Cuesta d. eShecue dS INSTITUTO AR De: cop ERIOLOGH BACTERY Nya: Fecha: Curso: i 42+ Que es una bacteria? Cuanto mide aproxlmadamente? Esquematice, Es una célula Eucariota o Procariota. Diga sus diferencias, 2- Diga cuantas y cuales son las formas morfolégicas bacterlanas que existen. 3+ Cuales, como y donde se encuentra el material genético de una bacteria? ‘Como esta constituido el citoplasma bacteriano? Que funcién cumplen estos elementos? 5+ Enel citoplasma bacteriano, existen grinulos de inclusién ¢Cusles son fos componentes ‘mas importantes, como almacena la energia? 5- Que son los ribosomas? Como se clasifican, en cuanto a tamafo, y cual predomina en una bacteria? 7- Quie es un plasmido? Estos contienen informacin genética? 8- A que llamamos “membrana citoplasmitica"? donde se encuentra en Ia célula bacteriana {Gram (+) y Gram(-) )? 9- Refiérase a composicién de la membrana citoplasmstica y dé funciones de la misma. 410- Cual es la composicén yfuncion dela pared bacteriana? de las Seeknes 14 Diol composicin de pare bacteriana dela bacterias Gram) yGram(. yy . Beido- ol Ae steates 112- Que son las endosporas? Diga sise encuentran en todas las especies bacterianas. 13-Algunas especies bacterianas poseen capsula, diga donde se ublca ésta y como esta constituida, 14 Cuales son las funciones de la capsula? 15- Que son los “flagelos bacterianos”? Donde se encuentran? Como estan constituidos y cual es su funcién? 16-A que llamamos “fimbrias”? En que bacterias se encuentran? : 17- Que son los pill? Que funcién cumplen? Escaneado con CamScannerCélulas procarioras Células eucarioras Carateristcas Gropos mayores Bacteris, alga verdezuadss ‘Alas, hongos,potz00s planta, animales pared celular CContiene peptidoglicanes,ipidos. proteins Ausente; cuando est presente conienequtina ‘o celulosa (plantas verdes) Estructura nuclear ‘Membrana nuciear Cromosomas Ploidia “Aranscripeiéniuaduccién Ausente Haplaide Unico, cerado, circular, DNA de doble cadena Continuo, con RNA mensajeros de vida cor y Tormacién de poliribosonis (polisomas) Presente Maltiple, lineal, cromasomas Diploide, haplaie(hongos) Discontinua, mRIVA d> vida larga transripto ene ridcleo y traducido ene! cioplssma Histonas Ausente Presentes Citoplasma Ribosomas Presentes: 705 (50S + 308) Presentes; 208 (60S + 408) Mitccondeias Ausentes Presentes Complejo de Golgi Ausente Present Reticulo endoplasmstico Ausente Presen! Membrana eitoplasmati-. Presente, fosfolipidos, sin esteroles (excepto en Preseate:fosfolipidos y esteroles(coesteol er a especies de Mycoplasma) gosteral) Triglidridos Ausentes Presentes Movilidad Flagelos (simple) Flagelos (complejost; seudspodes: ores sos lecomotares sompleios Generacién de enes2i Repreduceign sexual Auseate (innecesaria) Recombinaciéwintercam= bio génico a nuclear que encierra multiples eromosomas, mizntras ‘ve las células procariotas Genen un solo cromosoma que fo esté encerrado en una membrana nuclear. Las celulas tucarictas también poseen una variedad de organelas subcelulares con funciones especializadas, como mito- condtias (sitios donde se desarrolla la respiracidn aerobi- a) y cloroplastos (sitios donde se realiza la forosinesis en las plantas verdes). De hecho, estas organelas subce= lutares probablemente hayan evolucionado a partir de microorganismos procariotas que entraron en las células ‘eucatiotas y hayan desarrollado con éstas relaciones sie~ bidticas a io largo del tiempo con pérdida de las funcio- nes metabélicas asociadas con’su existencia auténoma y desarrollo de rasgos 0 atributos que beneficiaron al mi- croorganismo “huésped”. Como se describe brevemente en el cuadro I-1, las eélulas procariotas y eucariota di- fieren sustancialmente en muchas otras caracteristicas ANATOMIAY FISIOLOGIA BACTERIANAS BASICAS sionasl ‘TAMAmioY FORMA DE LAS BACTERIAS ‘Las eélulas bacterianas tienen una gran variedad de formas y tamafios. Por lo general, tienen 0,2 2.2 wm de ~ Aociada a la membrana citoplasmatiea Incercambio cromesémico o de plismidos vis ‘wansformacién, ransduccién 0 conjugacién Mitocondrias Presente (puede alternar con ciclosrepreducti= vos azexuales) CCigota diploide formada a pani de células mminales baploides: Ia meiosis da como resul- tado la recombinacic genética idmetro y 1 a 6 im de largo. Existea cusire morfologias bisicas para la bacterias: células estéricas 0 coeos, célu- las con forma de bastén o bacilos, células con forma de ‘spiral o espirilos y células con forms de coma liamadas vibriones. La disposicién de los cocos en pares. cadenas o racimos define a grupos de microorganismos que se de- rnominan, respectivamente, diplococas, estreptococos y estafilococos (fig. 1-1). Los microcrganismos con forma de bastéa pueden ser de morfologiz regular. mis cortos (cocobacilares) o tener aiguno de sus extremos ensan- chado (corineformes). Las células con forma de coma definen una caracteristica bisica de ciertas especies ([Link]. especies de Vibrio). Lo mismo es valido para cier- tas baeterias con forma de espira! (p. ¢j. especies de Compylobacter, Borrelia y Treponema), en las que la for- rma espiralada puede ser laxa (alrededor de cuatro vueltas por microorganismio) 0 mis apretada (entre 14 y 20 vuel- fas por microorganismo). Adems de su tamafo, forma y disposicién cellar, oo eriterio de diferenciacién de las bacterias se basa sobre sus catacteristicas de tineién con ide Gram, Con esta técnica de tinci6n, la ide las bacterias pueden ser clasificadas ¢o- mo grampositivas 0 gramnegativas. La coloracién de Gram diferencia a las bacterias sobre la base dela estruc- tura de la pared celular y s+ trata més adelante en este ca- devamente en el capitulo 2, La estructura gene- la coloraci mayor parte pnulo y m iF ET Escaneado con CamScannerOo oO O,o 5 2 Cocos 2. 0 oO gO Q Cocobacilos OQ 0. Bacilos uv AY Espirlos Espino de tipo Borrelia ao eo SF as : Estreptococos 4 Bacilos carinellormes bres Espitlo de tipo Leptescira ey © CP Vibriones a d Espirio de tipo Treponema Fig. 1-L. Morfologia bésica de distintas bacteria ral de una célula bacteriana (grampositiva y gramnegati- vva) se representa en la figura 1-2. ESTRUCTURA NUCLEAR, REPLICACION DEL DNA, ‘TRANSCRIPCION Y TRADUCCION Las caracteristicas hereditarias de todos los organis- mos vivientes estén determinadas por la estructura de su material genético. El material genético de una célula in- dividual esta compuesto por Acido desoxirribonucleico (DNA) crganizado en uno o en multiples cromosomas. Colectivamente, ef material genético es nombrado como el genoma del organismo. En los organismos procario- tas, el genoma est constituido por un nico cromosoma circular de DNA de cadena doble cerrado de manera co- valente (dsDNA). El cromosoma circular, denominado nucleoide, no se encuentra unido a la membrana, pero se encuentra libre en el citoplasma en una porcién central aislada de la célula bacteriana, El DNA celular bacteria no mide de 300 a 1.400 1m de largo y se presenta en la célula superenrollado (es decir, la molécula de cadena doble esté enrollada sobre sf misma como una banda eldstica entrelazada). Los genes individuales se encuen- tran ordenados linealmente sobre el cromosoma. El nu- cleoide representa alrededor del 10% del volumen celu- lar aunque el DNA es s6lo el 2 al 3% del peso seco de la Célula, En Escherichia coli, el cromosoma contiene alre- dedor de 5 x 10° pares de bases, y su longitud es unas 1.000 veces la longitud de la célula bacteriana en la que est contenido. A diferencia de procesos similares en cé- lulas eucariotas, la replicacién y la transcripciéa, del DNA a dcido ribonucleico mensajero (mRNA) se produ- ce continuamente. El cromosoma también parece estar unido al lado intemo de la membrana celular en ciercos puntos. En los organismos eucariotas. el material genéti- o se encuentra organizado en varios cromosomas dentro del nicleo. Los cromosomas se encuentran. a su vez, as0- ciados con diversas proteinas basicas llamadas histonas, que ayudan a estabilizar la estructura del cromosoma. Los cromosomas de organismos eucariotas estin separa dos del resto del material celular por una membrana nu- lear, que esta compuesta por una bicapa lipidica, que ¢s similar en composicién a la membrana celulac. La mem brana nuclear también posee poros. que permiten el pa- saje de pequefias moléculas hacia adentro del nicleo 0 hacia afuera. Los dcidos nucleicos de toda bacteria, al igual que los de otros microorganismos, estin compuestos de polinu- eledtides (polimeros de nuclestidos) que constan de los siguientes tres elementos (fig. 1-3): 1) un aaticar ciclico de 5 carbonos (ribosa en el RNA, desoxirribosa en el DNA), 2) una base purina (adenina, guanina) o pirimidi- fa (citosina, timina, uracilo) unida al carbono 1" de la pentosa por una unién N-glucosidica y 3) un grupo fos- Fato (PO) unido al carbono 5” de'la pentosa por un enla- ce fosfodigster, Las partes con desoxieribosa estin unidas mediante la altemnancia de grupos fosfato para formar tuna cadena que tiene las caracteristicas de una espiral he- licoidal, con las bases dirigidas hacia el eje central de la espiral. La estructura [Link] un dcido nuclei- co de cadena, simple (ssDNA). Laestructura de doble hélice del DNA, especificamen- te, resulta de la interaccién entre dos filamentos comple- mentarios de écido nucleico. La complementariedad esta Escaneado con CamScannerpidoglican® Cipsuia fe la pared Capea ‘celular Cuerpo de Tnclusién Proteinas de supedicie Membrana itoplasmatica Grempositiva 7 Flagelo ‘Sept Mesosoma “division BacTERIOLOGIA nisica 7 Capsula Membrana externa (ME} Capa ds peptidogicanos to de Upoproteina Cuerpo de inclusién Espacio periplasmatico Flagelo Gramnegativa Fig, 1-2. Seccin transversal de una edlula bacteriana en general. La mitad inquierda de esta figura representa Ia estructura Ue una bacte= ria grampositiva: la mitad derecha muestra a estructura de una bacteria gramnegativa asociada con la secuencia de bases de una cadena simple y los puentes de hirégeno que se producen entre bases ‘specificas de la cadena complementara (fig. 1-4). Las bases purina son la adenina (A) y a guanina (G) y las ba- ses pirimidina son la citosina (@), la timina (T) y el ura- cilo (U). La purina adenina se unird especificamente s6- Jo con la base pirimidina timina, la purina guanosina se unird especificamente con la pirimidina citosina, Las ca- ddenas antiparalelas del ssDNA permanecen unidss por tees puentes de hidrégeno entre Cy G y por dos puentes de hidrégeno entre A y T (véase fig. 14). El DNA nati- vo existe en la forma helicoidal de cadena doble mientras que el RNA existe primariamente en la forma de cadena Simple como RNA mensajero (mRNA) y parcialmente en formas de cadena doble como moléculas de RNA ri- bosémico (rRNA) y RNA de transferencia ((RNA). En todas las especies de RIN, el uracilo est presente en lu- ar dela timina (véase fig. -3) La secuencias de bases purina y pirimidina en ef DNA consttuyen el cédigo genético, con codones especiticos (Secuencias de tes pares de bases) que codifican para aminoécidos especificos, El mRNA de cadena simple es simtetizado a parir de dsDNA durante el proceso de tanscripeién por una RNA polimerasa DNA-depen- Giente, en la que una cadena complementaria de mRNA. 5 sintetizada con el filamento de DNA de sentido posi- tivo como molde. Durante el proceso de traduecién, el RRNA ¢s “decodificado” en asoeiacién con muchos t- Posomas en un complejo mRNA-polisoma, donde oct- Teel apareamiento de bases del coda y el anticodén a H2vés de moléculas de RNA de transferencia ((RNA). smoléculas de RNA de transferencia llevan los antico- Rasy SsPecifices a los codones correspondientes del SIRNA y también acarrean, unidos covalentemente, 1os inedcidos correspondientes. De este modo, el e6digo rodtico presente en el DNA es traducido en moléculas de proteinas “estructurales” y enzimsticas. que a su vez catalizardn la sintesis y degradacién del resto de los com- ponentes celulares. La sintesis de nuevas moléculas de DNA, denominada replicacién, ocurre merced al desen- rollamiento y apertura de la molécula de dsDNA por la enzima DNA girasa y la sintesis de una cadena comple- mentaria de DNA a partir de una DNA polimerasa DNA-dependiente. Cada nueva molécula de dsDNA contiene una de las cadenas del DNA. parental, La rela- cin encre la replicacién del DNA. la transcripcién del RNA y Ia traduccién de! cédigo genético en polipéptidos se resumen en la figura 1-5, Debido a que la secuencia de nuclestidos ¢s tnica pa- ‘[Link] especie individual de microorganismo, el andlisis de la relacién del dcido nucleico entre microbios se ha transformado en un arma poderosa para los taxdnoraos El dsDNA puede ser separado en las dos cadenas que lo constituyen por aplicacién de calor 0 concentracién sali- ‘a. alta. Por enfriamiento y por disminucién de la concen- tracién salina, las dos cadenas se vuelven a asociar 0 hi- bridar en la forma de cadena doble por apareamiento es- pecitico de bases. El punto hasta el cual dos cadenas de DNA se ensamblan nuevamente una con la otra ¢s una medida indirecta de su relacién y puede ser usada para determinar si dos microorganismos son miembros de la misma especie. A nivel genético, las especies pueden ser definidas como cepas de bacterias que exhiben una rela- cién mayor del 70% entre sus DNA y un $% o,menos de divergencia en sus secuencias de nuclesxidos.”* Aunque estos criterios resultan, tiles para la mayoria de los mi- croorganismos, algunas especies bacterianas tienen mis del 70% de relacidn entre sus DNA, y a pesar de ello ain se considéran especies distintas debido a su significancia clinica, Por ejemplo; Neisseria gonorrhoeae y Neisseria ‘meningitidis son virtualmente idénticas cuando son ana- Jizadas por hibridacién de dcido nucleico, pero las dos he Escaneado con CamScannerx Fig. 1-3. Estructura molecular de tos pot ory de liste et Slo nucena Uae nose odesorinna una ae pra mdi unis Somo de stone I nace 7 s—9- p—OH 3 ms ; tn unign N-lucostia yun grupo fosato unis cca tatbono 8 el azicar por un enlace fester tn ee Tee ean nt tnd ps Cadena yuan) y das es pins cx lostodiéster ‘na, timina y uracilo). H para ONA on{para RNA Sa azicar “ ; ° Il oN UN HUE. " ANS Nu Noth, ‘Cea Loft fern HON Han Sy 7 " \ Adenina uanina cre 4 Hy, HL 0 c aa oN WA Sa ( XN AUN 12S Ho NENG Nea i] t I 6 ° 6 citesina Timina Usacio especies causan entidades clinicas diferentes, la enferme- dad transmitida sexualmente llamada gonorrea y Ia me- gitis cerebrospinal epidémica/endémica, respectiva- mente, ‘Otra aplicacién de la tecnologia del écido nucleico ala taxonomfa microbiana es el andlisis de secuencias de RNA ribosémico (rRNA). Las secuencias de nuclesti- dos de las especies de RNA de cadena simple que se in- corporan en las subunidades de los ribosomas bacteria- znos pueden ser utilizadas para asegurar la relaciGn de pa~ rentesco entre microorganismos, ya que en especies indi- viduales estas secuencias han sido muy conservadas (es decir, no han sido alteradas por mutaciones) durante 1a evolucién. Las mutaciones en estas secuencias altamente conservadas generalmente son letales y los microorga- nismos que poseen esas mutaciones no sobreviven ni se propagan. Por el examen de la secuencia de nuctestidos del rRNA 16S se pueden asegurar las relaciones filoge- néticas y la evolucién de los microorganismos a partir de ancestros comunes. El andlisis de las secuencias de RNA ribosémico es muy stil principalmente para determinar la elacién entre los microorganismos por encima del ni- vel de género, aunque esta técnica también ha sido utili- zada también para validar las diferencias fenotipicas existentes entre especies y géneros muy relacionados. Estudios de secuenciacién de las moléculas de RNA ri- bosémico han revelado también secuenciasique son Uni cas para especies individuates. Dado que estas secuen- cias dnicas de RNA también estén altamente conservadas y que existen multiples copias en los ribosomas de una ‘céluia bacterfana, oligonuclestidos sintéticos capaces de hibridar con estas secuencias tinicas pueden ser utliza- dos para detectar ¢ identificar bacterias. Una aproxima- cin de este tipo es la base de la tecnologia de las sondas dde dcido nucleico para la deteccidn directa de microorz3- rnismos en muestras clinicas. Estas sondas también se pueden aplicar a microorganismos recuperados en me- dios de cultivo como un mécodo para la identiticacién o pueden ser usadas para detectar secuencias tnicas direc- tamente en las muestras clinicas, La tecnologia de las sondas de dcido nucleico y sus aplicaciones en microbio- logia clinica se discuten més adelante en este capitulo. CrropLasma El citoplasma es un gel amorfo que contiene enzimas, mies, organelas subcelulares que cumplen diversas fun iones y una gran variedad de grinulos, muchos de los cuales constituyen reservas de alimento y energia. Las enzimas citoplasmdticas de células procariotas funcicnan ‘en procesos anabdlicos y catabélicos y muchas de ellas ‘estin relacionadas con fa cara interna de la membrana (véase mas adelante). Las células procariotas carecen de organelas subcelulares unidas a la membrana, mientras Escaneado con CamScanner{que las células eucariotas contienen una variedad de es- tructuras subcelulares (p. ¢j., mitocondrias o reticulo en- doplasmatico, etc.) compuestas o rodeadas por membra- ‘nas constituidas por bicapas fosfolipidicas. Las inclusio- nes