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Morfología nivel celular

1º Grado en Ingeniería Biomédica

Escuela Técnica Superior de Ingeniería Industrial

Universidad Politécnica de Valencia

Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
 Tema 1. Introducción a la biología celular

La ingeniería biomédica aplica los principios de la ingeniería a las ciencias de la vida. Combina los
criterios de diseño en ingeniería y las herramientas de análisis provenientes de las matemáticas, la
física y la química a la resolución de problemas en medicina, biología, etc.
Se entiende por biología la ciencia que tiene como objeto de estudio a los seres vivos y, más
específicamente, su origen, su evolución y sus propiedades: nutrición, morfogénesis, reproducción,
etc.

Según Rudolph Carl Virchow, todas las enfermedades son alteraciones a nivel celular, para tratar la
enfermedad, debemos entender su causa y para comprender la causa, debemos comprender las
alteraciones que ocurren a nivel de las células individuales y moléculas.
Las células presentan diferentes formas debido a que cada una de ellas realiza diferentes funciones.

Historia de la biología
Las fechas más importantes de la historia biológica son:

1590 Se inventa el microscopio

1663 Robert Hooke describe por primera vez la célula
1838 Se descubre que todos los organismos vivos están compuestos por células
1953 Se propone la estructura en doble hélice del ADN

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 Los seres vivos

Teoría celular
1. Todos los organismos son células o están formados por células. La célula es la unidad
estructural de la materia viva.
2. Las funciones vitales de los organismos ocurren dentro, o en el entorno inmediato, de las
células. La célula es la unidad fisiológica de la vida.
3. Todas las células proceden de células preexistentes, por división de éstas. Es la unidad de
origen de todos los seres vivos.
4. Cada célula contiene toda la información hereditaria necesaria para el control de su propio
ciclo y del desarrollo y el funcionamiento de un organismo de su especia, así como para la
transmisión de esa información a la siguiente generación celular. La célula es la unidad
genética de vida.

Termodinámica de la vida

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 Célula procariota
Son las primeras células en aparecer sobre la Tierra. Dividiéndose en arqueobacterias (extremófilas)
y eubacterias. Son células muy pequeñas y poseen una membrana recubierta de una pared celular
de composición variable, en algunos casos aparece una cápsula externa.
En el citoplasma aparecen dos regiones, el nucleoide (cromosoma bacteriano con material
genético) y los ribosomas.
Presentan unas invaginaciones en la membrana plásmatica denominadas mesosomas cuya función
es contener algunas enzimas que intervienen en procesos de respiración y división. Además, tienen
flagelo (locomoción), pilis (intercambio adn) y fimbrias (adhesión a sustratos).
Tienen una gran variedad morfológica.

Célula eucariota
Son mucho más complejas que las procariotas tanto estructural como funcionalmente. Tienen una
membrana plasmática y ribosomas, pero, además, tienen núcleo, orgánulos citoplasmáticos y
citoesqueleto.
La presencia de orgánulos citoplasmáticos provoca una compartimentación, originando espacios
concretos dentro del citoplasma rodeados de membrana, en ellos tienen lugar actividades
metabólicas concretas desarrollo de diferentes funciones de manera simultánea.
1. Es capaz de retener moléculas específicas y desarrollar reacciones de manera ordenada
2. Las membranas de los orgánulos permiten el intercambio
3. Las funciones específicas se realizan en áreas específicas del citoplasma
4. Los procesos incompatibles pueden ocurrir simultáneamente dentro de la misma célula
Existen dos tipos, la animal y la vegetal. Ambas presentan mitocondrias, lisosomas, peroxisomas,
núcleo, retículo endoplasmático, aparato de Golgi y citoesqueleto. En cambio, las células animales
tienen como exclusivo el centrosoma y las vegetales los cloroplastos, la pared celular, la vacuola
central y los plasmodesmos.

