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Practica No.1 rutinas de diagnostico Tecnicas

Operaciones De Separación (Instituto Politécnico Nacional)

Studocu no está patrocinado ni avalado por ningún colegio o universidad.

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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

Escuela Superior de Ingenieria Quimica e Industrias Extractivas

Ingenieria Quimica Industrial

Espectroscopia Molecular y Atomica

Practica: RUTINAS DE DIAGNOSTICO

Grupo: 3IM66.

Alumnos:

López Fuentes Sandra Itzel

Profesora: Luis Enrique Camacho Camacho

Fecha: 30 de Agosto del 2021

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OBJETIVO
Adquirir los conocimientos básicos sobre espectrofotometría de absorción visible,
incluyendo la Ley de Lambert-Beer y sus aplicaciones en Química. Para ello se
realizará un experimento en el laboratorio que muestre cómo utilizar un
espectrofotómetro para llevar a cabo la determinación cuantitativa de un
compuesto.

Introducción
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite
determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en
que las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez
que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la
concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un
espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda
de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz absorbida
por la misma. En esta práctica se darán a conocer las características
generales y conceptos relacionados con la espectrofotometría. A
continuación y tras la explicación del funcionamiento del
espectrofotómetro se harán espectros de absorción con el fin de
determinar la longitud de onda donde la muestra presenta la máxima
absorción, y tras realizar las correspondientes rectas de calibrado se
cuantificarán las concentraciones de distintas biomoléculas.

Dentro de las investigaciones químicas y biológicas existe una rama muy

útil para este campo llamada espectrofotometría, esta realiza un análisis
óptico a través de un aparato llamado espectrofotómetro.
El espectrofotómetro es considerado como uno de los equipos o
aparatos mayormente utilizados en un laboratorio, pues dentro de la
física óptica mide la longitud de onda así como la relación entre valores
de una misma magnitud fotométrica.
El espectrofotómetro permite comparar la radiación absorbida o
transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de
soluto y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

¿Cómo se compone un espectrofotómetro?

Para que un espectrofotómetro realice las funciones correctas es
necesario que cuente con aquellos componentes que lo ayudarán en su
labor. Por lo tanto, un espectrofotómetro se compone de:
Fuente de luz

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La fuente de luz ilumina la muestra química o biológica, pero para que

realice su función debe cumplir con las siguientes condiciones:
estabilidad, direccionabilidad, distribución de energía espectral continua
y larga vida.
Las fuentes de luz que puede tener un espectrofotómetro son:
- Lámpara de wolframio (también llamado tungsteno)
- Lámpara de arco de xenón
- Lámpara de deuterio que es utilizada en los laboratorios atómicos

Monocromador
El monocromador de un espectrofotómetro aísla las radiaciones de
longitud de onda deseada, logrando obtener luz monocromática.
Un monocromador está constituido por las rendijas de entrada y salida,
colimadores y el elemento de dispersión.
Colimador
El colimador es un lente que lleva el haz de luz entrante con una
determinada longitud de onda hacia un prisma, el cual separa todas las
longitudes de onda de ese haz logrando que se redireccione hacia la
rendija de salida.
Compartimiento de muestra
En el compartimento de muestra es donde se lleva a cabo la interacción
R.E.M. con la materia.
Detector
El detector se encarga de evidenciar una radiación para que
posteriormente sea estudiada y saber a qué tipo de respuesta se
enfrentarán (fotones o calor).
Registrador
Convierte el fenómeno físico en números proporcionales al analito en
cuestión.
Fotodetectores
Los fotodetectores de un espectrofotómetro perciben la señal en forma
simultánea en 16 longitudes de onda y cubren al espectro visible, de
esta manera se reduce el tiempo de medida y minimiza las partes
móviles del equipo.

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Manual de Operación

Características Técnicas y Metrológicas

Rango de longitud de onda: 190-1100 nm

Precisión de la longitud de onda: ±0,1 nm

Reproducibilidad de la longitud de onda: ±0,05 nm

Condiciones de uso

Para el funcionamiento adecuado del equipo se debe trabajar en

condiciones ambientales e instalaciones controladas, las cuales son:

Estar conectado a una fuente de alimentación 120 V +-10%, con un

voltaje de polo a tierra menor a 1V.