intracelulares o grénulos representan reservas de ali mento (polisacéridos, lipidos 0 polifosfatos). El numero yy el tipo de grinulos de almacenamiento varia con el me- dio y el estado funcional de las célalas. El glucégeno es el material de almacenamiento mas importante de las bacterias entéricas mientras que algunas especies de Ba cillus y de Pseudomonas acumulan un 30% o més de su peso Seco en poli-B-hidroxibutirato. Los polimeros de al- to peso molecular como el polihexametafosfato con dos comorgrinulos metacrométicos 0 volutina se pro- ducen en especies de Corinebacterium, en Yersinia pes. tis y en especies de Mycobacteria. Esos grinulos de vo- latina se ven de color rojo rosdceo cuando las células se tiflen con azul de metiteno, Tanto los microorganismos procariotas como los euca- riotas albergan una gran cantidad de ribosomas, que son los sitios de sintesis de proteinas. En los microorganis- mos procariotas los ribosomas son 70S; en los eucario- tas, los ribosomas son 80S. La "S” se refiere alas unida- des Svedburg, que son una medida indirecta del tamafio de los ribosomas determinado en funcién de la tasa de se- dimentacién obtenida cuando son sometidos a la fuerza centrifuga. El dcido ribonucleico ribosémico (RNA) comprende el 80% de la totalidad del RNA celular. El ri- bosoma bacteriano 70S posee un peso molecular de alre- dedor de 800,000 daltons y existe en un estado disociado como dos subunidades denominadas 30S y 50S. La sub- unidad 30S contiene RNA 16S, mientras que la subuni- dad 50S contiene tanto RNA 23S como 3S; ambas subu- nidades también contienen varias especies de proteinas Fibosémicas especificas. El 20% restante del RNA celt lar se encuentra como dcido ribonucleico de transfe- rencia (tRNA) y dcido ribonucleico mensajero (mR- NA). Cuando forman un complejo con el mRNA trans- cripto, las subunidades ribosémicas 50S y 30S forman el ibosoma intacto 70S que se encuentra en las células bac- terianas. Los agregados de mRNA y ribosomas denomi- nados polirribosomas o polisomas contienen todos los componeintes del sistema de sintesis de proteinas; los po- lisomas son esencialmente cadenas de ribosomas 70S (monémeros) unidos al RNA mensajero (mRNA). Histo- fas o protefnas similares a las histonas que estabilizan los polipéptidos nacientes que son sintetizados por los polisomas, s6lo recientemente han sido encontradas en Pequefias cantidades en asociacién con el DNA de £s- cherichia coli mientras que la presencia de proteinas po- liaminicas (p. ej.. putrescina y espermidina) en asocia- ign con el DNA bacteriano es bien conocida. Un DNA extracromosémico se encuentra frecuente- mente presente en el citoplasma de microorganismos Procariotas en la forma de plismidos. Los plésmidos existen como circulos de ssDNA cerrados covalentemen- fe, En general no se encuentran en los microorganismos cucariotas si bien algunas organelas subcelulares de los ‘microorganismos eucariotas (p. ¢., mitocondrias) contie- nen moléculas de DNA que semejan plasmidos bacteria ‘nos. Los plsmidos son capaces de una replicacién auté= oma y son heredados por las células de la progenie bac- teriana. Los plsmidos pueden contener informacién ge- nética para una variedad de estructuras o funciones rela BACTERIOLOGIA pisica 9 Fig, 1-4. En Ia molécula de DNA. las dos cadenas de polineles- tidos de la doble hélice de DNA son “antiparalelas”. es deie el tremo 3'-OH de una cadena es adyacence al extremo 5° de laca- dena complementaia. Las bases. que se encuentran dirigidas hacia eleje central de la helice, unen las dos cadena polinuclestide me- diante uniones puente de hidrégeno, las cuales son relativamente débiles. La adenina se apares con la imina a wavés de des puentes de hidrégeno, mientras que la citosina se aparea con la guanina 2 través de wes puentes de hidrégeno. Estas fuerzas interacuvas en- ‘elas cadenas de polinuc!estidos pueden ser vencidas por energ térmica (calor) 0 por una fuerte alealnidad en su proceso de des- naturalizacin, Cionadas con la virulencia bacteriana, que incluyen genes para la resistencia antimicrobiana, adhesinas relaciona- das con la virulencia, produccién de toxinas y resistencia a iones de metales pesados. Algunas bacterias también pueden poseer transposones, que son secuencias de DNA capaces de “saltar” de un lugar a otro en el genoma bacteriano.'*" Las secuencias transponibles pueden ser cromosémicas 0 derivadas de plismidos. MEMBRANA CITOPLASMATICA El citoplasma de todas las eélulas bacterianas est r0- deado por una membrana citoplasmética. La membrana citoplasmdtica bacteriana se encuentra, inmediatamente por dentro de la capa de peptidoglicanos de la pared lular en las bacterias grampositivas y adyacente al espa~ cio periplasmdtico en las bacterias gramnegativas (se 2- a més adelante). La membrana citoplasmética tiene 1a estructura bisica de una bicapa fosfolipidica en la cual se Escaneado con CamScannerReplicacién O— NA Transeripcién ae (RNA Aminoacil | nos us —- 2QQ > Pelsoma | ‘Aminodeidos (aa) ATP (energia) 4 — Varias enzimas Iniciacién dala sintesis, de proteinas Traducciéa | € elongacién ge la cadena Beptiica fateres ‘elongacién I Terminacién de ia sintesis de proteinas | Plegamiento del péptide para om acquit su conformacien ‘secundaria y tercaria Proteina rata Replicacién, wanscripcién y traduccién del eédigo genético en microoryanismos procariotas. EI DNA es ceplicado por una goli- merasa DNA dependiente para producir dos moléculas de DNA de cadena doblea (dsDNA). El cddigo genético en el dsDNA ss cop ara producir un RNA de cadena simple (ssRNA) llamado RNA measajero (mRNA) durante el proceso de transcripeidn, El RNA de trans. Ferencia (wRNA) y el RNA ribosémico (RNA) tambiéa son tanscritcs. El RNA forma un ccmplejo con proteinas expecifics para fer, ‘mar parte de la estructura del ribosoma. El mRNA forma un complejo con los ribosomas para formar polisomas, que son los sitios de sins tesis de proteinas. En el polisoma, codones especificas para aminoicidos individuales son reconocidos por anticadones en moleeslae de (RNA por apareamiento de bases especifico. Codones especificos se corresponden con diferentes aminoscidos unidos a la molécula de ami foacil (RNA. Durante el estado de traduccidn, se inicia la sintesis de proteinas, se elongan las cadenas de polipéptides y Ia sintesis conclu. ye con la liberacién de una molécula de proteina, ‘encuentran incluidas varias proteinas, La membrana est compuesta en peso por un 30% a un 60% de fosfolipidos Y por un 50% a un 70% de proteinas. La mayoria de las membranas de las células bacterianas contienen fosfati- dilglicerol, fosfatidiletanolamina y difosfatidilglicerol; no contienem esteroles (p. ej., colesterol o ergosterol). Las nicas excepciones procariotas a esto son los mico- plasmas y los ureaplasmas, que incorporan esteroles del medio de crecimiento a sus membranas celulares. Los Acidos grasos que componen la porcién lipfdica de la bi- capa fosfolipidica generalmente estén constituidos por un esqueleto de 15a 18 dtomos de carbono y suelen en- contrarse saturados 0 monoinsaturado: La membrana celular de los procariotas pose diversas funciones que son relegadas a organelas subcelulares es- pecializadas en los microorganismos eucariotas. La membrana celular bacteriana contiene enzimas que ac- tan en Ia respiracién celular y en la fosforilacién oxida- tiva, la biosintesis de peptidoglicanos y en la biosintesis de la membrana externa en las bacterias gramnegativas. La membrana celular también actiéa en la sintesis y se- crecién de enzimas y toxinas bacterianas, La membrana citoplasmética brinda una barrera aislante a través de la cual se puede generar un gradiente de energia o potencial de membrana, energia que puede ser utilizada para el movimiento flagelar, la movilizacién cromosémica, etc. La membrana también retiene metabolitos y excluye ‘compuestos externos. Las protefnas de la membrana ci- ‘oplasmatica se encuentran principalmente involucradas fen el transporte de electrones y la fosforilacién oxidati- Escaneado con CamScannerva, Ia biosfatesis de lipidos complejos, la sintesis de los Constituyentes de Ia pared celular y Ia replicacién del DNA. También se encuentran involucradas en el trans porte activo de materiales hacia el citoplasma, Estas pro- feinas transportadoras especificas asociadas a la mem brana se denominan permeasas. Los mesosomas, que son invaginaciones de la membrana citoplasmatica que se extienden en el citopoplasma, pueden aumentar la su- perficie de la membrana disponible para enzimas celula- Fes catabdlicas y anabélicas. Pueden funcionar también en Ia replicacin del DNA y en la separacién de diplex de DNA en células en crecimiento activo. PAREDES