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 Ribosomas: Orgánulos sintetizadores de proteínas
Peroxisoma: Oxidación de ácidos grasos
Citoesqueleto: Soporte estructural de las células, facilita el movimiento de orgánulos
Lisosoma: Degrada los restos intracelulares
Vesícula de transporte: Transporta lípidos y proteínas entre el RE, aparato de Golgi y
membrana plasmática
Aparto de Golgi: Procesa, empaqueta y distribuye proteínas a otros orgánulos para su
exportación
Retículo endoplasmático:
o Liso: Lugar de síntesis de lípidos y metabolismo de fármacos
o Rugoso: Síntesis de proteínas
Nucleolo: Síntesis de ARN ribosómico
Núcleo: Contiene los genes (Cromatina)
Mitocondria: Oxida combustible para producir ATP
Membrana plasmática: Separa la célula de su entorno, regula el movimiento de materiales
hacia dentro y fuera de la célula
Envoltura nuclear: Segrega la cromatina (ADN+ proteína) del citoplasma

Diferencias

Procariotas Eucariotas
Protozoos, hongos, animales y
Organismos Bacterias
vegetales
Tamaño 1-100 µm 10-100 µm
Núcleo Cuerpo nuclear Núcleo real con envoltura

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 Circular (condensado en el Linear(cromosomas) con
ADN
nucleoide) proteínas histónicas
Ribosomas 70S 80S
Estructurado con membranas
Estructura citoplasmática Pocas
y un citoesqueleto
Cilios y flagelos hechos de Cilios y flagelos hechos de
Movimiento celular
flagelina tubulina
Mitocondrias 0 1-100
Cloroplastos 0 Presentes en algas y plantas
Células aisladas, colonias,
Organización Células aisladas organismos multicelulares con
células especializadas
División celular Fisión binaria (división simple) Mitosis y meiosis

Gestión de la información

Se pasa de una secuencia de nucleótidos de ADN a una secuencia de aminoácidos de una proteína,
diferenciándose entre:

Replicación La información genética debe reproducirse exactamente cada vez que la

célula de divide. La replicación es el proceso por el que las moléculas de ADN se copian a si
misma en el núcleo para que a partir de una cadena de ADN se obtengan dos similares.
Carácter semiconservador (Cada hebra sirve como molde para la síntesis de una nueva
cadena, produciendo dos nuevas moléculas de ADN, cada una con una de las hebras viejas y
una nueva hebra hija) bidireccional y semidiscontinuo.

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 Transcripción Formación de una molécula de ARN a partir de la información genética
contenida en un segmento de ADN. Da lugar a una copia de ARN con secuencia
complementaria y antiparalela, a partir de una secuencia molde en una de las hebras del
ADN. Se regula el principio y el fin de los segmentos trascritos

Traducción Proceso por el cual la información codificada en el ARN mensajero dirige la

adición de aminoácidos durante la síntesis proteica. Tiene lugar en los ribosomas en el
citoplasma de la célula, donde se lee el ARN se traduce en la formación de cadenas de
aminoácidos que generan la proteína sintetizada.

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 Tema 2. Técnicas de observación

La microscopía es el estudio detallado de células, tejidos y órganos mediante el uso del

microscopio. Su función es la identificación de células, tejidos y órganos indicados o enfocados y la
descripción de las características histológicas que permitió identificarlo.

Microscopio óptico
Componentes

Fuente de iluminación: luz (bombilla)

Elementos ópticos (lentes):
o Condensadora: Recoge y produce un
cono de luz que se transmite a través
de la muestra; no produce aumentos,
pero mejora la calidad de la imagen
o Objetivo: Aumenta y proyecta la
imagen en dirección a la lente ocular
o Ocular: Aumenta más la imagen y la
proyecta en la retina o un instrumento
de captación: cámara de vídeo, película
fotográfica, etc.
Elementos mecánicos

Conceptos

Poder de resolución: Capacidad que tiene un sistema óptico de aislar dos puntos que se
encuentran muy próximos entre sí, de manera que se puedan ver individualizados uno del
otro. Es inverso al límite de resolución.

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 Poder de amplificación: Incremento del tamaño aparente de un objeto por aumento de su
imagen en la retina. Se calcula multiplicando la capacidad de amplificación del lente objetivo
que se esté usando por la capacidad de amplificación de la lente ocular.

