citosina
§ Citosina
§ Tiamina § Uracilo

*Esta clasificación se hace de acuerdo a sus tamaños; las purinas

tienen 2 anillos, las pirimidinas 1 (ver imágenes de colores arriba). Esta
caracteristica afecta su complementariedad.

La estructura general de un nucleotido

inicia con una base ya sea purina o
pirimidina, azúcar (desoxirribosa o
ribosa) y fosfato.

2. ¿Qué es un nucleótido? Son las subunidades de los polimeros 4. ¿Cuáles son los tipos de enlace que se encuentran en los ácidos
lineales de ADN y RNA (los cuales difieren en la cantidad de estas nucleicos?
subunidades) que se conocen como ácidos nucleicos. Los genes § Enlace fosfodiester: este hace referencia a las uniones en el
se diferenciaran en su información basandose en el orden de extremo 5 de la pentosa con un fosfato y en el extremo 3 de otra
estos nucleotidos. ¿Cuál es su estructura? Están compuestos por pentosa con ese mismo fosfato, es decir, son 2 enlaces
un: fosfoester. Esta secuencia de nucleótidos unidos por enlaces
 fosfoester (con el fosfato) es la estructura primaria de los ácidos
nucleicos.
§ Puentes de hidrógenos: estos están entre una base nitrogenada
de una hebra del ácido nucleico y otra base nitrogenada de la otra
hebra del ácido nucleico. De la misma forma, el número de
puentes de hidrogeno varia de cuerdo al par de bases
nitrogenadas que se aparean, es decir, entre la T y A hay dos
puentes de hidrogeno, pero entre la re4G y la U hay 3. Lo anterior
es por la forma, el tamaño y la composición de las bases. Así, la
unión entre una purina más grande y Una pirimidina más pequeña
se le llama Pares de bases de Watson-CRICK.

Tener muy en cuenta cómo cambia el azúcar dependiendo de si es ADN

o ARN, pues el carbono 2 puede tener entonces un OH, el cual puede
reaccionar y hacer más inestable la estructura de la molécula.

El carbono 3 debe tener un OH para poder polimerizar la cadena y

formar una extensión como tal. El carbono 5 también es importante
porque ese también interactúa con el carbono 3 para hacer la extensión
de la cadena.

No olvidar el enlace glicosídico entre el azúcar y la base nitrogenada. 6. ¿Cuáles son las diferentes formas estructurales en las que
Otro dato a tener en cuenta es que la cadena siempre va de 5’ a 3’ y podemos encontrar el DNA y en qué condiciones
en el extremo 5’ hay un fosfato libre y en el 3’ hay un hidroxilo libre. fisiológicas/ambientales se encuentran? La mayoría del DNA de
las celias es una hélice dextrógira con las bases espaciadas
5. ¿Cuáles son las principales diferencias estructurales entre
normalmente a 0,34nm de distancia a lo largo del eje de la hélice.
DNA y RNA?
Dando así un giro completo cada 3.4/3.6nm dependiendo de la
§ DNA: su azucar es desoxiribosa (-1 en la posición 2).
secuencia. Existen dos formas del DNA: la forma B y la forma A.
o Tiene una hélice doble dextrógira que se encuentra en
En la forma B del DNA hay entre 10 y 10.5 pares por vuelta y está
sentido antiparalelo, la cual es estabilizada por puentes
presente en la mayoría de los tramos del DNA de las células en
de hidrogeno entre las bases y por la unión de los
condiciones normales. En la parte externa de la forma B del DNA,
anillos aromáticos de las bases en el centro de la hélice.
los espacios entre las hebras se conocen como surco mayor y
o Cuentan con bases de adenina y guanina: purinas (2
surco menor.
anillos) y de citosina, timina: primidinas (1 anillo).
§ RNA: su azúcar es ribosa. En condiciones de laboratorio en las cuales la mayor parte del agua se
o Esta continene a diferencia de la timina, uracilo como elimina del DNA, la estructura cristalografica de estas moleculas cambia
pirimidina. la forma A del DNA que normalmente tiene 11 pares de base por giro,
o Generalmente solo tiene una cadena. Molécula
dando como resultado un surco mayor mucho más profundo y un
monocatenaria (aunque existe ARN de doble cadena surco menor mucho menos profundo y más estrecho que la forma B.
asociado a infección viral). Por esto la forma A se ve mas ancha y corta que la forma B.
o Existen varios tipos: mensajero, ribosomal, de
transferencia y regulatorios. (estructuras secundarias y
terciarias son RNA plegados entre sí mismos para poder
cumplir una labor como por ejemplo el RNA-t que tiene
forma de trebol)
§ Las uniones entre las bases se dan siempre y cuando sean
complementarias. Esto está limitado a los tamaños y grupos
funcionales presentes en las bases: Ej. A solo se une con T y G
con C Tener en cuenta el surco mayor y menor del ADN
 § El cambio de nucleótidos de timina (del DNA) y el uracilo (del RNA)
es la segunda diferencia que le da más estabilidad al DNA. Esto es
gracias a que a pesar de que la timina y el uracilo sean similares
estructuralmente, el uracilo tiende a ser más reactivo lográndose
unir incluso con otros nucleótidos que no son de adenina. Por otro
lado, si el DNA funcionara con uracilo, entonces sería más
propenso a errores, gracias a la propiedad de la que hablábamos
antes. A pesar de todo el uracilo es muy util en el RNA, pues es el
que le permite formar estructuras secundarias como la de trebol
del RNA-T

No se habló pero acá esta la imagen explicándola

La principal razón por la cual el RNA es menos estable es porque tiene

de azúcar una ribosa por lo que el OH del carbono 2 puede reaccionar
Configuración z es como un desorden. con el enlace peptídico del carbono 3, desestabilizando la estructura.
Por esta razón el RNA está en configuración A permanentemente,
7. ¿A qué se debe que la estructura del DNA sea más estable porque de esta forma el OH está separado de ese enlace, permitiéndole
que la del RNA? ser estable.

(Del libro pag 119): Las 2 hebras de polinucleótidos se enrollan 8. Explique el proceso de desnaturalización de ácidos nucleicos
formando doble hélice y proyectan al interior las bases, estas hebras ¿cómo se lograría desnaturalizar un ácido nucleico en el
se unen mediante pares de bases que necesitan puentes de hidrógeno laboratorio? Ocurre mediante el desenrollamiento y separación
para aparearse, estos contribuyen a la estabilidad de la doble hélice, al de las hebras del ADN.
igual que lo hacen de forma adicional las interacciones hidrofóbicas, y
de van de Waals con pares de bases cercanas. De forma experimental, puede conseguirse mediante el aumento de la
temperatura a una solución que los contenga. A medida que sube la
(Del libro pag 120): Se debe a que el hidrógeno en posición 2’ en la energía térmica, se genera un mayor movimiento de las moléculas
desoxirribosa del DNA lo hace mucho más estable que el RNA, que desencadenando finalmente el rompimiento de los puentes de
tiene un grupo hidroxilo en posición 2’ de la ribosa. Estos grupos 2’ hidrógeno y otras fuerzas que le brinden estabilidad a la doble hélice.
hidroxilo del RNA tienen papel en la hidrólisis lenta, catalizada por OH- Luego, se va a dar la separación de las dos hebras y por la repulsión
de los enlaces fosfodiéster a pH neutro, mientras que como en DNA no electrostática del esqueleto van a apartarse.
hay estos grupos, se evita este proceso. Así, la presencia de
desoxirribosa en el DNA lo hace una molécula más estable y es crítico
esto para su función en el almacenamiento genético.

Existen 2 principales diferencias por las cuales el DNA es más estable

del RNA y estas son:

§ La desoxirribosa al ser un derivado de la ribosa a la que se le ha

quitado un grupo de oxígeno (se puede ver en el nombre desoxi) Además de la temperatura tenemos que tener en cuenta otros factores
resulta ser más estable, pues este pequeño cambio aumenta su como la concentración de sales, pH y loas agentes químicos (como la
flexibilidad lo cual es esencial para su estabilidad. Es esta formamida).
flexibilidad, la cual le permite la formación de hélices dobles al
DNA siendo imposible tener una hélice doble hecha con ribosa.
Cuando necesitamos la cadena sola es que es necesaria hacer este
proceso de desnaturalización. Por otro lado, si quitamos el agente
desnaturalizante, la cadena vuelve a la normalidad.

OJO: el ADN polimerasa, a pesar de separar el ADN no lo desnaturaliza.

Esta enzima tiene un proceso de separación de moléculas de forma
natural y con gasto energético (es una reacción catalítica).

9. ¿Qué es la temperatura de fusión de un ácido nucleico y qué

aspectos estructurales están asociadas a ella? Temperatura de
fusión (Tm): Es la temperatura a la cual las hebras se separan,
temperatura donde inicia la desnaturalización del ADN.

Aspectos asociados a la Tm

§ Mayor proporción de pares G-C --> Esto provoca que se necesite

una temperatura más elevada para desnaturalizarse. Esto se debe En la gráfica se ve como el DNA monocatenario va a tener más
a los tres puentes entre estos lo hace más estables que los pares absorbancia. NOTA: Esto no mide la degradación.
A-T qué poseen dos puentes de hidrógeno.
§ Porcentaje de pares A-T.
§ Longitud en solucion:
§ Concentración iónica à Debido a que los grupos fosfato, de
carga negativa, de ambas hebras se encuentran protegidos por
iones de carga positiva. Si la concentración iónica es baja, el
escudo disminuye por lo que aumenta la fuerza de repulsión entre
las hebras y se reduce la temperatura de fusión.
§ pH extremos à Estos desnaturalizan el ADN a bajas
temperaturas. A un pH bajo/ácido las bases se protonan
cargándose positivamente y se repelen unas a otras; cuando el pH
es elevado/alcalino las bases pierden protones y se cargan
negativas, repeliéndose entre sí.

Es igual a la Tm

Cuando tenemos una molécula de estas en solución y la sometemos a

ciertas frecuencias de luz podemos medir su absorbancia para obtener
información del ADN. La absorbancia hace referencia a la capacidad del
ADN de absorber haces de luz (entre una longitud de onda de 260 a
280). Esta medida me permite medir concentración del ADN, moléculas
diferentes al ADN, entre otras.

Moléculas de doble cadena absorben menor proporción de luz que una

cadena sencilla de ADN, esto es gracias a que en la segunda va a haber
más superficie expuesta para absorber la longitud de onda.
 Estructura de an: propiedades físicas y quimicas

anemia falciforme fenilcetonuria

Etiología: La anemia de células falciformes es causada por una Etiología: es un error congénito en el metabolismo debido a una
mutación en el gen de la hemoglobina beta en cromosoma 11, que le mutación en el gen PAH (Fenilalanina hidroxilasa), que se encarga de
dice a tu cuerpo que produzca el compuesto rico en hierro que hace codificar la enzima fenilalanina hidroxilasa que convierte la fenilalanina
que la sangre sea roja y permite que los glóbulos rojos transporten el en tirosina, entonces en la enfermedad se va a generar un déficit de
oxígeno de los pulmones a todo el cuerpo. Entonces la hemoglobina tirosina, un aumento del fenilpirúvico (cetoácido) y se afecta el sistema
cambia a ser valina en uno de sus AMC, el eritrocito pierde forma nervioso. Mutación del gen PAH que se expresa en el cromosoma 12q.
cuando no posee oxígeno.
AN que se obtiene: ADN genómico
AN que se obtiene: ADN genómico
Muestra: sanguínea periférica con anticoagulante, que se realiza
Muestra: La muestra se puede obtener por dos métodos: (1) sangre mediante tamizaje neonatal y que ayuda a confirmar si hay mutación o
periférica con anticoagulante u (2) obtener células de mucosa oral para no, por eso no se puede extraer mediante otra muestra.
hacer extracción directamente. Si hay mutación de ese gen podemos
Método de extracción: Fenol - cloroformo
encontrarla en ambas, pero estará más acumulada en muestra
sanguínea.

(1) Muestra de sangre, porque ahí es donde se da la mutación, distrofia muscular de Duchenne
entonces será más evidente. Se extrae sangre venosa (porque da más
flujo de sangre), se vierte en un frasco (que debe ser estéril y Etiología: enfermedad recesiva, asociada a cromosoma X, afecta el gen
desechable), se agrega anticoagulante (que inhibe la formación de DMD, que hace que se ausente la proteína distrofina, lo que causa la
coagulo sanguíneo) y se analiza células sanguíneas. distrofia muscular.

(2) Mucosa oral, porque es un epitelio muy cambiante y, además, es AN que se obtiene: ADN genómico.
sencilla de realizar. Se debe hacer un barrido bucal, con un isopo
rascarle la mejilla a persona y ponerlo en una mezcla. Muestra: muestra de sangre periférica anticoagulada.

Notita.
- Se usa anticoagulante cuando se necesita analizar células tuber culosis
sanguíneas (ADN o AN endógeno), por tanto, no se separan del
suero, ni hay necesidad de formar coagulo ni centrifugar. Etiología: en fase primaria no causa síntomas, pero cuando se activa,
Si tengo sangre periférica + anticoagulante no forma coagulo,
la bacteria infecta pulmones y provoca expectoración de sangre, fatiga,
por tanto, las células sanguíneas están dispersas en suero
fiebres, entre otros síntomas.
sanguíneo. Se toma muestra de sangre y realizo el análisis
directamente.
AN que se obtiene: ADN genómico.
- No se usa anticoagulante porque cuando se busca analizar ADN Muestra: de esputo de 5 a 10ml y depositarlo en un recipiente nuevo.
o AN exógeno, se necesita el suero libre, por eso se deja sin
Posteriormente, se debe hacer lisis con agente detergente, para
anticoagulante, para que se forme un coagulo sanguíneo, se
romper la membrana celular y nuclear y así liberar AN del organismo,
pueda centrifugar, separar células y dejar suero libre para
analizar. Se toma muestra de sangre cuando hay un agente luego, encubarlo a 75°C x 2h, junto con un buffer de lisis.
exógeno, es decir, que se encuentra en el torrente sanguíneo, Con esto se obtiene AN en general y, finalmente, mediante la PCR
pero no en el interior de las células. dirigida específica se detectan las bacterias.
Es importante: usar N acetil L cisteína (luego de tomar la muestra) para
descontaminar y tener cuidado con nucleasas (ADNasas, para que no
se rompa la información).

Método de extracción: fenol – cloroformo.

 virus de papiloma humano
Etiología: Como es virus, tiene material genético, necesita huésped,
sus genes importantes son E7 y E6, el último se incluye en un patrón
de ubiquitinación, destruyen la proteína P53, evita la supresión de
apoptosis porque se genera replicación descontrolada de células.
Afecta principalmente cuello uterino, en endocérvix donde hay células
epiteliales.

AN que se obtiene: ADN exógeno.

Muestra: (1) biopsia de cuello uterino, (2) citología, con espátula se

recolecta la muestra de células. Se analiza si hay genoma viral dentro
del genoma del paciente.

Método de extracción: fenol – cloroformo.

galactosemia
Etiología: enfermedad autosómica recesiva causada por mutación en
el gen GALT. Hace que se dañen las enzimas que transforman galactosa
en glucosa, entonces se acumula galactosa en el bebé. Se diagnostica
en etapa prenatal, porque rechaza leche materna, problemas
gastrointestinales.

AN que se obtiene: ADN genómico del líquido amniótico, en presencia

de amniocitos.

Muestra: amniocentesis, en la cual se extrae líquido amniótico que

rodea al feto mediante el ingreso de una aguja en la cavidad abdominal
de la madre. Se recomienda utilizar heparina, que sirve como fijador
para detener ciertos procesos fisiológicos y funciona como
estabilizador.

síndrome de turner
Etiología: ausencia o desarrollo incompleto de cromosoma x, solo
afecta mujeres. Sintomatología: baja estatura, infertilidad, defectos
cardiacos, ausencia de menstruación, oreja baja, tórax ancho, cabello
diferente.

AN que se obtiene: ADN exógeno.

Muestra: en este caso, se debe hacer el pare de la metafase (con

colchicina), se hace un anclaje de cromosomas y se observa pares
cromosómicos para analizar si existe la anomalía o no. Esto es porque
los cromosomas los observaremos en estado de condensación
máximo de la cromatina, en metafase.

Notita.
- El cariotipo es X0. Un cariotipo sirve para realizar una muestra
de los 23 pares de cromosomas y analizar errores.
- En una extracción de AN se obtiene ADN o ARN puro.
- Por tanto, con una extracción de AN no se puede hacer
cariotipo, porque no hay cromosomas, sino que está puro.
 Biología Clase de introducción

¿Qué es la microbiología?
 Básicamente no es visible por que el ADN estará mesclado con
el resto de cosas por lo que no seria visible

Extracción de ADN a partir de fresa

4. ¿Cuál sería la función del jugo de piña en la mezcla?
 La función del jugo de piña es purificar el ADN, debido a que el
1. Realice un diagrama de flujo con dibujos o fotos del proceso de
ADN aún se encuentra empaquetado en las histonas, y la piña al
extracción de fresas. ¿nota alguna diferencia con el diagrama de
contener bromelaína, una enzima proteolítica, es capaz de
flujo realizado para la sesión anterior? ¿cuál/es?
separar las histonas del ADN para purificar nuestro ácido
 No se realiza la centrifugación y tampoco el lavado del ADN
con etanol. El método es mucho más “rustico” y rápido (no nucleico.
hay necesidad de dejarlo reposar por mucho tiempo).
Tampoco se usaron solventes orgánicos y se usaron
soluciones salinas para desnaturalizar. (si se hiciera en 5. ¿Con qué otros compuestos podrían reemplazar el jugo de piña
el lab si debiera haber centrifugación) según su lectura?
 Otros compuestos que sirven para la purificación de ácidos
nucleicos son:
- Solución de fenol, cloroformo y alcohol.
- Soluciones concentradas de sales.
- Centrifugación en gradiente de cloruro de cesio.
- Fijando la muestra con sílice o vidrio con sales caotrópicas y
las proteínas se eliminan mediante lavado.
- La papaya.
- Proteinasa k
- SDS
6. Si omitimos este paso (adición de jugo de piña) ¿qué resultados
obtendrán al final?
 Se lograría extraer el ADN, pero este estaría empaquetado en las
histonas, ya que no se realizó la hidrólisis de proteína. De esta
forma si no se aplica el jugo obtendiramos un ADN poco “puro”.

7. Recuerden la fórmula química de la sal, ¿por qué es útil a la hora

de purificar el ADN?
 NaCl à cloruro de sodio, es muy importante a la hora de la
2. ¿Cuál es el propósito de adicionar jabón a sus muestras? purificación ya que los iones disociados en agua interactúan con
las proteínas, por su polaridad, afectando su función, lo que facilita
 El jabón se utiliza como el detergente, el cual genera la lisis de la el proceso de separación de histonas del ADN.
membrana celular y nuclear de la célula vegetal, debido a que las  Sirve para solubilizar las proteínas y neutraliza la carga negativa
moléculas del jabón tienen parte hidrofílica e hidrofóbica, la que tiene la carga fosfato haciendo así que los ácidos nucleicos
primera se une a las cabezas polares de las membranas y la fuesen menos hidrofílicos.
última se une con la porción lipídica de la membrana, resultando  La sal, al interactuar con el agua permite que el ion de sodio quede
así en la exposición del material genético al ambiente. libre y interactúe con el fosfato del ADN, neutralizándolo y
 Aca estamos en una primera fase de la extraccion en la cual se permitiendo que se separe al agregar alcohol
rompen las membranas con el uso del jabon que funciona como 8. Describan las funciones del alcohol en la mezcla.
detergente.  El alcohol se usa como precipitante, ya que el ADN es insoluble
en este y más si está frío. Es decir que el alcohol separa el ADN
3. ¿Es posible observar el ADN en este paso (adición del jabón)? de los otros componentes que si son solubles.
Justifique su respuesta.  Cuando se añade el alcohol frío, las moléculas de alcohol se
 No, porque se presenta una mezcla homogénea, ya que, si bien unen a las del agua, entonces desplaza el agua que interacciona
sale el ADN, también lo hacen los restos celulares y moléculas con el ADN y con los iones Na+ de la sal. Los iones Na+ se unen
que acompañan al ADN.
 a los iones fosfato del ADN, neutralizan su carga, estos pierden
su solubilidad y suben como filamentos blancos.

9. Observen y describan el comportamiento de las muestras de

ADN en el contenido del tubo. ¿Qué características debe tener el
contenido líquido del tubo para preservar el ADN?
 El ADN es soluble en agua, pero el alcohol que fue añadido
alteró su solubilidad, por lo que este se empezó a acumular en la
parte superior del precipitado (donde se encuentra el alcohol)
- Para su preservación convendría ponerlo en agua estéril y
libre de ADNsas, o bien soluciones amortiguadoras en la imagen podemos ver la diferencia de los poros del gel de
- Para poder almacenar el ADN se necesita un buffer que agarosa y del de poliacrilamida. Imagen dibujada en clase por la
mantenga estable el ADN, ya que el buffer va a mantener el profe.
pH estable y por eso va a evitar el daño de las cadenas. Por 13. Realice un diagrama de flujo del proceso de preparación del gel
otro lado se almacena en nitrógeno liquido cuando se y corrida del mismo.
necesita guardar por un largo periodo de tiempo
10. Los protocolos para extracción de ARN son similares a los
empleados para realizar extracción de ADN, sin embargo, para la
obtención de ARN se deben tener ciertas precauciones a la hora
de manipular las muestras y al llevar a cabo el proceso de
extracción, ¿consideran que es posible extraer RNA con este
mismo protocolo? ¿algunos reactivos específicos para este
proceso? Justifique su respuesta.
 La purificación se basa en la interacción de la resina y sus
grupos DEAE cargados positivamente con los grupos fosfatos
14. Haga un dibujo que represente lo siguiente:
(cargados negativamente) del RNA
 Se usaria el agua dimetil pirocarbonato al 0.1% para evitar las
a. El resultado que usted espera cuando corra el gel de
modificaciones covalentes
ADN que acaba de obtener. Tenga en cuenta las
 Para el RNA se usa una temperatura mas baja.
siguientes preguntas ¿qué tamaño tendrá este ADN?
 Es posible no usar la proteinasa K para estos procedimientos.
¿En qué parte del gel encontrará la banda? ¿cómo
 Se puede hacer una separación con pH (8.5 a 5.2)
determina el peso de la banda?

11. Según la lectura ¿cuál fue el método de extracción utilizado?

 Salting-out à ya que se utilizó una solución saturada de sales
para la purificación de ADN.

Electroforesis

12. Con base en su lectura indique qué tipo de electroforesis

realizaría para este ADN que acaba de extraer y justifique.
Con base a la lectura se tendría que hacer una
electroforesis de Ácidos Nucleicos con gel de agarosa de
forma horizontal. Esta forma de electroforesis nos va a
permitir trabajar con el ADN y centrarnos específicamente
en ese. Además, nos va a permitir separar el ADN por su
peso molecular, pues entre mayor sea el peso más difícil va
a ser para el ADN pasar por los poros de agarosa. Es por
esto que los ADN más pesados van a tender a quedarse *El espacio en rojo representa el DNA de la fresa*
más “arriba” que los menos pesados. Al hacer la electroforesis de este laboratorio se espera que
No se usa poliacrilamida por que este va a tener poros más se obtenga un patrón como el que se ve en el dibujo. Ahí
pequeños y esto va a permitir separar el ADN de forma vamos a encontrar tantas cadenas largas, pesadas y con
mas precisa, pero al tener que hacer esto en un genoma alta intensidad, así como cadenas pequeñas y de bajo peso
entero resultaría en muy poca separación en la e intensidad, aunque hay que aclarar que todas estas
electroforesis, pues la muestra es muy pesada y esto no cadenas se van a mover hacia el polo positivo.
nos permitirá ver bien la muestra. Al tratarse de un genoma completo el ADN se va a
encontrar muy cerca del polo negativo, esto ya que es muy
pesado.
 b. En el dibujo indique la dirección de migración del ADN METODO GENERAL PARA LA EXTRACCION Y PURIFICACION DEL
dentro del gel. ADN:

Disgregación o fragmentación del tejido: esto se hace si hay una parte

dura que romper como la cápside de las bacterias.
LA CLASE
Lisis celular: esto se hace con métodos químicos (detergente) y
Lo más importante antes de iniciar con un proceso de físicos (congelamiento-descongelamiento y homogenizadores).
extracción de AND es: Además, se rompe la membrana celular.
 Colecta de la muestra, almacenamiento y transporte.
Clarificación: liberación de proteínas y limpieza de los restos celulares
Para esto se quiere evitar cualquier contaminación de la muestra y se que no queremos sacar.
tiene que almacenar en frio para evitar el desgaste de los ácidos
nucleicos. Purificación: precipitación del ADN. Acá se tiene en cuenta 3 cosas: el
tamaño, la calidad y la nota (intensidad).

- ¿de dónde se obtiene el ADN? Análisis: se puede hacer de 2 formas que son la cualitativa y la
cuantitativa. La cuantitativa busca la espectrancia de la muestra
El ADN se obtiene de cualquier material biológico mientras que lo cualitativo se centra en las cualidades de esta.

- ¿Cómo se prepara la muestra?

CALIDAD DEL AND EN GELES DE AGAROSA
Por medio de formas como los pases de soluciones
(cloroformo/alcohol isoamílico) o métodos de columna que se hacen  Acá se ven bandas de ADN de alto peso molecular.
con kits especializados. Esto puede ser usado para por ejemplo  El smear (hace referencia a las que tienen x) indica degradación
identificar mutaciones en las células. del DNA

RNA de cultivos celualres:

 PREGUNTAS AL FINAL DE LA CLASE:

- ¿Cuál es la diferencia entre un buffer de corrimiento y

buffer de carga?

El buffer de carga se usa para cargar la muestra y de esta forma

aumenta la densidad (y el peso molecular). De esta forma cada
muestra que se coloca en la zona de muestra y no se va a quedar
nadando en el buffer de corrida.

El buffer de corrida permite usar la electroforesis por mucho tiempo,

ya que esta evita que el aparato se caliente por la electricidad.