CELULARES BACTERIANAS La pared celular bacteriana brinda rigidez estructural, confiere la forma a la célula y crea una barrera fisica con ta el ambiente externo. El componente rigido de la pa red celular de todas las bacterias esté constituida por peptidoglicanos. Los peptidoglicanos se encuentran en todas las especies de bacterias excepto en los ureaplas- mas y micoplasmas, ya que carecen de pared, Esta es- tructura est4 compuesta por un esqueleto de residuos de carbohidratos formados por unidades alternadas de N-acetilglucosamina y acido N-acetilmuramico unidos, por enlaces B-I,4 (fig. 1-6). Tetrapéptidos cortos, com- puestos generalmente por cadenas cortas ¢ idénticas de aminodcidos D y t. se encuentran unidos a los residues de dicido N-acetilmurdmico por medio de una unién pep- tidica al grupo lactilo del C,. Estas cadenas cortas contie- nen aminodcidos diferentes que no se encuentran gene- ralmente en las proteinas, que incluyen isémeros D de ‘icido glutémico y alanina (bacterias grampositivas) y Scido meso-diaminopimélico (bacterias gramnegativas) ‘Algunos de estos tetrapéptidos estén a su vez unidos tines con otros por péptidos cortes y forman entrecruza- mientos entre cadenas adyacentes de peptidoglicanos (lig. 1-7A). Los tipos de aminodcidos encontrados y los grados de entrecruzamiento son componentes variables Ge la estructura del peptidoglicano. Por ejemplo, en Staphylococcus aureus, la mayor parte de los residues del dcido N-acetilmurdmico esté entrecruzado a cadenas adyacentes de peptidoglicanos por cinco residuos de gli cina, que briadan de este modo una estructura algo apre- tada ‘de pared rigida (véase fig. 1-7A) En las bacterias gramnegativas (p. ¢j., Escherichia coli), el entrecruza- miento ocurre directamente entre el dcido meso-diamino- pimélico de una “cadena” de peptidoglicano y el residuo de D-alanina terminal de una cadena adyacente (véase fig. 1-7B). Este entrecruzamiento determina si una es- tructura de pared celular se denomina “rigida” (alto en- recruzamiento) 0 “taxa. PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS GRAMPOSITIVAS La pared celular de las bacterias grampositivas (fig. 1-8A) tiene un grosor de casi 80 am y esti compuesta principalmente de varias capas de peptidoglicano; de he- cho, desde el 40% hasta mas del 80% del peso seco de al- gunas paredes celulares grampositivas estén constituidas or peptidoglicanas. Atrapadas dentro de esta matriz de Peptidoglicanos se encuentran una variedad de proteinas. Polisacdridos y moléculas unicas denominadas dcidos teicoieos. Los dcidos teicoicos son polimeroé de Unida- u BacteRtovogta waste. cv,0% oon : % Bt) ° ray ‘o. on 0. ‘o.| feicoor, coo, Neacetilglucosamina r Acido Nacetiimurdmico He oy cno Lalanina (Cala) Acido D-glutamico (o'cu) Acieo OL-diamino- piméico {reso 0AP) O-Aiznina (O-ala) Unidad puente de unién cruzada Fig. 1-6. Estructura de la unidad repetitiva del peptidoglicano de Excherichia coli des de ribitol (5 cartonos) o de glicerol (3 carbonos) tunidos por enlaces fostodiéster (fig. I-¥f. Los dcidos ri- bitol teicoicos estén ‘asociados con la pared celular, mientras que los dcidos glicerol teicoicos se encuentran asociados con la cara interior de la membrana de la célu- la bacteriana] Los dcidos ribitol teicoicos estén unidos covalentemente al peptidoglicano por el del-grupo hidro- xilo del C6 del dcido W-acetilmurdmico; los acidos glice- rol teicoicos estin unidos a los glucolipidos de la mem- brana citoplasmatica. Las tiltimas moléculas se denomi nan deidos lipoteicoicos. Estin unidos a la capa externa de la membrana CelUlar y se extienden dentro de la pared celular. Los dcidos teicoicos de diferentes bacterias se encuentran aun mis modificados por el agregado de gru- pos “R” que incluyen residuos de o-alanina o o-lisina Unidas por enlaces ster 0 glucosas, galactosas o N-ace- tilglucosaminas unidas por enlaces del tipo O-glucésido. Los dcidos teicoicos estabilizan la pared celular, mantie- nen la asociaciGn de la pared con la membrana celular. quelan pequefios iones necesarios para el funcionamien- toy la integridad de la pared celular y participan en [a in- teraccion celular y la adherencia a mucosas u otras super~ ficies. Los dcidos teicoicos también pueden tener una funcién en Ia sintesis de peptidoglicanos y en la forma- ere TET TTT, Escaneado con CamScanner12 DiAGNUsiILU MICKUBIOLOGICO A Peptidoglicano de Staphylococcus aureus Fig. 1-7. Estructury eptidoglicano de 5, phy. lococcus aureus (A) y th Muibiae cherichia coli (B), “(Givis Ala obktH, / { MurNAc Gere tS i Ala, Ala ~ : (Gis o-Gu-nH, elys Murtiac ola ~ : re (cy), ai ad o-Ala o-GiuNh, 5 GleNAg Tlys MUrNAc 7 1 ' o-Ala- (Gly), ne o-GunNH, GletiAc cls oe Tong Abreviaturas: GleNAc, Nacetl lucosamina; MurNiAe, deido Nace Ala, alanina; Glu nina; Lys, faina'y Gy ghee ee ‘NH, isogtutamina; Lys, lsina y Gly, glicina, B Peptidoglicano de Escherichia coli lmurdmico: Mine LAlao-Gumeso-0AP-o-Ala chine 2 Murae ouenée i ~ wAlso-GlemesoOAP-otla _-Midise oe o-AlarmesoDAPS-Giu-Ala (lcNiAe | é Murfae Ala 0-Glu meso DAP-o-Ala ‘Abreviaturas: Véase arriba; también, Glu, glutamate; y DAP, daminapimelata cién de septos durante el crecimiento y la reproducciéa y pueden desempefiar también un papel en la capacidad de transformacién de algunas bacterias grampositivas (p. ¢j.. neumococos). En algunos microorganismos, los Acidos teicoicos son_ant agrupamiento antigénico (p. ¢j., el antigeno del grupo D ‘encel grupo D de estreptococos y en los miembros del gé- nero Enterococcus). El polisacirido C que se encuentra cn las paredes celulares de Streptococcus pneumoniae es un acido lipoteicoico complejo compuesto de ribitol y fosfatos sustituido en varios puntos con W-acet lactosamina, o-glucosa, N-acetil-2,4-diamino-2,4, desoxihexosa por medio de uniones O-glucosidicas o con colina unida por enlaces diéster. En los grupos de bacterias patégenas grampositivas pueden estar presentes otras estructuras de pared celular que’ son determinantes: importantes de virulencia. Por ejemplo, la proteina M, un reconocido factor de virulen- ia_de los estreptococos f-hemoliticos del grupo A. 5 encuentra asociada con los dcidos lipoteicoicos en la pa red celular de los estrepcococos y se extiende fuera de la pared como una proteina fimbrial (véase cap. 12). La es- tructura de la pared celular grampositiva estd representa- dda graficamente en la figura L-BA. PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS GRAMNEGATIVAS Ta pared celular de las bacterias gramnegativas (véase fig. 1-8B) es mis delgada que lade las bacterias grampo- sitivas pero estructuralmente es mds compleja. Por fuera de Ia membrana citoplasmatica se encuentra el espacio periplasmiitico, un compartimiento que contiene enzi- mas y que se encuentra entre la membraaa citoplasmti cay a porcién exterior de la pared celular. Una capa de peptidoglicano de una sola unidad de espesor forma el Escaneado con CamScannerFig. 1-8. Estructura de It pared eclu- | far de bacterias grampositivas (A) y aanmnegativas (B). KDO, cetodeso Ectulonsto; LPS, lipopoissesrdo. Polsacéridos espectlicos ‘dela pared celular Acido teleoico de + BacteaioLoata pAsica | 13 la pared celular Acido tpoteicoico ‘de membrai Peplidogticano Membrana citoplasmatica : A Grampositive an + antgeno0 of om Centro Les ; Koo Lipide A Proteina porina 3\——}—Lipeproteina | Proleina OMP A } Perictasma a =} Pepricegicane - FPRRTRRE TH E|R ERG RL nennrars JUN by bbb, 3 Foslolipides Protaina B— Gramnegative borde externo del espacio periplasmético. Como los pep- de la mitad de 1as cadenas peptidicas que pueden unirse tidoglicanas se disponen en una manocap9, el entrecru- a residuos de dcido N-acetilmurimicos estin realmente Zamicnto s6lo ocurre entre filamentos adyacentes de pep- _entrecruzadas. Fuera de la delgada capa de peptidoglica- Lidoglicanos en lugar de hacerlo entre capas de peptido- no se encuentra la membrana externa, Esta membrana slicanos m4é profundas o mas externas ala superficie de externa tiene una estructura basica que ¢s similar a la de la-célula. Los entrecruzamientos estin formados por Ia 1a membrana citoplasmatica, es decir, una bicapa fastoli- { “tnién del grupo carboxilo del residuo terminal de 0-ala- _pidcaen la que algunas moléculas grandes se encuentra ‘lina en una cadena con el aminoscido libre del residuo __incluidas. La membrana externa esté fijada a la capa de 4 Acido diaminopimelico en lncadena adyacente (véase " peptidoglicano por una lipoproteina pequefa y fuerte: ig. 1-7B). La capa de peptidoglicanos de las bacterias mente lipofilica que se une al grupo amino det dcido dia- Bramnegativas es bastante “laxa", es decir, sélo alrededor _minopimelico en el peptidoglicano