Bases físicas

Límite de resolución (d): Distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que
puedan ser discriminados como tales, es decir, que todavía puede distinguirse como dos
formas separadas. Menor límite de resolución implica un mayor poder o capacidad de
resolución, cuanto más pequeña sea esa distancia, mayor capacidad tendrá el microscopio.

o Longitudes de onda:

Poder resolutivo del microscopio: Capacidad del instrumento para dar imágenes distintas de
dos puntos situados muy cerca el uno del otro (1/LR)

El ángulo será mayor cuando las lentes estén muy cerca de la muestra. Da más resolución el color
violeta porque tiene menor longitud de onda

Tipos
Si modificamos la fuente emisora de luz
Microscopio de fluorescencia
Utiliza la luz ultravioleta.

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 Se utiliza para detectar sustancias marcadas con fluorocromos. Además, permite determinar la
distribución de una sola especie de molécula, su cantidad y ubicación en el interior de la célula. La
fluorescencia es un fenómeno de luminiscencia de vida corta.

Alta sensibilidad
Sencillez de implementación
Sondas fluorescentes y fluoróforos sofisticados
Fluoróforos que pueden acumularse en compartimentos celulares, condiciones de pH o
gradientes iónicos.
Anticuerpos marcables mediante fluoróforos
Proteínas fluorescentes:
o Endógenas: NADH/FAD (producción ATP), proteínas estructurales
(colageno/elastina), aminoácidos (triptófano y tirosina)
o Exógenas: tras modificación genética

La limitación de este tipo de microscopía es el grosor de la muestra. El haz de excitación ilumina

uniformemente un amplio campo de la muestra. Si la muestra es gruesa, la fluorescencia se excitará
en el plano focal, pero también en los planos por encima y por debajo del foco. Parte de esta
fluorescencia se grabará en el detector y dará como resultado una imagen de aspecto desenfocado.
Microscopio confocal
Utiliza un colimador de orificio limitante para eliminar la luz desenfocada o reflejada de zonas fuera
del plano focal.

Imágenes de mayor nitidez y contraste, mayor resolución vertical y horizontal. Posibilidad de

obtener secciones de la muestra, lo que permite su estudio tridimensional.

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 Una muestra gruesa se puede escanear ópticamente en tres dimensiones y las imágenes se pueden
procesar para producir secciones transversales a lo largo del plano de interés, composiciones
tridimensionales y animaciones.
Si modificamos cómo incide la luz sobre el espécimen
Microscopio de campo claro
Toda la luz llega al condensador
Microscopio de contraste de fases
Cono hueco de luz estrecho con desfase en las longitudes de onda
Microscopio interferencial
2 rayos luminosos con distinta trayectoria e índice de refracción
Microscopio de campo oscuro
Rayos oblícuos

Adaptación de materiales para su observación

Fijación
Impide la autolisis o descomposición debida a microorganismos. Conserva la composición
estructural y molecular de la muestra. Agentes fijadores: químicos (formol, etanol), físicos
(congelación, flameado). Un buen fijador debe impedir rápidamente los procesos autolíticos, tener
un alto poder de penetración, fácil manipulación, conferir dureza no excesiva y ser fácil de
conseguir y económico.
Un paso de la fijación se conoce como lavado de la muestra fijada, donde se lava la muestra
biológica con agua corriente a fin de retirar el fijador para evitar el excesivo endurecimiento y
facilitar seccionar en láminas delgadas.

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 Inclusión
Proporciona consistencia para facilitar el corte en secciones finas. Se sustituye el agua (componente
mayoritario de células y tejidas), por parafina (sólida a temperatura ambiente y líquida a 60ºC)

Esta sustitución se hace de forma progresiva:

Agua Etanol Xileno Parafina 60ºC Enfriar a temperatura ambiente
Como medio de inclusión, también se utilizan resinas polimerizables.
Se deshidrata con etanol, se aclara con xileno y se produce la imbibición con la parafina, acabado
esto, las muestras están completamente impregnadas en esa cera líquida. Se procede a la
construcción de un bloque de parafina que contendrá la muestra en su interior
Microtomía
Se utilizan los microtomos1(de deslizamiento o rotatorio) obteniéndose cortes de
aproximadamente 5-10 micrometros.
Los tejidos deben ser cortados en finas secciones que serán depositadas sobre la superficie de un
portaobjetos. El grosor dependerá del tipo de microtomo.
Coloración
La coloración o tinción es un proceso que consiste en la aplicación de una sustancia colorante a
una célula o tejido, a fin de aportarle color para destacar y contrastar o distinguir los componentes
estructurales de las células o tejidos.

