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Recuento y Viabilidad en Cámara de Neubauer

El documento describe dos ejercicios sobre recuentos de células viables usando una cámara de Neubauer. En el primer ejercicio, se calcula la densidad celular total y viable de una suspensión celular de 20 ml y su viabilidad. En el segundo ejercicio, se calcula la densidad celular total y viable de una suspensión celular de 5 ml y su viabilidad, y se explican los pasos para congelar las células a una densidad de 0.5x10^6 células viables/ml en criotubos.

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Recuento y Viabilidad en Cámara de Neubauer

El documento describe dos ejercicios sobre recuentos de células viables usando una cámara de Neubauer. En el primer ejercicio, se calcula la densidad celular total y viable de una suspensión celular de 20 ml y su viabilidad. En el segundo ejercicio, se calcula la densidad celular total y viable de una suspensión celular de 5 ml y su viabilidad, y se explican los pasos para congelar las células a una densidad de 0.5x10^6 células viables/ml en criotubos.

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Ejercicios de repaso: Recuento cámara de Neubauer

1. Se quiere hacer un pase de un cultivo en monocapa que está a punto


de entrar en confluencia. Una vez despegadas y lavadas las células, se
resuspenden en 20 ml de medio de cultivo. Para hacer el recuento de
células viables, 10ul de suspensión se mezclan con 40 ul de azul tripán
y con la mezcla se carga una cámara de Neubauer. El recuento de las
células blancas y azules en las cuatro esquinas de la cámara ha sido el
siguiente:

1- 86 células blancas y 16 azules


2- 76 células blancas y 20 azules
3- 90 células blancas y 16 azules
4- 95 células blancas y 12 azules

a) ¿Cuál es la densidad celular total de los 20mL de suspensión? y la


densidad celular viable?
b) ¿Qué viabilidad tienen las células (porcentaje de viables respecto
al total)?
c) Las células se van a subcultivar en frascos roux de 25cm​2​ y se
quieren sembrar 6*10​6​ células por frasco en un volumen final de
medio de 8 mL por frasco. ¿Cuántos frascos se necesitan? ¿Qué
cantidad de medio y de suspensión celular hay que colocar en
cada uno?

2. Queremos congelar células de una línea celular que crece en


suspensión. Partimos de una suspensión de células lavadas y
resuspendida en 5 ml de medio de cultivo. Para hacer el recuento de
viables, se hace una dilución previa de la suspensión con PBS
añadiendo 10ul de muestra en 90ul de PBS. Después se mezclan 20ul
de la dilución con 20ul de azul tripán y con la mezcla se carga una
cámara de Neubauer. El recuento de las células blancas y azules en las
cuatro esquinas de la cámara ha sido el siguiente.

1- 48 células blancas y 10 azules


2- 41 células blancas y 9 azules
3- 44 células blancas y 12 azules
4- 47 células blancas y 11 azules

a) ¿Cuál es la densidad celular total de los 5mL de suspensión? ¿y


la densidad celular viable?
b) ¿Qué viabilidad tienen las células (porcentaje de viables respecto
al total)?
c) Queremos congelar las células en criotubos a una densidad de
0.5*10​6​ células viables/mL, colocando 1 mL de suspensión en
cada criotubo. Explica qué pasos seguirías desde la suspensión
de las células en medio de cultivo hasta colocar los criotubos en
nitrógeno líquido. ¿Qué volumen de solución de congelación
necesitas? ¿Cuántos criotubos necesitas?

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