y se extiende a través spaies i Escaneado con CamScannerHA DIAGNOSTICO MICROBIOLOUICY ° ie-p vy nomen he heed 41 e075 Acido telcoico de tipo glicerat Acido telcoico de tipo ribitol Fig. 1-9, Estructura de dcidos teicoicos de bacterias grampositi- vas. A la izquierda se muestra el dcido rbitolteicoico; ala derecha 1 Se muestra el dcido glicerol teicoico, Sustituciofes del grupo “R” pueden incluir D-alanina unida por uaiones éster 0 olisina u o-glu- 6sidos unidos a glucosa, galaciosa o W-aceilglucosamina, del espacio periplasmético como una estructura a-heli- coidal. El otro extremo de esta lipoproteina esté incluido en Ia estructura lipidica de la membrana externa. ~~ Un componente estructural que es nico a fa membra- [Link] de las bacterias gramnegativas es el lipopoli- sacdrido (LBS) (fig. 1-10A). Las moléculas de los LPS son los determinantes antigénicos de superficie mis im- Portantes (Ilamados somaticos o antigenos O) de las bacterias gramnegativas y son responsables de la activi- dad de endotoxina de jas células gramnegativas. Las moléculas de los LPS son glucolipidos complejos com- Puestos por una porcién lipidica llamada lipido A, la re- gidn del centro 0 core polisacirido que en general es si- malar en estructura dentro de un género o una especie da- dos de bacterias y cadenas laterales O-especificas, que son regiones de estructura bioquimica variable que con- Geren una entidad serolégica dnica alas especies de bac- terias gramnegativas. La porcién conocida como lipido A del LPS esti incluida en Ia hoja externa de la membrana extema, con el centro polisacérido y las cadenas O-espe- cificas que se proyectan desde la superficie de la mem- brana externa como si fueran escobillas o bigotes. Cada especie de Salmonella, por ejemplo, tiene cadenas latera- les O-especificas que brindan un criterio valioso para la identificacién de microorganisms en el laboratorio cl nico, La estructura del LPS ha sido estudiada mds exten- samente en especies de Salmonella y Escherichia coli. EI lipido A estd compuesto por un disacérido de glu- cosamina en el cual los grupos hidroxilo estan esterifica- dos con B-hidroxidcidos grasos no comunes como el dci- do -hidroximiristico (C\,), el dcido miristomicistico y el Acido lauromiristico (véase fig. 1-10B). Los dcidos gra- sos adicionales pueden unirse a través de los grupos hi droxilo a otras posiciones no sustituidas de la molécula del dcido micistico. Estas sustituciones adicionales difie- ren entre los géneros de bacterias gramnegativas. Unido a la porcién de lipido A del LPS se encuentra el centro polisacdrido. El centro polisacérido contiene dos carbo- hidratos tinicos, el 2-ceto-3-desoxioctulénico (KDO), un aaticar de 8 carbonos, y la heptosa, un azticar de 7 carbo- nos. Los aziicares adicionales (es decir, N-acetilglucosa- mina, glucosa y galactosa) también pueden encontrarse en el centro polisacrido. La estructura del centro polisa- cérido es bastante conservada dentro de un géaero dado, pero puede variar de una especie a otra. Las cadenas 1a, terales O-especificas estin unidas ai core polisaciride y son responsables de la especificidad antigénica de ioy aislados individuales. Estas cadenas laterales contienen un niimero variable (hasta alrededor de 40) de unidades de oligosaciridos repetidas conformadas por tres a cinco monosacdridos cada una. Estas cadenas lateraies con es. pecificidad antigénica habitualmente contienen residuos de carbohidratos peculiares 0 poco comunes, que inclu- yen dcido aminohexaurdnico. 6-desoxiglucosa. y 2,6-di desoxiglucosa. El lipido A parece ser el principal com. ponente responsable de las manifestaciones de la acti dad de endotoxina en pacientes con sepsis ocasionadas por bacterias gramnegativas (p. ¢j., febre, shock, colap- so vascular y hemorragia). La endotoxina también puede activar el complemento y causar coagulacién intravascu- lardiseminada. La estructura genefalizada del LPS de las especies de Salmonella se muestra en la figura 1-10; la estructura del lipido A. el centro polisacdrido y los anti- gens sométicos se muestran en Ia figura 1-I0B, C y D. respectivamente. La disociacién de la membrana mas extema del LPS se puede llevar a cabo parcialmente mediante el trata- miento de suspensiones celulares con dcido etilendiami- notetraacético (EDTA), el cual actéa como quelante de los cationes divalentes de la membrana externa. Los tra- tamientos posteriores con lisozima hidrolizan la capa de peptidoglicano de bacterias gramnegativas y las células se lisan. La integridad de la membrana externa depende del calcio y del magnesio y es una de las principales ra- zones para la inclusidn de estos iones en los medios usa. dos para la prueba de susceptibilidad antimicrobiana, La membrana extema de los gramnegativos también contiene fosfolipidos y proteinas. Los fosfolipidos se asemejan a aquellos encontrados en la membrana cito- plasmatica e incluyen la fosfatidiletanolamina y el fosta. Uidilglicerol. La membrana mas externa también contiene proteins; algunas de ellas estén presentes en altas con- centraciones y son llamadas proteinas mayores 0 prin- cipales de membrana, Estas proceinas se pueden irtcluir en tres grupos fundamentales: las porinas, que son pro- teinas que forman canales de transmembrana a traves de los cuales los materiales de bajo peso molecular son in- troducidos en el espacio periplasmatico. Muchas de estas proteinas porinas tienen una estructura de trimero (es de- Gir, tees proteinas idénticas que forman un poro con for. ma de rosca). Las no porinas son proteinas de trans. ‘membrana que estén asociadas con la capa de peptidosli- cano de la pared celular. Pueden actuar en la produccisn y la secreci6n de exoenzimas, en la unién a superficies 0 en la unidn de agentes antimicrobianos a la superficie de las células blanco (es decir, proteinas de unidn de penici- lina). Las lipoprotefnas son las mis pequetias de las pro- teinas de la membrana externa y estabilizan Ia pared ce- lular por uniones covalentes con el peptidoglicano. De: two de la familia Enterobacreriaceae, un antigeno comin enterobacteriano también se encuentra en Ia membrana externa, Este antigeno es un polisacérido lineal compues- to por N-acetilglucosamina, écido N-acetilmanosaami- nourdnico y V-acetilfucosamina unidos a los fosfolipidos: de la membrana extema. [ La esteuctura de la pared bacteriana tiene una impor tancia directa y préctica para los microbislogos debico a que el tipo de estructura de la pared celulares responsa- Escaneado con CamScanner1-10. Lipopolisaesride (LPS) i 15 | BACTERIOLOGIA BAsica dels envoliora celular gramncgati- , SPS 1 sa. A. Segmnento de polimero i Unidad repetiva ucsra In dispasicidn de los €ons- erase Antigeno tituyentes principales. B. Estauctara : i {el lipido' A de Solnoneliatyphi- Centro ! muri. C. Centso det polissese- Cento poescirigo dd. D. Unidad repetitiva tipiea (Sate en i veel esphinuriin) (Ree ——— i do de Brooks GF y col. Janet | Medical Mic pido & ' . Norwalk. Connec- Acidos grasos a t tieut, Appleton & Lange, 1991) j iy ne A __ Lipide A (CENTRO a : ff wi An i/m " c : vt ' . Gyo GHoH td Cre geal oy Hy Che i I oH, 8 (vn (HM) gy Centro Guesiense KOO = ceto-deson-octulenato ba Hep. = \Glicero-o-mancheptosa iaee Hkt = dei pshidroxmaristic (C,.) we LM eid lauroximiniica hep MM = deido miristoximiristco « hen P-P-mN EIN = Elanclamina loo Gu = Glueosa i GlcNAc. = N-acetiglucesamina c tooxoor-carei Gal =Galactosa Unidad repettiva Ejemplo: (repetida hasta 40 veces) D ble de la reaccign frente a la coloracisin de Gram. Esta tincién diferencial divide 2 1a mayoria de las bacterias «en dos grupos, bacterias grampositivas y bacterias 2 negativas. En los procedimientos involucrados en la co- loracién de Gram, las células son: 1) teiidas con cristal Wioleta, 2) tratadas con yodo para formar un complejo Yodo-cristal violeta dentro de 1a célula, 3) tavadas con luna mezcla de solventes orgénicos (alcohol-acetona) y 4) tefidas con un colorante de contraste rojo, Id safrar * bacteria: Mahosa — Abecuosa 1 Ramnosa 1 Galactosa H nna, En las bacteria grampasitivas, el complejo purpu- ra cristal violeta-yodo es retenido dentro de a célula después de Ivar con algohol deido pore fa guess ade peptidozlicann no permite que el complejo yodo- cristal violeta pueda ser extraido de la eélula. En Tas vas, cl complejo yodo-cristal vio- leta es eliminado de la célula (es decig, las células pier- i peidn de la membcana den el color) debido a la inte extema rica en lipides por a Escaneado con CamScanner10 WiaususticU MIERUUIULUGICD ventes orgénicos alcohol-acetona. Estas células descolo- radas deben ser teftidas con un colorante de contraste pa- ra que puedan ser observadas