Colorante: Sustancia con tinción propia, capaz de ceder color a las células y tejidos dado a su
afinidad por sus componentes. Permiten estudiar células vivas.
Las células sin teñir tienen un 70% de agua y en su mayoría son transparentes, por ello se utiliza
esta técnica, para mejorar el contraste en la imagen microscópica. Permite obtener información
sobre la naturaleza de los componentes celulares y su localización. El color de una tinción se
obtiene de un elemento cromógeno que interacciona con el componente a observar.
Se realiza la desparafinación: parafina xileno etanol (concentraciones decrecientes) agua

1
Dispositivo mecánico que permite la elaboración de cortes finos de muestras para su observación al microscopio.

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 Se hidratan los cortes de forma progresiva

Artefactos de las preparaciones histológicas Serie de alteraciones que pueden observarse en los
cortes histológicos, ocasionados por anomalías en uno o más de los diferentes pasos de la técnica
histológica y que pueden dificultar o incluso imposibilitar la identificación de tejidos y órganos

Afinidad molecular
Ácido-base
Por afinidad química el colorante ácido se une a una estructura básica. Los componentes acidófilos
son aquellos que tienen afinidad por los colorantes ácidos, por ejemplo, el citoplasma; los basófilos
son aquellos que tienen afinidad por los colorantes básicos, por ejemplo, el núcleo.
Colorantes:

Ácidos: eosina, fucsina ácida (tiñen estructuras básicas)

Básicos: hematoxilina, azul de toluidina (tiñen estructuras ácidas)

Tinciones
Hematoxilina-eosina
Es posiblemente la más utilizada en diagnóstico clínico. Utiliza una mezcla de hematoxilina, que tiñe
los núcleos de azul (estructura basófila, carácter ácido) , y eosina, que tiñe los citoplasmas de rosa
(estructura acidófila, carácter básico).

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 Reticulina
Permite visualizar de color marrón oscuro las fibras de colágeno III. La tinción contiene sales de Ag+
que se unen a los residuos hidrocarbonados de dichas fibras dándole un aspecto característico.

Azul alcián
Tinción que contiene cobre, se utiliza mucho para teñir mucopolisacáridos2 entre otras moléculas.

Tricrómico de Masson
Se utiliza sobre todo para identificar células rodeadas de tejido conectivo. La solución de tinción
contiene fucsina ácida, que tiñe el citoplasma de rojo, azul de anilina que tiñe el colágeno de azul y
hematoxilina que tiñe los núcleos de azul oscuro.

2
Cadenas largas de moléculas de azúcar que se encuentran a lo largo de todo el cuerpo, a menudo en las mucosidades
y en el líquido alrededor de las articulaciones.

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 Microscopio electrónico

Preparación de muestras
Fijación Gluteraldehido + tetraóxido de
osmio
Deshidratación en alcoholes o acetonas
de gradación creciente
Inclusión Resinas polimerizables (epon,

Ultramicrotomía se obtienen cortes

ultrafinos (50nm de espesor; 20.000 en
1mm). También se pueden obtener cortes
semifinos (1µm) para ser observados al
microscopio óptico (se suelen teñir con azul
de toluidina)
Tinción acetato de uranilo + citrato de
plomo
Tipos

Microscopio electrónico de transmisión

o La criofractura es una técnica utilizada en M.E que consiste en la congelación de
muestras biológicas con nitrógeno líquido, seguido de un corte o fractura y el
sombreado metálico o recubrimiento con carbono de la superficie de la muestra.
Luego se procede a la eliminación del tejido biológico subyacente al sombreado y la
observación de esta réplica de la muestra mediante el uso de un microscopio
electrónico de transmisión.