El cuarto donde se encuentra el espectrofotómetro debe presentar las

condiciones de Temperatura y Humedad relativa requeridas por el
equipo (5°C a 40°C y una humedad relativa máxima de 80% para
temperaturas de hasta 31°C y 50% para 40°C.

Si se utilizan disolventes volátiles o sustancias tóxicas, disponer de una

ventilación
adecuada para extraer los vapores que puedan generarse durante el
análisis.

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Verificar que las celdas se encuentren perfectamente limpias y secas

Verificar que el porta muestra se encuentre en perfecto estado antes de

realizar la medición.

Se debe esperar mínimo cinco segundos después de cerrar la compuerta

del equipo
para tomar la lectura, así se evitan interferencias por la luz dispersa en
el ambiente.

Asegurarse de utilizar celdas perfectamente limpias, libres de huellas o

cualquier otro interferente para los blancos de reactivos con los que se
ajustará el cero o 100% T.

Calibración

Debemos de tener en cuenta que el hecho de tener el espectrofotómetro

calibrado en todo momento nos ayudará a obtener una información
mucho más precisa de la medición del color. Además, puede que
algunos casos, el propio dispositivo no permita realizar una medición si
no está calibrado previamente.
Se trata de un proceso que no nos llevará mucho tiempo, y a cambio,
nos aseguramos mayor fiabilidad en la lectura.
Tenemos que tener en cuenta también que el espectrofotómetro, al ser
un dispositivo fotosensible, se puede descalibrar debido a cambios
bruscos de la temperatura ambiental o por temperaturas extremas.
El proceso de calibración, según instrucciones del fabricante debe
realizarse como máximo cada 14 días. Calibrarlo antes de cualquier
reparación no nos llevará más de dos minutos.
Antes de utilizar el espectrofotómetro o fotocolorímetro es indispensable
realizar rutinas básicas de calibración para asegurarnos que el aparato
proporcione datos y lecturas confiables.
-Se enciende el equipo y se deja que caliente por lo menos 15 minutos,
-Despues se selecciona la longitud de onda deseada (esto depende de la
muestra a ser leída y del reactivo utilizado).

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-Se selecciona la función absorbancia o transmitancia.

-Se ajusta el aparato a cero con agua destilada, aire o con un blanco de
reactivo.
A continuación, se presenta un grupo de rutinas básicas que puede ser
realizada en el
laboratorio.

1. Limpiar externamente el espectrofotómetro, incluyendo los controles,

pantallas o metros de medición. Esto se puede realizar con una pieza de
tela fina –similar a la textura de los pañuelos– humedecida con
agua destilada.
2. Inspeccionar y limpiar el cable de alimentación eléctrica.

3. Verificar que la lámpara esté limpia y en buen estado. Si no funciona,

instalar una nueva, con las mismas especificaciones de la original. En los
espectrofotómetros modernos, el estado de la lámpara es detectado
automáticamente mediante el software que controla el estado y el
funcionamiento del equipo, por lo que es fácil determinar en qué
momento es necesario cambiar la lámpara. Efectuar el cambio de la
lámpara y realizar el ajuste posterior siguiendo el procedimiento
recomendado por el fabricante.

4. Revisar el fusible de protección. Antes de abrir el alojamiento del

fusible, comprobar que el espectrofotómetro esté apagado y que sus
contactos se encuentren limpios y en buen estado. Si es necesario
reemplazarlo, colocar uno nuevo con las mismas características del
recomendado por el fabricante.

5. Colocar el instrumento en la configuración operacional.

6. Accionar el interruptor de encendido para permitir un funcionamiento

por cinco (5) minutos. Verificar lo siguiente:
a)Si las lámparas o indicadores piloto funcionan.
b) Si el indicador de lectura permanece en cero (0).
c) Si la luz de la fuente funciona.

7. Realizar una prueba de corriente de fuga en las posiciones de

encendido y apagado.
a) Verificar el polo a tierra y la polaridad correcta.
b) Verificar la polaridad correcta sin polo a tierra.
c) Verificar la polaridad inversa sin polo a tierra.
8. Calibrar el panel frontal del espectrofotómetro siguiendo las
instrucciones del
fabricante.