en el microscopio dptico: este contraste es provisto por la safranina. Las bacterias grampositivas se ven azul-parpura en el microscopio y las gramnegativas son tefidas de rojo por el colorante de contraste safranina. PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS ACIDORRESISTENTES Una modificacién de la pared de las células grampo- sitivas ha sido observada en microorganismos pertene- cientes a los géneros Mycobacterium, Nocardia y nebacterium. En estos microorganismos, los igidos! constituyen més del 60% del'peso seco de la pared bac- teriana. En sus paredes contienen unas motéculas llama das dcidos micélicos. Los dcidos micdlicos son B-hidro. xidcidos grasos grandes, a-sustituidos, que se presentan como ésteres unidos a los polisacdridos de la pared ce- lular. Los dcidos micdlicos varian en el numero de sto. mos de carbono; aquellos con 30 carbonos (C30) se en» uentran entre las corinebacterias (écidos corinemicolé. nicos), los de C50 se encuentran en especies de Nocar. dia (Acidos nocardicos) y aquellos con C90 0 més cons. tituyen los dcidos micélicos encontrados en el género Mycobacterium. A on CH,O-CO-CH-CH-C AH OH) OC-CH- EHC fH) Cay fone Acido gras0 t 6 0-Acido graso on Gt ‘Acido graso-6 Fig. 1-11, Estructura molecular de lipidos especializados que se encuentran en la pared celular de Mycobacterium ruberculosis. A. Esmucua molecular de un to cordén (6.6m) producide por Mycobacterium néereulosis. B, Estructura molecu- lar det sufolipido principal (2"-sulfato de 2,3,6,6"-tetnaciltrehalo- sa) de M, ruberculoss La pared celular de las micobacteriasconiene una pa de peptidoglicano, cuya estructura es similar fs contrada en las paredes de las bacteras grammega El peptidoglicano esté unido a un polisacirido ramific do llamado arabinogalactano por enlaces fosfodinay Los extremos distales del arabinogalactano estin esterif cados con el acido micélico de alto peso molecular re, cién descrito. Estos glucolipidos de alto Peso molecular tienen un esqueleto carbonado cuya longitud oscila entre Cyx ¥ Cu, En Mycobacterium tuberculosis, el dnico ser do micélico 6,6"-dimicoliltrehalosa es conocido como el factor cordén (fig. 1-11A). Esta molécula esté asociada com la virulencia de M. tuberculosis y con una amplia ga- ma de actividades biolégicas, que incluyen la ctaxoxct, dad de la membrana celular, la inhibicidn de la migracién de los polimorfonucleares, la induccién de la formacién de granulomas, actividad adyuvante, actividad antitumo. ral y habilidad para activar la via aera del complemen. to. El complejo peptidoglicano-icido micélico-arabino- galactano forma el esqueleto de las paredes celulares de las micobacterias. Las cadenas hidrocarbonadas de los Acidos micélicos estin intercaladas con las de los nume- rosos li sl lipidos asociados con la pared incluyen grupos acil ga- sos de longitud media (C,, aC) y conta (Cy; a Cy). ES. tos lipidos asociados con la pared incluyen a los sultol pidos de trehalosa (véase Fig, I-11B). Los sulflipidos trehalosa ejemplificados por el sultoliido principal de M. tuberculosis, el 2'-sulfato de [Link] -tetraaciltrehalo- $2, estn asociados com la virulencia de las micobacterias Porgue estas moléculas evitan la fusién fagolisosémics {que sigue ala fagocitosis de las micobacteras, y perma, fen de este modo que los microorganismos sobrevivan como pardsitos intracelulares facutatvos, Proyectindose 4 través de las capas de la pared de peptiddsticano, ars, binogalactano y dcido micolico se encuentran fosfoipt, dos susttuidos (Fostatidilinositolmandsidos) y lpopel. Sacéridos(lipoarabinomananos) que estia unidos snes: pa mis exiema de la membrana celular de las micabacte. tias, Estas moléculas proveen de una Unign no covalene entre Ia membrana y la pared celular, Las protenas que estin incluidas en la pared celular de las micobuctesios estin involucradas en la biosintesisy la constrceicn de los polimeros de la pared celular y algunas apaventemnens te funcionan como porinas Los microorganismos que son acidoresstentes se t- fien de color cajo con el colorantebisico carbolfuesina y ton ress a a desesloron con sesh cts be bido al cardcterhidrofébico de la pared celular de Ia mi cobacteria, la penetracién del colorante dentro de lac. lula es favorecida por el calor (método de Zichl-Neelsen) 0 por agregado de detergente al colorant (es decis. me. todo de Kinyoun). La resistencia 3 la descoloracign con aleohol scido (acidorresistencia) esti asociada con las unidades de dcido mieslico arabinogalactano que consti tuyen la mayor parte de los materiales de la capa externa del peptidoglicano, Los lipides solubies contrtuyen pe- ro no determinan las propiedades acidocresistentes de las ‘micobacterias porque la extraccin de esos lipides dismi- auye pero no destruye la acidorresistencia, La inerrup- cidn mecinica de la pared celular y Ia extaccign de los lipidos de la pared celular con etanol alcalino que remue- ve tanto los lipides libces como los esterificados destru- yen la acidorresistencia de estos microorganismos, indi- Escaneado con CamScanner 3cativo de que el contenido de lipid ipidos tot * celular es responsable de. lag ‘propia acidorresistente, ales de la pared lades de tincién Envosroras Las endosporas son estructu i ras s Icluras esféricas u ovales r madas denteo de ciertas especies bacteringe vues las endospora man 5 chon ors cots ns man al sitivos formadores de endosporas pertenccicntes hve, + £0 Bacillus y os bacilos anaerobios obligados grantee tivos formadores de endosporas del género Closindinn, En estos péneros, las endosporas se forman en respuesta ala falta de nutrientes dentro de la célula bacterisna oe. gclativa, Estas estructuras son altamtente resistentes a log + « efectos destructivos del calor, sequedad, presién y mar chos agentes desinfeclantes. Se requieren procedinion. tos de esterilizacién (es decir, 120°C durante 15-20 an, ‘utos) para matar esporas. Se cree que la resistencia al calor de las endosporas bacterianas se debe al reducido contenido de agua en el centro propiamente dicho de Ip espora. El tamafio, la forma y la localizacién de las en dosporas incipientes en células en fase estacionaria de especies de Clostridium y Bacillus es stil para Ia carsc. (erizacién y la identificacién de ciertas especies dentro de estos dos géneros. Las endosporas pueden ser esféri- as, subesféricas u ovales; pueden diferic en su localiza, cién dentro de la célula (es decir, central, terminal o sub. terminal) y pueden hiachar 0 no a la eélula. Las endos. Poras generalmente no se tifen con los métodos habitus. les de tincidn como la coloracién de Gram y aparecen co. mo cuerpos refractacios, no teflidos en los extendidos Bajo los estimutos de ciertas condiciones ambientales como el agotamiento de nutrientes (glucosa, nitréxeno 0 11,_,,f0sfato) o la exposicién a temperaturas o potenciales re~ “, “dox subsptimos, ef material nuclear se divide en dos nu. I ,tleoides, y uno se separa del otro por un septo membra. oso. El septo crece y el centro de la espora termina ro- deado por una doble membrana. Entre las dos membra- { nas, una capa cortical se deposita sobre ellas. Esta corte. 1) | 2a consta fundamentalmente de material peptidoslicano =” La capa cortical se endurece y acumula iones caicio de. bido a la actividad quetante de una molécula singular lla- 1, mada deido dipicolinico. El centro queda protegido por ta alta concentracién de iones calcio que enteecruzan \"fuertemente el material peptidoglicano y toda el agua contenida en la espora es expulsada. Varias capas de la cubierta de la espora (una sustancia de tipo queratina [3 que es rica en enlaces disulfuro) se depositan y Ia espora 5 ¢S liberada en el momento en que muere y se lisa la cé- [i lula madre vegetativa. Las endosporas pueden permane- seer. viables durante periodos prolongados. Cuando la es- ’Pora es colocada en condiciones ambientales favorables £m presencia de algiin estimulo particular (p. ej. la pre- Sencia de un amino‘cido particular, hideato de carbono 0 Jpg 3882) Se produce su germinacidn, Bajo este estimulo, las enzimas son activadas, depradan in corteza de la espora y liberan el material peptidoglicano, los iones calcio y el ju Side dipicolinico. Comienza la stntesis del RNA, sezui- 149 por la sintesis de proteinas y, finalmente, la sintesis de ae YA. El resultado es una nueva célula vegetativa. # =e Bacteriotoata nAsica 17 ESTRUCTURAS DE LA SUPEAFICIE DACTERIANA ” CAPsuLas : | Algunas bacterias poscen una edpsula por fuera de la apa mas externa de la pared celular. La capsula puede set gruesa o delgada y puede estar estrecha 0 laxamente #80- Giada con la cara externa de Ja pared celular, El material Capsular laxamente asociado