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 Se realizan 4 pasos para la realización de una réplica por criofactura:
1. Congelación rápida: se logra sumergiéndolo en nitrógeno líquido
2. Fractura de la muestra: se lleva a cabo en condiciones de vacío, bajo una cuchilla de
diamante o romperla en un dispositivo de bisagra
3. Fijación (de platino-carbono): se procede a evaporar una fina capa de carbono-platino sobre
la muestra.
4. Limpieza de la replica: posteriormente a la fijación, la muestra se lleva a presión atmosférica
y se le deja calentar a temperatura ambiente. El material biológico restante en la replica es
eliminado mediante el empleo de una solución de ácido crómico, hipoclorito de sodio y
otros agentes limpiadores.

Microscopía electrónica de barrido (SEM)

Un haz de electrones se hace incidir sobre una muestra gruesa, opaca a los electrones. A
diferencia del TEM, el haz de electrones no atraviesa la muestra, sino que choca con la muestra
y se focaliza sobre la superficie de la misma, describiendo un conjunto de líneas paralelas. La
corriente electrónica emitida por la muestra se recoge y amplifica.

Métodos físicos de separación de células

Tejidos con diferentes tipos celulares

Células con diferente funcionalidad / actividad biológica
Subpoblaciones celulares con diferentes marcadores moleculares
Alternativa a la clonación: + rápidos, + rendimiento (- pureza)
Los más empleados explotan diferencias en: tamaño celular, densidad, carga superficial, dispersión
de la luz, emisión de fluorescencia.
Citometría de flujo
Es una técnica de análisis celular multiparamétrico cuyo fundamento se basa en hacer pasar una
suspensión de partículas (generalmente células) alineadas y de una en una por delante de un haz de
láser focalizado

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 Es capaz de medir los componentes/propiedades de las células e incluso orgánulos celulares que
fluyen en una suspensión celular. Una variación muy interesante es el sorting, proceso mediante el
cual el citómetro permite separar las células en función de sus características.
En conclusión, mide las características celulares individuales, en las células observadas de una en
una.
Lo más habitual es marcas las células con fluorescencia. Por ejemplo, mediante
inmunofluorescencia, hacemos una reacción entre un anticuerpo unido a un fluoróforo, que se
unirá a las células que presenten el antígeno que reconoce.

Tras excitar con el láser, emitirán fluorescencia las células en que haya habido unión
antígeno/anticuerpo marcado.
Además de contabilizar las células positivas para la unión, cuantifica la intensidad de la
fluorescencia en cada célula.
También en todas las células, expresen o no la molécula diana, reconocerá el tamaño:
informa del grado de anisocitosis3 de las células de la muestra

Fraccionamiento de componentes subcelulares

La lisis (rotura) celular se suele realizar por: homogeneizador mecánico de tejidos, sonicación,
cavitación, soluciones hipotónicas. La separación de los componentes subcelulares se realiza
generalmente por centrifugación.

Tema 3. Membrana celular

Es una fina capa flexible que la separa del medio externo impidiendo la salida del contenido celular,
pero permitiendo el intercambio selectivo y regulado de sustancias que entran o salen. Además,
permite recibir información del exterior. Formada por material celular organizado en forma de
lámina continua de poco grosor que se extiende por toda la superficie de la célula.
Continua y Heterogénea
Estructura

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 La estructura de la membrana se ajusta al modelo del mosaico fluido que describe cómo es y cómo
funciona la membrana celular. Es como un mosaico fluido en el que la bicapa lipídica es la base o
soporte y las proteínas están incorporadas o asociadas a ella, interactuando unas con otras y con
los lípidos. Estas moléculas están en constante movimiento en dos dimensiones, de manera fluida.
Según este modelo, son como un mosaico plano constituido por una matriz, la bicapa lipídica, con
las zonas polares de los lípidos anfipáticos4 a ambos lados de la membrana orientadas hacia el agua,
y sus zonas hidrófobas (cadenas hidrocarbonadas) en la parte interna. También existen gran
cantidad de proteínas que tienen diversas funciones.
Este mosaico es fluido porque tanto los lípidos como las proteínas gozan de una gran libertad de
movimiento, siempre dentro de la bicapa que, a pesar de su fluidez, mantiene su integridad
estructural. Además, es asimétrica, es decir, sus dos caras (extra e intracelular) son distintas.