 En esta imagen se ve como el cultivo de ARN 28S y 18S son de

buena calidad por su intensidad y claridad. Las bandas que están
tachadas con rojo son las degradadas y en las cuales se ve el
“smear”
 Hay incongruencia por que si se quiere separar el ARN no
debería aparecer ADN
 Intensidad de la banda=cantidad (a mayor intensidad, mayor
cantidad de ADN/ARN).
 Por último si se quiere hacer una limpieza entonces se usaría
una proteína DNAasa para degradar las partes no deseadas

NIVELES DE ABSORBANCIA QUE INDICA LA CALIDAD DEL ADN Y

ARN

TIEMPOS Y TEMPERATURAS DE ALMACENAMIENTOS

 De los modelos de replicación planteados, ¿cuál se comprobó en
organismos vivos? Replicación semiconservativa

Flujo de información genética  replicación, transcripción y

traducción.
síntesis de nueva cadena de adn
Siguen adición sucesivamente de nucleótidos, siguen la ley de Chargaff
En replicación es muy importante recordar que ADN está en el núcleo
A-T/C-G y replicación semiconservativa.
de la célula, se replica, se transcribe donde se produce ARNm. Luego
sale del núcleo, llega a citoplasma y se traduce en proteína que tendrá La cadena parental va a dar el molde
función determinada. para que nucleótidos correspondientes
se unan allí. La ADN polimerasa
modelos de síntesis de adn
sintetiza cada nucleótido a la nueva
ADN se sintetiza basado en el modelo del ADN molde/platilla, que cadena, mediante un enlace
implica la separación de cadenas para la formación de una nueva fosfodiéster (alta energía, enlace
cadena complementaria a la inicial. Es exponencial, donde de 2 cadenas covalente) para que avance la cadena.
salen 4 y así sucesivamente. Dicho enlace se forma por la unión del
hidroxilo libre del C3 y del P del C5 del
1. REPLICACIÓN DISPERSIVA  se observa cadenas hijas con siguiente nucleótido.
fragmentos de la cadena antigua y fragmentos de la nueva. En la
primera generación, se encontrarán partes del ADN inicial con el La estabilidad a lo largo de cada cadena se da por el enlace covalente
ADN que se está sintetizando. En la segunda generación y las dos cadenas que se están formando se estabilizan por puentes de
tendríamos cadenas con parte de material genético de ambas hidrógeno.
partes (mezcladas) en una misma hebra.
La replicación del ADN sólo ocurre en la mitosis durante la división
2. R. CONSERVADORA  síntesis de una molécula nueva, copia de
celular, aunque empieza a prepararse en la fase G1.
la original, quedan 2 hebras antiguas y 2 nuevas. Siempre se
tenía la misma cadena, no hay molde de nada. ¿Qué tipo de enlace une los nucleótidos entre si para formar una
3. R. SEMICONSERVADORA  cada una de las moléculas hijas se cadena sencilla? Enlace fosfodiéster.
conserva una de las cadenas originales. Tenemos cadena
parental/molde y a partir de esa obtenemos una nueva cadena. A unión de nucleótido a nueva cadena
partir de cada ciclo de replicación tendremos el doble de
información genética inicial. ¿Cómo se une un nucleótido a la nueva cadena? OH en C3 se une al
primer grupo P del C5 de la cadena que viene entrando. Se da este
enlace covalente y se retiran dos grupos pirofosfatos de la enzima.

¿Quién lo hace? Para poder llevar a cabo la síntesis es necesario la

ADN polimerasa que se encarga de añadir nucleótidos uno a uno
(siempre que sean complementarios) a la cadena de ADN. Sin
embargo, para que esta polimerasa cumpla con esto, requiere:
 Cadena molde
El modelo que describe la síntesis de ADN es la replicación  Nucleótidos y extremo OH libre
semiconservativa, confirmado por Meselson y Stahl en 1957. Se  Cebador: una cadena preexistente de 5-10 nucleótidos de
experimentó usando isotopos de nitrógeno 14 (N14) y nitrógeno 15 largo
(N15), los mezclaron en cadenas diferentes de ADN y con los  Magnesio
resultados se veían si se combinaban o salían independientes. Al ver  Requiere energía proveniente de los fosfatos unidos a los
que se combinaban N14 y N15 en una sola cadena confirmaron que nucleótidos. Cuando sus enlaces se rompen liberan la
era semiconservativa. suficiente energía para hacer enlace entre el nucleótido
entrante y la cadena creciente. A esto le llamamos
polimerización.

La dirección de síntesis es 5’-3’ porque siempre debe haber un OH libre

para que avance la cadena. La polimerasa no une un P hacia atrás, une
OH con P. La cadena molde es 3’-5’, la polimerasa lee la cadena molde
en 3’-5’ y sintetiza en 5’-3’.
 In vitro (en lab) tengo que poner la estructura sintética (nucleótidos),
para que se puedan utilizar dentro de la cadena.

¿Cuál es el símil usado para explicar la estructura de la ADN

polimerasa? Mano

¿Cómo es el mecanismo de unión de nucleótidos por la ADN

polimerasa? tipos de adn polimerasa

Llega nucleótido, teníamos 3  Identificados en célula eucariota

fosfatos unidos a pentosa. Aquí o Alfa  funciona como primasa (pone nucleótidos como
ocurre ataque nucleofílico, en en una molécula de ARN que van a funcionar como
este caso, polimerasa necesita primers. Inicia la síntesis de fragmentos.
2 magnesios, uno que o Beta  replicación del ADN nuclear
neutralice cadenas de fosfato y o Gamma  replicación de ADN mitocondrial
otro que ayuda a la liberación o Epsidon  sintetiza cadena líder
del H del OH en el C3. Al hacer o Delta  sintetiza cadena rezagada
esto, oxígeno queda libre y se  Identificados en células procariotas
une al P del nucleótido que o ADN polimerasa 1
tiene 3P, entonces se liberan o ADN polimerasa 2
otros 2P (pirofostato), es decir, o ADN polimerasa 3
hace un ataque nucleofílico a
corrección de errores por polimerasa
un fosfato y así se forma el
enlace fosfodiéster. La molécula va a censar el nucleótido y evita aquellos que no hacen
unión con cadena molde, es decir, que no se forman adecuadamente
Por tanto, el ataque nucleofílico
los puentes de H (A-T 2 puentes de H y C-G 3 puentes de H), entonces
es el mecanismo por el cual se
se mueve la cadena hacia la actividad exonucleasa 3’-5’ y en ese punto
forma el enlace fosfodiéster.
se libera el nucleótido que no funciona bien.
Primero se forman puentes de hidrógeno y luego sucede el ataque
nucleofílico. Después del ataque se libera agua y una sola molécula de Ej: en vez de llegar timina llega citosina, no se forman adecuadamente
pirofosfato, de esta manera, se avanza en la polimerización del ADN. puentes de
hidrogeno entre
ellas, entonces la
estructura de adn polimerasa molécula se va hasta
el punto de actividad
ADN polimerasa es una proteína formada por laminas beta y alfa exonucleasa, se
hélices, nucleótidos de libera esa molécula y
unión, molécula de ADN a partir de allí, se da
y tiene dominio que le la opción de que
permite hacer la llegue
actividad exonucleasa, correctamente la
que sintetiza estas timina para poder
moléculas sea muy hacer la replicación.
precisa.

Se describe como una mano. horquilla de replicación

 En la parte baja de la palma de mano → está la actividad
exonucleasa, para corregir errores PROCESO DE SÍNTESIS EN LA HORQUILLA/BURBUJA DE
 En parte central de la mano → ocurre la polimerización REPLICACIÓN
 Entre dedos y pulgar → entra nucleótido nuevo y está el sitio
activo que permite hacer el enlace fosfodiéster
 En los dedos → se organiza la cadena de ADN

El nucleótido entra en la “palma de mano”, se censa si hay buena

complementariedad; si el puente de hidrogeno es adecuado, se forma
el molde.

¿De dónde vienen los nucleótidos? Dentro del organismo son Horquilla de replicación, es asimétrica porque (en teoría) debe crecer
precursores de moléculas que dan energía, pero cuando se vuelven de manera antiparalela, entonces una hebra debe crecer continua y otra
nucleótidos ya pueden forman parte de la molécula de AN. es discontinua. Una es continua por la dirección en que se sintetiza que
es 5’-3’, mientras que la rezagada va de 3’-5’. La que crece hacia el
sentido de la horquilla se conoce como hebra adelantada o líder y la punto es que llegue la primasa, que coloca los primer/cebadores (que
que crece en sentido contrario se llama rezagada. es tipo ARN) y sintetiza el primer requisito para la unión de la
polimerasa. La polimerasa también llega con su cargador que la ayuda
La hebra líder corre en sentido del movimiento de helicasa y requiere a ubicarse en la cadena parental que va a usar como molde para la
de un cebador para comenzar replicación. Mientras que, la rezagada nueva cadena.
requiere de muchos cegadores para la replicación y cada punto donde
va a dejar una cadena de nucleótidos se conoce como fragmentos de
Okasaki, que después es unido por otra enzima llamada ligasa.
FUNCIONAMIENTO DE LA HELICA SA DE ADN
Polimerasa lee en 3’-5’ y sintetiza en 5’-3’. 5’-3’ hay libre OH, 3’-5’ hay
disponible un P.

ORIGEN, BURBUJA Y HORQUILLA DE REPLICACIÓN

Origen de
replicación
Horquilla
de
replicación

Burbuja de replicación La helicasa se une a la cadena de ADN y rompe los puentes de

hidrógeno mediante un gasto energético (Se hace hidrólisis de ATP
El origen está formado por Adeninas y Timinas, porque tienen doble para poder romper la cadena). Romper los puentes separa las cadenas
puente de hidrogeno, por eso, es muy fácil romper acá y es fácil que y las hace accesible a la polimerasa.
las moléculas lleguen, rompan puentes de H, colonicen ese espacio y
se empieza a abrir la burbuja de replicación.

En la replicación siempre vamos a tener los que conocemos como una

adn primasa
burbuja de replicación, la cual va a estar compuesta por dos horquillas
de replicación. Dentro de las burbujas de replicación vamos a tener
orígenes de replicación que inician la síntesis, entonces la síntesis va a
ocurrir desde la horquilla de replicación hacia las dos direcciones de Puede poner como molde el ADN,
elongación por eso, vamos a tener en cada horquilla vamos a tener una no necesita primer. Lo que ellos
cadena líder y una rezagada. usan como primer son nucleótidos
de ARN que van a proporcionar el
hidroxilo 3’ normal para la
¿CÓMO SE INICIA UNA HORQUILLA DE REPLICACIÓN?
polimerasa poder hacer la síntesis.
La replicación ocurre en un momento específico, es decir, en la fase s
de la división celular, todo el proceso de replicación arranca en el
origen de replicación que son secuencias ricas en adeninas – timinas.
Recordemos que durante la fase S de la división celular hay unos
procesos de señalización que están dados por receptores como Ras.
single strand binding protein (SSB)

Hay otro tipo de moléculas que podemos encontrar en el proceso de

Cuando se da la señal de que hay que iniciar la replicación, hay unas replicación, estas son las proteínas que se unen a la cadena de ADN
proteínas iniciadoras que inician el plegamiento previó al punto de sola, SSB, estabiliza la cadena sencilla que se acaba de producir en la
origen de replicación, hacen una especie de recogimiento de la cadena replicación. Pone el extremo 3’ y empieza el proceso de síntesis de
y generan una apertura en el origen de replicación, en este punto llega primer.
la helicasa con su cargador, se carga en el origen de replicación, es
SSB se une a cadena sencilla para mantener esa cadena lista para que
ubicada en el origen, el cargador es liberado y la helicasa es activada, no se una con otra cosa y para que la polimerasa “vaya haciendo lo
en este punto iniciaría la replicación. Una vez llega la helicasa, el tercer
suyo”.
 mecanismo de carga en adn de abrazadera
deslizante

La abrazadera deslizante es la molécula que ayuda a que la ADN

polimerasa a ubicarse en la cadena parental para hacer la síntesis. La
abrazadera posee un cargador que requiere un gasto energético para
poderla abrir, luego la abrazadera va a ser cargada directamente en la
molécula de ADN, cuando ya está ubicada hay hidrolisis de ATP para
cerrarla y llega la polimerasa. La abrazadera estabiliza, va a permitir
que la polimerasa se ubique y no se suelte.

Helicasa y polimerasa llegan con cargador, que las mantiene ubicadas

para que no se salgan de la cadena, eso ayuda a que la polimerasa
sea progresiva, le permite ubicar un montón de nucleótidos en una
unidad de tiempo.
PCNA = sliding clamp, abrazadera deslizante

En la imagen observamos una horquilla de replicación con:

 Helicasa rompe los puentes de Hidrogeno de las cadenas moldes.
 Primasa: la primera que tuvo que haber llegado
 Pproteínas de Unión: estabilizan las moléculas monocatenarias
 Abrazadera deslizante con la polimerasa

No tenemos ningún inconveniente para la cadena que es líder: porque

a partir de esta cadena que es 3’-5’ vamos a ver la cadena amarilla
como la cadena parental, y la cadena roja como aquella que está
sintetizando. Como la cadena parental sintetiza en dirección 3’-5’ su
complementaria va en dirección 5’-3’, encargada de esta síntesis la
polimerasa (que va en esta dirección). Siguiendo este pensar la cadena
continua seria la superior y las rezagadas las inferiores.

 En la cadena parental en el origen de replicación las polimerasas

van en el mismo sentido desde el ORI (extremo izquierdo).
 Se debe hacer en fragmentos por la dirección 5’-3’. Observamos
que la cadena está doblada por la síntesis del primer, en las
inferiores se estarán sintetizando fragmentos de Okazaki y el
primer para que se extienda un poco más y formar el tercer
fragmento de Okazaki.
o Cuando el primer se pega, la molécula dará una vuelta
para que se pueda hacer la síntesis.
 De los modelos de replicación planteados, ¿cuál se comprobó en
organismos vivos? Replicación semiconservativa

Flujo de información genética  replicación, transcripción y

traducción.
síntesis de nueva cadena de adn
Siguen adición sucesivamente de nucleótidos, siguen la ley de Chargaff
En replicación es muy importante recordar que ADN está en el núcleo
A-T/C-G y replicación semiconservativa.
de la célula, se replica, se transcribe donde se produce ARNm. Luego
sale del núcleo, llega a citoplasma y se traduce en proteína que tendrá La cadena parental va a dar el molde
función determinada. para que nucleótidos correspondientes
se unan allí. La ADN polimerasa
modelos de síntesis de adn
sintetiza cada nucleótido a la nueva
ADN se sintetiza basado en el modelo del ADN molde/platilla, que cadena, mediante un enlace
implica la separación de cadenas para la formación de una nueva fosfodiéster (alta energía, enlace
cadena complementaria a la inicial. Es exponencial, donde de 2 cadenas covalente) para que avance la cadena.
salen 4 y así sucesivamente. Dicho enlace se forma por la unión del
hidroxilo libre del C3 y del fosfato del
1. REPLICACIÓN DISPERSIVA  se observa cadenas hijas con C5 del siguiente nucleótido.
fragmentos de la cadena antigua y fragmentos de la nueva. En la
primera generación, se encontrarán partes del ADN inicial con el La estabilidad a lo largo de cada cadena se da por el enlace covalente
ADN que se está sintetizando. En la segunda generación y las dos cadenas que se están formando se estabilizan por puentes de
tendríamos cadenas con parte de material genético de ambas hidrógeno.
partes (mezcladas) en una misma hebra.
La replicación del ADN sólo ocurre en la mitosis durante la división
2. R. CONSERVADORA  síntesis de una molécula nueva, copia de
celular, aunque empieza a prepararse en la fase G1.
la original, quedan 2 hebras antiguas y 2 nuevas. Siempre se
tenía la misma cadena, no hay molde de nada. ¿Qué tipo de enlace une los nucleótidos entre si para formar una
3. R. SEMICONSERVADORA  cada una de las moléculas hijas se cadena sencilla? Enlace fosfodiéster.
conserva una de las cadenas originales. Tenemos cadena
parental/molde y a partir de esa obtenemos una nueva cadena. A unión de nucleótido a nueva cadena
partir de cada ciclo de replicación tendremos el doble de
información genética inicial. ¿Cómo se une un nucleótido a la nueva cadena? OH en C3 se une al
primer grupo fosfato del C5 de la cadena que viene entrando. Se da
este enlace covalente y se retiran dos grupos pirofosfatos de la enzima.

¿Quién lo hace? Para poder llevar a cabo la síntesis es necesario la

ADN polimerasa que se encarga de añadir nucleótidos uno a uno
(siempre que sean complementarios) a la cadena de ADN. Sin
embargo, para que esta polimerasa cumpla con esto, requiere:
 Cadena molde
El modelo que describe la síntesis de ADN es la replicación  Nucleótidos y extremo OH libre
semiconservativa, confirmado por Meselson y Stahl en 1957. Se  Cebador: una cadena preexistente de 5-10 nucleótidos de
experimentó usando isotopos de nitrógeno 14 (N14) y nitrógeno 15 largo
(N15), los mezclaron en cadenas diferentes de ADN y con los  Magnesio
resultados se veían si se combinaban o salían independientes. Al ver  Requiere energía proveniente de los fosfatos unidos a los
que se combinaban N14 y N15 en una sola cadena confirmaron que nucleótidos. Cuando sus enlaces se rompen liberan la
era semiconservativa. suficiente energía para hacer enlace entre el nucleótido
entrante y la cadena creciente. A esto le llamamos
polimerización.

La dirección de síntesis es 5’-3’ porque siempre debe haber un OH libre

para que avance la cadena. La polimerasa no une un fosfato hacia atrás,
une OH con fosfato. La cadena molde es 3’-5’, la polimerasa lee la
cadena molde en 3’-5’ y sintetiza en 5’-3’.
 In vitro (en lab) tengo que poner la estructura sintética (nucleótidos),
para que se puedan utilizar dentro de la cadena.

¿Cuál es el símil usado para explicar la estructura de la ADN

polimerasa? Mano

¿Cómo es el mecanismo de unión de nucleótidos por la ADN

polimerasa? tipos de adn polimerasa

Llega nucleótido, teníamos 3  Identificados en célula eucariota

fosfatos unidos a pentosa. Aquí o Alfa  funciona como primasa (pone nucleótidos como
ocurre ataque nucleofílico, en en una molécula de ARN que van a funcionar como
este caso, polimerasa necesita primers. Inicia la síntesis de fragmentos.
2 magnesios, uno que o Beta  replicación del ADN nuclear
neutralice cadenas de fosfato y o Gamma  replicación de ADN mitocondrial
otro que ayuda a la liberación o Epsidon  sintetiza cadena líder
del H del OH en el C3. Al hacer o Delta  sintetiza cadena rezagada
esto, oxígeno queda libre y se  Identificados en células procariotas
une al fosfato del nucleótido o ADN polimerasa 1
que tiene 3P, entonces se o ADN polimerasa 2
liberan otros 2P (pirofostato), o ADN polimerasa 3
es decir, hace un ataque
corrección de errores por polimerasa
nucleofílico a un fosfato y así
se forma el enlace La molécula va a censar el nucleótido y evita aquellos que no hacen
fosfodiéster. unión con cadena molde, es decir, que no se forman adecuadamente
los puentes de H (A-T 2 puentes de H y C-G 3 puentes de H), entonces
Por tanto, el ataque nucleofílico
se mueve la cadena hacia la actividad exonucleasa 3’-5’ y en ese punto
es el mecanismo por el cual se
se libera el nucleótido que no funciona bien.
forma el enlace fosfodiéster.

Primero se forman puentes de hidrógeno y luego sucede el ataque Ej: en vez de llegar timina llega citosina, no se forman adecuadamente
nucleofílico. Después del ataque se libera agua y una sola molécula de puentes de
pirofosfato, de esta manera, se avanza en la polimerización del ADN. hidrogeno entre
ellas, entonces la
molécula se va hasta
estructura de adn polimerasa el punto de actividad
exonucleasa, se
ADN polimerasa es una proteína formada por laminas beta y alfa libera esa molécula y
hélices, nucleótidos de a partir de allí, se da
unión, molécula de ADN la opción de que
y tiene dominio que le llegue
permite hacer la correctamente la
actividad exonucleasa, timina para poder
que sintetiza estas hacer la replicación.
moléculas sea muy
precisa. La ADN polimerasa va en dirección 5' a 3'
horquilla de replicación
Se describe como una mano.
 En la parte baja de la palma de mano → está la actividad PROCESO DE SÍNTESIS EN LA HORQUILLA/BURBUJA DE
exonucleasa, para corregir errores REPLICACIÓN
 En parte central de la mano → ocurre la polimerización
 Entre dedos y pulgar → entra nucleótido nuevo y está el sitio
activo que permite hacer el enlace fosfodiéster
 En los dedos → se organiza la cadena de ADN

El nucleótido entra en la “palma de mano”, se censa si hay buena

complementariedad; si el puente de hidrogeno es adecuado, se forma
el molde.
Horquilla de replicación, es asimétrica porque (en teoría) debe crecer
¿De dónde vienen los nucleótidos? Dentro del organismo son de manera antiparalela, entonces una hebra debe crecer continua y otra
precursores de moléculas que dan energía, pero cuando se vuelven es discontinua. Una es continua por la dirección en que se sintetiza que
nucleótidos ya pueden forman parte de la molécula de AN. es 5’-3’, mientras que la rezagada va de 3’-5’. La que crece hacia el
sentido de la horquilla se conoce como hebra adelantada o líder y la punto es que llegue la primasa, que coloca los primer/cebadores (que
que crece en sentido contrario se llama rezagada. es tipo ARN) y sintetiza el primer requisito para la unión de la
polimerasa. La polimerasa también llega con su cargador que la ayuda
La hebra líder corre en sentido del movimiento de helicasa y requiere a ubicarse en la cadena parental que va a usar como molde para la
de un cebador para comenzar replicación. Mientras que, la rezagada nueva cadena.
requiere de muchos cegadores para la replicación y cada punto donde
va a dejar una cadena de nucleótidos se conoce como fragmentos de
Okasaki, que después es unido por otra enzima llamada ligasa.
FUNCIONAMIENTO DE LA HELICA SA DE ADN
Polimerasa lee en 3’-5’ y sintetiza en 5’-3’. 5’-3’ hay libre OH, 3’-5’ hay
disponible un fosfato.

ORIGEN, BURBUJA Y HORQUILLA DE REPLICACIÓN

Origen de
replicación
Horquilla
de
replicación

Burbuja de replicación La helicasa se une a la cadena de ADN y rompe los puentes de

hidrógeno mediante un gasto energético (Se hace hidrólisis de ATP
El origen está formado por Adeninas y Timinas, porque tienen doble para poder romper la cadena). Romper los puentes separa las cadenas
puente de hidrogeno, por eso, es muy fácil romper acá y es fácil que y las hace accesible a la polimerasa.
las moléculas lleguen, rompan puentes de H, colonicen ese espacio y
se empieza a abrir la burbuja de replicación.

En la replicación siempre vamos a tener los que conocemos como una

adn primasa
burbuja de replicación, la cual va a estar compuesta por dos horquillas
de replicación. Dentro de las burbujas de replicación vamos a tener
orígenes de replicación que inician la síntesis, entonces la síntesis va a
ocurrir desde la horquilla de replicación hacia las dos direcciones de Puede poner como molde el ADN,
elongación por eso, vamos a tener en cada horquilla vamos a tener una no necesita primer. Lo que ellos
cadena líder y una rezagada. usan como primer son nucleótidos
de ARN que van a proporcionar el
hidroxilo 3’ normal para la
¿CÓMO SE INICIA UNA HORQUILLA DE REPLICACIÓN?
polimerasa poder hacer la síntesis.
La replicación ocurre en un momento específico, es decir, en la fase s
de la división celular, todo el proceso de replicación arranca en el
origen de replicación que son secuencias ricas en adeninas – timinas.
Recordemos que durante la fase S de la división celular hay unos
procesos de señalización que están dados por receptores como Ras.
single strand binding protein (SSB)

Hay otro tipo de moléculas que podemos encontrar en el proceso de

Cuando se da la señal de que hay que iniciar la replicación, hay unas replicación, estas son las proteínas que se unen a la cadena de ADN
proteínas iniciadoras que inician el plegamiento previó al punto de sola, SSB, estabiliza la cadena sencilla que se acaba de producir en la
origen de replicación, hacen una especie de recogimiento de la cadena replicación. Pone el extremo 3’ y empieza el proceso de síntesis de
y generan una apertura en el origen de replicación, en este punto llega primer.
la helicasa con su cargador, se carga en el origen de replicación, es
SSB se une a cadena sencilla para mantener esa cadena lista para que
ubicada en el origen, el cargador es liberado y la helicasa es activada, no se una con otra cosa y para que la polimerasa “vaya haciendo lo
en este punto iniciaría la replicación. Una vez llega la helicasa, el tercer
suyo”.
 mecanismo de carga en adn de abrazadera
deslizante

La abrazadera deslizante es la molécula que ayuda a que la ADN

polimerasa a ubicarse en la cadena parental para hacer la síntesis. La
abrazadera posee un cargador que requiere un gasto energético para
poderla abrir, luego la abrazadera va a ser cargada directamente en la
molécula de ADN, cuando ya está ubicada hay hidrolisis de ATP para
cerrarla y llega la polimerasa. La abrazadera estabiliza, va a permitir
que la polimerasa se ubique y no se suelte.

Helicasa y polimerasa llegan con cargador, que las mantiene ubicadas

para que no se salgan de la cadena, eso ayuda a que la polimerasa
sea progresiva, le permite ubicar un montón de nucleótidos en una
unidad de tiempo.
PCNA = sliding clamp, abrazadera deslizante

En la imagen observamos una horquilla de replicación con:

 Helicasa rompe los puentes de Hidrogeno de las cadenas moldes.
 Primasa: la primera que tuvo que haber llegado
 Pproteínas de Unión: estabilizan las moléculas monocatenarias
 Abrazadera deslizante con la polimerasa

No tenemos ningún inconveniente para la cadena que es líder: porque

a partir de esta cadena que es 3’-5’ vamos a ver la cadena amarilla
como la cadena parental, y la cadena roja como aquella que está
sintetizando. Como la cadena parental sintetiza en dirección 3’-5’ su
complementaria va en dirección 5’-3’, encargada de esta síntesis la
polimerasa (que va en esta dirección). Siguiendo este pensar la cadena
continua seria la superior y las rezagadas las inferiores.

 En la cadena parental en el origen de replicación las polimerasas

van en el mismo sentido desde el ORI (extremo izquierdo).
 Se debe hacer en fragmentos por la dirección 5’-3’. Observamos
que la cadena está doblada por la síntesis del primer, en las
inferiores se estarán sintetizando fragmentos de Okazaki y el
primer para que se extienda un poco más y formar el tercer
fragmento de Okazaki.
o Cuando el primer se pega, la molécula dará una vuelta
para que se pueda hacer la síntesis.
 Replicación de Ácidos Nucleicos
Vídeos
Esto es lo que se encuentra en un proceso de replicación.