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9. Medir la sensibilidad del equipo.

10. Realizar una prueba siguiendo la ley de Beer.

11. Regresar el espectrofotómetro a la configuración inicial, si la

calibración se ha efectuado con éxito.

PRINCIPIO DEL ESPECTROFOTÓMETRO

El principio de funcionamiento de la espectrofotometría se basa en el

empleo de las interacciones entre la radiación electromagnética y la
materia. Los modelos explicativos de la estructura de la materia que
tienen como fundamento las características ondulatorias de las
partículas que la constituyen proporcionan un marco de referencia
conveniente para describir las interacciones entre la radiación
electromagnética y la materia.
La energía electromagnética se encuentra constituida por fotones cada
uno de los cuales tiene como característica una longitud de onda. Si
asignamos una longitud de onda característica a cada tipo de radiación,
la propagación de esa onda se hará con una frecuencia tal que al
multiplicarla por su longitud debe darnos la velocidad de propagación.
Esto es:

v = c/ λ

La letra griega lambda minúscula representa la longitud de onda y la

letra V representa la frecuencia de esa onda. c= 2,99792458×108 m·s-1
es la velocidad de la luz en el vacío.
El rango del espectro electromagnético va desde Rayos cósmicos de
alta energía (alta frecuencia, corta longitud de onda) hasta microondas
de baja energía (baja frecuencia, larga longitud de onda).
La luz visible, que es la que podemos ver sin ningún tipo de transductor
artificial, representa apenas una pequeña porción de ese rango, con
longitudes de ondas que van desde alrededor de 400 manómetros para
la luz azul, hasta alrededor de los 700 manómetros para la luz roja.
Longitudes de ondas mas cortas caen en la región Ultravioleta, y
longitudes de onda mas largas se ubican en la región Infrarroja.

LEY DE LAMBERT – BEER

La ley de BOUGUER-LAMBERT-BEER también se conoce como ley de

Beer-Lambert-Bouguer y fue descubierta de formas diferentes e
independientes en primer lugar por el matemático y astrónomo francés
Pierre Bouguer en 1729´Luego por el filósofo y matemático alemán,

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Johann Heinrich Lambert en 1760 y por último el físico y matemático

también alemán, August Beer en el año 1852. Se puede decir que esta
ley se trata de un medio o método matemático, el cual es utilizado para
expresar de que modo la materia absorbe la luz. En óptica (Rama de la
física que se encarga del estudio de la luz) La ley de Beer afirma que la
totalidad de luz que emana de una muestra puede disminuir debido a
tres fenómenos de la física, que serían los siguientes:
1. El número de materiales de absorción en su trayectoria, lo cual se
denomina concentración

2. Las distancias que la luz debe atravesar a través de las muestra.

Denominamos a este fenómeno, distancia del trayecto óptico

3. Las probabilidades que hay de que el fotón de esa amplitud particular

de onda pueda absorberse por el material. Esto es la absorbencia o
también coeficiente de extinción. La relación anterior puede ser
expresada de la siguiente manera:

Donde:
A = Absorbencia
ε = Coeficiente molar de extinción
d = Recorrido (en cm)
c = Concentración molar

A medida que la luz atraviesa un medio que la absorbe, la cantidad de

luz absorbida en cualquier volumen corresponde a la intensidad de luz
que incide, luego se multiplica por el coeficiente de la absorción.
Frecuentemente la intensidad de un haz de luz incidente declina
significativamente a medida que pasa a través del medio absorbente.
Cuando esta relación se expresa como Ley de BOUGUERLAMBERT-BEER,
tenemos que:

Donde:
T = Transmitancia
ε = Coeficiente molar de extinción
c = Concentración molar del absorbente
d = Recorrido en cm

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TIPOS DE ESPECTROFOTOMETROS

A continuación, te explicamos las principales diferencias entre los

espectrofotómetros de barrido, de matriz y los de haz simple o doble.

