UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR
2023-I

Practica de laboratorio 3
Uso del microscopio óptico de campo claro, observación de estructuras celulares y
microorganismos.

En los últimos años se han logrado grandes avances en la comprensión de la estructura y

funcionamiento celular, los cuales han sido posibles en gran parte gracias a la utilización de
técnicas e instrumentos que permiten cortar células y analizar sus funciones de los componentes
individuales. Los avances de la microscopía han permitido examinar detalladamente las
estructuras celulares

El microscopio hace posible la observación y examen de seres microscópicos que están fuera del
poder de resolución del ojo humano que es de 0,2 mm. El microscopio aumenta la imagen hasta
el nivel de la retina, para captar la información. Amplifica considerablemente la imagen de objetos
pequeños y microorganismos, y permite observar sus detalles estructurales que son imperceptibles
a simple vista.

Partes de un microscopio óptico de campo claro.

El microscopio de campo claro está integrado por dos series de lentes (ocular y objetivo) que se
utilizan para magnificar las estructuras que se examinan y permitir así observar sus detalles. Estos
funcionan conjuntamente para producir la imagen aumentada
El sistema de aumento de un microscopio óptico está compuesto por: (1) El ocular, ubicado en
el extremo superior del tubo del ocular, cuyo poder de aumento se encuentra marcad en la
parte superior del ocular (5x, 10x); y (2) los objetivos, acoplados al resolver, y pueden ser
cambiados de posición con sólo rotarlos. El poder de aumento de cada objetivo calcular el
aumento total de la imagen observada, se multiplica el poder de aumento del objetivo por el
número de aumentos del ocular.

Existen dos clases de objetivos: Los objetivos secos, de menor aumento, se utilizan para
observaciones corrientes. Entre el objeto que se examina y la lente frontal hay una capa de
aire; y los objetivos de inmersión, que se reconocen fácilmente porque son más largos y tienen
una lente frontal pequeña y más curvada. Llevan impresa las letras OIL u OEL INM, y para su
utilización es necesario el uso de aceite de inmersión que llena el espacio entre la preparación
y el objetivo.

Actividad 1.
Investigue las siguientes clases de microscopio, con sus componentes y funcionalidades:

 Microscopio invertido
 Microscopio de barrido confocal
 Microscopio de inmunofluorescencia
 Microscopio de contraste de fases
 Microscopio de interferencia de Nomarski
 Microscopio de campo oscuro
 Microscopio electrónico de transmisión
 Microscopio electrónico de barrido MEB

Actividad 2.
Observación de estructuras celulares vegetales, animales y microorganismos.
Objetivo: Que los alumnos identifiquen las diferencias estructurales entre la membrana
plasmática de células animales, células vegetales vivas y microorganismos.

Materiales Reactivos
 Cebolla por grupo 1 Solución de Lugol
 Muestra de heces de carnero 1 Solución de azul de metileno
Agua destilada
 1 Caja de cultivo bacteriológico
 Microscopios compuestos
 4 Portaobjetos por mesa de trabajo.
 8 Cubreobjetos por mesa de trabajo.
 1 Aguja hipodérmica calibre 21G
 2 Palillos de madera por mesa de
trabajo.
 1 Pipeta o gotero por mesa de trabajo.
  2 hojas de Papel absorbente por mesa
de trabajo.
 1 Pinzas de disección sin dientes por
mesa de trabajo.
 2 hisopos con punta de algodón por
mesa de trabajo.

 Gasa
 Colador
 Tubos boca ancha
 Paleta de madera

OBSERVACIÓN DE ESTRUCTURAS CELULARES.

Preparación de célula vegetal

1.- Colocar una gota de agua destilada en el centro de un portaobjetos. Colocar
una capa de la cebolla en la caja de cultivo bacteriológico.

Con unas pinzas, desprender la epidermis de la superficie cóncava de una capa de la cebolla.
La capa epidérmica deberá ser transparente.

2.- Colocar en el portaobjetos el trozo de epidermis de cebolla no mayor que el diámetro de la

gota de agua. Con agujas o con los palillos, extienda cualquier doblez de la epidermis sin
romperla.
Coloque un cubreobjetos sobre esa epidermis.
NO aplique presión alguna sobre el cubreobjetos.

3.- Con un trozo de papel absorbente, secar el agua que aparezca fuera del cubreobjetos.
Nota: La parte superior del cubreobjetos y las lentes del microscopio
deberán estar, siempre, libres de agua.

4.- Coloque la preparación sobre la platina del microscopio de campo claro y observarla con
objetivos 4X, 10X, 40X y 100X. (Dibuje como se observa su preparación en los diferentes
objetivos.)

5.- Realice otra preparación húmeda de epidermis de cebolla. Pero ahora coloque
en el portaobjetos una gota de solución colorante, como solución de lugol o azul
de metileno en lugar de la gota de agua.
Examine las preparaciones, por separado, obsérvelas con los objetivos 4X, 10X, 40X y 100X.
(Dibuje como se observa su preparación en los diferentes objetivos.)
Preparación de célula animal

1.- Poner una gota de solución de azul de metileno o de lugol en el centro de un

portaobjetos. Frotar suavemente el interior de su mejilla con un palillo de dientes.

No frote hacia atrás y hacia adelante, sino en una sola dirección, separando el
palillo después de cada movimiento (nota: aunque no se vea material en el palillo se habrán
colectado muchas células).

2.- Separar el material colectado, golpeando suavemente el palillo en la gota de

colorante del portaobjetos. Con el palillo, extienda el material en la gota del colorante.
3.- Cubrir la preparación cuidadosamente con un cubreobjetos y secar la
superficie de alrededor.

4.- Colocar la preparación sobre la platina del microscopio de campo claro y observarla con los
objetivos 4X, 10X, 40X y 100X.
(Dibuje como se observa su preparación en los diferentes objetivos.)

OBSERVACION DE MICROORGANISMOS DE MUESTRAS DE HECES DE CARNERO

Preparación de muestras de heces.

1. tomar 5 gramos de heces de carnero con la paleta de madera,

2. agregar las heces a un frasco boca ancha y disolverla en 20 ml de agua destilada.
Mezclar.
3. Utilizar un colador con gasa no tejida sobre un nuevo tubo y dispensar la mezcla
anterior, colar las heces.
4. Agregar otros 20 o 30 ml de agua destilada para disolver el resto de heces que queda
en la gasa
5. dejar reposar las heces coladas por 10 minutos
6. Con una pipeta Pasteur o gotero, obtener del fondo del frasco una muestra del
sedimento de heces.
7. Agregar en una lámina portaobjeto 1 gota del sedimento de heces y además añadir una
gota de lugol
8. Mezclar con un palillo
9. Colocar un cubreobjetos
10. Observar al microscopio en el objetivo 10X y 40X.
11. Dibujar observaciones o realizar un registro fotográfico
Explique lo que observa en la muestra.