1. En esta imagen observamos en la primera parte que ya hay un

fragmento de Okazaki y se está sintetizando el segundo. La
★ Vídeo 3. cadena parental y la que se está sintetizando podemos ver que
están sintetizando el segundo cebador; la cadena se va
REPLICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
devolviendo a medida que se van poniendo los cebadores.
En la imagen observamos una horquilla de replicación con: 2. En la segunda fracción, necesitamos voltear el primer para que se
pueda unir. La cadena líder guía a la polimerasa en cuanto a
 Helicasa rompe los puentes de Hidrogeno de las cadenas moldes. dirección. El hidroxilo debe quedar con dirección hacia la derecha,
Y solo se une a la cadena rezagada. junto con el primer. Esto se hace para cambiar la dirección del
 Primasa: la primera que tuvo que haber llegado. No esta pegado primer para que así la polimerasa pueda sintetizar la cadena.
a la helicasa contrario a lo que se ve en el modelo 3. Cuando se voltea el primer (3) la dirección ahora es 5’3’ (hacia
 Proteínas de Unión: estabilizan las moléculas monocatenarias. donde la polimerasa hace la síntesis). Este mismo primer queda
 Abrazadera deslizante con la polimerasa hacia el lado donde está sintetizándose la polimerasa; se dobla la
cadena y entonces la polimerasa queda en la misma dirección y el
primer queda con la dirección del OH (3’) para que la polimerasa
lo lea y EXTIENDA la síntesis. Aquí el Okazaki se está terminando
de sintetizar

Para una representación grafica mirar el siguiente link:

https://www.youtube.com/watch?v=It7qh4zzsgs (2 min de duracion)

Replisoma del E. Coli

En una horquilla de
replicación tendremos:

No tenemos ningún inconveniente para la cadena que es líder: porque  2 polimerasas tipo III
a partir de esta cadena que es 3’-5’ vamos a ver la cadena amarilla que van hacia el = lado
como la cadena parental, y la cadena roja como aquella que está  1 helicasa de DNA:
sintetizando. Como la cadena parental sintetiza en dirección 3’-5’ su va abriendo por un lado la
complementaria va en dirección 5’-3’, encargada de esta síntesis la horquilla de replicación.
polimerasa (que va en esta dirección). Siguiendo este pensar la cadena  2 o más pinzas ß que
continua seria la superior y las rezagadas las inferiores. garantizan que la
polimerasa permanezca
 En la cadena parental en el origen de replicación las polimerasas unida al ADN
van en el mismo sentido desde el ORI (extremo izquierdo).  Un complejo gamma para cargar la pinza deslizante de ADN
 Se debe hacer en fragmentos por la dirección 5’-3’. Observamos  SSB: proteínas que estabilizan la monocadena de ADN
que la cadena está doblada por la síntesis del primer, en las
inferiores se estarán sintetizando fragmentos de Okazaki y el Componentes de la horquilla de replicación en Eucariotas
 primer para que se extienda un poco más y formar el tercer
fragmento de Okazaki.
o Cuando el primer se pega, la molécula dará una vuelta
para que se pueda hacer la síntesis.
  En G1 se inicia el reclutamiento de las proteínas que originan la
separación del origen de replicación y que reclutan la helicasa con
su cargador. Primero hay un origen de replicación que es
reconocido por un complejo de cinasas.
 Eucariotas: hay polimerasa épsilon, delta y alfa (replican en la  Luego, cuando llega la helicasa llega la
cadena continua). Tenemos la cadena estabilizante de DNA mono primasapolimerasaproteínas estabilizadoras de la
catenario (RPA), la abrazadera deslizante (PCNA), primasa monocadena y a partir de ahí empieza la síntesis que ocurre en la
(polimerasa alfa), fragmentos de Okazaki. Según los últimos fase S
libros, tanto la alfa como la épsilon pueden hacer la síntesis de  En G2 ya se ha terminado la replicación de ADN
las 2 cadenas, por lo que no hay tanta especificidad entre ellas. ★ Vídeo 4
Cuando se finaliza la replicación se deben quitar los primers puestos REPLICACIÓN DE TELÓMEROS
para hacer la cadena rezagada. Esto lo hará la FEN1 que quitará los
primers de RNA, luego la ligasa llega y unen los espacios donde  Se tiene la burbuja de replicación, con su
estaban los primers. Cuando esto sucede, y la cadena queda unida, origen de replicación. Donde la cadena
podemos dar por terminada la replicación. superior de azul y verde seria la cadena
discontinua y la inferior con una porción
El problema del desenrolla miento del ADN verde extensa seria la continua.
 Helicasa abriendo la horquilla  Debajo se ve en zoom en la horquilla de
por un lado de la replicación: en el replicación con la cadena rezagada
DNA puede haber estrés de torsión (superior) y la cadena líder (inferior)
muy fuerte que hace que se degrade donde la rezagada queda con un pedacito
la cadena, por eso se usan topoisomerasas para liberar el estrés (azul) que no se puede replicar y se pierde
de torsión. información, es debido a esto que abajo se ven los extremos de
o Topoisomerasa I: las cadenas que son los telómeros donde esa pérdida de
funciona rompiendo un enlace información no es buena porque los telómeros ayudan a la
fosfodiéster que une a la conservación de la información genética
cadena y hace un enlace  Se ve la cadena líder (más larga) y la cadena rezagada que está
covalente temporal/reversible incompleta, para eso se tiene la telomerasa que tiene un iniciador
con un nucleótido, luego libera de RNA con la secuencia del telómero (repetitiva) que sería
un OH y permite que la cadena TTGGGG, entonces la telomerasa tiene aquella secuencia
se rompa a si misma para complementaria.
liberar el estrés de torsión.  Esta telomerasa funciona como un primer (pronunciación ingles)
Una vez pasa esto, vuelve y que extiende o pone nucleótidos adicionales en la cadena líder,
los une por medio de una ampliando el espacio para poder sintetizar los faltantes a la cadena
fuerza nucleofílica y convierte rezagada.
el enlace fosfodiéster, sale la  En ese caso, se extiende la cadena líder gracias a la telomerasa
topoisomerasa y se libera el que es lo que está rojo, y a partir de ahí la ADN polimerasa sintetiza
estrés. Es como cuando para en sentido contrario, en dirección 5´ a 3´ y llena el espacio que
desenredar un teléfono de faltaba para que la información del telómero no se pierda.
cable se deja colgando y de o Telomerasa: complementa el
esta forma esta gira hasta que espacio de la cadena rezagada
se libera de esta torsión extra. porque no se termina de llenar.
o Topoisomerasa II: rompe DNA circulares unidos entre Sirve como un primer para que la
sí. La amarilla es la parental y la roja la recién formada. polimerasa extienda y llene el
Esta funciona igual que la I; llega y rompe haciendo espacio del telómero en la cadena
enlaces covalente reversibles y separan la cadena, la rezagada.
desenredan y luego la cierran con el enlace fosfodiéster;  Aquí se tienen unas proteínas
de nuevo se da un enlace nucleofílico. Luego la requeridas en el proceso de replicación, donde se comparan las
topoisomerasa sale y queda el DNA que antes estaba proteínas eucariotas con las procariotas, y al lado de está su
enrollado y generando el estrés de torsión. Evita función.
enredos entre cadenas de ADN  Cuando envejecemos la acción de la telomerasa disminuye y por
lo tanto se va a ir perdiendo gradualmente información genética.
Regulación de la replicación durante el ciclo celular (min 30)  La polimerasa pega la secuencia el numero de veces que sea
necesario y esta secuencia no va a ser codificado.
 La replicación o Dna A, DnaB, DnaC: reconocen el origen de replicación
ocurre en un en procariotas
momento o DnaB tiene una función como la helicasa
especifico: en el o DnaC: cinasas dependiente de ciclinas que están
ciclo de división haciendo la señalización para que la helicasa llegue en
celular en la el inicio de la replicación de la interfase del ciclo cé
interfase (S).
https://www.youtube.com/watch?v=k4fbPUGKurI

video explicando la topoisomerasa.

 0 0 0

Marcela charry – 23/02/21

taller replicación del adn

• La Pol III agrega nucleótidos de ADN (conocidos como
1. ¿Por qué es importante replica el ADN sin errores? ¿Qué podría fragmentos de Okazaki) a la cadena rezagada hasta
suceder si hubiera errores en la replicación? encontrarse con el primer de ARN siguiente.
RTA: La replicación del ADN debe darse sin errores pues de hacerlo • Posteriormente, la Pol I remueve estos primer de ARN, que
podría causar cambios genéticos en las células hijas, producto de lo están causando una interferencia en la cadena, y los reemplaza
replicado. Siendo esto característico del cáncer y un gran factor para con cadenas de ADN.
• Las dos polimerasas tienen funciones distintas; sintetiza,
la inestabilidad del genoma. Asimismo, esta alteración de réplica
elongar y corregir errores en la replicación.
puede conllevar a cambios epigenéticos en el genoma, los cuales han
En eucariotas:
sido estudiados y dan indicios de que se pueden heredar de forma
• Polimerasa épsilon y delta → para elongación, replicación de
estable en hasta 5 generaciones. De haber errores en la replicación,
cadena líder y rezagada, respectivamente. Ambas hacen
tomarían el nombre de mutaciones; las cuales podrían afectar el corrección de errores.
funcionamiento de las proteínas y llevar a pérdidas de información. • Alpha pone los primer/cebadores.
Tiene consecuencias fisiológicas MUY marcadas. • Beta entra cuando ninguna de ellas pudo reparar un problema
grave, cuando hay un estancamiento de proceso de
2. ¿Cuándo debe ser replicado el ADN? ¿Cuántos eventos de la vida replicación, horquilla estancada.
incluyen replicación de ADN?
RTA: La replicación del ADN se debe dar en la subfase S de la 8. Durante la replicación del ADN ¿Cuál es la diferencia entre la
interfase del ciclo celular. La célula madre debe duplicar su genoma cadena líder y la rezagada?
para así transmitir la información a sus dos células hijas. También RTA: La cadena líder es continua, tiene una dirección 3’-5’, tiene un
ocurre en algunos procesos de la vida humana, como: solo primer y aquí la ADN polimerasa sintetiza en sentido 5’-3’
• Desarrollo intrauterino Cadena rezagada tiene dirección 5’-3’, es discontinua, necesita
• Regeneración celular proteínas estabilizadoras que roten la dirección para que pueda ser
• Formación de gametos leída por ADN polimerasa. Se forman fragmentos de Okasaki
• Recambio celular (epitelios)
Es decir, siempre que hay replicación de células, hay replicación de 9. Cuales enzimas adicionan nuevos nucleótidos de ADN a cadena
ADN. existente?
RTA: Pol I → remueve los primer y añade nucleótidos de ADN
3. Si una doble hélice de ADN se replica 3 veces, ¿Cuántas doble Pol III → hace síntesis de cadenas rezagada y continua, como las
hélices se tendrían? polimerasas épsilon y delta
RTA: 8, porque es semiconservativa, entonces cada hebra será
parental de la siguiente hebra que viene, de una hebra salen 2 → 2n, 10. La replicación de cadenas líder y rezagada requiere diferentes
donde n es el # de veces que se replica. En este caso, 23=8 enzimas
RTA: DESACUERDO, las enzimas son las mismas, cambian nombre,
4. ¿Qué sucede con el ADN molde después de una ronda de pero cumplen la misma función, ambas cadenas necesitan las mimas
replicación? Explique enzimas y ambas tienen primer. Ej:
RTA: La cadena molde de ADN va a unirse con la cadena sencilla que • FEN 1 remueve primer en cadena líder y rezagada
se originó gracias a la replicación de la cadena molde. Quedará unida • Ligasa une nucleótidos que faltan, en ambas cadenas
con la cadena 5’-3’; esto sucede porque la replicación del ADN es
semiconservativa. De cada hebra de ADN se obtendrían 2 hijas; por la 11. Orden de enzimas en replicación normal
forma semiconservativa. Una parte del primero será para de las hijas. RTA: Primasa (pone primer), Pol III, Pol I, ligasa (une)

5. ADN polimerasa puede adicionar cerca de 1.000 nucleótidos por 12. ¿Por qué no hay fragmentos de Okasaki en cadena líder?
segundo. A la ADN RTA: Por la disposición, en la cadena rezagada ADN pol sintetiza en
RTA: 3.000.000 de segundos. Se divide 3.000.000.000 entre 1.000 forma 3’-5’, por tanto, necesita hacerse por fragmentos (discontinua).
En esta cadena hay más cebadores o primer, luego la ligasa une y la
6. Cuáles enzimas actúan primero en la replicación? hace continua.
RTA: Helicasa. Posteriormente primasa → polimerasa → ligasa. En la cadena líder no hay fragmentos de Okasaki porque la
disposición de la cadena es 3’-5’, por tanto, ADN pol sintetiza en 5’-3’,
7. En la replicación de ADN se usan dos polimerasas diferentes, es decir, en su sentido normal, y hará una cadena continua.
¿por qué cree usted que es así?
RTA: En procariotas, se utilizan las ADN polimerasas I y III.
 introducción 5. Dirección de síntesis: igual que en la replicación, se sintetiza en
▪ Los puntos del DOGMA CENTRAL de la biología molecular son: sentido 5´-3’, la diferencia es que en la traducción quien hace el
o Replicación del ADN proceso es la RNA polimerasa.
o Transcripción del ADN → ADN debe ser transcrito para El enlace fosfodiéster no cambia en relación con el DNA, es decir,
producir un RNAm que llevará la información para sigue siendo un enlace fosfodiéster con el C3’ del nucleótido con
codificar una proteína finalmente el C5’ que tiene el fosfato en el siguiente nucleótido.
 El RNAm es lo único que sale del núcleo en la
transcripción. Ese mensaje es leído en tipos de rna’S FUNCIONALES
citoplasma por ribosoma para producir
proteínas
o Traducción

▪ Hay un conjunto de RNA’s y cada uno de ellos tendrá una función

de regulación de genes en la célula. Ej: ribosomal, nucleolar,
En la transcripción se produce una pequeños interferentes, PIWI, no codificantes largos
sola molécula de RNA ▪ Dichos RNA se producen en la transcripción
complementaria a una de las dos ▪ En la transcripción no solo actúa el RNAm, este es uno de tantos
cadenas de ADN. RNAs que hay en la célula. Se habla mucho de RNAm porque se
La cadena parental / molde de doble relaciona más con patologías
cadena (ADN) es 3’-5’, porque ▪ Funciones de los RNAs funcionales
polimerasa sintetiza en 5’-3’. Sin o RNA mensajero → es el UNICO que codifica proteínas
embargo, más adelante se verá que o RNA ribosomal → forma la estructura básica del ribosoma
cualquiera de las dos puede ser. y catalizan síntesis de proteínas
Sigue presente un modelo de semiconservación. o RNA de transferencia → encargado de traer los
aminoácidos para sintetizar la proteína
Diferencia entre ADN y ARN o Los pequeños RNAs → regulan maduración de otros
▪ RNA: tiene uracilo RNAs.
▪ ADN: tiene timina ▪ Nucleares → actúan en el funcionamiento del RNA
propiamente dicho
Se diferencian por la presencia de ▪ Pequeños nucleolares → ayudan en el
un metil en su carbono 1, que se ausenta en el uracilo; por ende, son procesamiento de modificaciones químicas de
cambios estructurales presentes en las bases nucleotídicas. RNAs como los de los RNAs de transferencia que
deben tener unos cambios específicos en sus
característica s de la transcripción ribonucleótidos para que sean funcionales
o Los últimos 3 están asociados a expresión génica

composición de ribosoma en mamífero

Después de que ocurre la transcripción en el núcleo, el mensaje será
leído en el citoplasma por un ribosoma. El RNA ribosomal es quien
termina siendo una riboproteína (proteínas unidas con RNAs de
diferentes tamaños/ pesos con funciones particulares dentro del RNA
1. Selectiva: porque tiene marcados los puntos de inicio y ribosomal).
terminación; mientras que en la replicación SOLO hay un punto de En el proceso de transducción tendremos una subunidad mayor (60S)
origen de replicación y termina en los telómeros, pero no hay algo y una menor (40S). S hace referencia a coeficiente de sedimentación
muy marcado selbelbet, que cuando se centrifuga, queda la banda en un punto
Es decir, no se transcribe TODO el ADN del genoma de la célula, determinado.
sino puntos específicos. ▪ En la subunidad mayor encontraremos
2. Conservador: hay una doble cadena, y una de ellas es la que se subunidades ribosomales tales como:
va a usar como molde para transcripción. A partir del ADN o 5S
produce un ARN o 5.8S
3. Monocatenario: produce una sola cadena de RNAm, no genera o 28S
una doble cadena ▪ En la subunidad menor habrá solo la
4. Antiparalelo y complementario subunidad ribosomal 18S
• Antiparalelo porque sigue la Ley de Chargab, la cadena Conocer las subunidades ribosomales
molde de DNA que va de 5’→3’ dará como origen a una permite saber la calidad del RNA y ADN;
cadena antiparalela que va en sentido contrario (3’→5’). pues entendiendo la estructura, se entiende
• Complementaria porque es el completo de la otra la función. Las subunidades ribosomales
cadena tienen mucho que ver con el proceso de
transducción. Las mas estudiadas son 28S y 18S.
Se debe tener en cuenta también que habrá riboproteínas metabólica. Cuando esto se produce, se obtiene el
▪ Subunidad menor: 33 proteínas ribosómicas terminador.
▪ Subunidad mayor: 49 proteínas ribosómicas  Es policistrón Lac Z, Lac Y, LacA
 Procariota no tiene núcleo definido, por eso el ADN está en
definición de gen nucleoide y eso permite que pueda ser leído y que se transcriba
 Es la secuencia de DNA que tiene información necesaria para el RNA a partir de esta información genética. El RNA que se
codificar ARN funcional o proteína. Gran parte del genoma tiene transcribe, se traduce inmediatamente, entonces no hay
información importante para regular la expresión génica. modificaciones postranscripcionales.
 Antes se pensaba que solo el 1% era funcional y que el resto
era “basura”, que no codificaba para producir una proteína. No estructura de gen eucariota
necesariamente el hecho que no codifique no sirve para algo;  También hay punto de inicio de transcripción, tiene promotor
pues se ha corroborado que los RNAs que no codifican, regulan. basal, proximal y distal (explicados anteriormente)
 Es muy importante saber que esos genes o RNA que codifican o Promotor marca inicio, los factores de transcripción
para una proteína están muy estudiados y caracterizados en reconocen el promotor e inician la secuencia
términos de los elementos que marcan donde inicia la  Monocistrón → un solo elemento regulatorio activa la expresión
transcripción y donde finaliza. Este no es el caso para los ARN de un solo gen, no de un conjunto de genes como en bacterias
no codificantes (ej. micro RNA, small interference, RNA no
codificantes largos). Policistrón → cuando un operón tiene varios genes que se traducen
en una sola corrida, es decir, se reconoce el promotor, el operador
elementos del adn que codifican rna también llega y modula esa transcripción y se transcribe todos esos
Hay elementos en el DNA que determinan dónde arranca la tres genes. Entendiendo que cada cistrón es un gen que va a producir
transcripción y dónde finaliza: una proteína diferente
 Operon → unidad genética funcional formada por un grupo de Monocistrón → un solo elemento regulatorio activa la expresión de
genes capaces de genes ejercer una regulación de su propia un solo gen, no de un conjunto de genes como en bacterias
expresión (tiene promotor, terminador y tiene operadores)
o Promotor → región/elemento de reconocimiento en el
DNA, donde será reconocido por RNA polimerasa para  La secuencia de ADN entre el promotor distal y el proximal se
empezar su pto de inicio. Se ubican antes del pto de inicio transcribe: Lo que queda en el intermedio normalmente no se
de transcripción y son reconocidos por enzimas-proteínas, transcribe; a esto es lo que se llamaba ADN basura
que luego reclutan a otras y arrancan transcripción.
▪ Promotor fuerte/basal o caja TATA → aquí se da En la imagen se ve un ejemplo del gen de la insulina humana, ahí
el punto de inicio de la transcripción. Produce solamente se va a producir una sola enzima
MUCHO mensaje una vez se active
▪ Promotor proximal → está a -10 secuencias
(aprox a -35 nucleótidos) del punto de inicio. Da
la secuencia codificante, ayuda a transcribir
▪ Promotor distal → Regula la expresión, mediante
potenciadores y silenciadores. Gracias a esto se
expresa un mensaje (un RNAm), pero poquito,
entonces lo potencia
En el punto de inicio, todo lo que se transcriba hacia adelante (cascada
arriba) es positivo y lo que esta antes del punto (cascada abajo) es
negativo.

estructura de gen procariota

Una vez se inicie la transcripción, habrá unas regiones llamadas
intrones/exones, silenciadores y terminadores, que se ven en el ADN.
• Silenciadores: evitan que los genes sean activados, reclutan
Factores de transcripción (TF) represores, alteran el proceso de
corte y empalme del nARN y crea señales que bloquean la
traducción
• Promotores basales son reconocidos por TF (son importantes
porque regulan la transcripción de genes) Ej. Caja TATA
o Fuerte en procariotas
 Hay un operón (unidad genética funcional formada por genes o Débil en eucariotas
que pueden regular su propia expresión). Tiene su promotor, ▪ Esto lo determina el número de transcritos
terminador y operadores. que pueda sacar por tiempo. Dependerá de
 En la imagen se observa una cadena de ADN y en ella habrán que tanto produce. En bacterias, a veces los
unas regiones que funcionan como promotor (promueve la promotores no son fuertes; no producen
expresión) y hay unos operadores. El operón produce todas las tantos mensajes porque la bacteria es
proteínas para dirigir un proceso metabólico como tal. bastante sencilla. En cambio, en eucariotas
o Operon lac → más conocido. Tiene su promotor, si se necesitan más mensajes.
operador, conjunto de genes (lacZ, lacY y lacA) que Promotores distales: al inicio de la transcripción
codifican cada uno para una proteína determinada,
que en conjunto actúan para una misma ruta +1 es el inicio de la transcripción (corriente abajo) que es el que se
*TF: Factores de transcripción transcribe primero
-1 corriente arriba
Esto determina las posiciones específicas del nucleótido en la secuencia
 0 0 6

Marcela charry – 23/02/21

taller replicación del adn

• La Pol III agrega nucleótidos de ADN (conocidos como
1. ¿Por qué es importante replica el ADN sin errores? ¿Qué podría fragmentos de Okazaki) a la cadena rezagada hasta
suceder si hubiera errores en la replicación? encontrarse con el primer de ARN siguiente.
RTA: La replicación del ADN debe darse sin errores pues de hacerlo • Posteriormente, la Pol I remueve estos primer de ARN, que
podría causar cambios genéticos en las células hijas, producto de lo están causando una interferencia en la cadena, y los reemplaza
replicado. Siendo esto característico del cáncer y un gran factor para con cadenas de ADN.
• Las dos polimerasas tienen funciones distintas; sintetiza,
la inestabilidad del genoma. Asimismo, esta alteración de réplica
elongar y corregir errores en la replicación.
puede conllevar a cambios epigenéticos en el genoma, los cuales han
En eucariotas:
sido estudiados y dan indicios de que se pueden heredar de forma
• Polimerasa épsilon y delta → para elongación, replicación de
estable en hasta 5 generaciones. De haber errores en la replicación,
cadena líder y rezagada, respectivamente. Ambas hacen
tomarían el nombre de mutaciones; las cuales podrían afectar el corrección de errores.
funcionamiento de las proteínas y llevar a pérdidas de información. • Alpha pone los primer/cebadores.
Tiene consecuencias fisiológicas MUY marcadas. • Beta entra cuando ninguna de ellas pudo reparar un problema
grave, cuando hay un estancamiento de proceso de
2. ¿Cuándo debe ser replicado el ADN? ¿Cuántos eventos de la vida replicación, horquilla estancada.
incluyen replicación de ADN?
RTA: La replicación del ADN se debe dar en la subfase S de la 8. Durante la replicación del ADN ¿Cuál es la diferencia entre la
interfase del ciclo celular. La célula madre debe duplicar su genoma cadena líder y la rezagada?
para así transmitir la información a sus dos células hijas. También RTA: La cadena líder es continua, tiene una dirección 3’-5’, tiene un
ocurre en algunos procesos de la vida humana, como: solo primer y aquí la ADN polimerasa sintetiza en sentido 5’-3’
• Desarrollo intrauterino Cadena rezagada tiene dirección 5’-3’, es discontinua, necesita
• Regeneración celular proteínas estabilizadoras que roten la dirección para que pueda ser
• Formación de gametos leída por ADN polimerasa. Se forman fragmentos de Okasaki
• Recambio celular (epitelios)
Es decir, siempre que hay replicación de células, hay replicación de 9. Cuales enzimas adicionan nuevos nucleótidos de ADN a cadena
ADN. existente?
RTA: Pol I → remueve los primer y añade nucleótidos de ADN
3. Si una doble hélice de ADN se replica 3 veces, ¿Cuántas doble Pol III → hace síntesis de cadenas rezagada y continua, como las
hélices se tendrían? polimerasas épsilon y delta
RTA: 8, porque es semiconservativa, entonces cada hebra será
parental de la siguiente hebra que viene, de una hebra salen 2 → 2n, 10. La replicación de cadenas líder y rezagada requiere diferentes
donde n es el # de veces que se replica. En este caso, 2 3=8 enzimas
RTA: DESACUERDO, las enzimas son las mismas, cambian nombre,
4. ¿Qué sucede con el ADN molde después de una ronda de pero cumplen la misma función, ambas cadenas necesitan las mimas
replicación? Explique enzimas y ambas tienen primer. Ej:
RTA: La cadena molde de ADN va a unirse con la cadena sencilla que • FEN 1 remueve primer en cadena líder y rezagada
se originó gracias a la replicación de la cadena molde. Quedará unida • Ligasa une nucleótidos que faltan, en ambas cadenas
con la cadena 5’-3’; esto sucede porque la replicación del ADN es
semiconservativa. De cada hebra de ADN se obtendrían 2 hijas; por la 11. Orden de enzimas en replicación normal
forma semiconservativa. Una parte del primero será para de las hijas. RTA: Primasa (pone primer), Pol III, Pol I, ligasa (une)

5. ADN polimerasa puede adicionar cerca de 1.000 nucleótidos por 12. ¿Por qué no hay fragmentos de Okasaki en cadena líder?
segundo. A la ADN RTA: Por la disposición, en la cadena rezagada ADN pol sintetiza en
RTA: 3.000.000 de segundos. Se divide 3.000.000.000 entre 1.000 forma 3’-5’, por tanto, necesita hacerse por fragmentos (discontinua).
En esta cadena hay más cebadores o primer, luego la ligasa une y la
6. Cuáles enzimas actúan primero en la replicación? hace continua.
RTA: Helicasa. Posteriormente primasa → polimerasa → ligasa. En la cadena líder no hay fragmentos de Okasaki porque la
disposición de la cadena es 3’-5’, por tanto, ADN pol sintetiza en 5’-3’,
7. En la replicación de ADN se usan dos polimerasas diferentes, es decir, en su sentido normal, y hará una cadena continua.
¿por qué cree usted que es así?
RTA: En procariotas, se utilizan las ADN polimerasas I y III.
 introducción 5. Dirección de síntesis: igual que en la replicación, se sintetiza en
▪ Los puntos del DOGMA CENTRAL de la biología molecular son: sentido 5´-3’, la diferencia es que en la traducción quien hace el
o Replicación del ADN proceso es la RNA polimerasa.
o Transcripción del ADN → ADN debe ser transcrito para El enlace fosfodiéster no cambia en relación con el DNA, es decir,
producir un RNAm que llevará la información para sigue siendo un enlace fosfodiéster con el C3’ del nucleótido con
codificar una proteína finalmente el C5’ que tiene el fosfato en el siguiente nucleótido.
 El RNAm es lo único que sale del núcleo en la
transcripción. Ese mensaje es leído en tipos de rna’S FUNCIONALES
citoplasma por ribosoma para producir
proteínas
o Traducción