 Espectrofotómetros de barrido

En un espectrofotómetro de barrido o escáner, la luz dispersada en

longitudes de onda individuales se selecciona mediante una rejilla, que
gira mecánicamente y mide la transmitancia individual de cada longitud
de onda a través de la cubeta. De este modo, se obtiene todo el
espectro de forma continua.
En algunos casos, el escaneo con espectrofotómetros de barrido puede
producir una disminución en la precisión y reproducibilidad de la
selección de longitud de onda.

 Espectrofotómetros de matriz (array)

Aquí la muestra está iluminada por un haz de luz UV/VIS, que contiene
todo el espectro. De esta forma, la muestra absorbe simultáneamente
las diferentes longitudes de onda de luz. La luz transmitida es difractada
por una rejilla de reflexión, situada después de la cubeta. A
continuación, la luz es dirigida a un detector, compuesto por diversos
materiales fotosensibles, lo que permite la medición simultánea de todas
las longitudes de onda. Al sistema de espectrofotómetros de matriz
también se le conoce como "óptica inversa" y tiene la ventaja que no
dispone de partes móviles y la medida es más rápida y fiable.

 Espectrofotómetros UV/VIS de haz simple o doble

En espectrofotómetros de haz simple, el haz de luz originado en la

lámpara se guía directamente a través de la cubeta de muestra hasta el
detector.
En cambio, en la configuración de espectrofotómetros de doble haz, el
haz de luz de la lámpara se divide en dos haces de intensidades iguales:
un haz de referencia y un haz de muestra. Cada haz pasa por una
cubeta diferente, la de referencia (con el solvente) y la de muestra, de
forma simultánea.
Las intensidades de ambos haces se miden al mismo tiempo mediante
dos detectores (o fotodiodos). En otros instrumentos, los dos haces
pasan a través de un bloqueador que impide el paso de un haz. El
detector alterna entre la medida del haz de muestra y la de referencia.
En mediciones por debajo de 300 nm, hay que tener en cuenta el valor
de absorbancia de los solventes, que puede ser alta. Esto puede originar

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errores, puesto que la absorción debida a la muestra es pequeña en

comparación con la absorción total.

MODO DE OPERACIÓN

ARRANQUE Cuando el instrumento se enciende, todas las etiquetas de la

pantalla se muestran visibles por varios segundos antes de comenzar las
pruebas de auto diagnóstico. Este proceso toma algunos segundos,
durante este tiempo el progreso se mostrará en pantalla. Una vez que
estos test se completan, se mostrará la pantalla principal.

Encendido.

a) Antes de encender el espectrofotómetro revisa que no hayan quedado

celdas en la porta muestras. En caso afirmativo, las retira, ya que esto
puede generar un error en la calibración del equipo.

b) Encienda el espectrofotómetro y espera mínimo 30 minutos antes de

proceder con los siguientes pasos, con el fin de evitar daños en el equipo
u obtener lecturas erróneas durante el proceso.

c) Encienda el ordenador.

d) En la ventana del ESCRITORIO abra PERKINELMER UVWINLAB y

selecciona usuario ANALYST

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Se abre la siguiente pantalla

 En base METHODS selecciona la opción WAVELENGTH QUANT-

LAMBDA

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 Espera a que aparezcan los datos de LONGITUD DE

ONDA, ABSORBANCIA Y SLIT WIDTH ; antes de cargar
el método. Aparecerá la siguiente ventana:

 Se debe recordar que en la pestaña

TASK no se realiza ningún cambio.

 Ingresa las opciones en la pestaña DATA

COLELECTION, que se indican en la Tabla 2.
Opciones de Data Collection, conforme se muestra a
continuación:

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No realiza ningún cambio en la pestaña ACCESSORY

 En la pestaña CORRECTIONS ingresa las opciones que

se indican en la imagen de acuerdo a las instrucciones

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descritas a continuación.

o BASELINE CORRECTIONS: Para las curvas de

calibración en BASELINE DETERMINATION
selecciona ALWAYS AT TASK STAR y 100%
T/BASELINE (AUTOZERO), que me indica que el
programa debe tarar antes de iniciar a correr
todas la muestras.
o EXPIRE CORRECTIONS: No modifica nada

