Año del Bicentenario del Perú: 200 años de Independencia”
UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARÍA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS BIOQUÍMICAS
Y BIOTECNOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ASIGNATURA
Biología Molecular - 06
TEMA
Práctica 5: Extracción y purificación de RNA utilizando el
método de cloroformo -alcohol isoamílico y por columnas
de Sílica
DOCENTE:
Dra. Yuma Ita Balta
PRESENTADO POR:
Huayta Apaza Leydi Xiomara
Semestre Impar 2023
CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son los tres tipos de RNA que se encuentran en las células eucariotas, que
características y funciones presentan?
• ARN mensajero (ARNm): tiene la información genética que se necesita para generar proteínas
y llevar la información al ADN, su función es transportar información sobre las proteínas
del ADN de la célula hasta el citoplasma.
• ARN ribosómico (ARNr): cada ARN tiene cadenas de diferentes tamaños, con estructuras
secundarias y terciarias, su función es ayudar a formar ribosomas en el orgánulo donde se
forman las proteínas.
• ARN de transferencia (ARNt): es una molécula que ayuda en la síntesis proteica, su función
es que sirve de vehículo entre el ARN mensajero y la cadena creciente de aminoácidos que
forman una proteína.
2. Comente sobre la ventaja del método de extracción de RNA con Trizol en relación
con otros métodos
• Trizol® (Invitrogen) presenta mayor rendimiento, calidad e integridad; además, permitió la
detección del virus por RT-PCR en todos los órganos evaluados.
• Una mayor probabilidad de presentar mayor rendimiento y una menor contaminación con
proteínas
3. Mencione tres inhibidores de RNasas e indique como actúan.
• IC01 : alta afinidad a RNAsas, bloquea su actividad. Es recomendado para ser utilizado en
purificaciones de ARN, síntesis de ADNc y transcripción in vitro.
• RNasin® funcionan uniéndose fuertemente a las RNasas, evitando que degraden las
moléculas de ARN vulnerables.
• Tiocianato de guanidinio: inhibe la actividad de la RNasa durante sus experimentos.
4. ¿Se podría utilizar el EDTA u otro agente quelante parar inhibir las RNasas?
¿Por qué?
Hay agentes quelantes, que son de soluciones de baja o alta fuerza iónica (para que sea soluble el ADN)
y de altas concentraciones de NaCl.
• EDTA: Es un agente quelante de iones metálicos como Ca++ y Mg++. Inhibe la acción de
las nucleasas al no haber cofactores libres para su actividad y así protege al ADN. Se emplean
para para proteger el ADN de la acción de enzimas nucleasas.
• NACl: son sales que aumenta el poder iónico y ocasionan la precipitación del ADN.
5. Describa el Método de Extracción de RNA por Columnas de Silica.
• Es un método rápido, reproducible y se necesita de centrifuga.
• Preparación de la muestra. (1ml de sangre +10ml de ELB) lo llevamos a vortex y luego 15min
a incubación (hielo)
• Lysis en el tubo de 15ml agregamos 600 microlitros de Lysis RL y al vortex por 10 segundos.
Lo incubamos por 10min T.A
• En el filtro D- azul centrifugamos al máximo por 1min y luego desechamos.
• Para el Binding añadimos 600ml de etanol y en el tubo morado lo dividimos en 2 tiempos
600ml en cada uno por 1min de centrifugación.
• Lavamos (en el primero añadimos 500 microlitros HS y centrifugamos por 1 min) (en el
segundo añadimos 700 microlitros de Buffer LS y centrifugamos por 1min)
• Para el Elución añadimos 30 microlitros de agua libre de RNAsas y lo incubamos por 1 min
a T.A y luego centrifugamos en vacío 8000ppm por 1 min
6. Comente brevemente respecto a los Kits de extracción de RNA, según las muestras
biológicas a trabajar.
• NucleoProtect® RNA podrá realizar la extracción de ARN en cualquier momento ya que
permite preservar el RNA de células y tejidos humanos y animales sin toxicidad.
• Para la purificación se utiliza NucleoSpin®RNA basado en columnas de sílice, que además
permite la extracción en diferentes formatos.
• Para la extracción liquida RNA con NucleoZOL, un reactivo de baja toxicidad sin cloroformo
y sin separación de fases con un alto rendimiento para todo tipo de muestras.
7. Describa la Tecnología del RNAi e indique las aplicaciones que puede tener
• Es una respuesta a conservada a ARN de doble hebra (dsARN), regula la expresión de los
genes.
Algunas aplicaciones son:
• Inhibición transcripcional por remodelación de la cromatina.
• Como una terapia para enfermedades autosómicas, cáncer e infecciones virales
• Para estudiar diferentes tipos de patógenos a personas con diabetes y obesidad.
• Interfiere con la replicación del VIH
• Silenciamiento de oncogenes
8. Qué medidas propondría Ud. Para evitar la contaminación y degradación del
RNA.
• Para evitar la contaminación del ARN propongo que utilicemos guantes ya que la piel tiene
piel es una fuente común de RNasas.
• Utilizar reactivos certificados, incluida agua de alta calidad
• Para evitar la degradación las muestras de ARN generalmente se almacenan congeladas a -
20 °C o -80 °C o bajo nitrógeno líquido.