▪ Hay un conjunto de RNA’s y cada uno de ellos tendrá una función

de regulación de genes en la célula. Ej: ribosomal, nucleolar,
En la transcripción se produce una pequeños interferentes, PIWI, no codificantes largos
sola molécula de RNA ▪ Dichos RNA se producen en la transcripción
complementaria a una de las dos ▪ En la transcripción no solo actúa el RNAm, este es uno de tantos
cadenas de ADN. RNAs que hay en la célula. Se habla mucho de RNAm porque se
La cadena parental / molde de doble relaciona más con patologías
cadena (ADN) es 3’-5’, porque ▪ Funciones de los RNAs funcionales
polimerasa sintetiza en 5’-3’. Sin o RNA mensajero → es el UNICO que codifica proteínas
embargo, más adelante se verá que o RNA ribosomal → forma la estructura básica del ribosoma
cualquiera de las dos puede ser. y catalizan síntesis de proteínas
Sigue presente un modelo de semiconservación. o RNA de transferencia → encargado de traer los
aminoácidos para sintetizar la proteína
Diferencia entre ADN y ARN o Los pequeños RNAs → regulan maduración de otros
▪ RNA: tiene uracilo RNAs.
▪ ADN: tiene timina ▪ Nucleares → actúan en el funcionamiento del RNA
propiamente dicho
Se diferencian por la presencia de ▪ Pequeños nucleolares → ayudan en el
un metil en su carbono 1, que se ausenta en el uracilo; por ende, son procesamiento de modificaciones químicas de
cambios estructurales presentes en las bases nucleotídicas. RNAs como los de los RNAs de transferencia que
deben tener unos cambios específicos en sus
características de la transcripción ribonucleótidos para que sean funcionales
o Los últimos 3 están asociados a expresión génica

composición de ribosoma en mam ífero

Después de que ocurre la transcripción en el núcleo, el mensaje será
leído en el citoplasma por un ribosoma. El RNA ribosomal es quien
termina siendo una riboproteína (proteínas unidas con RNAs de
diferentes tamaños/ pesos con funciones particulares dentro del RNA
1. Selectiva: porque tiene marcados los puntos de inicio y ribosomal).
terminación; mientras que en la replicación SOLO hay un punto de En el proceso de transducción tendremos una subunidad mayor (60S)
origen de replicación y termina en los telómeros, pero no hay algo y una menor (40S). S hace referencia a coeficiente de sedimentación
muy marcado selbelbet, que cuando se centrifuga, queda la banda en un punto
Es decir, no se transcribe TODO el ADN del genoma de la célula, determinado.
sino puntos específicos. ▪ En la subunidad mayor encontraremos
2. Conservador: hay una doble cadena, y una de ellas es la que se subunidades ribosomales tales como:
va a usar como molde para transcripción. A partir del ADN o 5S
produce un ARN o 5.8S
3. Monocatenario: produce una sola cadena de RNAm, no genera o 28S
una doble cadena ▪ En la subunidad menor habrá solo la
4. Antiparalelo y complementario subunidad ribosomal 18S
• Antiparalelo porque sigue la Ley de Chargab, la cadena Conocer las subunidades ribosomales
molde de DNA que va de 5’→3’ dará como origen a una permite saber la calidad del RNA y ADN;
cadena antiparalela que va en sentido contrario (3’→5’). pues entendiendo la estructura, se entiende
• Complementaria porque es el completo de la otra la función. Las subunidades ribosomales
cadena tienen mucho que ver con el proceso de
transducción. Las mas estudiadas son 28S y 18S.
Se debe tener en cuenta también que habrá riboproteínas transcribe, se traduce inmediatamente, entonces no hay
▪ Subunidad menor: 33 proteínas ribosómicas modificaciones postranscripcionales.
▪ Subunidad mayor: 49 proteínas ribosómicas
estructura de gen eucariota
definición de gen
 Es la secuencia de DNA que tiene información necesaria para
codificar ARN funcional o proteína. Gran parte del genoma tiene
información importante para regular la expresión génica.
 Antes se pensaba que solo el 1% era funcional y que el resto
era “basura”, que no codificaba para producir una proteína. No
necesariamente el hecho que no codifique no sirve para algo;
pues se ha corroborado que los RNAs que no codifican, regulan.
 Es muy importante saber que esos genes o RNA que codifican
para una proteína están muy estudiados y caracterizados en
términos de los elementos que marcan donde inicia la
 También hay punto de inicio de transcripción, tiene promotor
transcripción y donde finaliza. Este no es el caso para los ARN
basal, proximal y distal
no codificantes (ej. micro RNA, small interference, RNA no
o Promotor fuerte/basal o caja TATA → aquí se da el
codificantes largos).
punto de inicio de la transcripción. Produce MUCHO
mensaje una vez se active
elementos del adn que codifican rna o Promotor proximal → su distancia con respecto al
Hay elementos en el DNA que determinan dónde arranca la
punto de inicio varía, puede ser aprox -10 o -35
transcripción y dónde finaliza:
nucleótidos. Da la secuencia codificante, ayuda a
 Operón → unidad genética funcional formada por un grupo de
transcribir
genes capaces de genes ejercer una regulación de su propia
o Promotor distal → Regula la expresión, mediante
expresión
potenciadores y silenciadores. Gracias a esto se
 Gen procariota tiene promotor, operador y terminador. Mientras expresa un mensaje (un RNAm), pero poquito,
que, el gen eucariota tiene promotor basal, proximal y distal entonces lo potencia
o Promotor → región/elemento de reconocimiento en el  Promotor marca inicio, los factores de transcripción reconocen
DNA, donde será reconocido por RNA polimerasa para
el promotor e inician la secuencia
empezar su punto de inicio. Se ubican antes del punto de
 Es monocistrón
inicio de transcripción y son reconocidos por enzimas -
proteínas, que luego reclutan a otras y arrancan
transcripción Policistrón → cuando un operón tiene varios genes que se traducen
En el punto de inicio, todo lo que se transcriba hacia adelante (cascada en una sola corrida, es decir, se reconoce el promotor, el operador
arriba) es positivo y lo que esta antes del punto (cascada abajo) es también llega y modula esa transcripción y se transcribe todos esos
tres genes. Entendiendo que cada cistrón es un gen que va a producir
negativo.
una proteína diferente
Monocistrón → un solo elemento regulatorio activa la expresión de
estructura de gen procariota un solo gen que produce una sola proteína, no se habla de un
conjunto de genes como en bacterias

 La secuencia de ADN entre el promotor distal y el proximal se

transcribe: Lo que queda en el intermedio normalmente no se
transcribe; a esto es lo que se llamaba ADN basura

En la imagen se ve un ejemplo del gen de la insulina humana, ahí

solamente se va a producir una sola enzima
 Hay un operón (unidad genética funcional formada por genes
que pueden regular su propia expresión). Tiene su promotor,
terminador y operadores.
 En la imagen se observa una cadena de ADN y en ella habrán
unas regiones que funcionan como promotor (promueve la
expresión) y hay unos operadores. El operón produce todas las
proteínas para dirigir un proceso metabólico como tal.
o Operon lac → más conocido. Tiene su promotor,
operador, conjunto de genes (lacZ, lacY y lacA) que
codifican cada uno para una proteína determinada,
que en conjunto actúan para una misma ruta
metabólica. Cuando esto se produce, se obtiene el
terminador.
 Es policistrón Una vez se inicie la transcripción, habrá unas regiones llamadas
 Procariota no tiene núcleo definido, por eso el ADN está en intrones/exones, silenciadores y terminadores, que se ven en el ADN.
nucleoide y eso permite que pueda ser leído y que se transcriba • Silenciadores: evitan que los genes sean activados, reclutan
el RNA a partir de esta información genética. El RNA que se Factores de transcripción (TF) represores, alteran el proceso de
*TF: Factores de transcripción
 corte y empalme del nARN y crea señales que bloquean la
traducción
• Promotores basales son reconocidos por TF (son importantes
porque regulan la transcripción de genes)
o Fuerte en procariotas
o Débil en eucariotas
▪ Esto lo determina el número de transcritos
que pueda sacar por tiempo. Dependerá de
que tanto produce. En bacterias, a veces los
promotores no son fuertes; no producen
tantos mensajes porque la bacteria es
bastante sencilla. En cambio, en eucariotas
si se necesitan más mensajes

¿cuál es la cadena molde y quién la

determina?

La cadena molde que funciona para la transcripción es determinada

por la orientación del promotor. La ADN polimerasa transcribe 5’-3’;
es importante tener en cuenta que ambas cadenas de ADN pueden ser
objeto de transcripción si el promotor está ubicado en dirección 3’-5’.
 TRANSCRIPCIÓN DEL ADN La ARN también va a necesitar magnesio, obviamente, ya
que para deshacer el enlace fosfodiéster se debe realizar
un ataque nucleofílico donde intervienen los magnesios.
La cadena amarilla es la cadena parental y el transcrito es
5. ¿CUAL ES LA CADENA MOLDE Y QUIEN LA DETERMINA? la azul. La dirección de síntesis siempre va a ocurrir 5’ –
3’.

TRANSCRIPCIÓN EN BACTERIAS.
1. Al inicio, el factor σ y la
La cadena molde, que funciona para la transcripción, es ARN polimerasa están
determinada por la orientación del promotor. La ADN unidos, llega la cadena de
polimerasa transcribe 5’-3’; es importante tener en cuenta que ADN bacteriano.
ambas cadenas de ADN pueden ser objeto de transcripción si el El factor σ reconoce el
promotor esta ubicado en dirección 3’-5’. promotor del operón y el
factor σ lo que hace es
Fragmentos de Okazaki más grandes en procariotas
acomodar esa cadena de
TRANSCRIPCIÓN DEL ADN ADN en la polimerasa para
La transcripción es complementaria, pero la cadena molde que pueda abrir el punto de
siempre será la 3’-5’. inicio de la transcripción.
La síntesis de una cadena de ARN complementaria y 2. La cadena se separa gracias a que se rompen los puentes
antiparalela, a la secuencia de nucleótidos de una de las cadenas de hidrógeno.
de ADN. 3. Inicia la síntesis abortiva  la polimerasa empieza a
intentar sintetizar, pero dado que el factor σ aún está, no
le permite ser procesiva, es decir, arrancar y leer toda la
cadena de ADN. La polimerasa no puede moverse ya que
se encuentra limitada físicamente por el factor σ.
4. El factor σ se libera de la polimerasa  La polimerasa
empieza a elongar toda la cadena del ARNm que se va a
transcribir.
5. Vamos a tener dos formas de terminación…
- Generalmente la que más se encuentra es la formación
de un tallo bucle que se forma gracias a la interacción
de la cadena de ARN entre sí misma. El tallo bucle lo
que hace es limitar el paso de la polimerasa. Y va a
hacer que se disocie todo el complejo, luego la
(Vídeo 3) polimerasa se vuelve a unir con el factor σ para
Vamos a ver como es el proceso de transcripción en procariotas continuar el ciclo. horquilla estable --> presión física
y eucariotas. - El otro punto es con la proteína Rho (no estoy segura
Lo primero que debemos recordar es que la ARN polimerasa… si se escribe así, perdón) que va a llegar al punto de
En procariotas: terminación para inducir el desensamblaje, liberar el
- Holoenzima polimerasa  Posee un núcleo transcrito del ARN y el ADN molde que se estaba
enzimático en la parte transcribiendo.
interna y va a tener un factor La arn polimerasa no tiene acción exonucleasa por lo que no
σ que es quien reconoce el puede corregir errores, pero esto no es muy preocupante, por
promotor para permitir el que solo es una cadena de RNA y no al ADN por lo que no pasa
inicio de la transcripción. nada.
- Solo necesita un RNApol cumple el papel de la helicasa (abre la doble cadena de DNA)
factor de inicio de la
TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS.
trascripción.
El proceso va a cambiar ya que no vamos a tener solo un factor
La ARN polimerasa va a σ que reconoce y las eucariotas no van a necesitar primer
funcionar también porque no estamos hablando de ADN, lo que se van a poner es
como helicasa ya que ribonucleósidos, es muy proceisva y necesitan factores
de alguna manera va a generales deal transcripción.
permitir que se vayan
rompiendo los puentes Hay diferentes factores generales de la transcripción que van a
de hidrógeno, abre la reconocer esos promotores del gen eucariota. Recordemos que
cadena y los nucleótidos van a ingresar. un gen eucariota no tenemos un policistron sino que tenemos
 un monocistron, vamos a tener promotores basales, distales y La elongación ocurre paralelamente al
proximales y vamos a tener terminadores. proceso de maduración del ARNm. Es
importante recordar que se fosforila la
Vamos a tener diferentes tipos de ARN polimerasa… colita de CTD pero también se reclutan
Cada una se va a encargar de trascribir diferentes tipos de ARN. otras proteínas que van a hacer el corte y
empalme de ese ARNm y las que van a
reconoer la
terminación de la
transcripción.
Cuando ya sale el 5’
que es el primer
extremo que se
reconoce,
inmediatamente va a
tener un prceso
donde se le va a
adicionar una
caperuza que es una guanosina invertida
y va a proteger ese extremo 5´de la
degradación. metilguanosina invertida El punto de terminación
Cada uno de los RNA tiene un factor de transcripción específico será 3'
¿Cuáles son las funciones de los factores generales de la Luego va a ocurrir el proceso de corte y empalme alternativo y
transcripción? al ginal llega el punto de la terminación que ocurre gracias a que
Ellos reconocen los promotores que el facotr CPSF que específica el corte y poliadenilación donde ya
están en el ADN limitanod donde es se para la transcripción, luego llega el CstF que estimula el corte
el inicio y donde se termina la y no se sigue transcribiendo. Llega la poli A polimerasa (PAP)
transcripción. que pone específicamente adeninas (pone alredeodr de 200 a lo
El promotor basal es la caja TATA que largo del transcrito) cuando y hay un polímero muy largo, llega
es reconocida por un factor de la proteína que se une a las colas poli A, lo que hace es impedir
transcripción especfífico que es el que esa cola poli A interactua entre sí misma y con otras
factor de trascripción IID, ella va a moléculas para que no se vaya a empezar a degradar. El poner
tener un dominio de union a caja la caperuza y poner colas poli A lo que hace es proteger la
TATA la TBP, el cual reconce la caja onfromación que va en el mensaje.
TATA y lugo va a hacer que se reclute
TFIIB que es el otro factor de Secuencia de terminación en el ARM: AAUAAA
transcripción.
TFIIB va a reconcoer parte del ¿Cuáles son la sproteínas adicionales que requiere la ARN pol
promotro que esta proximal, amplia la y para qué?
región de reconoceimienot y ahí se
recluta la TFIIE y TFIIH. TFIIE está El proceso de elongación puede estar regulado por proteínas
regulando a la TFIIH, la cual va a que están asociandose a los pormotores distales. Van a haber
funcionar como una helicasa y proteínas que funcionen como activadores que aumentan la
cuando esta, empieza a abrir la transcripción y produzcan más mensajes, o por el contrario
cadena de ADN, llega la ARN polimerasa traida por el TFIIF y va pueden reconocer los silenciadores que funcionarian como
a haber un cambio que está dado por TFIIH que también se frenos para la transcripción.
encarga de fosforilar la colita CTD. Después, arranca la Vemos que
transcripción. su fosforilación es independiente hay un
Esa fosforilación es determinante para el inicio de la complejo de
transcripción, adicionalmente permite que se recluten otros proteínas muy
factores importantes para el procesamiento de ARNm. grande, hay
Colita: Da la señal de inicio y permite la disposición de las estructuras en el complejo complejos
Funciones de los factores generales de la transcripción. remodelando
- Posicionan correctamente la ARN polimerasa en el la cromatina y
promotor. por otro lado
- Asisten la separación de la doble hélice de ADN. tenemos unas
proteínas
Elongación y terminación de la transcripción. mediadoras
que interactuan con esos promotores distales y regulan la
transcripción.

Sin la caperuza ni la Poli A no se puede dar la traducción

 EN EUCARIOTAS

VIDEO 4
10. Explique de forma gráfica o diagrama de flujo el proceso
de corte y empalme

Entre la caperuza y la cola poliA, tenemos intrones y exones.

Los intrones deben ser removidos porque el exon es que el que
trae la información genética. Dentro en la secuencia de ARNm
hay unos sitios de corte y empalme, que se basa en quitar los
intrones y unir los exones y dejar solo esos exones y quede el
ARNm listo para ser leído.
Hay unos puntos específicos o nucleótidos que marcan esos
En este momento U6 queda con el hidroxilo libre que interactúa
extremos que deben ser cortados por las proteínas o enzimas
con el extremo 3´ y hace un ataque nucleofílico en ese extremo
que hacen el proceso de corte y empalme.
3´, y ocurren un desprendimiento del intrón que se tenía
En este caso (imagen) en el extremo 5´ se tiene los nucleótidos
inicialmente, formando tallo-bucle y viene un complejo de unión
GGU (conservados), y variaciones que pueden ser AC o AA por
de exones para unir el exón 1 y exón 2. Estas uniones entre el
un lado y en AGAU y GAGU en el otro (variaciones). Más allá del
hidroxilo y el extremo 3´ esta mediado por U2, U5 y U6.
intron tenemos una adenina que puede estar marcada por
Ese ese el proceso de corte y empalme
nucleótidos cualquiera que varían, pero la Adenina es
conservada (YUNAY) y se le llama punto de ramificación.
También se tiene una secuencia de polipirimididna que son
conservadas y hacia el extremo 3´ se tiene nucleótidos
conservados que son AGG y pueden variar entre C o U por un
lado y G o U por el otro.
Estos puntos son reconocidos por moléculas que hacen corte y
empalme.

11. ¿Qué es el corte y empalme alternativo, cuáles productos

genera y cuál es la importancia de estos productos en los
organismos vivos?

El corte y empalme está regulado por ribonucleoproteinas El corte de empalme alternativo dice que no necesariamente
pequeñas nucleares. Entonces este es un tipo pequeño de ARN se une de forma consecutiva los exones, pues cuando se une
nuclear que se unen con proteínas por lo que se llaman de manera ordenada (1, 2, 3, 4,5) y se traduzca da origen a una
ribonuclopotrienas de pequeños ARN nucleares, entonces esa proteína A, pero puede ocurrir que salga un exón (1, 2, 4,5) y
ribonucleopotrina se conoce como U que es una familia que va la traducción de ese ARNm de origen a la proteína B diferente
de la 1 a la 6 y reconocen esos puntos de corte en el intrón. a la A. También puede ocurrir que se desorganicen exones sin
 El ARNm tiene exones e intrones, donde la secuencia (2,3,5,1,4) y den origen a otra proteína C.
ribunocleoprotiena U1 reconoce el extremo 5´ de ese Estas proteínas se conocen como isoformas de un mismo
intrón, ARNm y es una forma de introducir variabilidad en los procesos
 luego la proteína BBP funciona como punto de ramificación metabólicos y de expresión genética. Entonces a partir de un
para que se una otra ribunonucleoproteína que es la U2 mensaje se produce una misma proteína, pero si hay corte y
snRNP,RECONOCE UNA ADENINA CONSERVADA (sapa) dice donde cortar empalme alternativo se pueden producir
 una vez llega la U2 y se reconoce el extremo 5´ del intrón postranscripcionalmente varios tipos de proteína que se
por el U1. En ese momento el U2 unido al punto de conocen como isoformas.
ramificación, eran también las U4, U6, U5 que interactúan
entre si formando un bucle para que la adenina haga ataque
nucleofílico en el extremo 5´ y rompa el enlace fosfodiéster
de un extremo y lo conecte al otro.
 Luego sale el U1 que reconoció al extremo 5´ y sale U4,
quedando U6, U2 Y U5.
12. ¿Cuál es la estructura del mRNA de un organismo eucariotas tiene una caperuza, una cola poliA, tiene UTR5´ y
eucariota? UTR3´ y hay un proceso de empalme alternativo.

La estructura de un ARNm eucariota es más compleja que de Las diferencias grandes del proceso de transcripción es que en
un procariota porque requiere de maduración, donde después eucariotas el mensaje sale del nucleó y todos los procesos de
de todo el proceso de maduración lo que se obtiene es un ARNm maduración funcionan también para que el ARNm sea
que tendrá una caperuza (7-metil guanosina invertida unida al transportado al citoplasma, es decir, que tenga caperuza, cola
extremo 5´), una región 5´ no traducida (5´UTR) y una región poli-A, y los exones sin intrones es una señal para que salga
codificante que son exones (salieron intrones), una región 3´ del núcleo (control de calidad).
no traducida (3´UTR) y una cola Poli-A que es el final del En procariotas simplemente se transcribe el ARNm y se
mensaje. produce la proteína.
Esas UTR que están en el ARNm una vez producido y madurado,
son importantes porque en estas regiones hay puntos de
reconocimiento del ribosoma para hacer traducción.

Básicamente para hacer el proceso de traducción todo ese

proceso de maduración ocurre de manera paralela en el
momento que se da la transcripción y entonces fosforilación de
la cola CTD permite el reclutamiento de enzimas que forman el Preguntas que faltan:
casquete, es decir que forman la caperuza de traer las proteínas
que hacen todo el corte y empalme que se llame empalmosoma, 8. Con un esquema describa el proceso de
y de todas las proteínas que reconocen el punto de terminación transcripción en procariotas. Divida el
y que ponen las colas poli A. proceso en inicio, elongación y
terminación.

9. Con un esquema describa el proceso de

transcripción en eucariotas. Divida el
proceso en inicio, elongación y
terminación.

Todo esto ocurre en el momento que se transcribe (se

transcribe e inmediatamente va madurando el ARNm).

13. De forma breve y precisa indique las principales

diferencias entre el proceso de transcripción en
eucariotas y procariotas.
El gen procariota
es un policistron
que produce a
partir de una
región varias
proteínas. No
tiene proceso de
maduración, no
tiene proceso de
corte y empalme.
Tiene UTR5´ y UTR3´

En el gen eucariota son monocistrones se produce una sola

proteína a partir del mensaje y a nivel postranscripcional puede
haber un proceso de corte y empalme alternativo para que se
produzcan varios tipos de proteínas. Además, el ARNm en
 0 0 8

M a r c el a c h a rr y – 0 2 / 0 3/ 21

• Flujo de información genética: ADN se replica y luego se ▪ Cambios sinónimos → codones que codificarán el mismo
transcribe en núcleo, posteriormente, sale el ARNm por los AMC
poros nucleares al citoplasma y en citoplasma se lee el mensaje • Generalmente, tienen las mismas 2 primeras letras,
para poder codificar una proteína sólo varían la última
o Excepciones: Leu y Ser, donde hay cambios
también en las primeras 2 letras, pero como
codifican para un mismo AMC, entonces se
ADN que está en el núcleo no sale, sí sale el ARNm al citoplasma consideran sinónimos
y allá se lee el mensaje para traducir una proteína • Imp porque en ARNm, puede tener muchos errores
• Salida de ARNm se realiza por poros nucleares de membrana porque ARN polimerasa no tiene dominio para
nuclear, las cuales son estructuras complejas donde hay 60 o + corregir errores
nucleoproteínas que regulan tránsito de moléculas (NO LO TOCA • Cada vez que RNA polimerasa se equivoque mucho
EN DETALLES PORQUE LO EXPLICO EN BIOCEL, YA SABEMOS con un mismo AMC, entonces se empieza a tomar
COMO SALEN Y ENTRAN MOLECULAS DEL NUCLEO) dicho AMC como sinónimo
• PROCESO DE MADURACION POST-TRANSCRIPCIONAL DEL ▪ Cambios no sinónimos → cambian algunos nucleótidos,
ARNm. Implica: por tanto, no darán el mismo AMC
o Caperuza: en el extremo 5’ • Generalmente los dos primeros, en pocos casos
o Cola polia: en el extremo 3’ cambia el último nucleótido
o Proceso de corte y empalme, de quitar intrones y unir o Tripletes: los tripletes del ARNm son lo que se considera
exones para producir ya RNAm maduro como codón. Este está formado por 3 letras.
▪ Exones son puntos de control de calidad ▪ 64 combinaciones, formadas por bases nitrogenadas que
▪ Las exportinas y todo el complejo de proteínas de este son 4: A, T, G, C
tipo de moléculas reconocen la cola polia y el proceso de ▪ El codón de inicio es: AUG que codifica para Met (no
corte y empalme. Según eso, si el ARNm está completo y tiene sinónimo)
cumple con ciertos criterios, entonces transporta el ▪ Se excluyen 3 tripletes del código genético, se excluyen
mensaje al citoplasma los codones de terminación, porque indican que termina
• En caso de que no cumplan, hay un sistema de el proceso “STOP”. Estos son: UAA, UAG, UGA
degradación llamado NMD que es Degradación
Mediada Sin Sentido, que no permite que salga del
núcleo
o En eucariotas el transporte de RNAs mensajeros del núcleo
hacia el citoplasma es muy regulado, diferencia grande con
procariotas.

c ó d ig o g e n é t i co o Existen anticodones, que son tripletes complementarios,

CODIGO GENETICO: combinaciones en nucleótidos que salen del para la detección de ellos y la puesta de un AMC especifico
ARNm. Son reglas o lineamientos que sirve para traducir una en cadena polipeptídica que se va a formar
secuencia de ARNm ▪ No necesariamente reconoce todos los sinónimos de un
• CARACTERISTICAS: codón 3 codones de parada y 1 de iniciación
o Semiconservativo: porque se tiene una parte del ADN como ▪ Se une principalmente a los primeros dos AMC
molde para producir ese mensaje, viene del ADN pero los
trae es el ARNm
o Específico y continuo: cada codón tiene un significado único
o Redundante pero no ambiguo: capacidad de que un AMC
puede ser codificado por diferentes codones. Es decir, para
poder tener un AMC, se puede tener cualquier triplete que • Fenómeno de balanceo o fluctuación → el código genético tiene
codifica para ese AMC un proceso de fluctuación o balanceo. Los tripletes reconocidos
o Ser regenerado: porque varias combinaciones de tripletes para poder poner un mismo AMC específico inician los dos con
traen el mismo AMC, es decir, diferentes codones pueden el mismo nucleótido y finalizan con un nucleótido diferente →
origen a mismo AMC Patrón para mayoría de aminoácidos que tenemos
64 opciones de marcos de lectura (64 combinaciones que dan resultado 20 aa)
Más de una combinación generan el mismo codón
Por lo general el que cambia es el tercer nucleótido
 o Fluctuación: primeros 2 nucleótidos van a estar muy fijos, se
conservan 2 primeros nucleótidos, el ultimo es el que
cambia, tiende a ser permisivo para permitir que nucleótidos
lleguen acá
o Cuando se habla tRNA, es importante recordar que es RNA
que se pliega sobre sí mismo y genera una estructura como
de trébol de 4 hojas
o En el extremo 3’ esta el AMC y en el otro extremo (que no es
el extremo 5’) está en el anticodón, anticodón es
complementario al codón e s t r u ct u r a d e l r i b o s o m a y e l r o l d e s u s
r e g io n e s f u n c io n a l e s
• Ribosoma va a determinar, tener todo el andamiaje de moléculas
para que pueda el tRNA leer el codon y traer el RNAm
• Permiten la unión del ARNm al ARNt. Codón/anticodón
• Cataliza la transferencia del Aminoacil-ARNt → Peptidil-ARNt
• El RNA ribosomal está formado por una subunidad mayor y otra
menor, este tiene 3 sitios específicos: A, E, y P
o Sitio A: Entrada de AMC-tRNA. Ahí ingresan los AMC unidos
RNA de transferencia
o Sitio P: Elongación de cadena peptídica. tRNA que acaba de
• ¿En qué molécula se encuentra el codón? El codón se donar su aminoácido, pasa el sitio de polimerización, entra el
encuentra en el mRNA, el codón dirá “con estas 3 letricas otro RNA de transferencia y este libera la cadena de
tráigame un AMC” polipéptidos y se la entrega al que acaba de llegar, ese RNA
o En RNA no porque no especifica el tipo, debe ser más de transferencia pasa al sitio E. Está tRNA con AMC
preciso, por ejemplo, mRNA ▪ En este sitio ocurre el enlace peptídico que ocurre en
o DNA no, porque produce información para RNAm subunidad mayor y se va a elongar el polipéptido.
▪ Importante recordar: el ribosoma se forma una vez el
RNAm haya salido del núcleo
a c t i v a c ió n d e r n a d e t r an s f er e n c ia
• La activación es el paso previo a traducción o Sitio E: sitio de salida. Aquí se elonga la proteína naciente
• El tRNA se va a activar a partir de la unión, formando un enlace ▪ ¿Qué es lo que le permite despegarse de cadena de
covalente del aminoácido con el aminoacil de tRNA sintetasa (que ARNm y salir por el sitio E? Es el movimiento del
será específica para cada codón), entonces se hace el enlace ribosoma, quien rompe puentes de H y permite que esté
covalente, hay un gasto energético y ya queda activo el tRNA libre Sale ARNt sin el aminoácido
Quien activa tRNA es aminoacil de RNA sintetasa, quien cataliza
la unión de alta energía entre extremo 3’ con aminoácido
o En extremo 3’ se hace el enlace covalente
Subunidad mayor: cataliza la
formación de la proteína

subunidad menor: ahí se

ubica el RNAm que será
leído en tripletas (provee
marco de lectura)

o Hay un movimiento de subunidad mayor, RNA que entra por

sitio A luego pasa a sitio P y luego a sitio E, así, por el
• Unión entre AMC (grupo amino- grupo carboxilo- grupo radical) movimiento de la subunidad mayor del ribosoma
formación de enlace peptídico para formar el peptídico que sería ▪ ¿Qué hace que se muevan las subunidades del
la proteína. ribosoma? Factores de elongación de traducción
o AMC los trae los tRNA una vez activados por aminoacil de Cuál es la función de adenil ciclasa tARN → activar tARN, unir AMC
RNA sintetasa y empiezan a formar enlaces peptídicos para al tRNA
formar el polímero que sería la proteína