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 SAMPLE ID: Da un nombre a las muestras patrón; no

pueden ser nombres repetidos
 DESCRIPTION: Da una descripción de la muestra. No es necesario.
 TYPE: Selecciona de la lista desplegable qué tipo de
muestra se va a analizar: las opciones son BLANK,
CONTROL, SAMPLE O STANDARD; para ingresar un
nuevo método y realizar la curva de calibración, se
debe seleccionar: STANDARD para todas las muestras y
no se debe tener en cuenta la muestra con
concentración Cero (Blanco de Proceso) pues para ello
hay una opción en la pestaña de BEER’S LAW QUANT.
 Concentration: Defina la concentración de las muestras
patrón cuando se va a crear un nuevo método.
 . En la Pestaña BEER’S LAW QUANT ingresa las
opciones que se indican en la imagen:

o COMPONENT: Defina el componente que se

quiere determinar con el análisis; Ejemplo:
AZUFRE, FOSFORO, BORO, entre otros.
o UNITS: Cambia las unidades de mgml-1 a mgl-1.
o CALIBRATION: Selecciona la opción de FORCE THROUGHT
ZERO
o LIMITS: Selecciona CORRELATION (0,980000),
STANDARD TOLERANCE (3,00) y PROCEED ON
ERROR; y selecciona ALLOW 10%
EXTRAPOLATIÓN.

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 En la pestaña PARAMETERS NO modifica ningún

dato.

 En la pestaña CALIBRATION se pueden observar los

resultados de cada muestra patrón y como se va
creando la curva de calibración:

 En las pestañas PROCESING y RESULTS no se modifica nada.

 Guarda el método ingresando a FILE seleccionando
SAVE SETTINGS y AS NEW METHOD si es un método o
curva de prueba guardar en la carpeta PRUEBAS PARA
EL EQUIPO, en la subcarpeta del componente a
analizar; recordar NO cerrar el programa creado.

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 Coloca dos celdas con el blanco de reactivos, uno en

cada porta muestras; cierra la compuerta y selecciona
START para iniciar la lectura de las muestras patrón y
la creación de la curva de calibración siguiendo los
pasos que se muestran a continuación:

 Selecciona ACEPTAR cuando aparezca el aviso que se

muestra a continuación, para TARAR.

 NO SELECCIONA ACEPTAR NI CANCELAR, al momento

en que aparezca el aviso que se muestra a
continuación, solo retira el blanco de reactivos ubicado
en el porta muestras de la parte de adelante y dejar el
que se encuentra atrás.

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 Coloca la muestra patrón a analizar en la

porta muestras de adelante, cerrar la
compuerta y seleccionar ACEPTAR en el
aviso que se muestra en el paso b.

 Espera a que aparezca el siguiente aviso y abra la

compuerta para quitar la muestra patrón ya leída,
coloca la siguiente muestra y selecciona ACEPTAR.

 Continúa de la misma manera que en el punto d del

paso 12, con todas las muestras patrón, y selecciona
ACEPTAR cuando aparezca el siguiente aviso.

 Luego que aparezca un aviso que diga CALIBRATION

SUCCESSFULL e informe el dato de correlación. En caso
de ser igual o superior a límite inferior de 0,980000,
Selecciona ACEPTAR.

 Guarda la curva de calibración,

ingresando a FILE y selecciona

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SAVE SETTINGS:

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 CALIBRACIÓN DE PRUEBA: Si es una curva

de calibración de prueba selecciona TO
METHOD.
 CALIBRACIÓN FINAL:
 Selecciona AS NEW METHOD y
guarda en la carpeta de SUELOS o
TEJIDO VEGETAL, según corresponda.
 Guarda una copia de la misma en: AS
NEW METHOD en la carpeta
MÉTODOS FINALES y en la
subcarpeta de SUELOS o TEJIDO
VEGETAL según corresponda.
 La curva debe ser guardada con el
nombre del análisis y la fecha en que
se debe realizar nuevamente la curva
de calibración, es decir 6 meses
después de la fecha en que se realizó
la curva que se está guardando.
Ejemplo: S DISP 2014-08-27.