también puede ser Hlamado capa “borrosa”. El material capsular habitvalmente es dc naturaleza polisacdvida; pueden ser polimeros de un nico monosacdrido (glucosa, dextrano, levano) 0 helero- Polisacéridos que contienen tanto hexosas como pento- sas, mas ribitol, glicerol u otros alcoholes azsicar. Los fos- * fatos con frecuencia también estén presentes. En algunas especies de bacterias, como algunas especies de Bacillus, {a efpsula bacteriana es de naturaleza polipeptidica. La capsula es sintetizada a nivel de la membrana celular; sus componentes son sintetizados y exportados fuera de la cé lula por un sistema transportador para lipidos isopren des. en el cual los componentes se unen a un material cap- sular “iniciadoc” ya presente en la superficie celular. En algunos casos, como en el de la edpsula de glucano de Streptococcus mutans, la eépsula es sintetizada por enzi- mas extracelulares llamadas glucosiltransferasas que son secretadas fuera de la célula. La accién de estas enzi- ‘mas en una dieta de sacarosa crea una matriz de glucano Famificada € insoluble que luego interactia especifica- mente con receptores de la superficie celular para crear una cépsula de glucano. La cépsula de glucano tiene im- Portancia prictica como un factor de virulencia porque este material forma la matriz de la placa dental. La adhe~ rencia de las bacterias a esta matriz y la posterior forma- ion de dcidos a partir de la sacarosa presente en Ia dieta conduce a la iniciacién de caries dentales, La cdpsula bacteriana tiene varias funciones. Protege a las células de la desecacién y de materiales toxicos del medio ambiente (p. ej., metales pesados y radicales li- bres) y promueve la concentracién de nutrientes en la su- Perficie de la bacteria debido a su naturaleza polianiéni- a. La cipsula tambign tiene participacién en la adheren= cia de las bacterias a las células y mucosas superficiales. Esta adherencia es necesaria para que muchos microor- ganismos establezcan infecciones en los huéspedes ade Cuados (se trata mas adelante). Ademds, la cdpsula tam- bién ofrece resistencia a la accién bactericida del com- plemento y de los anticuerzos séricos. El material capsu- far habitualmente es antigénico y la deteccign seroldgica de las formas capsulares es la base de la prueba de Que- lung, que puede ser utilizada para identificar 0 estable~ cer [Link] varias de las mas importantes bacterias patégenas para el hombre € incluyen serotipos de Sirep- tococcus pireumoniae, Haemophilus influenzae de tipo b, Klebsiella pneumoniae y Neisseria meningitidis. El ma- terial capsular en muchos microorganismos es sintetiza~ do en abundancia y derramado en los liquidos circundan- tes tanto in vivo como in vitro. Este material puede ser detectado en varios Ifquidos corporales (p. ej, suero, f= quido cefalorraquideo y orina) durante la infeecién por ciettas bacterias encapsuladas (p. ej., neumococo, me ningococo y H. influenzae de tipo b) y puede ser especi~ ficamente detectado ¢ identiicado mediante pruebas de electroforesis o aglutinacién para proveer un diagnéstico rapido. " Escaneado con CamScanner18 _ DiaGxostico suckoBIoLUcico FLAGELOS Los flagelos bacterianos son largos apéndices filamen- tosos que surgen a nivel de Ia membrana citoplasmatica, [Link] se extienden a través de Ia pared celular al medio circundante. Son responsables de la movilidad celular, Los Magelos generalmente se encuentran en las bacterias gramnegativas con forma de bastén aunque algunas espe- ies con forma de bastén grampositivas méviles (p. €)., especies de Listeria) y cocos (algunas especies de Ente- rococcus, especies dé Vagococcus) también pueden pre- sentarlos. Los Mlagelos se diferencian por su ntimeto Por su disposicién en la célula, Las bacterias con un fla- gelo tinico en posicién polar se Haman monotricas; aquellas con dos o mas flagelos que se originan en un po. 10 © punto de la célula son sefialadas como lofotricas, aquellas con un solo lagelo en dos puntos o polos dife- rentes de la célula se Ilaman anfitricas y aquellas con os o mas flagelos (un penacho) en dos puntos o polos de 4a célula se Haman anfilotricas, Los microorganismos ue poseen flagelos sobre toda su superficie se denomi. nan peritricos, En las bacterias gramnegativas, los flagelos tienen una estructura compleja que consiste en tes partes: el fla- mento, el gancho y el cuerpo basal (fig. 1-12), El fila. mento flagelar tiene 13 a 17 nm de didmetro y es de lon. Flamento gitud variable. Esti compuesto de subfibrllas paratelg, de Ia proicina flagelina (PM= 30,000~10.000 daltons, que interacuian para formar un cilindro hueco. El ily, mento es semirrigido y forma una hélice orientada hacia Ja izquierda tal como existe en la célula. La Magelina te- ne la capacidad de autoensamblarse. Los mondmeros de la proteina son sintetizados y pasados a tavés de la luz del cilindro, En el extremo de crecimiento de Ia helice flagelar, el monémero sufre un cambio conformacional y se adiciona al extremo distal del flagelo. El gancho esti constituido por otra proteina diferente que actia como una “manga de la cual emerge el flagelo. El gancho per- mite la transmisi6n de un movimiento de rotacidn desde el cuerpo basal hacia el filamento. El cuerpo basal esti compuesto de anillos complejas conectados por una es- tructura-con forma de bastén, Los anillos M, 5, P, y L estén fijados en la membrana, el espacio periplasmitico, el peptidoglicano y en el lipopolisacérido de Ia membea. na extema, respectivamence. La estructura anular extema fen las bacterias gramnegativas comprende al menos 10 proteinas. La estructura ea anillo unida a la membra- fa rota como parte de una reaccién dependiente de ener. aia, y hace que la hélice rigida lagelar se convierta en un propulsor, La energia para esta reaccién se abtiene me. diante el pasaje de protones desde afuera hacia el cito- plasma a través del cuerpo basal. Los anillos externos (anillos L y P) evidencerente funcionan como soportes, mminimizando la friccion y la liberacign de materiales co. lulares en los puntos de insercién flagelar. En las bacte. fias grampositivas, la estructura flagelar es menos com. pleja y estd compuesta por dos anillos. Una estructura ca anillofjael lagelo a la membrana plasmatia, la seun da estructura en anllo se encuentra incluida en la capa ce peptidosticano. Varias especies de microorganismos fagelados pue- den modificar el tipo de antigeno Magelar que produce este proceso se denomina variacién de fase.'La varia, in de fase ocurre debido a la expresién diferencial ac genes que codifican para varias proteinas flavslines tructuradas. Este fenémeno fue observado por primera vez en bacterias entéricas gramnegativas coma reeiee de Salmonetfa, pero tambien se produce en olcis eset, cies. Los antigens flazelares en bacilos gramnessunes se denominan antigenos H, de la palabra alemana “hauch” que significa “respirar”. La tpiticacién serie, gica completa de Salmoneliae involucra la idemtiicacion de los antigenos § (antigeno somitico), H (antégenos fl gelares) y K (antigenos capsulares), FIMBRIAS (PILI) Las fimbrias o pili son apéndices mis pequefios que se encuentran en la superficie de muchas bacterias, gativas. A pesar de que los términos “pili” y “imbrs han sido usados en forma indistinta, fimbria se utiliza a¢- tualmente para describic cualquier apéndice no flazelar similar a un pelo, mientras que pili se utiliza para nom- brar a aquellas fimbrias de las bacterias gramnegativas cuya funcién especifica es la de transferir DNA de una célula a otra durante el proceso de conjugacién (p. ej. pi- li sexuales), Las fimbrias tienen de 3 a 10 nm de didme- wo, de 15 a 20 um de largo y estin compuestas de una protefna denominada Gimbrilina. Las proteinas forman tubos profundos que parecen tener origen en la membra- Escaneado con CamScanner1 i oie 3) na celular pero que carecen de un cwemg:b dc Fare et gee ge a Hy Fey Estos apéndices:estin involucrados en I form mgelos: si), pares especificos para el intercambio demas on oe co durante la conjugacién y también sirven de nee "iadhesién para bacteristagos. Las fisbrice one eee woeg come organclas cel aes para la adhesién celular a fi 8; las fimbrias que sicven para esta _ {uncién son‘citadas’frécientemente como adhesinas. La mayorfa de las‘adhesinas'ejercen' una tinién del tipo lee: “Aina a residios teriminales dé carbohidratos, como unida des de iiiinosa, Por ejemplo, Ia adiierencia de bacteriag #°* entéricas'a‘stipetficies mitcosas, gle ¢s mediada por pili ¢ de tipé 1 o comtines, puede ser inhibida por una preincu- PY bacién’de'las bacteriag con mano: Ja porci6n terminal de la cdhesina’y bloquea la adheren- 8°) ‘cia; de esta manera, 16s pili de