Sinónimo: mismo aminoácido no cambia el nucleótido

No Sinónimo: Cambia el aminoácido y por tanto también lo hará el nucleótido

Se tiene una enzima por cada aminoácido (es decir que existen 20 aminoacil de RNAt sintetasa específicas para cada uno de ellos)

Metionina: Codón de inicio

Trae la subunidad menor
viene en el P, es decir que el A está libre
F4G y F4E reconocen la cola y la caperuza respectivamente
 i n i c ia ci ó n d e t r a d u cc ió n • Así, sucesivamente, será el proceso de elongación y
• Los ribosomas inicialmente se forman una vez el RNAm sale del nuevamente, entra el RNA de transferencia (ficha azul oscura,
núcleo, entonces no siempre están formados sino que vienen a #5) y hace el mismo proceso.
hacerlo a la hora de la traducción del RNAm • ¿A qué se hace referencia con extremos N y C? Extremos amino
• A partir de esto, lo primero que va a ocurrir es que hay unos y carboxilo de los aminoácidos. Siempre que tengamos un
factores de iniciación de la traducción, que van a traer el eIF2 EIF en eucariotas polímero, en un extremo habrá el grupo amino terminal y un
o eIF2 que trae el tRNA o el AMC de inicio (Met). En este caso, grupo carboxilo terminal
el factor de iniciación junto con el RNA va a traer la subunidad
ribosomal pequeña del RNA que se situará en el citoplasma
• Luego, en el citoplasma está el RNAm completo: con la caperuza,
que es reconocida por el factor de iniciación eIF4E y la cola polia
reconocida por el factor eIF4G
o Los factores de reconocimiento permiten que el RNAm se una
al ribosoma. Una vez los factores de iniciación (eIF4E, eIF4G)
se unen al ribosoma, el RNAm se lienaliza y esa unión va a
estar ayudada por esos factores de iniciación y también por la
secuencia que está en la UTR5’ (que para eucariotas es la
secuencia kozak y para procariotas es la secuencia shine-
dalgarno)
▪ En la secuencia kozak que es reconocida por el ARN
ribosomal. Aquí el RNAm se une al ribosoma a través de
las secuencias mencionadas anteriormente y, una vez • Este proceso está mediado por Factores de Elongación
sucede esto, el ribosoma empieza a buscar. Como ya hay • En este caso es el factor de transcripción TU que trae el tRNA para
un tRNA, él va a tener un anticodón, el codón de ese que se ubique en el sitio A y luego, cuando ya ha ocurrido el enlace
anticodón es AUG (SIEMPRE en un RNAm el codón de peptídico va a haber un gasto energético para la liberación de ese
inicio es el AUG). factor de iniciación y, en ese caso se hace el enlace peptídico
• Una vez unido el RNA a la unidad ribosomal, el tRNA junto con el o Antes de que ocurra el gasto energético debe hacerse una
ribosoma van a buscar el codón de inicio. Una vez lo encuentran, prueba de lectura, de reconocimiento de codones y
ya hay un gasto energético, se libera el factor de iniciación y a anticodones, si están completamente apareados y es
partir de acá ya ingresa la subunidad mayor del ribosoma. adecuado se produce el gasto energético
• Ya ingresada tendríamos entonces el primer aminoácido, luego o Ese factor de iniciación está regulando que se dé una buena
ingresa el segundo aminoácido con el tRNA, se hace el enlace lectura del RNA mensajero). A partir de ahí, va a ocurrir la
peptídico, el RNA que acaba de llegar queda con la Metionina y interacción entre esos aminoácidos, va a ocurrir el enlace
luego este va a pasar hacia la salida para salir del ribosoma peptídico y luego, llega el factor de elongación G (EF-G) que
se encarga de hacer la translocación de la subunidad mayor
ribosomal para que el RNA de transferencia que acaba de
llegar pase a la subunidad P del ribosoma y luego, la moradita
pase a la salida y así sucesivamente
o El factor de transcripción TU es sólo para procariotas, en
eucariotas tiene otro nombre

e l o n g ac ió n
• Aquí ya hay un tRNA que tiene unidos varios aminoácidos, 3
exactamente y llega un cuarto que hace el enlace peptídico, él
queda con todo el polipéptido
• Posteriormente, este tRNA que acaba de ceder todos los
aminoácidos que tenía se va a translocar hacia el sitio E (de
salida) y luego, el que estaba en el sitio A que acababa de
ingresar (el azul) para al sitio P (al centro) donde está el tRNA
con el polímero de proteínas
Se seleccionan los anticodones para los codones
Hay una translocación mayor, no se sabe donde ocurre el enlace peptídico
Ocurre en el sitio P del ribosoma (para el examen) porque en realidad se desconoce por la rapidez del proceso
 t e r m in a c ió n d e l a t r a d u c ci ó n
• Hay 3 codones de terminación UAG, este va a ser reconocido por (UAA, UAG, UGA) de terminación
un factor de unión y liberación del ribosoma. Aquí ningún RNA
de transferencia va a reconocer ese codón de terminación,
entonces llega el factor de liberación, reconoce ese codón e
induce la liberación del RNAm y el desensamblaje del ribosoma

• Hay antibióticos que se centran en bloquear ese proceso de

traducción en bacterias (efecto principal de los antibióticos), es
decir, bloquean cualquier punto de traducción de las proteínas
• Si una bacteria no hace el proceso de traducción de proteínas, va
a morir
 T a l l er d e t r a n sc r ip c i ón y t r a d u c c ión – M a r c e l a c h a r r y 0 9 / 0 3 / 21

d u d a s d e l t a l l e r d e t r a n s c ri p c ió n y  ¿ Los nucleótidos TAA (subrayado) codifican un codón de parada

t r a d u c ci ó n para la proteína? No, porque al dividir la cadena en tripletes, el
Abajo se muestra la secuencia de DNA doble cadena de E. coli, que TAA se separa, quedando GAT y AAT, codificando así para otros
codifica para una proteína hipotética. Ambas cadenas se muestran; la aminoácidos.
cadena superior se lee 5’ a 3’ de izquierda a derecha, mientras que la
cadena inferior se lee 5’ a 3’ de derecha a izquierda. Los nucleótidos En el esquema se representa una secuencia de DNA de doble cadena,
están numerados de 1 a 100. Tenga en cuenta que, para este problema, correspondiente a una fracción de un genoma de levadura hipotético
el transcrito inicia e incluye los pares de base C/G marcados en rojo y que contiene un gen muy pequeño. La transcripción inicia en el sitio
subrayados; la RNA polimerasa procesa de izquierda a derecha a lo de inicio de la transcripción (TSS, Transcription Starts Site) ubicado
largo del DNA. después del promotor, y se procesa en la dirección indicada por la
URT 5’ flecha. La transcripción finaliza en el terminador de la transcripción.

URT 3’

 Es transcripción porque tiene un terminador (a veces puede ser

AAU, AAA o a veces en el ejercicio lo dan), en cambio, en
 ¿ C uál de las cadenas (superior o inferior) es usada como molde traducción hay codón de parada.
para la transcripción? Si dicen que polimerasa va de izquierda a  En transcripción, se i ncluyen l as bases ni trogenadas del
derecha, es decir, lee en sentido 3’-5’ y sintetiza en 5’-3’, te rminador? No, el transcrito llega hasta que el punto en el que
entonces la cadena molde sería la i nferior. La cadena superior inicia el terminador y lo que queda del ARNm a partir de allí es
sería el ARNm. la col a polia.
 ¿ Dónde estaría el promotor en relación con el punto de inicio de  ¿ C uál de las cadenas de DNA, superior o inferior, es la cadena
l a transcripción? El promotor estaría antes del punto de inicio mol de? Inferior
de la transcripción, es decir, antes de los pares de base C/G  ¿ C uál es la secuencia de mRNA producido a partir de este gen?
marcados en rojo y subrayados. Marque los extremos 5’ y 3’.
 ¿ C uáles son los primeros 15 nucleótidos del mRNA resultante? 5’ – GAGCCAUGCAUUAUCUAGAUAGUAGGCUCUGAGAAUU – 3’
Indique los extremos 5’ y 3’ del mRNA.
5’ - CUA AUA UUG UGA GAU - 3’ P roceso de traducción
 ¿ C uáles son los primeros 5 aminoácidos traducidos a partir del  ¿ C uál es el primer aminoácido con el que se inicia la traducción?
mRNA resultante? Indique el extremo N y C terminal. AUG, que codifica para metionina (MET) en eucariotas y
mRNA: 5’ - AUG UUA UAU CCC GCC - 3’ formilmetionina en procariotas
Proteína: NH2-Met-Leu-Tyr-Pro-Ala-COOH  ¿ Qué tipo de enlace se forma? Enlace peptídico
o La traducción no inicia en el mismo lugar que la  No se utiliza primer en traducción, pero sí en replicación. ARNt
transcripción, porque la traducción inicia en AUG, no se utiliza como primer en traducción, primer sólo está en
porque este es el triplete que codifica para el codón MET replicación, no hay en ningún otro lado. Lo otro es un ARNt y es
o Traducción termina en UA A , UAG o UGA que son los una secuencia de anticodón.
codones de parada o STOP.  ¿ Qué ocurre con las proteínas una vez son sintetizadas? Los
o Es importante recordar la estructura del RNAm, para no ribosomas pueden estar libres en citoplasma y a partir de allí
enredarse (polia, caperuza son modificaciones se produce proteínas, pero ribosoma también puede ir a
postranscripcionales, pero si hablan del transcrito se retículo endoplasmático rugoso.
habla de UTR 5’, ORF y UTR 3’). o Pasa a retículo endoplasmático rugoso que se encarga
▪ UTR 5’ es el espacio del ARNm que no codifica de síntesis de proteínas y sigue unas rutas: ir a Golgi y
para proteínas, antes del primer AUG. hacer modificaciones postranscripcionales y luego ir por
▪ El inicio de ORF lo marca un ATG (que es lo otras rutas (como endocítica, constitutiva o regulatoria).
o Tenemos modificaciones postranscripcionales que es
mismo que AUG para efectos prácticos), porque
necesario para que unas proteínas sean funcionales,
es la región que codifica para proteína.
entonces pasa por retículo endoplasmático
▪ UTR 3’ es el espacio de ARNm que no codifica
principalmente en glucosilación, pero después pueden
para proteínas, de spués del codón de parada.
tener otro tipo de modificaciones.
 o Si se queda en ribosoma libre también puede tener
modificaciones pero ya específicas con enzimas, cosas
muy particulares de la proteína en sí.
 Qué ocurre e n ri bosoma de spués de traducción? En la
terminación de traducción (procariotas y eucariotas) ocurre que
el codón lo reconoce un factor de unión (ya no un ARNt) y:
o Un factor induce liberación del ARNm y el desensamblaje
del ribosoma
o La traducción arranca con la unión de la subunidad menor
del ribosoma
▪ Ribosomas se forman o interactúan cuando hay
ARNm, cuando no hay ARNm se desensambla
▪ Ri bosoma: es un conjunto de proteínas y RNA’s que
pueden desintegrarse y volver a interactuar entre sí
▪ Que tiene que llegar para que subunidad menor se
una al RNAm? Un factor de iniciación II cargado con
GTP, que solamente libera ese ribosoma cuando
interactúa con codón. Luego llega subunidad mayor

 F unciones de si tios E , A , P o E, P , A (tienen relación con

ribosoma)
o S i tio A: por aquí entra el ARNt, luego
pasa el AMC para el sitio P
o S i tio P : sitio de polimerización. Junta,
se une o hace enlace peptídico con el
otro AMC, entonces RNAt pasa a sitio E
o S i tio E: sitio de salida
o Hay un proceso de movimiento de la subunidad mayor del
ribosoma dónde se va a translocar el tRNA que acaba de
ceder su aminoácido y está en el sitio P, hacia al sitio E
para su salida del ribosoma; y el tRNA que estaba en el
sitio A, que acaba de ingresar, pasa al sitio P (sitio donde
está el tRNA con el polímero de proteínas/polipéptido
naciente).
Se trata de un fenómeno cíclico, por lo que se realizará tantas veces
como aminoácidos se añaden a la cadena peptídica en crecimiento.
 r e a c ci ó n e n c a d e n a d e p o l im e r a s a - p cr
 PCR se usa para de tección de mi croorganismos, porque
aumenta la cantidad de material genético de esos
microorganismos para poder ser detectados con mayor facilidad
 PCR es una reacción en cadena de polimerasa que permite
detectar regiones especificas de un microrganismo. Permite
delimitar una región y hacer una amplificación (delimita el punto
y puede obtener de una gran cantidad una región que se acaba ▪ Te mperatura de e xtensión: (72°C por 30seg) la
de delimitar) enzima polimeriza los dNTPs y forma cadena
 Es una re plicación in vitro complementaria basándose en molde al cual hibridó
 P RINCIPIOS un primer. Asociada a actividad de la polimerasa.
o Síntesis natural de ADN en una célula: hay un proceso de
desnaturalización, hibridación y replicación
o Se trabaja con ADN puro o mezclado con otros ADN o
ARN. El primer también delimita el cierre, el punto de inicio
y punto final de la replicación Polimerasa se extiende y sintetiza una nueva hebra
o Método simple, flexible, sensible y rápido de ADN detrás de los cebadores
 C OMPONENTES
o A DN polimerasa
o P rimers que marcan inicio y final del segmento que se
quiere amplificar
o A mplificación final: temperatura de extensión se mantiene
o Los 4 dNTPs (nucleótidos trifosfato) utilizados por
por 5 min. Se repite paso 2, 3 y 4 durante 30 ciclos y
polimerasa para hacer extensión después de 3 ciclos se han sintetizado 2 fragmentos del
o C l oruro de magnesio que será el cofactor de polimerasa
ADN, aquí hay un fragmento delimitado por el primer y es
o B uffer que mantiene reacción a pH adecuado, para
super valioso porque en el ci clo 3 tenemos el amplicón y
obtener buen producto de amplificación de región que se
ya solo se sigue amplificando este fragmento
necesita
 En general, la mayoría de PCR no sobrepasan los 25 microlitros
de la reacción
 P ERFIL TÉRMICO
o Inicio de l a desnaturalización: se da a 95C° por 5 min.
Destruye las estructuras secundarias del ADNc
permitiendo acceso a primer. Rompe puentes de
hidrógeno (no hay helicasa, pero hay T°) y desnaturaliza
la cadena. o A l macenamiento temporal: PCR se programa en un ciclo
▪ No se puede dejar por más tiempo porque se final de 4C° por tiempo indefinido generando que se
deteriora la molécula. conserve los productos del PCR
o C i clos de amplificación
▪ Te mperatura de desnaturalización: (95C° por 30
seg) para terminar de separar las cadenas
 ¿ C ómo diseño el primer? El primer debe ser muy especifico de
la región que quiero amplificar, el primer es muy pequeño y
.
tiene varias condiciones necesarias que se deben mantener para
lograr buena especificidad y capacidad de unión a la región del
DNA que se necesita amplificar
 Cuando se obtiene un producto de amplificación, se debe
▪ Te mperatura de al ineamiento/anillamiento: (55- visualizar en una e l ectroforesis. Generalmente se usa 1,2% de
60C° por 30-40seg) condiciones cinéticas para ge l de agarosa para poder visualizarlo, que permita flujo normal
unión de iniciadores con secuencia complementaria. de ese producto de amplificación para poderlo trabajar
Puentes de hidrogeno son formados entre los o Se observa por bandas
primers y la plantilla de ADN
• Tm: T de fusión cuando ADN esta
desnaturalizado
• Todos los primers tienen una T° de
anillamiento. A esta T° primers llegan a
cadena de ADN y se van a poder unir
 PCR tapia

¿Cómo puedes evitar esas secuencias complementarias de los

explicación de gen de interés primeros?
No se puede, la maquina te tira el dato de que unos tienen mas
probabilidades que otros de volverse dímeros o de formar estas
formas. Uno tiene que escoger el que más le convenga evitando estos
casos.
¿Qué usarían para hacer un primer?
Uno los puede diseñar por programas computacionales y para hacerlos
hay que tener en cuenta los conceptos antes mencionados. Un ejemplo
de estos programas puede ser el primer express o el primer 3. Existen
muchos programas que te permiten hacer esto, además hay unas
verificaciones que se deben hacer y esas son las formas
complementarias que puede formar el primer o si se van a formar
dímeros.

El primer se puede entender como un anzuelo de pesca, si no tienes

Aquí estamos hablando del gen de interés. Ese gen de interés y el un buen anzuelo no vas a pescar nada.
primer deben tener una complementariedad muy alta. Por eso vamos
a ir al BC-NCBI donde hay una base de datos de genes, lo que nos sirve t ipos de P CR
para poder crear un primer eficaz que se una sin problemas. Eso es
con respecto al primer.

selección de primers

Uno de los aspectos necesarios para crear un primer es que se eviten

los malos emparejamientos, ósea que sea muy complementaria la
frecuencia para evitar que el primer se una a otra cosa que no sea tu
blanco. Además hay que cuidar para que no se formen formas ¿qué se entiende por PCR múltiple?
segundarias del primer o en dímeros de primer, puesto que esto va a Se analiza una amplificación de mas de un ADN en una sola reacción.
generar una reacción ineficiente. Esto es usado para buscar mutaciones o polimorfismos de un gen, por
Los porcentajes de G/C (que este entre 40-60%) son importantes por ejemplo, es usado para identificar los diferentes tipos de plasmodios
que de esto depende la TM, por esto es necesario tenerlo en cierto en la malaria. Se usa para identificar diferentes organismos que causan
rango para que no sea muy difícil separar el ADN. la misma enfermedad.
Hay que mirar sobre todo la estructura termodinámica, que tenga cierto Biomerieux es una pagina web que muestra los panesles de PCR como
tamaño y este entre cierto valor. Normalmente la maquina que hace la multiple, la cual sirve para lo que explico antes y esto lo hace de
esto lo entrega todo hecho por lo que la vida es fácil por ese lado. Aun forma rápida y efectiva. Sirve con estos organismos.
así, es importante tener las bases por si nos toca hacer algo así.
El único problema es el precio, puesto que son costosos. En resumen:
El primer reto y el más retador en este tipo de PCR es el diseño del Cuando hablamos de la PCR anidada hablamos de amplificar un pedazo
primer, puesto que tenemos que encontrar un primer que no se mas grande que tiene la secuencia blanco dentro. se hace una primera
dimerice con los otros primers. Además después de hacer la PCR PCR que nos saca un amplicon (primer amplicon), el cual es usado
tenemos que hacer una electroforesis en gel. Esto es por que son PCRs como molde para la segunda PCR donde amplificamos la región que se
en punto final, lo que quiere decir es que necesitan terminar el ciclo ve verde en el dibujo. A ese cuadrado verde se le llama segundo
completo de amplificación para ir a mirar a un gel que es lo que se amplicon.
amplifico. Un ejemplo de esto es el diagnóstico del dengue el cual se confirma
con el primer amplicon y el segundo amplicon te dice el serotipo de
dengue que te infecto

Electroforesis.

De esta forma identificamos si la muestra que se

multiplico es la que me interesa. Esto es por que
el peso ya esta preestablecido, por lo que al hacer
la electroforesis en gel ya sabemos en que punto
del gel va a quedar el ADN que replicamos.

El segundo reto es el tamaño de la muestra, puesto que se va a separar

en un gel de agarosa, las muestras deben tener un tamaño diferente
entre sí.
Si la electroforesis en gel se hace con un ARN se debe usar un gel
desnaturalizante para que la cadena de ARN no se plegue consigo
misma. Tener en cuenta que a mayor porcentaje de
El termociclador ha sido uno de los inventos que han contribuido al agarosa menor tamaño va a tener el ADN, por lo que la relación acá va
desarrollo de estos métodos como el PCR a ser inversamente proporcional.
PCR anidada RT-PCR

Esta es la PCR inversa. Mientras que la PCR es la amplificación de ADN,

la RT-PCR nos va a dar la amplificación a partir del ARN. En este tipo
de PCR pasamos el RNA viral (como el de SARS cov 2) a DNA. Esto en
los virus lo hace la transcriptasa inversa y de esa forma pasamos de
un RNA a un DNA copia (cDNA). Una vez se consigue el cDNA en esta
PCR vamos a hacer una replicación normal para obtener la parte que
necesitemos replicada.
Para el SARS cov 2 se hace una RT-qPCR que hace una amplificación
a partir de ARN, pero este tipo de PCR es cuantitativo. De esta forma
nos muestra cuanto hay de mi fragmento en la muestra. (para más info
de la qPCR ver la siguiente clase.)

Este proceso se usa para tener mayor sensibilidad. Esto es por que
vamos a tener una primera etapa en la que se amplifica una zona
llamada el segmento diana donde está metido la información que
queremos amplificar. Una vez hecho esto si se usan otros primers que
amplifican la información que queremos amplificar y que se encuentra
dentro del segmento diana. Esto es usado por ejemplo para el
diagnostico de la histoplasmosis en pacientes con sida y para eso se
usa una muestra de medula ósea.
 PCR in situ

De esta forma pasamos de la electroforesis en gel a unas graficas que

nos muestran en tiempo real como va la amplificación del ADN.
Además, en la PCR en tiempo real podemos usar varias muestras y
identificarlas por separadas sin problema. Por todo esto la qPCR nos
permite hacer una cuantificación precisa.
Esta es una muestra de tejido inmersa en parafina o congelada, la cual
Crossing P oint (Cp)
se corta con un criostato. Ya en la laminilla se añade el coctel para la
PCR, y se coloca en el termociclador. Esto nos permite saber que tipo El Cp es el punto donde la fluorescencia empieza a incrementarse y se
celular esta presente en un tejido o que expresa un determinado gen. puede distinguir del ruido de fondo.
Es decir: esta PCR se hace en el tejido específicamente.
¿Cuándo se usa esta PCR?
Se usa cuando quiero hacer una PCR para el papiloma humano,
hepatitis B y C. En VPH se usa esta PCR por que se tiene un poco de
frotis (es poquita) además de que la toma de la muestra en invasiva.
En ese caso se hace la amplificación directamente en la muestra.