 Imprima los resultados de la curva de calibración que

se realizó, se dirige a la pestaña OUTPUT, en REPORT
TEMPLATE selecciona QUANT CALIBRATION (REV.1) y
luego escoja PREVIEW; se abrirá un documento en PDF

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del reporte con opción para imprimir. Al momento de

imprimir selecciona la impresora.

 Apaga las lámparas

 REALIZAR UNA MEDICIÓN

 Encienda el equipo
 Selecciona uno de los métodos ya creados y guardados
en la carpeta de SUELOS o TEJIDO VEGETAL según el
componente que se vaya a determinar.

 Revisa y espera a que aparezcan los datos de

LONGITUD DE ONDA, ABSORBANCIA y SLIT WIDTH
como se indica en la siguiente imagen:

 No cambie ningún dato en las pestañas TASK, DATA

COLLECTION, ACCESSORY, BEER’S LAW QUANT,
PARAMETERS, CALIBRATION, PROCCESSING y RESULTS

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porque se puede dañar la curva de calibración; y el

método tendría que volverse a crear.
En la pestaña corrections, solo si se requiere para el análisis,
se puede modificar lo que está señalado en el recuadro rojo

 que se indica a continuación

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 BASELINE CORRECTIONS: Si para todo el análisis solo

se requiere calibrar una vez entonces en BASELINE
DETERMINATION selecciona ALWAYS AT TASK START y
100%T/BASELINE (AUTOZERO); si se necesita tara
antes de cada muestra y selecciona ALWAYS BEFORE
NEXT MEASUREMENT y 100%T/BASELINE (AUTOZERO).
 EXPIRE CORRECTIONS: No modifica nada.

 En la pestaña SAMPLE INFO ingresa el

número de muestras a analizar en
SAMPLES y fija las opciones que se indican
a continuación:

 SAMPLE ID: Da un nombre a las muestras; recuerde

que no se pueden repetir nombres.
 DESCRIPTION: No es necesario.
 TYPE: Selecciona de la lista desplegable qué tipo de
muestra se va a analizar: las opciones son BLANK,
CONTROL, SAMPLE o STANDARD; Que para las
muestras que se van a analizar sería SAMPLE
 CONCENTRATION: No es necesario.

 Coloca dos celdas con el blanco de

reactivos, uno en cada porta muestras;
cierra la compuerta y selecciona START
para iniciar la lectura de las muestras.

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 Selecciona ACEPTAR cuando aparezca el aviso que se

muestra a continuación, para TARAR.

 Al momento en que aparezca el aviso que se muestra a

continuación, no selecciona aceptar ni cancelar solo
retirar el blanco de reactivos ubicado en el porta
muestras de la parte de adelante y deja el que se
encuentra atrás.

 . Coloca la muestra a analizar en el porta muestras de

adelante, cierra la compuerta y selecciona ACEPTAR.

 Espera a que
aparezca el siguiente
aviso y abra la
compuerta para
quitar la muestra ya
leída, coloca la
siguiente muestra y selecciona ACEPTAR.

 Continua de la misma manera que en el numeral 11

con todas las muestras y selecciona ACEPTAR cuando

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aparezca el aviso que se muestra a continuación:

Si durante el transcurso del ensayo se quiere agregar otra

muestra para que vuelva a leer la muestra anterior, hacerlo
lo que se indica a continuación:

 No cerrar el método sobre el que se está trabajando.

 No seleccionar ACEPTAR en el momento que aparece el
aviso para colocar la otra muestra, se selecciona
CANCELAR.

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 Selecciona SAMPLE INFO, selecciona la muestra

siguiente a la que queremos volver a leer, presiona

INSERT para que aparezca una nueva muestra

 Nombra la nueva muestra de tal manera que

identifiquen que es una nueva lectura de la anterior.
Ejemplo: Muestra Anterior: M2; Nueva Muestra: M2.1

 Selecciona START y continúa la lectura normalmente

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 Si se quiere guardar los resultados del análisis que se

realizó, ingresar a FILE, seleccionar SAVE RESULTS y AS
NEW TASK o TO TASK. Nombra el nuevo archivo con el
número de muestra o según corresponda

 No guarda sobre el método al momento de cerrar la

ventana, ya que esto puede dañar la curva de
calibración. En cuanto aparezca el aviso que se
muestra a continuación, selecciona NO.