tipo |'se denominan ma- ‘nosa-sensibles, Las adhesinas'qut'no son afectadas por Ia. -manosa se denominan’ manosa-Fesistentes. Distintas es- L- pecificidades en estas ufiones dé tipo lectina’son parcial- mente responsable’ pot el tropismo tisular observado en + una variedad de especies bactetianas, Lt 2)..El papel de las fimibrias conto Factores de virulencia ha ido estudiado extensamente ent Neisseria gonorrhoeae. Las cepas virulentas dé W: gonorrlioeae paseen fimbrias superficiales y son capaces de unirse con avider. a célu- Jas [Link] genital::La pérdida de fimbiias, ",_merced a repetidos subcultivos in vitco yuelven a estos “ “microorganismos. incapaces: de originar una infeccién “urogenital debido a la falta de adherencia a la mucosa, Aiemis, los gonococos poseen un gran ntimero'de genes, gue codifican para proteinas fimbriales antigénicas dis- “tints estnicturalmente: Cuando se encuentran presentes antiéuierpos contra un tipo de proteiaa fimbrial. el imi- croorganismo es [Link] “apagar” Ia produccidn de la vieja proteina y “encender” la produccién de una nueva proteina fimbrial. Debido a la capacidad de una tinica c ‘pa de gonococo de producir miltiples antigenos fimbria- °, Tes antigénicamente. diferentes, la utilizaciémde fimbr * © como antigeno candidato para una vacuna antigonocéci- ca ha’ sido considerablemente infructuosa. * INTERCAMBIO'GENETICO EN LAS BACTERIAS Sex’ * La replicacién bacteciana ocurre. por un‘ proceso de fi- ién binaria, un proceso asexual que no involucra eventos tis de recombinacién y tiene como resultado la generacion de ZY" dos células hijas idénticas a la célula parental. A pesar de | €Sto, varios grupos de bacterias tienen la capacidad de Ile- ‘(hl Yar a cabo un intercambio genético y recombinaciéa con ‘otros microorganismos. El intercambio genético entre 4,).bacterias suicede por unaide tres mecanismos: transforma- ‘tio4 Si6n, transduccién y conjugacién (fig. 1-13). < La transforthacién involucra a incorporacién de DNA libre del medio que rodea al microorganismo: Las *$ eélulas que’son [Link] tomar € incorporar a sus ge- jEsinmas DNA libre se [Link]. La com ‘ype, Petencid generalmente es,un estado transitorio que suce~ i) de hacia-el final de la. fase exponencial de crecimiento. Vo En'las“bacterias. grampositivas. competentes,, trozos pe- queiios de‘ DNA. de [Link] se unen ala célula por tin receptor celular. de Supertic Laps Rerloda counpetent-Aunedid We ie lees expresado duran- Yess Las fimbrias también ac- + a" La manosa se une.a JaqueeliDNaentra'en _ presién posterior de los genes transducidos. La transdi BrcremoLocia nhsca| 95 : HEE In célula, una cadena es hidrolizada por una nucteasa uni: aq la supetticie. Los acontecimientos de recombinacién entre el DNA de cadena simple y la regi6n homdloga d: Eromosoma bacteriano dan como resultado Ia integracion del DNA travisformado al genoma bacteriano. Si no exis-, “ten regiones con homologfa hacia el DNA transformador, Ja cadena de DNA no se integra, los genes de esa cadena + de DINA no se-éxpiesan y él DNA. de cadena simple es degradado'por endonucleasas dé restriccién éndégenas.~ ‘Las bacterins gramnegativas’ competerites también’ po- seen receptores pafa DNA én la superficie-celular, pero el proceso de uni6n’dlel DNA ocurre’simnulténeamente con -el reconpcimiento’ de und secuentia”de ‘nucleétidos de _ 10 a 14 pates [Link]’ que permite que s6lo'el DNA de ‘especies muy relacionadas pueda‘unirse y entrar en las, células competentes."El DNA’ de éadena doble ingresa “ entonces en Ia célula, péro s6lo una'cadena participa en los eventos de recombinacién qué determinan la incorpo- racién del DNA teansférmador en’el genoma del recep- “tor. Por medio [Link] tratamiento con CaCh, u otras solu- cciones Salinas, células que normalmente no expresan __ competencia para la tcansformacién genética pueden ha- cerse permeables al DNA extracelular--La ineorporacién de DNA desnudo por bacterias “artificialmerite compe- tentes" sé denomina transfeccién. +. * : El intercambio de informacién genética por medio de bacteriéfagos se denomina transduccién. Los bacterié- fagos (o simplemente “fagos”) son virus que infectan bacterias. Algunos bacteridtagos son Iiticos, esto es, lue- 20-de infectar a'la eélula bacteriana los genes cegulato- * Giog'del bacteriéfago “toma control” de la maquinaria de biosintesis celular, lo cual Ileva a la expresién de los genes estructurales del fago y a la produccién de nuevas particulas faigicas que son liberadas debido a la lisi muerte del huésped bacteriano: Cori los bacteriéfagos temperados, el material genético es incorporado al DNA del huésped como “profago” y se replica junto con el ceromosoma bacteriano. Estos bacteriéfagos también son Uamados bacteridtagos lisogénicos y de la célula bacte- riana infectada con este fago se dice que se encuentra li- sogenizada. En la induccién por’ éxposicién a ciertos quimicos (p. ¢j., mitomicina C) 0 a la radiacién ultravio- leta, los bactetiéfagos lisogénicos pueden ser inducidos a; iniciar la produccién de nuevos fagos (es decir, el fago-se~ vuelve “litico”). La escisién del DNA del bacteridfago del genoma de la cétula bacteriana trae aparejado el he~ ‘tho dé que algunos bacteridfagos no sélo contengan los.» genes especificos del fago sino también genes de Ia célu- fa huésped que Se encontraban localizados en las adya- cencias del sitio de integracién del fago en el cromosoma * bacteriano. » ae Bild La wansterencia de, informacién genética durante la transduccién puede sef. generalizada.0 espécializada. El: término transduccién generalizada hace, referencia al empaquetamiento accidental y aleatorio del DNA de la. célula huésped en el interior de [Link] o “cabeza",de- la particula Figica. La liberacién de particulas fégicas maduras durante la lisis celular'y la posterior infeccién *'; de otra célula bacteriana deterniina 1a introduccién en el interior del “receptor” de “DNA donante” proveniente del huésped bacteriano original, La tecombinacién del DNA transducido con una regidn homdloga del cromo: soma de la célula'receptora resulta en la integeacién y ex20. DiAGNosmico MicroBioLécico [Link]én [Link]én C. Conjugacién : ay + + ey Fragments do + DNA Gromosémico Bacteria Bactoria Yolmcucisng, Receptor, Bacteda Ellagagontiene ._ donante (E*) | recepiers F-) 4 tonto Gonante « » algo de DNA" Set Sr eee 50.6: Capacitacién’ ee | . mea: Gong | Se Ee : pil sexvat wre ‘ONA’¢e fa donahte transterido scr go a dena rare ‘Bacar ‘cranta a topiencs Recombinaciéa” : Las células : El fago quo 5 se separ ‘centone ONA ' bacteriano - “. tee te ci . ieyseu Bu (Célula bacteriana eee tinted og : inom Receptor : vansdee \ Receptor mcontarna : aa Fig. 1-1. Mecatiismos de transferencia de genes en las bacterias. Los microorganismos pueden intercambiar material genético por eual- gitlera de wes procesos: transformacida (A). transduccida via bacteri6 ign generalizada sucede con una frecuencia de | fago transductor por cada 10? a 10° particulas de fago genera- das por induccién desde un estado lisogénico, y alrede- dor del 1% al 2% de la longitud total del genoma de la célula huésped puede ser transferida por este mecanismo, Se denomina trinsduccién especializada al empaqueta- miento de genes especificos del huésped dentro del fago wansductor. Este tipo de transduccién ocurre con los fa- 0S temperados que se insertan en sitios especificos del cromosoma, como el bacteriéfago lambda. Sélo aque- Uos genes de! buésped que flanquean al genoma del fago integrado tienen la oportunidad de ser incorporados en el. ‘genoma del bacteridfago luego de Ia inducciéa desde el estado lisogénico. Us fago transductor especializado se produce por cada 10° 4 10 nuevas particulas fégicas pro- ducidas ivego de Ia induccién, 7 (B) y conjugacién (C). La conjugacién’es el Unico mecanismo de intercam- bio genético entre bacterias que requiere contacto célula- célula. Las bacterias gramnegativas capaces de participar en la conjugacién poseen un plasmido llamado F que co- para los pelos sexuales. Estos pelos especializados funcionan como vehiculos para establecer contacto con otra célula bacteriana como si fueran “tubos" a través de los cuales el DNA pasa durante el proceso de conjuga- ccidn. Las células que poseen el plismido F se denominan F>, las células que no lo tienen son llamadas E-. Una vez que se ha establecido el contacto’entre una célula Ey una F* através de ur pelo sexual, el plismido circular E ‘comienza a ser replicado, Durante este proceso, una: de las cadenas simples del plésmido DNA pasa a través del pelo ala célula receptora. La cadena simple que es-pasar- da comienza a ser replicada a medida que entra en la.cé~ Escaneado con CamScanner