PCR en tiempo real

En otras palabras, el Cp es el umbral que nos dice donde se empieza a

amplificar el ADN
El CT es diferente, pues este es el ciclo en el cual la curva pasa el Cp

La PCR estándar permite hacer un análisis de punto final, ósea que

debo esperar hasta el final para saber si hubo amplificación. Además
de esto al final tengo que identificar el producto en una electroforesis
en gel.
A mayor numero de moléculas blanco menos ciclos vamos a necesitar
La PCR en tiempo real me permite un análisis de la cinética de la
mientras que a menor número de moléculas blanco vamos a necesitar
reacción. Esto quiere decir que a medida que la reacción va avanzando
muchos ciclos para amplificar.
puede ver si ha aumentado o no la fluorescencia. Además de esto
Es por esto que el número de moléculas blanco y los ciclos necesarios
puedo detectar el producto de cada ciclo de la reacción, es por esto
son inversamente proporcionales.
por lo que es llamado PCR de tiempo real, por que puedo ver la
amplificación en el momento.
 Continuación PCR
Marcela Charry, Juan P Tapia – 16/03/21

 Reacción exponencial, es catalizada por una enzima, así

★ Forma de hacer replicación de ADN in vitro
que llega un punto en donde se estanca. Por esto, se
★ COMPONENTES: buffer, magnesio, dNTPs, primers, agua, Taq
recomienda utilizar muestras que iniciaron a amplificarse
polimerasa, ADN molde
rápido y no las tardías
★ Electroforesis es el método para comprobar si hubo o no
amplificación, si el producto o región de ADN genómíco/ARN que
se busca está en la muestra o no
★ PCR Standard o PCR de punto final
o Análisis de punto final, es decir, se debe esperar al final para
determinar con un gel de electroforesis si amplificó o no
o Detección del producto por electroforesis en gel
★ PCR en tiempo real MEDICI ÓN DE AMP LIFICACIÓN
o Análisis de la cinética de la reacción, es decir, permite seguir La medición de la amplificación puede ser:
cinética de la reacción, no se debe esperar al final ★ NO ESPECIFICA
o Detección del producto en cada ciclo de la reacción, es decir, o Utiliza moléculas no especificas: moléculas baratas
no necesito gel para evaluar producto de PCR o No requieren diseño de sondas
o Medir y cuantificar directamente la reacción de amplificación o Reporta TODA la amplificación, no sólo la del gen de interés
mientras está sucediendo o No quiere decir que sea mala, de hecho es la que más se usa
o Marcador de peso molecular, que indica si la amplificación cuando no se busca amplificación super especifica
corresponde al tamaño esperado de amplicón o Se habla de AGENTES INTERCALANTES, moléculas que se
o La qPCR permite leer la fase exponencial (fase mas estable)  intercalan en ADN doble cadena, no detecta unido a cadenas
conocer con cuanto material se comenzó = CUANTIFICACIÓN sencillas de ADN. La inespecificidad es porque se pueden unir
a cualquier cadena doble que encuentre
CROSSING P OINT (CP)  SYBR GREEN
★ Es el punto en donde la fluorescencia empieza a incrementarse y  Más utilizado, más económico
se puede distinguir del ruido de fondo  No saturante
o Cp: es una línea (umbral) donde la muestra que pase ese nivel  Inhibición de la PCR en altas concentraciones
de fluorescencia marca el CP, porque ahí empezó a expresarse  Medida aproximada de Tm
★ Ct: ciclo en el cual la muestra o ADN pasa el umbral  Puede presentar preferencias A=T
★ Termociclador siempre muestra numero de ciclo y unidades  Máxima absorbancia 498nm
relativas de fluorescencia  EvaGreen
★ La fluorescencia que se detecta en PCR en tiempo real es  Aplicación en HRM
directamente proporcional a la cantidad de ADN  Mínima inhibición de la PCR a altas concentraciones
 Medida precisa de la TM
 ¿Cómo funciona? igual que PCR normal, pero agregamos
SYBR GREEN.
 Anillaje: de acuerdo con la TM de primer
 Una vez inicia amplificación con la Taq polimerasa, se
unen moléculas de SYBR a doble cadena de ADN
porque son especificas de ese tipo de moléculas
 Termociclador emite haz de luz que excita moléculas y
empieza a producir la fluorescencia en una frecuencia
o Si amplifica en tiempo precoz/rápido, se producen mayor
determinada
número de moléculas blanco. Si amplifica en tiempo tardío, se
 Equipo sube unidades de fluorescencia y se observa
produce menor número de moléculas blanco
curva exponencial que ya se explicó
 La relación entre Ct y concentración de ADN es
inversamente proporcional
 Cada muestra tiene un Ct (en la imagen cada curva es una
muestra diferente, pero todas están en el mismo coctel de
amplificación, es decir, todos los reactivos se hacen en
conjunto y luego se deposita en cada muestra, todos
tienen misma concentración de primers, etc. Lo que varía
es la ADN molde)
  Si hay dímeros de primer, también se une ahí, por eso o Métodos de desplazamiento de la sonda
al final se debe hacer curva denaturación que  Molecular beacons
determina Tm de cada uno de los amplicones  Dual oligo FRET probe
o Entonces, al final de la reacción de amplificación,
subo T a 95°C y se empieza a ver como desciende
la fluorescencia
o Desciende porque si subo T°, hay
desnaturalización de la molécula de ADN, se libera
fluoróforo y se pierde fluorescencia
o Estos resultados se convierten en logaritmo para
poder visualizar en forma de curva
o Hay picos de amplificación
 Si se espera un solo producto, solo se espera
un pico
 Todas las muestras deben haberse
desnaturalizado a la misma T°, si hay dímeros
Molecular beacons
de primer o amplificación inespecífica que no
tienen nada que ver con el producto, entonces
habrán 2 o 3 picos

★ ESPECÍFICA
o Se usa más en el diagnóstico
o Se diseña sonda, que fue diseñada para detectar la misma
región genómica
o Usa moléculas especificas
o Incrementa la especificidad de la reacción
o Mutación y opciones de detección
o Más costosa: porque la sonda requiere diseño y estar marcada
con fluoróforo para poder detectar
o Método de ruptura – TaqManTM es el más común, pero no el
único
 Además de poner primers y mezcla de reactivos, se
adiciona una sonda que se diferencia del primer porque es
de mayor longitud
 Tanto primer como sonda deben ir dirigidos a misma
región que se va a amplificar
 Sonda tiene diseño
 Tiene fluoróforo
 Tiene quencher (es como receptor de onda de
fluoróforo, mientras haya distancia optima entre ellos Sondas FRET
dos el quencher impide que fluoróforo emita
fluorescencia. La distancia se diseña
 En la amplificación está el primer y adelante de él la
sonda (no se pega si no hay complementariedad con
el fragmento)
o Va adelante porque primer es reconocido por Taq
polimerasa, empieza a extender y si la sonda está
ahí la levanta/destruye y al hacerlo, la distancia
entre quencher-fluoróforo se pierde y fluoróforo
fluoresce
 Si sonda permanece unida nunca hay
fluorescencia
 Dos puntos de especificidad (primer y sonda)
Lo que cambia es el diseño de la sonda, sin embargo, el principio es el Se pone el pedazo de lo que se esta trabajando, ya sea 1, 2 o 3
mismo. No vamos a entrar en detalle por que no es necesario saber nanogramos de ADN y al hacer la amplificación obtengo el CT que es
todo eso de memoria. lo que nos permite graficar.
Tipos de cuantificación Esta grafica es de la forma y=mx+b y además de eso nos da un
La cuantificación se aplica para cualquiera de los métodos de medición coeficiente, el cual nos dice que tan correlacionada esta mi variable
de los que se hablaban, ya sean específicos o inespecíficos, siempre y dependiente con mi variable independiente. Si es alta (>98%) nos indica
cuando mi objetivo sea saber cuánto de la molécula blanco había en que la ecuación si me sirve para hallar a partir del CT una concentración
esa muestra. Si necesito presencia ausencia no es necesario una qPCR, de ADN. Si es menor al 98% entonces se descarta.
puesto que esto se puede hallar con esta cuantificación. Cuando ya sacamos la curva estándar y comprobamos que todo esté
Existen 2 formas de cuantificación. bien entonces podemos jugar con la formula para a para obtener poder
 Numero de partículas virales en una cantidad de muestra (da calcular la concentración de ADN a partir del CT.
un número concreto.) Cuantificación relativa
o Cuantificación absoluta  El resultado para análisis es una razón: la cantidad relativa
 Cambio en la cantidad de mRNA en un tejido canceroso VS (cambio en número de veces) del blanco en cantidades
uno normal (muestra el cambio en la cantidad de un mensaje equivalentes de muestras problema y control (A vs B)
con relación a otro)  Gen referencia: su nivel de expresión es constante en todas
o Cuantificación relativa. las muestras evaluadas y su expresión no se ve afectada por
la condición experimental. Siempre tengo que verificar que
Cuantificación absoluta no me esté cambiando la expresión.

 Se comparan los valores de CT de las muestras con los de

una curva estándar.
 Los resultados se expresan en cantidad (número de copias,
ng, etc.) por una cantidad especifica de muestra (por célula,
por ug de RNA total, etc.)
 El resultado es la descripción cuantitativa de una sola
muestra que no se ve afectada por las propiedades de otra,
es decir se mide una propiedad intrínseca de la muestra.
Curva standard. La cuantificación relativa es una en la que me va a decir que tanto se
expresa un gen con respecto a otro (de control generalmente). A partir
de esto lo que se hace es usar ese gen de referencia para normalizar
el gen que me interesa como se ve en el ejemplo. De esta forma si en
el control me da 2000 entonces puedo decir que en ese caso hubo 100
menos que en el control.
La fórmula es: valores del primero/ valores del segundo. Y luego
comparo con el control. De esta forma esto me ayuda a cuantificar,
pero de forma cualitativa y no tan cuantitativa (no es tan preciso). Se
usa para saber si aumento o disminuyo una expresión en concreto
ignorando el número exacto.
https://www.youtube.com/watch?v=y8tHiH0BzGY
video ilustrativo que explica estos temas ^
Nota, no se puede dar una eficacia con los datos de esta cuantificación,
pues todo depende del contexto.
Se tiene en el eje Y la CT {variable dependiente} y en el X el logaritmo explicación final
del standard (lo que le eche de muestra) {variable independiente}. La
curva resultante sirve para 2 cosas:
1. Mirar la eficiencia de la redacción
2. Hacer una cuantificación.
La curva no es mas que una regresión lineal. Esto es usado para mirar
la relación entre el CT y la cantidad de muestra usada. Yo esto lo tengo
que hacer con el mismo coctel que yo uso para amplificar mis
muestras. Por eso cuando hago el coctel le agrego todo y cuantifico
para que me alcance para cada muestra incluida la curva estándar. Por
que en esta curva se va a ver la eficiencia.
¿Qué es la curva standard?

A hacer uno de estos experimentos vamos a tener unas muestras

problema y con ellas necesito evaluar un gen de interés y el gen de
referencia. Por otro lado también necesito hacer una curva estándar y
para todo esto necesito hacer un mismo coctel (el coctel se reparte
para todo). El coctel se hace con primer, buffers, bases nitrogenadas
(dNTPs), MgCl2, Taq pol, Molde ADN, Syber y agua. Este coctel se
reparte para todas las muestras y de esa forma puedo usar mi curva
estándar para cuantificar (puesto que lo único que cambia es el ADN).

Dudas:
El gen de referencia es el mismo que el de housekeeping
Las FRET son un diseño de sondas especifico.
 1 2

M a r c el a c h a rr y – 2 3/ 0 3/ 21

caso 1
• NO se puede tomar producto de amplificación para luego hacer
En un determinado experimento usted tiene tres muestras de sangre
cuantificación qPCR de amplicones. Es diferente si se hace RT-PCR,
de un sujeto que tiene una enfermedad respiratoria y además tiene una porque en esta se genera ADNcopia, es decir, no se hizo
inflamación hepática. El médico sospecha de 2 patógenos y envía al
amplificación sino transcripción, entonces si puede ser el molde
laboratorio una solicitud de PCR para diagnosticar: a) Streptococcus
para una qPCR
pneumoniae, b) Virus de la Hepatitis C y c) los dos patógenos
o En el caso de Streptococcus pneumoniae, se puede ir por qPCR
simultáneamente.
directamente. Porque si tomo producto de PCR anidada (si
• Realice un flujograma de la forma en que diseñaría un experimento
quiero amplificar partículas) lo debo hacer directamente en la
para detectar estos patógenos (de manera individual y ambos
muestra, sin necesidad de PCR anterior, porque en la PCR
simultáneamente) en sangre, mediante PCR, recuerde considerar la anidada se cuantifica el amplicón, entonces ya no sería el ADN
extracción de los ácidos nucleicos
como tal, ya no estaría cuantificando bacterias, sino el producto
de amplificación
▪ Cuando hablamos de PCR anidada, se tiene una muestra, la
Sin anticoagulante

amplifico y se produce 2n de amplicones

▪ En la PCR en tiempo real (qPCR), depende en que ciclo pasa
el umbral esa muestra, se puede decir si está más
concentrada o menos
Análisis de calidad de ADN mediante electroforesis • Si no se quiere amplificar, solamente se busca ver
presencia/ausencia en una PCR/cuantificación cualitativa (se hace
PCR de punto final) se observa en gel de electroforesis y veo si tiene
o no tiene la infección
• El lader o marcador de peso molecular indica tamaño del amplicón,
no habla de cuantificación/cantidad (peso molecular=pares de
bases)
o La intensidad de la banda habla de cantidad, qué tanto ADN,
comparando con otras bandas
o Cualitativa habla de presencia de producto, no de cantidad
• Para el Streptococcus pneumoniae, en conclusión, se haría PCR
sencilla de punto final, donde se observa si hay presencia/ausencia.
En el flujograma anterior falta:
Luego, se hace evaluación de calidad de ADN, se hace cuantificación
• Incluir en la extracción de la muestra en sangre periférica → no se
(se refiere a cuánto hay de ADN para saber cuánto se pone en PCR),
usa anticoagulante, porque como se va a extraer la bacteria, se
se hace amplificación, se hace el gen, con eso se sabe si está
necesita el plasma sanguíneo, entonces se debe dejar coagular,
presente o no y ya se llega al diagnostico
para luego centrifugar y separar células sanguíneas y plasma
• Añadir diseño de primers
• Antes de realizar la PCR, se realiza la espectrofotometría que analiza
la calidad del ADN. Proporciona un rango de absorbancia:
o 260/280 para ver si está contaminado con proteínas → con el
cual espero un valor de absorbancia 1,8 – 2,0 para ver la calidad
o 260/230 índice de contaminación con sales y péptidos
o Para saber si está degradado, saber si está integro o no, lo
evalúo mediante:
▪ Electroforesis → se observa como banda bien marcada
cuando está integro
▪ Fluorometría → cuantifica, no permite saber calidad
Para el Streptococcus pneumoniae se usa muestra de sangre, pero
también se podría tomar muestra de esputo
• Cuando se habla de qPCR, el análisis respectivo sería cuantificación, o Falsos negativos: decirle a paciente que no está enfermo,
que se haría con cuantificación absoluta cuando sí lo está. No amplifica ninguno, pero C+ siempre debe
o TIPOS DE CUANTIFICACIÓN EN qPCR amplificar (marcarse), entonces significa un problema pero no
▪ Cuantificación absoluta → dice cuántos genomas virales es de la muestra. Se ve vacío
hay, cuantas copias de gen hay
▪ Cuantificación relativa → se usa cuando no necesito saber
exactamente la cantidad de partículas, sino solo necesito
saber si hubo expresión mayor de una muestra con
respecto a la otra (evaluando el mismo patógeno o gen)
• Si necesito evaluar cuanto se está expresando un gen
en una muestra cancerosa vs una muestra sana. Ej. se
expresó 5 veces más en el canceroso con relación al
sano caso 2
• Es una proporción del genoma que tenemos comparado Un investigador necesita estandarizar una PCR para la detección del
con un genoma modelo parásito de la malaria (Plasmodium vivax) a partir de sangre humana.
• Cuando se hace diagnóstico molecular se debe cuidar de: La casa comercial que fabricó los cebadores (primers) le sugiere una
o Para descartar falsos positivos y negativos, debo poner en la temperatura de alineamiento de 60°C durante el programa de PCR,
reacción: debido a que los primers sentido y antisentido tienen una temperatura
▪ Control +: muestra/reacción que siempre va a amplificar. Si de 58 y 60°C respectivamente. Se espera que se amplifique un
pongo reacción de PCR + ese ADN = amplificación segura fragmento de 500 pb. En los ensayos de estandarización, el
▪ Control -: reacción de amplificación donde incluyo todos los investigador evalúa 7 muestras con diferentes concentraciones de DNA
reactivos de PCR menos el ADN molde. Al no ponerlo, no del parásito (de 500 a 1 parásito/uL de muestra) en el gel de agarosa
se espera amplificación encuentra (L corresponde al Ladder, es decir, el marcador de peso
o Falsos positivos: decirle al paciente que esta enfermo, cuando molecular):
no lo está. Amplifica en control -, control + y muestra. Con el
hecho de que haya amplificado C-, así esté en mismo tamaño Experimento 1:
que estoy esperando, puedo hablar de contaminación cruzada,
porque amplifico C+ y también C– donde no espero
amplificación. ¿Por qué puede amplificar C- si no tiene ADN
molde? Por dímeros de primers, contaminación cruzada que
también puede estar en las demás muestras por contaminación
de agua - magnesio – buffer – Taq. Se debe repetir

Al laboratorio llega un estudiante de PhD y realiza el mismo

experimento con las mismas muestras y obtiene los siguientes
resultados:
• INTERPRETACIÓN
o Aquí hay 7 muestras de ADN del mismo parásito, aquí el
marcador del peso molecular era de 500pb.
o Resultado ideal paciente enfermo: amplifica P1 y C+, pero no
o Todas las muestras amplifican correctamente, excepto 1 y 2,
amplifica C-
pero todas alcanzaron el mismo rango
o El 500pb hace referencia a la concentración de ADN en cada
muestra, por eso se ve más oscuro en el de 500, porque hay
más parásitos. Entonces, hay 500 parásitos por microlitro y, a
partir de esos 500 parásitos se obtuvo este ADN
o La L es el marcador de peso molecular, va de 100 a 600pb.
¿Qué tamaño tiene esa banda de amplificado? 500pb, por el
o Resultado ideal paciente sano / no enfermo: amplifica C+, pero
lader, es decir, el fragmento se está amplificando en 500pb
no hay amplificación en pacientes ni en C-. Esta no amplificación
o La intensidad de la banda muestra que hay mucho ADN en las
no significa errores en la muestra o en los reactivos de la PCR
primeras muestras, mientras que en la penúltima muestra hay
porque C+ amplificó
muy poquito ADN
Experimento 2: d i s e ñ o d e p r im e r s
• ¿Están los cebadores (primers) incluidos dentro de la secuencia
del producto de amplificación? NO. Los primers no se incluyen en
el producto final de la amplificación, ellos se usan durante el
proceso para especificar y delimitar la longitud del producto que se
desea amplificar
• Los demás datos, como longitud, tamaño y otros, los daba
específicamente la página
• No se amplifica correctamente, porque no alcanzan las 500pb, sino
que están en 200-300 y se pueden considerar bandas inespecíficas No hubo más dudas
• Las bandas inespecíficas pueden ser resultado de:
o Dímero de primer (unión de 2 primers): tamaño máximo de
primer es 20 nucleótidos, entonces un dímero de primer se
vería en pares de bases (pb) más cortos, es decir, debajo de
50. Por esto, el experimento 2 se descarta como dímero de
primer
o Mala amplificación
o Primer se pliega sobre sí mismo
o En este caso, se debe a que se aplicó una Tm diferente, más
bajita de lo que se debería: es probable que al subir la Tm de
los primers, se pueda quitar todas las inespecificidades;
también es posible que este amplicón se pierda y se pueda
obtener un amplicón específico
▪ Por qué si bajo Tm de primers, se pueden formar dímeros
de primer?
• Porque cuando Tm esta baja, un fragmento tan pequeño
como el de un primer, puede anillarse a cualquier cosa,
de manera inespecífica, no siendo necesariamente
complementarios para poderse anillar
• Si subo Tm, se rompen puentes de H que no son fuertes
y afianza lo especifico y permite que lo que queda sea
lo duro, lo específico
 regulación de la expresión genética

Juan P Tapia – hoy

*Gen reprimible*
Regulación de la expresión génica en Acá tenemos un gen completo, con un operón y sus genes
procariotas estructurales. En este caso hablamos de un gen reprimible el cual
funciona de modo contrario comparado con el inducible, puesto que
este se va a reprimir cuando tengamos la sustancia en el medio.
Ej: triptófano. Cuando hay triptófano en el medio, este se une al
represor y lo activa, lo cual va a inhibir la formación de triptófano. Por
otro lado, si no hay triptófano en el medio, el represor no se activa, lo
que permite la expresión de las diferentes proteínas que van a producir
triptófano en la bacteria.

Resumen del todo:

Un operón es reprimible porque si está la sustancia (el sustrato), activa
el represor
Un operón es inducible porque cuando esta la sustancia (el sustrato),
se inhibe el represor.
Nota: Las necesidades de cada bacteria varían dependiendo de su
entorno y son estas necesidades las que determinan el tipo de operón
que van a tener.

Activador transcripcional:
primera imagen operón reprimible, segunda operón inducible
Operón Lac
Vamos a iniciar con procariotas porque son los más sencillos. Acá
Hay varios elementos puntuales que están determinando esta
tenemos que conectar a la expresión con lo que es un gen.
expresión del operón lactosa. Acá se va a adicionar otros puntos de
Básicamente:
regulación cuando hay un operón lactosa o de otros genes.
Gen de procariotas= operón (fragmento de ADN con varias proteínas
totalmente regulados con promotor, terminador y operador.)

La lactosa va a ser un regulador en los procariotas. El operón que es

la unidad funcional conformada por la región genómica va a ser
regulado por diferentes operones los que pueden ser:
 Reprimibles: *
 Inducibles: Es el que no está siempre activo, sino que se
activa cuando es necesitado. Se activa o se apaga
dependiendo de la presencia de una sustancia específica, la
cual puede ser.
o Activadores  estimulan
o Represores  inhiben
Un ejemplo de un operón inducible es el operón lactosa. Explicación:
¿Qué es importante para una bacteria?  el medio ambiente, donde
busca alimentos. La lactosa es una fuente de energía y por ende un
alimento. De esta forma cuando hay lactosa en el mediose van a
expresar unos genes que van a generar las enzimas que degradan la
lactosa. Para esto, el operón se debe activar. Por otro lado, si no hay La parte azul del gen corresponde a aun potenciador que es una
lactosa en el medio el represor va a estar unido al operón. secuencia reguladora, la cual funciona en cis. Pero:
¿A qué se refiere que sea un regulador en cis y que otros tipos hay?
Resumen: si no hay lactosa el operón esta apagado por que esta unido
Tenemos 2 tipos de reguladores:
al represor, pero si llega lactosa, esta entra en contacto con el represor,
 CIS: cuando hablamos de reguladores cis hablamos de
lo cual activa el operón, transcribiendo las enzimas necesarias para
reguladores en la misma región de la cual se expresa el gen
degradar la lactosa.
 como por ejemplo el regulador cis que se ve en la imagen
señalado con azul claro.
 TRANS: corresponde a reguladores que vienen de otro lado,
como por ejemplo proteínas como el represor visto en el
tema anterior o factores de transcripción.
Ahora si volviendo a la imagen, además del potenciador activado por
CAP (AMP cíclico), podemos ver los promotores señalados con
amarillo (el -35 y -10) y el inicio del operador el cual se ve en color
verde. Por ultimo los genes señalados en naranja. El activador va a
estar regulando fuertemente la expresión de lactosa. Acá en eucariotas las cosas se vuelven mas complejas, puesto que en
El operón lactosa se va a activar para degradar la lactosa en el medio, el inicio se replica, luego se trascribe y se traduce para producir una
sin embargo, se deben de dar condiciones muy particulares para que proteína. Lo que vamos a ver en esa expresión de genes son esos
el operón se prenda. Esto es por que el operón va a estar regulado por puntos de chequeo que van a llevar a la producción de una proteína al
un potenciador de esa expresión. Además de que esta el operador, final.
también va a haber un potenciador. Los puntos son:
Explicación de la imagen: 1. El punto transcripcional: acá es donde se dice listo, esto se
1. Por esta razón si hay tanto glucosa como lactosa, la bacteria transcribe
va a usar la glucosa como fuente principal de energía. 2. Proceso de control del ARN: maduración del ARN
2. Si no hay lactosa en el medio entonces no se va a expresar 3. Control de transporte y localización del ARN: salida del núcleo
y si hay glucosa vamos a ver el represor lac presente
inhibiendo la expresión del gen. Una vez el ARN en el citosol, se regula la
3. Si no tenemos ninguno de los 2 entonces el potenciador va estabilidad del mensaje. Acá se puede degradar o
a estar presente, pero va a estar reprimido. Esto es por que pasar a generar una proteína.
si no hay glucosa entones vamos a tener AMP cíclico el cual
es necesario para activar el potenciador. Entonces vamos a 4. Control de traslación: creación de proteína
ver el potenciador activado, sin embargo, como no hay 5. Control de degradación
lactosa entonces vamos a tener el Lac represor inhibiendo la 6. Control de activación de proteína: acá se decide si se activa
síntesis. o no a la proteína.
4. En el ultimo caso como no tenemos glucosa, vamos a tener Niveles de regulación de la expresión génica
al potenciador activo y como si hay lactosa entonces no va a
estar el Lac represor (puesto que la lactosa se lo lleva) y en
este caso sí que va a haber expresión del gen.
En conclusión: como condición para que se active le operón lac es que
haya lactosa y no haya glucosa

1. Acá tenemos que recordar que el ADN no va a estar nadando libre

en el núcleo. Este esté empaquetado, condensado en una cromatina.
Gift del operón lac https://gfycat.com/insistentunitedhyracotherium Para que el ADN se transcrita esta cromatina tienen que permitirle el
acceso al ADN, en otras palabras, se debe des condensar
Regulación de la expresión completamente para que el ADN pueda ser trascrito. Lo antes dicho
Genética en células eucariotas explica el primer punto de regulación.
¿En que partes del proceso de flujo de información genética del núcleo 2. Acá se tiene en cuenta la frecuencia y velocidad, la velocidad de
al citoplasma, ocurre el control de expresión génica? elongación y la eficacia de la transcripción. Acá los reguladores son los
puntos de inicio accesibles, que haya factores de transcripción y la
eficacia de los promotores.
3. Acá vemos el procesamiento del ARN y esto hace referencia a la
maduración (al corte y empalme, ya sea normal o alternativo).
4. Control de transporte del RNA: se basa en que se seleccione el ARN
adecuado y que llegue al citoplasma.
5. Degradación del RNA: se mira la estabilidad del RNA maduro.
6. Control de control de traducción: Acá se regulan las mismas cosas
que habíamos hablado para transcripción. Sobre todo, se van a
seleccionar a los mRNAs que son traducidos.
Al final vamos a tener un procesamiento de las proteínas, pero no nos
vamos a detener ahí por que es de biocel y va a haber un control en la
actividad de las proteínas.

1. Punto de control pre transcripcional

Nosotros podemos decir que lo primero que se controla es
que el ADN este en acceso. Que es lo que se ve en la imagen Una de las modificaciones mas famosas son las acetilaciones
(se ve las etapas de condensación del ADN).  y les des acetilaciones.
Habíamos dicho entonces que hay histonas que se pueden Las acetilaciones van a ocurrir en las colitas externas de las
metilar para liberar el ADN y que había unos estados donde histonas.
se libera el ADN y otros donde se condensan y no se libera. En las acetiltransferasas de histonas hablamos de moléculas
En la imagen de abajo se ve eso: que agregan acetilos a las colitas. Cuando hablamos de estas
moléculas hablamos de moléculas que reducen la carga
positiva de histonas lo cual va a producir que el ADN sea
menos atraído por las histonas lo cual descondensa la
cromatina. En las deacetilasas de histonas pasa lo contrario.

En la metilación del ADN en histonas se ve lo contrario. Se

puede metilar tanto las histonas como el ADN. El ADN va a tener unos
puntos con grupos metilo. Una metiltransferasa va a adicionar un grupo
metilo a las citosinas, las cuales van a tener unos grupos metilos.
También se pueden metilar directamente las histonas. Estas marcas de
acetilación es lo que se conoce como epigenética (código de genes que
se hereda de padre a hijo y que no está directamente en el código
genético). Ellas van a leer el mensaje el cual son las marcas de
metilación y eso es lo que va a decir si se va a expresar o no el gen.
Esto apenas se está entendiendo como tal (la epigenética).
Acá podemos ver a la caja tata que es el promotor. Esta debe estar
expuesta para que pueda ser reconocida por los factores de
transcripción. Para esto van a llegar complejos de remodelamiento de
cromatina. Estos pueden estar compuestos de 3 formas:
1. De una molécula como el complejo grande que hace que se
puedan mover los nucleosomas, lo que libera el factor de
transcripción como lo es la caja TATA y sea reconocido.
2. Que haya una chaperona de histonas, las cuales despliegan
las histonas por que las despolimeriza, lo cual va a liberar la
caja TATA
3. Se puede tener una chaperona de histonas que cambie la
polaridad de las histonas, de esta forma se libera el espacio
para que la caja TATA quede libre.
4. Por otro lado pueden haber enzimas que modifican las
histonas (que acetilen en este caso) para que puedan
exponer ese pedazo de la caja tata y permitir que lo
reconozcan los factores de transcripción.
De esta forma el primer objetivo es exponer las regiones cis
regulatorias del ADN para que puedan empezar a ser reconocidas por Entonces;
las moléculas necesarias y hacer la replicación. Cuando hablamos de metilación hablamos de un proceso donde se
Las metilaciones y acetilaciones. transfieren grupos metilo, lo cual va a aumentar las cargas positivas, lo
cual aumenta la afinidad del ADN y la histona. Esto reprime la
expresión de expresión.
En resumen: metilación reprime, acetilación descondensa.
 Control transcripcional Son proteínas que tienen un dominio que le permite la unión con el
ADN. Algunos pueden interactuar tanto con el giro mayor como con el
menor y son estos los que mas especificidad van a dar. Acá tenemos
que saber los tipos de estos factores y que hay estructuras que se han
identificado para ellos.
Laminas beta:

Acá estamos hablando de los elementos que se regulan o se conocen

para realizar la transcripción. Acá vamos a volver a ver los elementos
cis y trans. Se une al surco mayor puesto que este surco tiene mas espacio para
 Cis: promotor, el enjancer, el silenciador. interactuar.
 Trans: las proteínas que están llegando como los factores de Dedos de zinc:
transcripción los coactivadores, entre otros.
La imagen nos muestra el complejo de regulación de transcripción. Los
factores generales de la transcripción van a regular el proceso y estos
van a ser los factores que reconocen la caja TATA. También vamos a
tener otros factores de transcripción que son los que se van a expresar
en un tejido determinado. Estos se conocen como factores de
transición inducibles y van a determinar si se expresa cierto gen o
cierto otro gen.
Cuando hablamos de la diferenciación de expresión en células
especializadas vamos a tener una expresión diferencial en cuando a los
factores transcripcionales inducibles, que principalmente están Tiene una hélice alfa y lamina beta unidos con un zinc lo que le permite
trabajando con los promotores distales, ya sean silenciadores o interactuar con el surco mayor.
potenciadores. Los otros son los generales de la transcripción, los Hélice-lazo-hélice y cremallera de leucina.
cuales se tienen que expresar para que se forme un transcrito. Los
inducibles nos dicen que se apaga y que se prende. Estos van a generar
la especificidad de cada célula
Duda: los potenciadores y silenciadores están muy lejos ¿Cómo
pueden entonces potenciar o silenciar un gen que esta mucho
después?
Cuando tenemos estos tipos de reguladores tenemos un montón de
proteínas haciendo la regulación. Los potenciadores distales están muy
lejos del gen. Es por esto que debe haber proteínas mediadoras como
esta: (la señalada)

Acá tenemos otro que es H-L-H el cual tiene un buen reconocimiento

por que va a tener 2 hélices alfa que van a reconocer ambos lados del
ADN. La cremallera de leucina es parecida, pero en este caso tenemos
2 hélices largas que están reconociendo esos 2 lados del ADN.