Organización química y molécular

Lípidos (50% masa)
Los principales tipos de lípidos que forman la membrana son: los
fosfolípidos, el colesterol5 y los glucolípidos (solo se presentan en la
capa externa, donde junto con la fracción glucídica de las
glucoproteínas, constituye el glucocálix).
Existen asimetrías entre las dos capas y dentro de la misma capa,
además de variar el grosor de la bicapa.

4
Aquellas moléculas que poseen un extremo hidrofílico, es decir, que es soluble en agua, y otro que es hidrófobo, lo
cual significa que rechaza el agua
5
Se sitúa entre los fosfolípidos

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 Las colas de ácidos grasos con insaturaciones son más cortas (bicapa más fina). Pueden aparecer
s en colesterol, glucolípidos y
proteínas, cuya utilidad es la reserva de colesterol y la transducción de señales.
Los lípidos son anfipáticos, por ello cuando se encuentran en un medio acuoso se disponen
espontáneamente formando una bicapa que tiende a cerrarse sobre sí misma. De este modo la
membrana plasmática define un espacio interior que es el interior celular y uno exterior, el espacio
extracelular. Es esta bicapa lipídica la que constituye la estructura básica de la membrana y sirve de
soporte para el resto de las moléculas de la membrana.
Los lípidos tienen un comportamiento fluido y pueden moverse por:

Difusión lateral Es el movimiento fundamental de la fluidez de la bicapa, depende de

varios factores:
o El número de ácidos grasos con dobles enlaces o insaturaciones, a mayor número de
dobles enlaces mayor fluidez pues impiden las interacciones entre las cadenas
hidrocarbonadas y su fuerte empaquetamiento, que disminuirá la fluidez.

o La presencia de colesterol: interacciona con las cadenas hidrocarbonadas y reduce la

fluidez al interaccionar con las colas hidrófobas de los fosfolípidos. Pero al mismo
tiempo impide que las coles se junten entre sí, impidiendo una gran rigidez; por
tanto, el colesterol incrementa la estabilidad mecánica de las membranas.

o La temperatura: cuanto mayor es, mayor fluidez adquiere la membrana

Rotación de los lípidos y flexión de las cadenas hidrocarbonadas

Cambio de capa o movimiento flip-flop: es muy poco frecuente y suele estar mediado por
unas enzimas llamadas flipasas que son las que contribuyen a mantener una distribución
asimétrica de los lípidos a uno y a otro lado de la bicapa.

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 Proteínas (50% masa)
Suelen tener un carácter antipático, lo que les permite
integrarse más o menos en diferentes zonas de la
bicapa lipídica. Las proteínas son las que confieren a la
membrana funciones, como el intercambio de
sustancias, de forma que la membrana no es
únicamente una barrera pasiva entre el exterior y el
interior. Habrá, por tanto, una variedad enorme de
proteínas de membrana según las distintas especies y
los distintos tipos celulares.
Según su posición en la membrana se distinguen:

Proteínas integrales o intrínsecas: Tiene una gran parte de la molécula incluida en la bicapa.
Pueden atravesarla totalmente (proteínas transmembrana) o solo parcialmente. Son
moléculas anfipáticas: tienen una parte hidrófoba, que es la que está incluida en la bicapa y
otra parte hidrófila situada en el exterior de la bicapa. Dado que estas proteínas están
fuertemente unidas a los lípidos de la bicapa mediante enlaces hidrófobos, son difíciles de
separar de la membrana. (la mayoría de las proteínas son de este tipo)

Proteínas periféricas o extrínsecas: son las que se disponen en la cara extracelular o en la

intracelular; generalmente se unen mediante enlaces no covalentes a proteínas
transmembrana o a lípidos de la bicapa o a los glúcidos de la membrana, y por consiguiente
se pueden separar con facilidad. Muchas proteínas del interior celular, del citoplasma, no
están libres, sino asociadas a la cara citoplasmática de la membrana.

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 Las proteínas de membrana también tienen un comportamiento fluido y pueden moverse por
difusión lateral en la bicapa y por rotación, movilidad muy importante para que las proteínas se
distribuyan por toda la membrana, interaccionando entre sí, y ejerzan sus funciones. Sin embargo,
no pueden sufrir movimientos de flip-flop. Una vez que una proteína es sintetizada e incorporada a
la membrana no es posible que cambie de orientación.
Esta posición fija de las proteínas en unas de las caras es fundamental en la asimetría de la
membrana y su funcionalidad.