 Imprima los resultados, selecciona la pestaña OUTPUT,

en REPORT TEMPLATE escoja DEFAULT-QUANT (REV. 1)
y luego elija PREVIEW; se abrirá un documento en PDF
del reporte para que se pueda imprimir.

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 Apagar las lámparas

 El apagado de las lámparas se realiza para evitar el

gasto inútil de las mismas

 Verifica que no queden celdas en los porta muestras

del espectrofotómetro y en caso afirmativo las saca.
 En la carpeta de METHODS selecciona el método
nombrado como: APAGAR LAMPARAS

 Selecciona START y ACEPTAR en cuanto salgan los

avisos que se muestran a continuación.

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 Cierra el método y selecciona NO al momento en que aparezca el

siguiente aviso:

 . Verifica visualmente que las lámparas se apagaron.

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DATOS EXPERIMENTALES:

Tabla 1. Que muestra la preparación de la curva de estandarización de

K2Cr2O7 a las concentraciones de: 25, 50 y 75 mg/L en H 2SO4 0.2N, a
partir de una solución “madre” de K2Cr2O7. Leídas a una ʎmáx= 160.5 nm,
en un EQUIPO LAMBDA 25 UV/Vis Spectrometer. Modelo PERKIN ELMER.
Con el Software Lambda 25 en UV winLab.

C1V1 = C2V2

No. Sol´n madre de K2Cr2O7. Concentración

de disolución [mL] (mg/L)
1 2.5 25
2 5.0 50
3 7.5 75

Tabla 2. Que muestra los valores de ʎmáx obtenidos experimentales en la región del UV-Vis
con un cristal del Óxido de Holmio.

No.
de pico 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
ʎ ʎexp[nm] 289.0 296.0 342.0 370.0 430.0 458.0 466.0 472.0 551.0 657.0 669.0

Tabla 3. Que muestra los valores de ʎmáx obtenidos experimentales en la región del UV-Vis
con vapores de benceno

No.
de pico 1 2 3 4 5 6
ʎexp [nm] 240.5 245.8 250.0 255.6 261.8 267.8

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RESULTADOS:
Tabla 4. Que muestra los valores obtenidos experimentalmente de Absorbancia vs
Concentración, 25, 50 y 75 mg/L en H2SO4 0.2N, a partir de una solución “madre” de
K2Cr2O7, y a una ʎmáx= 160.5 nm. En un EQUIPO LAMBDA 25 UV/Vis Spectrometer.
Modelo PERKIN ELMER. Software Lambda 25 en UV winLab.

No. Concentración
de disolución (mg/L) Absorbancia
1 25 0.214
2 50 0.4189
3 75 0.6092

y = 0.0079x + 0.0188
r2 = 0.9995

Tabla 5 Que muestra el %error al comparar las ʎmáx teór vs ʎexp máx del espectro UV-Vis de la
curva de estandarización de K2Cr2O7, y a una ʎmáx= 360.5 nm. En un EQUIPO LAMBDA
25 UV/Vis Spectrometer. Modelo PERKIN ELMER. Software Lambda 25 en UV winLab.

No. ʎmáx teór ʎmáx exp Error

de disolución [nm] [nm] %
1 350 360.5 2.4

Tabla 6. Que muestra el %error al comparar las ʎmáx teór vs ʎexp máx del espectro UV-Vis del
cristal de Óxido de Holmio. En el EQUIPO: LAMBDA 25 UV/Vis Spectrometer. Modelo
PERKIN ELMER. Software Lambda 25 en UV winLab

No.
de pico 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
ʎmáx teór
[nm] 279.0 287.0 333.5 360.5 418.0 445.0 453.0 459.5 536.0 637.0 648.5
ʎmáx exp [nm]
289.0 296.0 342.0 372.0 430.0 458.0 466.0 472.0 551.0 657.0 669.0
% Error 3.58 3.13 2.54 3.19 2.87 2.92 2.86 2.72 2.79 3.13 3.13