Las cuales permiten la conexión entre los diferentes complejos

regulatorios, interactuando con las proteínas.
Son complejos proteicos grandes que me están acercando la
regulación desde el promotor distal hasta el gen como tal.
Estructura de los factores
Transcripcionales
Hélice-Vuelta-Hélice: El RNA interferente guía al argonauta que es una enzima que puede
degradar el RNA mensajero por que lo corta. Esto lo hace si el RNA de
interferencia es igual al RNA mensajero. En otras palabras, los
argonautas hacen el trabajo sucio de cortar el mRNA.
RNA no codificantes

Este va a reconocer 2 surcos mayores, puesto que son de 3.4nm el

cual es la distancia entre surco y surco. Hay diferentes tipos los cuales
se van a ver en la imagen.
Homeodominios

Cuando hablamos de los RNA no codificantes o interferentes son estos

de los que hablamos (mirar imagen). Además de estos podemos
agregar los Long non-coding RNAs (IncRNAs) los cuales son algo
grandes.
Los miRNA degradan el mRNA por que los llevan a los cuerpos P o
gránulos de estrés. Estos son sitios de aglomeraciones de proteínas
donde van a estar estos mRNA que se están reprimiendo en la
transcripicon.
Los siRNA literalmente corta el mRNA
Los piRNA están trabajando mas en un proceso de regulación del
desarrollo de los organismos.
Proceso de los miRNA:
Este va a reconocer tanto el surco mayor como el surco menor. Esto
le permiten tener una mayor capacidad de reconocimiento del ADN.

Después de esto se produce el transcrito y ahora vamos a pasar a

hablar de la estabilidad del ARN que es el siguiente control.
RNA de interferencia

Básicamente si se une se lo lleva a los cuerpos p o gránulos de estrés,

los cuales son agregados de proteínas en el citoplasma.

miRNA
Cuando nosotros hablamos de los miRNA estamos hablando de RNA
interferentes que regulan la estabilidad del arn mensajero justo cuando
Acá se esta regulando si el ARN se degrada, se reprime o se traduce. este se unió en el citoplasma. Foto abajo:
El proceso de ARN de interferencia esta regulado por ARN de
interferencia y estos van a estar determinando el destino del mARN. En
la imagen vemos el ARN blanco en el citoplasma y este tiene que
degradarse. En ese sentido hay unos RNA de interferencia (como los
miRNAs, piwiRNA, siRNAs, LncRNAs…) hay diferentes grupos de ARN
de interferencia que lo que hacen es precisamente interferir con el
mRNA. Cuando se decide que eso debe ser degradado se forma un
RNA interferente que se une a un argonauta. El fragmento lo que hace
es guiar al argonauta para deprimir o degradar el mRNA.
  Se une a un argonauta y forma el complejo RISC el cual va a
ir a cortar RNA
 Se une a un complejo RITS y van a regular a un punto
pretranscripcional. Aquí ellos pueden hacer una represión de
la transcripción uniéndose al mRNA. (tal como se ve en la
imagen).
piwiRNA

Esto inicia en el ADN donde va a haber regiones de transcripicon para

el miRNA primario o el primiRNA. Esto es lo que se ve arriba que es
una estructura rara con bucles. Este primi RNA va a ser cortado por
una enzima llamada Drosha, la cual corta esto:
Acá estos piwi son pequeños RNA, los cuales regulan los transposones
que son genes saltarines. Los genes saltarines son pedazos de RNA
después de esto es cortado por una enzima
que están saltando en diferentes partes del genoma y que pueden
llamada dicer el cual corta el pedazo final del bucle dejando solo el
generar mutaciones en el desarrollo del organismo. Los piwi lo que
micro RNA. Entonces nos va a quedar un duplex, y ahí una de esas 2
hacen es silenciar estos RNA saltarines para que haya un correcto
cadenas va a ser cargado por el argonauta y de ahí van a buscar mRNA.
desarrollo del organismo. No hay mucho asociado a la parte clínica.
Aquí pueden pasar 2 cosas:
lncRNA
 Que se una de forma completa al mRNA: acá el ARN guía le
dice al argonauta corte y entonces se degrada el mRNA
 Que se una de forma incompleta al mRNA: acá cuando no
hay complementariedad completa es cuando se lo lleva hacia
los cuerpos P o gránulos de estrés.
siRNA

Los RNA no codificantes largos pueden actuar en cis o en trans. Es

decir, pueden generar el RNA y ahí mismo regular el mismo gen o
puede producirse el RNA no codificantes largo en un lado y que vaya a
regular otro cromosoma diferente como se ve en la imagen.
Básicamente los no codificantes largos van a funcionar como
andamiajes de proteínas que pueden generar incluso desde un punto
pre transcripcional, transcripcional y traduccional. (tienen un punto
mas amplio de regulación.
Para finalizar
Tenemos los diferentes niveles de regulación de los que acabamos de
hablar. (el control pre transcripcional, transcripcional y traduccional).
Esto es lo que se va a trabajar con relación a expresión de genes.

Acá siempre se corta el mARN. A partir de RNA de doble cadena se

forman siRNA (es cortado por dicer). Esto nos lleva a 2 vias:
 0 1

Marcela charry - abril 20

Mutaciones • CLASIFICACIÓN SEGÚN:

• Tienen rol importante en los procesos evolutivos de cualquier o Según el tipo de célula afectada: si es somática o germinal
organismo vivo, porque introducen variabilidad. ▪ Célula somática: cambio afecta al individuo, pero no afecta
o Variabilidad: cambios en la secuencia de ADN, que serán la evolución porque no son heredables
generadas por efectos del medio ambiente o del metabolismo ▪ Célula germinal: afecta al individuo y se transmite a la
propio descendencia, por tanto, afecta al proceso evolutivo
o Esos cambios aportan al proceso de evolución, porque o Según extensión de material genético afectado: impacto
introducen cambios que permiten adaptarse a condiciones determinante
ambientales que se presenten, las cuales se heredan y permite ▪ Cromosómica: cambios directamente en el cromosoma, que
que evolucione la población involucra varios genes. Inserciones, translocaciones,
o Las variaciones son importantes porque sin ellas se inversiones, duplicaciones, deleciones
homogeneizaría un genoma de una población, haciendo que • Inversión: tiene impacto grande en la expresión de
cuando lleguen virus como SARS-cov2 si no hay variabilidad y genes porque cambian los elementos regulatorios de un
todos tienen la misma predisposición, los afectaría por igual, en gen (que son promotor basal como caja TATA, promotor
algunos casos podría hasta desaparecer la especie. En cambio, proximal, promotor distal, silenciadores)
la variabilidad permite responder de manera diferente, generar
cuellos de botella, lo que lleva a que la especie sobreviva
• La mutación puede ocurrir en:
o Célula germinal: cuando los cambios que ocurren en el ADN,
pasarán a la descendencia
o Célula somática: cuando los cambios que suceden en el ADN de
• Deleción: perdida de un fragmento del cromosoma y,
estas células se quedan con individuo y desaparece con él
por tanto, de los genes que estaban ahí
• Mutaciones → cambios en ADN producidos por error en proceso de
replicación (que es controlada, pero no perfeta, porque polimerasa
puede cometer errores y por corregirlos hasta cierto punto y a
veces tampoco los puede corregir; entonces es ahí donde se
generan cambios en genoma que no necesariamente son dañinos)
o Son la base de muchas enfermedades genéticas, pero no
siempre una enfermedad genética es hereditaria
• Mutaciones tienen diferentes niveles de impacto: • Duplicación: aparece un segmento cromosómico más
o Mutación en la secuencia del ADN de una vez en el mismo cromosoma o en otro. Esto
o Mutación que ocurre en nucleótido: que también afectaría la produce una sobreexpresión de un gen o una proteína,
secuencia de ADN lo que lleva a una redundancia de información, que
o Mutaciones en la disposición del ADN genómico afecta directamente el funcionamiento de un organismo
• Nivel de afectación / consecuencia depende de:
o Cambio en la secuencia nucleotídica: puede ocurrir que altere o
no el producto (proteína). Si no lo altera, no hay problema. Hay
cambios nucleotídicos que afecta la proteína y que sucede en
una célula que se replica mucho
▪ Ejemplo: células epidermales. Nivel de afectación grave →
defectos fuertes • Translocación: cambio de localización de un segmento
▪ La efectividad de la lesión depende de la eficiencia de cromosómico, esta también tiene implicaciones
mecanismos de reparación y de la tasa de división celular.: grandes a nivel de expresión de genes
si la célula que está afectada, se replica rápido y,
adicionalmente, el mecanismo de reparación es poco
efectivo → se amplifica el error rápidamente, lo cual lleva a Translocación, deleción y
duplicación se pueden
mutagénesis y carcinogénesis
detectar en Array
o Cambio en los genes o productos génicos
o Cambios en los tipos celulares involucrados
 ▪ Genómica: mutaciones a nivel genómico
• Euploidia: afecta el número normal de dotaciones
cromosómicas
o Diploidia – es lo normal: los humanos tienen 2
copias genómicas (una de mamá y otra de papá) →
la ploidia es 2n
o Monoploidia: es la pérdida de la mitad de
información genómica. Existe un solo cromosoma
de cada par (n), no es compatible con la vida
o Polipoidía: contienen más de un juego completo de
cromosomas; en humanos no es compatible con la
vida, pero en plantas sí. Pueden ser triploides (3n), ▪ Mutación sin sentido: hay codón de parada prematura
tetraploides (4n), poliploides (Xn), octaploides (8n)
• Aneuploidia: aumenta o disminuye el número de un
cromosoma específico, se asocia síndromes, trisomías
o Monosomías
o Trisomías
▪ Génica: cambio en un nucleótido específico inducido por un
agente físico-químico o por errores de polimerasa durante
la replicación del ADN, donde puede haber o no reversión
del daño
• Transversiones, transiciones, inserciones, deleciones
o Clasificaciones de mutaciones puntuales o génicas ▪ Mutación de sentido equivocado: hay un cambio de codón
que afecta AMC, se cambia por un codón de grupo químico
totalmente diferente (se habla de un polar cargado a un
hidrofóbico). El cambio es evidente, afecta completamente
la estructura y la función de la proteína, incluso puede
inhabilitarla

o Según su origen
▪ Mutación natural o espontánea: se producen en condiciones
naturales de crecimiento, influidas por el medio ambiente,
*leyó el cuadro y agregó lo siguiente: * respirar gas toxico constantemente
▪ Sin mutación: como está en el organismo, no tiene mutación • Representan la base de la evolución
▪ Simil lingüístico: es el mensaje de la proteína o grupos de ▪ Mutación inducida:
aminoácidos, la coherencia de la proteína • Inducida por mutágeno: agente físico químico biológico.
▪ Transición: cambio de un nucleótido por otro de la misma Es una molécula que incrementa la frecuencia en la que
clase (purina por purina, pirimidina por pirimidina) ocurren las mutaciones, cataliza la producción de la
▪ Transversión: cambia una purina por una pirimidina, mutación. Mutágenos pueden ser:
proteína no funciona perfecto, pero algo de fx tiene o Físicos: radiación UV (aumenta mutaciones, pero se
▪ Inserción: se pierde la función de la proteína, se desplaza presentan al azar), radiación ionizante, las partículas
marco de lectura α, β y γ, el choque térmico o radiaciones
▪ Deleción: se perdió guanina y se generó un codón de parada electromagnéticas
prematuro → no corre marco de lectura, trunca la proteína o Químicos: alteran la estructura del ADN o se
completamente intercalan entre los nucleótidos. Por ejemplo:
o Según el resultado en la secuencia de aminoácidos pueden ser: formalina, acido nitroso, ácido bórico, colchicina,
▪ Mutación neutra: no afecta funcionalidad, no tiene efecto ácido fórmico
sobre fenotipo, se da un cambio en secuencia que genera o Biológicos: se integran al ADN. Por ejemplo: virus,
tripletes que codifican para AMC equivalentes (cuando se bacterias, hongos, etc
cambia un AMC de un mismo grupo químico). Puede afectar • Por carcinógenos: es algo que produce un oncogén a
un poco la estructura, pero no cambia función partir de un protooncogén, el cual daña la secuencia del
• AAA (lis) → AGA (arg) protooncogén y puede inducir un crecimiento
▪ Mutación silenciosa: cambia el codón, pero AMC sigue descontrolado de la célula. Pueden ser físicos,
siendo el mismo, pasa desapercibida
 biológicos y químicos. Son mutaciones que ocurren reparación del adn
directamente en protooncogenes Preguntas del video de reparación del ADN
o Los protooncogenes son cualquier gen involucrado • Según el video, ¿cuáles son las formas en las que se pueden
en la regulación de ciclo celular, estos serán presentar los daños en el ADN? Puede ser:
susceptibles a volverse oncogén o Nucleótidos se dañan cuando hay discordancia, entonces los
o Si protooncogén funciona bien, el ciclo celular nucleótidos se unen incorrectamente
funciona bien, todo normal o Cuando hay mutaciones por moléculas naturales o moléculas
o Si protooncogén se daña, muta, se altera → químicas
entonces se vuelve oncogén → nunca se detiene el • ¿De manera general como se repara el daño en las células?
proceso de replicación → por eso genera tumor → o Con enzimas especializadas que se encargan de identificar las
se acumula mutaciones en proteínas que se forman secuencias que se están dañando y hacer la reparación correcta
en tumor y luego produce cáncer con enzimas específicas para el daño que se acaba de detectar
• Teratógenos: agentes químicos que producen daños • ¿Cuál es el método de reparación usado por la célula cuando se
durante el periodo de vida perinatal daña una base nitrogenada en el nucleótido?
o Mutación o Reparación de extinción de base, cuando una enzima corta o
o Aberraciones cromosómicas extrae la base nitrogenada mientras otra enzima se encarga de
o Interferencia mitótica cortar el resto del nucleótido. Entonces la enzima quita grupo
o Alteración en síntesis y función del ADN fosfato y la pentosa, para que luego otra enzima lo reemplace
o Falta de precursores, sustratos y coenzimas para la por un nucleótido nuevo que sea concordante con la hebra
biosíntesis • ¿Cuáles son los princípiales efectos en el ADN de la luz UV del sol?
o Alteraciones con las fuentes de energía ¿Cuál es el mecanismo de reparación de estos daños?
o Inhibición enzimática o La luz UV hace que dos nucleótidos adyacentes se peguen,
• Alteraciones genéticas, relacionadas a alteraciones a nivel genético, distorsionando la forma doble hélice del ADN. Para la reparación
cromosómico, aneuploidías: de este problema se utiliza reparación por escisión de
nucleótido, la cual consiste en que un grupo grande de proteínas
elimina una cadena del ADN de aproximadamente 24
nucleótidos, reemplazando esos nucleótidos por otros nuevos
• ¿Cuáles son los principales efectos de los rayos Gamma y los Rayos
x en el DNA? ¿cuál es el mecanismo de reparación de estos daños?
o Efectos: la radiación de muy alta frecuencia, como los rayos
gamma y los rayos X, causan un tipo diferente de daño. En
realidad, pueden cortar una o ambas cadenas de la columna
vertebral del ADN. Las roturas de doble hebra son las más
peligrosas, incluso una puede causar la muerte celular
o Mecanismos: las dos vías más comunes para reparar roturas de
doble hebra se denominan recombinación homóloga y unión de
extremos no homólogos
▪ Unión de extremos no homólogos: unión de dos cadenas,
así como están. Método no tan efectivo porque hay perdida
*no la leyó, pero igual la agrego* de información genética
▪ Recombinación homóloga: se coge otra cadena de ADN que
sea homóloga, entonces se garra una cadena y a partir de
esta (que tiene la misma información genética) se rehace la
información que se había perdido de la cadena que está
separada

Mal emparejamiento de nucleótidos:

hablamos de va a haber una
desaminación, entonces el sistema ya
no percibe una adenina como adenina,
sino que la percibe como guanina; por
tanto, se va a emparejar con una citosina
y eso genera un problema de mal
apareamiento de bases
En este caso, quienes interactúan todo
el mecanismo de reparación son los
Mut… Mut S: reconoce dónde está el
daño, dónde está el mal apareamiento y va a ocurrir que Mut H • Intercalación: daño por agentes intercalantes como el bromuro de
reconoce la cadena metilada, entonces reconoce el punto de etidio, que se va a intercalar en la hélice de ADN y eso no tiene
emimetilación, de esa forma el sistema puede identificar cuál es la reparación
cadena recién sintetizada y cuál es la molde. Siendo así que la recién
sintetizada es la que debe reparar y la cadena molde no la puede tocar.
Luego llega Mut L que hace como un sistema de acoplamiento, une
esas dos moléculas (Mut S y Mut H) para que al final llegue Mut H y
haga el corte en el punto donde tiene que empezar la reparación (que
es el punto de emimetilación). Ahí llega UvrD que quita todo el
fragmento hasta el nucleótido que tiene que corregir, luego llega
polimerasa y ligasa para remplazar todo ese espacio y reparan el daño MECANISMO DE REPARACIÓN DE DAÑOS EN BASES NITROGENADAS
(BER):
• Cuando hablamos de este tipo de daños, estamos hablando de
sistema de reparación por escisión de bases. En este caso al tener
la base nitrogenada dañada:
o Si el problema es la depurinación, de una vez pasa al punto de
la AP endonucleasa para retirar el azúcar y el fosfato
o Si el problema es que la base está dañada con los procesos que
se mencionó ahora, entonces se debe dar desaminación, donde
sale la base dañada, se queda el sitio sin base nitrogenada y
luego la endonucleasa AP corta y libera, luego llega ADN
DAÑO EN BASES NITROGENADAS. los siguientes son tipos de daños polimerasa que adiciona el nucleótido correspondiente y ligasa
que pueden ocurrir en una base nitrogenada: que une, generando dos enlaces fosfodiéster dentro de la
cadena
• Depurinación: se pierde base nitrogenada (en el ejemplo se pierde
una guanina que es una purina), por tanto, en la imagen se observa
el azúcar y grupo fosfato, pero la citosina no tiene con quien
emparejar. Entonces esto constituye un error para la polimerasa si
esta cadena es la que va a funcionar como molde, porque
básicamente no va a encontrar pareja

• Deaminación: pérdida de grupo amino en las cadenas. Por ejemplo, DAÑO EN LOS NUCLEÓTIDOS (NER)
si hay una citosina pero está desaminada, entonces habrá un uracilo • Hablamos de dímeros de pirimidina generados por radiación
y en este caso si hay uracilo se empareja con adenina, lo que lleva ultravioleta
a error de emparejamiento • Se forman dímeros, se forman abultamiento; y eso es lo que impide
que la polimerasa pueda avanzar, es decir, se estanca la polimerasa
durante la replicación

• Alquilación: es el mecanismo mediante el cual se ponen grupos

metilo en las bases nitrogenadas. Ejemplo: hay una guanina, se
pone grupo metilo, entonces se observa una O6-metilguanina y en • Cuando eso ocurre, hay una lesión en el ADN y, en este caso, llega
este caso hay un mal emparejamiento nuevamente porque esta se el complejo UvrAB; que reconoce sitio del daño y UvrB funciona
identificaría como adenina como helicasa que va a abrir la cadena y UvrA se libera a partir de
ahí y ayuda en el reconocimiento
• Una vez reconoce, llega UvrC, el cual ubica el punto de corte y retira
el fragmento dañado
• Llega polimerasa con ligada y restaura el fragmento
 CORTE DE AMBAS CADENAS DE ADN Y REPARACIÓN
• El rompimiento de doble cadena puede generar activación de ATM
o ATR que son cinasas que ya regulan todo el proceso de
reparación. Primero se deben detener los procesos generales de la
célula y luego se concentra en reparar el rompimiento de esa doble
cadena, porque si no se repara, la célula se muere

SISTEMA DE REPARACIÓN UNIDO A LA REPARACIÓN DE ESCISIÓN DE

NUCLEÓTIDOS QUE ES LA REACTIVACIÓN DEL SISTEMA SOS (SABE
OUR SOUL)
• Este sistema reconoce y responde a la acumulación de ADN de
cadena sencilla cuando el proceso de replicación se bloquea y, por
tanto, no ha podido ser sintetizada, hay expuesta una cadena • Dependiendo si es ATM o ATR quien se activa hay una reparación
sencilla. Por tanto, se activa el sistema SOS, que está regulado por por extremos homólogos o no homólogos:
LexA (que es el represor) y los genes SOS (expresa todos los genes o Si se activa ATR: habrá reparación por extremos no homólogos.
que harán la reparación por escisión de nucleótido, es decir, los De manera general, aquí se rellena la secuencia sin ningún
genes Uvr) molde, simplemente se coloca nucleótidos y ya. Por esta razón
o son más de 40 genes que se activan por la proteína RecA y no es muy adecuado, dado que genera mutación adicional
cuando no están en uso, se unen al represor LexA o Si se activa ATM: reparación por extremos homólogos. Se usa
o Si se inactiva LexA, deja libre el promotor para que sea generalmente. Echa mano de cromosomas homólogos que hay
reconocido por un factor de transcripción que al final induce la dentro del genoma, aquí se utilizan las cromátides hermanas
transcripción de los genes SOS, que incluye todos los NER que tiene (se habla durante un proceso de división celular,
(genes asociados a reparación por escisión de nucleótidos), donde se llena ese espacio). En ese espacio se corta un pedazo
Din1 (inhibidor de RecA) de la secuencia, generando una estructura donde hay enzimas
o RecA está activo, se une a cadena sencilla, induce la inactivación que utilizan la secuencia de abajo como molde para rellenar.
de LexA, entonces se puede empezar el proceso de Reparan con molde que es precisamente la cromátide hermana
transcripción de los genes SOS … se comienza la transcripción
de los genes de la caja SOS porque se crean factores de
transcripción (imagen b)

• Cuando se soluciona el problema, es decir, los genes NER reparan

- quitan nucleótido – reparan → luego inactivan Din1 → inactiva RecA
→ activa LexA → entonces al activarse LexA, se une de nuevo a
promotor, se silencian genes y se soluciona el problema
 1 4

Marcela charry - abril 20

Mutaciones • CLASIFICACIÓN SEGÚN:

• Tienen rol importante en los procesos evolutivos de cualquier o Según el tipo de célula afectada: si es somática o germinal
organismo vivo, porque introducen variabilidad. ▪ Célula somática: cambio afecta al individuo, pero no afecta
o Variabilidad: cambios en la secuencia de ADN, que serán la evolución porque no son heredables
generadas por efectos del medio ambiente o del metabolismo ▪ Célula germinal: afecta al individuo y se transmite a la
propio descendencia, por tanto, afecta al proceso evolutivo
o Esos cambios aportan al proceso de evolución, porque o Según extensión de material genético afectado: impacto
introducen cambios que permiten adaptarse a condiciones determinante
ambientales que se presenten, las cuales se heredan y permite ▪ Cromosómica: cambios directamente en el cromosoma, que
que evolucione la población involucra varios genes. Inserciones, translocaciones,
o Las variaciones son importantes porque sin ellas se inversiones, duplicaciones, deleciones
homogeneizaría un genoma de una población, haciendo que • Inversión: tiene impacto grande en la expresión de
cuando lleguen virus como SARS-cov2 si no hay variabilidad y genes porque cambian los elementos regulatorios de un
todos tienen la misma predisposición, los afectaría por igual, en gen (que son promotor basal como caja TATA, promotor
algunos casos podría hasta desaparecer la especie. En cambio, proximal, promotor distal, silenciadores)
la variabilidad permite responder de manera diferente, generar
cuellos de botella, lo que lleva a que la especie sobreviva
• La mutación puede ocurrir en:
o Célula germinal: cuando los cambios que ocurren en el ADN,
pasarán a la descendencia
o Célula somática: cuando los cambios que suceden en el ADN de
• Deleción: perdida de un fragmento del cromosoma y,
estas células se quedan con individuo y desaparece con él
por tanto, de los genes que estaban ahí
• Mutaciones → cambios en ADN producidos por error en proceso de
replicación (que es controlada, pero no perfeta, porque polimerasa
puede cometer errores y por corregirlos hasta cierto punto y a
veces tampoco los puede corregir; entonces es ahí donde se
generan cambios en genoma que no necesariamente son dañinos)
o Son la base de muchas enfermedades genéticas, pero no
siempre una enfermedad genética es hereditaria
• Mutaciones tienen diferentes niveles de impacto: • Duplicación: aparece un segmento cromosómico más
o Mutación en la secuencia del ADN de una vez en el mismo cromosoma o en otro. Esto
o Mutación que ocurre en nucleótido: que también afectaría la produce una sobreexpresión de un gen o una proteína,
secuencia de ADN lo que lleva a una redundancia de información, que
o Mutaciones en la disposición del ADN genómico afecta directamente el funcionamiento de un organismo
• Nivel de afectación / consecuencia depende de:
o Cambio en la secuencia nucleotídica: puede ocurrir que altere o
no el producto (proteína). Si no lo altera, no hay problema. Hay
cambios nucleotídicos que afecta la proteína y que sucede en
una célula que se replica mucho
▪ Ejemplo: células epidermales. Nivel de afectación grave →
defectos fuertes • Translocación: cambio de localización de un segmento
▪ La efectividad de la lesión depende de la eficiencia de cromosómico, esta también tiene implicaciones
mecanismos de reparación y de la tasa de división celular.: grandes a nivel de expresión de genes
si la célula que está afectada, se replica rápido y,
adicionalmente, el mecanismo de reparación es poco
efectivo → se amplifica el error rápidamente, lo cual lleva a Translocación, deleción y
duplicación se pueden
mutagénesis y carcinogénesis
detectar en Array
o Cambio en los genes o productos génicos
o Cambios en los tipos celulares involucrados
 ▪ Genómica: mutaciones a nivel genómico
• Euploidia: afecta el número normal de dotaciones
cromosómicas
o Diploidia – es lo normal: los humanos tienen 2
copias genómicas (una de mamá y otra de papá) →
la ploidia es 2n
o Monoploidia: es la pérdida de la mitad de
información genómica. Existe un solo cromosoma
de cada par (n), no es compatible con la vida
o Polipoidía: contienen más de un juego completo de
cromosomas; en humanos no es compatible con la
vida, pero en plantas sí. Pueden ser triploides (3n), ▪ Mutación sin sentido: hay codón de parada prematura
tetraploides (4n), poliploides (Xn), octaploides (8n)
• Aneuploidia: aumenta o disminuye el número de un
cromosoma específico, se asocia síndromes, trisomías
o Monosomías
o Trisomías
▪ Génica: cambio en un nucleótido específico inducido por un
agente físico-químico o por errores de polimerasa durante
la replicación del ADN, donde puede haber o no reversión
del daño
• Transversiones, transiciones, inserciones, deleciones
o Clasificaciones de mutaciones puntuales o génicas ▪ Mutación de sentido equivocado: hay un cambio de codón
que afecta AMC, se cambia por un codón de grupo químico
totalmente diferente (se habla de un polar cargado a un
hidrofóbico). El cambio es evidente, afecta completamente
la estructura y la función de la proteína, incluso puede
inhabilitarla

o Según su origen
▪ Mutación natural o espontánea: se producen en condiciones
naturales de crecimiento, influidas por el medio ambiente,
*leyó el cuadro y agregó lo siguiente: * respirar gas toxico constantemente
▪ Sin mutación: como está en el organismo, no tiene mutación • Representan la base de la evolución
▪ Simil lingüístico: es el mensaje de la proteína o grupos de ▪ Mutación inducida:
aminoácidos, la coherencia de la proteína • Inducida por mutágeno: agente físico químico biológico.
▪ Transición: cambio de un nucleótido por otro de la misma Es una molécula que incrementa la frecuencia en la que
clase (purina por purina, pirimidina por pirimidina) ocurren las mutaciones, cataliza la producción de la
▪ Transversión: cambia una purina por una pirimidina, mutación. Mutágenos pueden ser:
proteína no funciona perfecto, pero algo de fx tiene o Físicos: radiación UV (aumenta mutaciones, pero se
▪ Inserción: se pierde la función de la proteína, se desplaza presentan al azar), radiación ionizante, las partículas
marco de lectura α, β y γ, el choque térmico o radiaciones
▪ Deleción: se perdió guanina y se generó un codón de parada electromagnéticas
prematuro → no corre marco de lectura, trunca la proteína o Químicos: alteran la estructura del ADN o se
completamente intercalan entre los nucleótidos. Por ejemplo:
o Según el resultado en la secuencia de aminoácidos pueden ser: formalina, acido nitroso, ácido bórico, colchicina,
▪ Mutación neutra: no afecta funcionalidad, no tiene efecto ácido fórmico
sobre fenotipo, se da un cambio en secuencia que genera o Biológicos: se integran al ADN. Por ejemplo: virus,
tripletes que codifican para AMC equivalentes (cuando se bacterias, hongos, etc
cambia un AMC de un mismo grupo químico). Puede afectar • Por carcinógenos: es algo que produce un oncogén a
un poco la estructura, pero no cambia función partir de un protooncogén, el cual daña la secuencia del
• AAA (lis) → AGA (arg) protooncogén y puede inducir un crecimiento
▪ Mutación silenciosa: cambia el codón, pero AMC sigue descontrolado de la célula. Pueden ser físicos,
siendo el mismo, pasa desapercibida
 biológicos y químicos. Son mutaciones que ocurren reparación del adn
directamente en protooncogenes Preguntas del video de reparación del ADN
o Los protooncogenes son cualquier gen involucrado • Según el video, ¿cuáles son las formas en las que se pueden
en la regulación de ciclo celular, estos serán presentar los daños en el ADN? Puede ser:
susceptibles a volverse oncogén o Nucleótidos se dañan cuando hay discordancia, entonces los
o Si protooncogén funciona bien, el ciclo celular nucleótidos se unen incorrectamente
funciona bien, todo normal o Cuando hay mutaciones por moléculas naturales o moléculas
o Si protooncogén se daña, muta, se altera → químicas
entonces se vuelve oncogén → nunca se detiene el • ¿De manera general como se repara el daño en las células?
proceso de replicación → por eso genera tumor → o Con enzimas especializadas que se encargan de identificar las
se acumula mutaciones en proteínas que se forman secuencias que se están dañando y hacer la reparación correcta
en tumor y luego produce cáncer con enzimas específicas para el daño que se acaba de detectar
• Teratógenos: agentes químicos que producen daños • ¿Cuál es el método de reparación usado por la célula cuando se
durante el periodo de vida perinatal daña una base nitrogenada en el nucleótido?
o Mutación o Reparación de extinción de base, cuando una enzima corta o
o Aberraciones cromosómicas extrae la base nitrogenada mientras otra enzima se encarga de
o Interferencia mitótica cortar el resto del nucleótido. Entonces la enzima quita grupo
o Alteración en síntesis y función del ADN fosfato y la pentosa, para que luego otra enzima lo reemplace
o Falta de precursores, sustratos y coenzimas para la por un nucleótido nuevo que sea concordante con la hebra
biosíntesis • ¿Cuáles son los princípiales efectos en el ADN de la luz UV del sol?
o Alteraciones con las fuentes de energía ¿Cuál es el mecanismo de reparación de estos daños?
o Inhibición enzimática o La luz UV hace que dos nucleótidos adyacentes se peguen,
• Alteraciones genéticas, relacionadas a alteraciones a nivel genético, distorsionando la forma doble hélice del ADN. Para la reparación
cromosómico, aneuploidías: de este problema se utiliza reparación por escisión de
nucleótido, la cual consiste en que un grupo grande de proteínas
elimina una cadena del ADN de aproximadamente 24
nucleótidos, reemplazando esos nucleótidos por otros nuevos
• ¿Cuáles son los principales efectos de los rayos Gamma y los Rayos
x en el DNA? ¿cuál es el mecanismo de reparación de estos daños?
o Efectos: la radiación de muy alta frecuencia, como los rayos
gamma y los rayos X, causan un tipo diferente de daño. En
realidad, pueden cortar una o ambas cadenas de la columna
vertebral del ADN. Las roturas de doble hebra son las más
peligrosas, incluso una puede causar la muerte celular
o Mecanismos: las dos vías más comunes para reparar roturas de
doble hebra se denominan recombinación homóloga y unión de
extremos no homólogos
▪ Unión de extremos no homólogos: unión de dos cadenas,
así como están. Método no tan efectivo porque hay perdida
*no la leyó, pero igual la agrego* de información genética
▪ Recombinación homóloga: se coge otra cadena de ADN que
sea homóloga, entonces se garra una cadena y a partir de
esta (que tiene la misma información genética) se rehace la
información que se había perdido de la cadena que está
separada

Mal emparejamiento de nucleótidos:

hablamos de va a haber una
desaminación, entonces el sistema ya
no percibe una adenina como adenina,
sino que la percibe como guanina; por
tanto, se va a emparejar con una citosina
y eso genera un problema de mal
apareamiento de bases
En este caso, quienes interactúan todo
el mecanismo de reparación son los
Mut… Mut S: reconoce dónde está el
daño, dónde está el mal apareamiento y va a ocurrir que Mut H • Intercalación: daño por agentes intercalantes como el bromuro de
reconoce la cadena metilada, entonces reconoce el punto de etidio, que se va a intercalar en la hélice de ADN y eso no tiene
emimetilación, de esa forma el sistema puede identificar cuál es la reparación
cadena recién sintetizada y cuál es la molde. Siendo así que la recién
sintetizada es la que debe reparar y la cadena molde no la puede tocar.
Luego llega Mut L que hace como un sistema de acoplamiento, une
esas dos moléculas (Mut S y Mut H) para que al final llegue Mut H y
haga el corte en el punto donde tiene que empezar la reparación (que
es el punto de emimetilación). Ahí llega UvrD que quita todo el
fragmento hasta el nucleótido que tiene que corregir, luego llega
polimerasa y ligasa para remplazar todo ese espacio y reparan el daño MECANISMO DE REPARACIÓN DE DAÑOS EN BASES NITROGENADAS
(BER):
• Cuando hablamos de este tipo de daños, estamos hablando de
sistema de reparación por escisión de bases. En este caso al tener
la base nitrogenada dañada:
o Si el problema es la depurinación, de una vez pasa al punto de
la AP endonucleasa para retirar el azúcar y el fosfato
o Si el problema es que la base está dañada con los procesos que
se mencionó ahora, entonces se debe dar desaminación, donde
sale la base dañada, se queda el sitio sin base nitrogenada y
luego la endonucleasa AP corta y libera, luego llega ADN
DAÑO EN BASES NITROGENADAS. los siguientes son tipos de daños polimerasa que adiciona el nucleótido correspondiente y ligasa
que pueden ocurrir en una base nitrogenada: que une, generando dos enlaces fosfodiéster dentro de la
cadena
• Depurinación: se pierde base nitrogenada (en el ejemplo se pierde
una guanina que es una purina), por tanto, en la imagen se observa
el azúcar y grupo fosfato, pero la citosina no tiene con quien
emparejar. Entonces esto constituye un error para la polimerasa si
esta cadena es la que va a funcionar como molde, porque
básicamente no va a encontrar pareja

• Deaminación: pérdida de grupo amino en las cadenas. Por ejemplo, DAÑO EN LOS NUCLEÓTIDOS (NER)
si hay una citosina pero está desaminada, entonces habrá un uracilo • Hablamos de dímeros de pirimidina generados por radiación
y en este caso si hay uracilo se empareja con adenina, lo que lleva ultravioleta
a error de emparejamiento • Se forman dímeros, se forman abultamiento; y eso es lo que impide
que la polimerasa pueda avanzar, es decir, se estanca la polimerasa
durante la replicación

• Alquilación: es el mecanismo mediante el cual se ponen grupos

metilo en las bases nitrogenadas. Ejemplo: hay una guanina, se
pone grupo metilo, entonces se observa una O6-metilguanina y en • Cuando eso ocurre, hay una lesión en el ADN y, en este caso, llega
este caso hay un mal emparejamiento nuevamente porque esta se el complejo UvrAB; que reconoce sitio del daño y UvrB funciona
identificaría como adenina como helicasa que va a abrir la cadena y UvrA se libera a partir de
ahí y ayuda en el reconocimiento
• Una vez reconoce, llega UvrC, el cual ubica el punto de corte y retira
el fragmento dañado
• Llega polimerasa con ligada y restaura el fragmento
 CORTE DE AMBAS CADENAS DE ADN Y REPARACIÓN
• El rompimiento de doble cadena puede generar activación de ATM
o ATR que son cinasas que ya regulan todo el proceso de
reparación. Primero se deben detener los procesos generales de la
célula y luego se concentra en reparar el rompimiento de esa doble
cadena, porque si no se repara, la célula se muere

SISTEMA DE REPARACIÓN UNIDO A LA REPARACIÓN DE ESCISIÓN DE

NUCLEÓTIDOS QUE ES LA REACTIVACIÓN DEL SISTEMA SOS (SABE
OUR SOUL)
• Este sistema reconoce y responde a la acumulación de ADN de
cadena sencilla cuando el proceso de replicación se bloquea y, por
tanto, no ha podido ser sintetizada, hay expuesta una cadena • Dependiendo si es ATM o ATR quien se activa hay una reparación
sencilla. Por tanto, se activa el sistema SOS, que está regulado por por extremos homólogos o no homólogos:
LexA (que es el represor) y los genes SOS (expresa todos los genes o Si se activa ATR: habrá reparación por extremos no homólogos.
que harán la reparación por escisión de nucleótido, es decir, los De manera general, aquí se rellena la secuencia sin ningún
genes Uvr) molde, simplemente se coloca nucleótidos y ya. Por esta razón
o son más de 40 genes que se activan por la proteína RecA y no es muy adecuado, dado que genera mutación adicional
cuando no están en uso, se unen al represor LexA o Si se activa ATM: reparación por extremos homólogos. Se usa
o Si se inactiva LexA, deja libre el promotor para que sea generalmente. Echa mano de cromosomas homólogos que hay
reconocido por un factor de transcripción que al final induce la dentro del genoma, aquí se utilizan las cromátides hermanas
transcripción de los genes SOS, que incluye todos los NER que tiene (se habla durante un proceso de división celular,
(genes asociados a reparación por escisión de nucleótidos), donde se llena ese espacio). En ese espacio se corta un pedazo
Din1 (inhibidor de RecA) de la secuencia, generando una estructura donde hay enzimas
o RecA está activo, se une a cadena sencilla, induce la inactivación que utilizan la secuencia de abajo como molde para rellenar.
de LexA, entonces se puede empezar el proceso de Reparan con molde que es precisamente la cromátide hermana
transcripción de los genes SOS … se comienza la transcripción
de los genes de la caja SOS porque se crean factores de
transcripción (imagen b)

• Cuando se soluciona el problema, es decir, los genes NER reparan

- quitan nucleótido – reparan → luego inactivan Din1 → inactiva RecA
→ activa LexA → entonces al activarse LexA, se une de nuevo a
promotor, se silencian genes y se soluciona el problema
 irna y crispr/cas9

NIVELES DE REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA

Recordemos que
cuando hablamos del
flujo de la infromación
genética estamos
hablando del proceso de
replicación del ADN, de
la trascripción del ADN
para producir un ARN
mensajero y de la traducción de RNA mensajero para producir una
proteína, y netender que vamos a tener unos mecanismos de
regulación que van a estar desde el ADN para hacerlo disponible a nivel Es importante que entendamos que los miRNA no superan un tamaño
transcripcional y luego entender que hay unos procesos de control a de los 22 nucleótidos, que están procesados por dos enzimas (Drosha
nivel posttranscripcional que controlan la estabilidad del mensaje y y Dicer), y que los siRNA siempre van a trabajar con dicer, siempre
controlan si pasa al siguiente mensaje que es ya la traducción para la vamos a hablar de argonauta como la proteína que va a hacer el
producción de la proteína, donde también hay unas modificaciones silenciamiento. Además, respecto al mecanismo de acción de un
postraduccionales que ya son a nivel de las proteínas que van a miRNA vamos a hablar de un represión traduccional o una
detemrinar la ubicación de esta y sus modificaciones para hacerla degradación del mensaje, y si estamos hablando de siRNA es un daño
funcional. del RNA.

En otras palabras, estamos ★ Ruta de biogénesis.

hablando de ADN donde vamso a
tener cambios a nivel de cromatina
para que pueda iniciar el proceso de
transcripción, se va a porducir un
mARN maduro que sale al
citoplasma y donde va a tener
puntos de regulación y ya la
producción del mensaje y por último
las modificaciones
prostraduccionales.

Dentro de este flujo de información

genética, ¿Dónde estaría ubicado
el iRNA? Los mecanismos de iRNA
pueden regular desde la cromatina,
pero los que vamos a trabajar ahora, miRNA y siRNA, van a trabajar
principalmente en un nivel postranscripcional en la parte de la
estabilidad del mensaje.
Si estamos hablando de un miRNA, vamos a entender que este es
RNA INTERFERENTE un gen que se va a transcribir con una polimerasa II, y lo que se
va a generar es un miRNA primaria que lo vamos a reconocer
Es importante tener en cuenta que vamos a tener varios RNA no como Pri-miRNA, este va a ser procesado por Drosha en el
codificantes dentro de los cuales encontramos los miRNA, los siRNA, núcleo, lo que hace esta enzima es cortar en el tallo generando un
piRNA y los lncRNA. Nos vamos a centrar en los dos primeros ya que precursor de miRNA (Pre-miRNA), este va a salir del núcleo, se
son los que más se han trabajado actualmente y los que se están queda en el citoplasma y Dicer va a cortar el bucle de ese tallo-
utilizando como método de diagnóstico y de terapia génica. bucle y ahí se genera el miRNA, pero este va a tener dos cadenas,
es un dúplex, una cadena va a ser la guía y la otra una pasajera
Los piRNA y los lncRNA no funcionan como mecanismos de terapia
que se eliminará. El sistema va a reconocer una de las dos
génica por lo que es importante que se estén estudiando como
cadenas que va a cargarse dentro del complejo RISC
conocimiento adicional.
(Silenciamiento inducido por RNA) y en este punto la cadena guía,
guía el complejo RISC hasta el mRNA para que sea degradado o
 para regular su estabilidad, cuando hablamos de esta regulación Estos biomarcadores que me permiten saber el estado de una
de la estabilidad pueden ocurrir dos cosas: célula, donde puedo comparar el nivel de expresión de una célula
1. Represión de la traducción: Ocurre en los cuerpos P. control con una célula enferma y poder mirar la expresión
2. Degradación del mRNA: Ocurre en los cuerpos P, pero diferencial que va a ocurrir entre los siRNA, miRNA, piRNA,
podría ocurrir que se degrada inmediatamente la argonauta LncdRNA. Sabemos que normalmente estos miRNA están
corta la cadena. regulando estos procesos fisiológicos y que cuando están mal van
Si miramos esta rutina de biogénesis normal de los miRNA, a ocurrir enfermedades como las que vemos en el cuadro.
podemos detectar puntos donde utilizar esa misma herramienta
para realizar una terapia génica. Entonces, puedo creer desarrollar Podemos determinar cuál es el nivel de expresión en una
el miRNA desde el núcleo donde yo pueda insertar la secuencia y población control y cuál es el nivel de expresión de un miRNA en
que todo el tiempo se esté expresando desde el núcleo y se esté una población enferma y poder identificar unos patrones
expresando un miRNA que sale del núcleo pueda realizar todo el diferenciales que me permitan decir, esto podría funcionar como
proceso anterior o puedo preferir diseñar un Pre-miRNA y lo un biomarcador.
inserto en el citoplasma para que Dicer lo reconozca, y después
siga el proceso y bloqueé el gen o se disminuya la expresión de ★ ¿Para qué sirven?
ese mensaje. Cuando hablamos de que puede utilizarse como una terapia
Por otra parte (ruta de los siRNA), tenemos los RNA de doble génica, es algo como lo que vemos en la imagen:
cadena que son dúplex, para este caso el sistema es muy sencillo
puede tener un RNA de doble cadena que va a ser reconocido por
Dicer, corta y va a generar el siRNA, al reconocerlo ya carga la
cadena guía y se va a degradar el RNA. El sistema de intervención
lo podemos trabajar desde arriba (donde aparece los dsRNA)
poniendo ese RNA doble cadena específico que a mi me interesa
que Dicer reconozca o desde donde se carga y yo diseño la
cadena con las características adecuadas para que argonauta
reconozca la cadena que debe cargarse y avanzar.

★ Funciones biológicas reguladas por ncRNAS.

Es importante que tengamos en cuenta que los RNA no
codificantes normalmente se encuentran regulando procesos
fisiológicos, los que vemos en la imagen.

Tengo un gen específico, lo voy a identificar, pero dentro del ese

gen también voy a mirar a donde quiere dirigir ese interferente.
En este caso, vamos a hablar de un siRNA que lo diseño
complementario a la secuencia específica, le pongo una marca
que le va a indicar el sistema que cuál no es la cadena que yo
quiero cargar para hacer lo más específico posible el proceso. La
cadena que quiero se carga en el complejo RISC y se descarta la
otra cadena, y se hace el silenciamiento o degradación del
mensaje.

Con esto podemos entender que ese mecanismo es un proceso

normal y natural, que podemos intervenir. Ahí viene la implicación
de que podemos usar los no codificantes como biomarcadores.

Cuando hablamos de este tipo de terapia hay muchísimas

opciones a nivel comercial donde yo puedo diseñar desde el
siRNA para ponerlo en el citoplasma o poner un miRNA que aún
no puede ser cargado en argonauta ya que le faltan los extremos
que son por el corte de Dicer. Por otro lado, tengo sistemas de Este virus va a tener unas estructuras en las UTR 5’ y 3’ que
iRNA basados en vectores, donde le pongo un vector viral o son importantes y sirven para regular la replicación del virus.
vectores específicos para que constantemente esté expresando Cuando el virus ya
un Pre-miRNA o un miRNA puntualmente. También puedo utilizar se encuentra en el
RNA doble cadena para que Dicer haga lo propio y haga el hígado, esta el
silenciamiento de ese gen. miRNA miR 122
que es del
• EJEMPLO: Hipercolesterolemia. hospedero y tiene
una expresión
hepática.
El miR122
aumenta su expresión cuando el virus entra, interactúa con
la UTR 5’ del virus, induciéndolo a aumentar el nivel de
expresión por lo que hay mayor liberación de partículas
virales.

Mipomersen es un iRNA antisentido que va a silenciar a la

apopoliproteína B100, proteína que está en toda esa ruta de
desarrollo del colesterol de alta densidad. En las personas
que tiene hipercolesterolemia, esta proteína está expresada
en una lata proporción y se necesita bajar la proporción de
expresión.
En este caso, vamos a tener que es un antisentido, por lo
tanto, se aplica la molécula sintética y debe de haber una
reaplicaicón del medicamento para que pueda funcionar. El miravirsen es un antagónico del miR 122, que al ponerlo
lo bloqueo e inhibe la unión del miR con la UTR 5’ del virus
Inhibición de Apoliproteína B-100 por lo tanto, tenemos una disminución de partículas virales.

★ ¿Para qué sirven en diagnóstico?

Imagen de la derecha → ADN que va a expresar la ApoB,

tengo el Mipomersen para que haga un doble cadena que
será reconocido por el sistema, degradado y se disminuirá la
expresión de la proteína. Cuando estamos hablando de una
proteína que es importante para el sistema, pero está
sobreexpresada por lo que genera el problema este es un
buen mecanismo para bajar el nivel de expresión. Los
liposomas son una muy buena herramienta para encapsular
este tipo de moléculas (mipomersen) y liberarlas 1. Los miRNA son los que más se han utilizado para hacer este
directamente en el citoplasma. tipo de diagnósticos ya que pueden obtener en
microvesículas, proteínas, casi en cualquier tipo de fluido
• EJEMPLO: Miravirsen-Ensayo clínico Fase II. corporal lo que lo hace un método de diagnóstico no invasivo
Se basa en el tratamiento del virus de la hepatitis C que y que ayuda a obtener información muy precisa.
infecta el hígado. 2. Luego de obtenerlo, hacemos la extracción del miRNA que
son menores de 200 nucleótidos donde se utilizan kits de
extracción específicos, se usan unas columnas que al final
filtran estos miRNA de acuerdo con el tamaño.
3. Una vez ha sido extraído el RNA, se evalúa un control versus
la población enfermas, donde debemos detectar la expresión
diferencial que pueden ser los biomarcadores para la
enfermedad. Hay diferentes métodos, uno de ellos es la
exploración que por ejemplo si yo quiero conocer lo que hay
y tratar de identificar esos miRNA uso las herramientas de
 high-throughput sequencing donde básicamente miro las hacer el corte del RNA pero no de ADN, luego se va a activar
expresiones diferenciales, también tenemos los gracias al guía de RNA específico al RNA que se quiere cortar.
microarreglos y la qRT-PCR, pero en estos voy a necesitar Luego, se va a hacer la edición de esas moléculas de RNA donde
conocer que es lo que voy a sacar, por ejemplo tengo una uno de sus extremos va a tener moléculas fluorescentes y en el
población europea con una enfermedad y ya conocen sus otro una molécula inhibitoria a esa fluorescencia, cuando ambas
biomarcadores y yo necesito evaluarlo en mi población, en moléculas están juntas no se emite la fluorescencia, se activa tras
ese caso usaríamos estos últimos. el corte de la diana por parte de la Cas, tras liberarse las moléculas
4. Cuando ya he detectado esos biomarcadores, ya me voy a fluorescentes se va a poder detectar la cadena. Hay otro método
probarlos y a mirar en una población sana vs una enferma, de diagnóstico similar utiliza la Cas12a que corta el ADN de doble
utilizó el biomarcador y miro a ver si ayuda a diferenciar entre cadena, este se llama DETECTR.
los dos grupos o si algún sano va a estar enfermo. Vídeo → Science explains: CRISPR diagnostics
5. Con la información anterior ya puedo tomar decisiones ¿Cómo se haría la multiplex para dengue? Se diseñarían
clínicas ya sea para una terapia personalizada. diferentes Cas13 para poder detectar el RNA viral y diseñar con
diferentes fluoróforos en diferentes compartimientos para
CRISPR/CAS9 detectar que variante de dengue sería, que fueran diferentes
reacciones.
¿Cuál es la función del reportero? Cuando Cas13 se activa al
reconocer la secuencia diana, empieza a cortar cualquier RNA que
haya en el medio de manera desproporcionada, si empieza a haber
fluorescencia es porque Cas13 cortó sin importar quien era,
generando la separación del fluoróforo y el quencher emitiendo la
fluorescencia. El reportero es importante ya que la fluorescencia
va a ser masiva.
Es un método que funciona como si fuera el sistema inmune de
TALLER
bacterias.
Cuando nos enfrentamos a este tipo de realidades debemos tener en
Cuando hay una infección viral, va a liberar su genoma viral y eso va a
cuenta que se trata de un dilema ético bastante fuerte donde estamos
ser guardado en un locus llamado CRISPR que son unas secuencias
encontrando que hay dos caminos que podemos tomar, ambos tienen
repetidas interespaciadas que vamos a tener en las bacterias, este
beneficios peor también tienen incertidumbre muy grandes. En este
funciona como el historial de infecciones que la bacteria ha tenido.
momento la técnica no está completamente desarrollada, que hay out
Todas las barritas de colores en la imagen, hacen parte de regiones
targets que se pueden generar sobre todo en la edición del genoma de
virales que luego van a ser reconocidas en caso de una nueva infección
un embrión y que claramente ya hay ensayos donde se permite el
por el mismo virus.
ensayo con humanos, pero sin llevar a término el embarazo (sobre todo
China), sin embargo, en el 2018 un médico lo hizo y existen dos
Este locus CRISPR, va a ser transcrito (policistron) y esos pedacitos
gemelas que son producto de esa edición de genoma donde se eliminó
van a cargarse dentro de la proteína Cas que va a identificar cuando la
el receptor que permite el ingreso del VIH, hubo un gran dilema
nueva partícula viral llegue a la célula e inmediatamente lo corta y lo
respecto a esto y actualmente el médico está en la cárcel (noticia). En
degrada.
Colombia, hay que entender de que debemos primero garantizar el
correcto funcionamiento de la metodología y que esté adecuada para
★ CRISPR/Cas9 como un herramienta en la edición de genoma.
poder ser aplicada y sobre todo cuestionarnos, ¿cuál es el problema
Tenemos Cas9, la molécula que
que queremos solucionar? ¿cómo lo vamos a hacer?¿es la metodología
va a ser como la proteína en
adecuada?¿vale la pena?¿riesgos y beneficios?, debemos evaluar el
bacterias y vamos a tener un
contexto. Además, debemos definir esas necesidades sociales
RNA guía con una estructura
comunes, no particulares.
muy específica que va a permitir
Otro punto para analizar es como inserto una metodología de estas en
la unión a Cas9, vamos a tener
el contexto social donde nos encontramos (sería decisión de bioético).
un especie de interespaciador
que va a determinar en qué
Proyectos como el proyecto genoma humano que ha generado gran
punto se va a cortar la cadena de ADN genómico. La
impacto donde no solo invirtieron en el desarrollo del genoma sino que
complementariedad debe ser perfecta. Una vez se hace el corte,
también en el construir un ambiente ético y social donde se pudiera
hay enzimas que llegan y reparan ya sea por unión de extremos
educar a la población y se pusieran unas normativas tanto bioéticas
homólogos o no homólogos al azar aunque este método puede
como sociales para hacer el manejo de la información, se declaró el
crear mutaciones, puede ocurrir que la reparación utilizando una
genoma humano como patrimonio de la humano para que nadie
ADN donador haciendo la edición de genoma que quiero.
pudiera patentarlo.
★ CRISPR como mecanismo de diagnóstico.
La técnica de diagnóstico mediante CRISPR es SHERLOCK, donde
se utiliza la Cas13a y la Cas12, la primera tiene la capacidad de