%Errormáx prom = 3.13

Tabla 7. Que muestra el %error al comparar las ʎmáx teór vs ʎ máx exp del espectro UV-Vis de los
vapores de benceno. En el EQUIPO: LAMBDA 25 UV/Vis Spectrometer. Modelo PERKIN
ELMER. Software Lambda 25 en UV winLab.
No.
de pico 1 2 3 4 5 6
ʎmáx teór 237.0 242.2 247.8 253.6 259.6 266.8
ʎmáx exp 240.5 245.8 250.0 255.6 261.8 267.8
% Error 1.47 1.48 0.88 0.78 0.84 0.37

%Error máx prom = 0.97

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CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el fundamento de los métodos espectroscópicos de análisis?
R= Con un amplio grupo de métodos analíticos que se basan en las interacciones
de la radiación electromagnética con la materia. La radiación electromagnética es
un tipo de energía que toma varias formas, de las cuales las más fácilmente
reconocibles son la luz y el calor radiante.
2. ¿Qué se entiende por transición electrónica?

R= Es el cambio en el estado cuántico de un electrón, es decir se produce una

transición electrónica cuando se produce un cambio en alguno de los cuatro
números cuánticos que definen a un electrón.
3. ¿Cuáles son las transiciones electrónicas que se presentan en
compuestos orgánicos?

R= 1.- Transiciones σσ. Se presentan en todos los compuestos orgánicos. Son en

general de gran energía (UV de vacío) e intensidad
4. ¿Qué tipo de compuestos se pueden por esta técnica?

R= Orgánicos
5. De 2 ejemplos de compuestos que absorban en la región UV-Vis
Proporcione formula desarrollada R=

6. Describa brevemente ¿Cuál es el objetivo de la practica?

R= Saber cómo operar el espectrofotómetro, así como las partes que lo conforman
y el programa que se debe de ocupar para poder operar de forma correcta el
equipo.
7. Mencione ¿Cuáles son las partes que constituyen un espectrofotómetro
UV-Vis?

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8. Explique cuál es el propósito de verificar los equipos antes de realizar

cualquier tipo de análisis instrumental
R= Para minimizar los errores en las mediciones, así como encender de forma
correcta el equipo, ya que un mínimo error puede ser fatal para la medición de
cualquier tipo y/o se puede descomponer el aparato
9. ¿Qué se entiende por barrido espectral?

R= Es la variación de la longitud de onda., necesario para la búsqueda de una

max donde el analito absorbe más luz. Límite de detección: se define como la
concentración del analito que da una señal significativamente diferente de la señal
del blanco,
10. ¿Qué información analítica proporcionan los resultados de uno
espectrograma?

R= Resulta una gráfica que representa la energía del contenido frecuencial de la

señal según va variando ésta a lo largo del tiempo.
11. ¿En qué tipo de industrias se puede aplicar la técnica Uv-Vis?

R= En la industria metalúrgica (Determinación de metales en compuestos de

coordinación), en la rama farmacéutica (Seguimiento de la cinética de procesos
químicos y bioquímicos), en la rama eléctrica (Análisis de semiconductores).

CONCLUSIONES
La lámpara de deuterio se ocupa para la zona UV y pudimos
observar unos puntos verdes. Es necesario un blanco para las
calibraciones y este caso fue el agua destilada.
Las celdas cuentan con un lado esmerilado donde se debe tomar
para no afectar el traspaso de la luz. Dependiendo la zona a manejar
se prenden las dos lámparas o solo una.
Las rutinas de diagnóstico permiten conocer si los equipos se
encuentran calibrados o no, ya que al tener una mala calibración se
puede caer en obtener datos analíticos erróneos.
De igual forma no se puede manejar un espectrómetro UV-VIS si no
se conocen sus partes y que tipo de lámpara se ocupa en cada zona,
ya que comúnmente la lámpara de deuterio es utilizada es la zona
UV. La curva de calibración que se hizo con las soluciones de
K2Cr2O7 nos permiten conocer si dicho equipo sigue la ley de
Lambert-Beer, como se puedo observar a una mayor concentración
se tiene una mayor absorbancia

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