Glúcidos (<1% masa)

Son los oligosacáridos que forman parte de los glucolípidos o las glucoproteínas de la membrana, y
que forman el glucocálix hacia la cara extracelular de la membrana plasmática, cuyas funciones son:

Protección de la membrana, de sus proteínas, etc, contra sustancias químicas.

Los glúcidos absorben mucha agua creando una superficie viscosa que también sirve como
protección mecánica y, además, facilita el desplazamiento de algunas células móviles, como
las sanguíneas.
Reconocimiento o identificación celular y adhesión celular en organismos pluricelulares.
Sus glúcidos actúan como antígenos de superficie e inducen la producción de anticuerpos.
Actúa como receptores de distintos tipos de moléculas (hormonas), agentes patógenos
(virus) etc.

Diferenciaciones
Producen la heterogeneidad de la membrana. La superficie apical, que está orientada hacia la
superficie epitelial es distinta a la superficie basal, que se pone en contacto con las células
epiteliales vecinas.

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 Microvellosidades (función metabólica)
Son prolongaciones externas de la membrana plasmática
con forma digitiforme, sostenidas por haces de
filamentos de actina del citoesqueleto del interior
celular, que sirven para aumentar la superficie de
contacto celular; son muy abundantes en epitelios de
absorción (como el intestinal).
Interdigitaciones laterales (función mecánica y metabólica, estructura dinámica)
Expansiones de la membrana (entrantes y salientes en la zona lateral de las células epiteliales) que
se forman paralelas con otras de la célula vecina. Su función es reforzar la unión entre las células
epiteliales, aumentan la superficie de contacto y permite el intercambio de sustancias.
Invaginaciones basales (función metabólica)
Entrantes más o menos ramificados que se forman en la
zona basal de las células epiteliales. Su función es el
aumento de la superficie celular para incrementar el
transporte de agua y electrolitos a través de la membrana.

Clasificación funcional de las uniones celulares

Uniones ocluyentes/ Uniones estrechas

Forman un cinturón reticular que rodea toda la célula en la parte
lateral superior, establecen una unión mecánica fuerte entre células
epiteliales vecinas. Impiden el intercambio de sustancias entre la
superficie apical y la basolateral

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 Uniones de anclaje
Su estructura general varía entre proteínas transmembrana de unión6 y de anclaje
intracelular7.
o Unión de filamentos de actina
Uniones adherentes (célula-célula)
Las cadherinas son las principales moléculas de adhesión intercelular, forman
homodímeros (efecto cremallera), necesitan Ca++ para realizar su función.

Uniones focales (célula- matriz extracelular)

Tipo de unión de anclaje entre una célula y la matriz extracelular, mediante
filamentos de actina. Las integrinas son las principales moléculas de adhesión
entre célula y matriz extracelular. Son muy numerosas y forman
heterodímeros. Su función es mantener la integridad de los tejidos.

6
Su dominio citoplasmático se une a una o más proteínas de anclaje intracelular/ su dominio extracelular se une con
moléculas de la matriz extracelular o con dominios extracelulares de proteínas de conexión de otras células.
7
Forman una placa en la cara citoplasmática de la membrana, que conecta el complejo de unión con filamentos de
actina o intermedios.

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 o Unión a filamentos intermedios
Desmosomas (célula-célula)

Hemidesmosomas (célula-matriz extracelular)

Uniones comunicantes
o Uniones gap
Están formadas por proteínas transmembrana, que forman canales acuosos
intercelulares (conexiones) que permiten el paso de iones y pequeñas moléculas
entre los citoplasmas de células adyacentes. Sirven para la comunicación directa
entre los citoplasmas de distintas células, lo que facilita su función coordinada.

Funciones
Las funciones principales de la membrana plasmática son:
Intercambio de información (mediante células emisoras de señales/ receptores de superficie)
Células emisoras de señales
Este tipo de células son: las paracrinas y autocrinas (distancia corta) y las neuronales (transmisión
sináptica, distancia larga). Las primeras se utilizan como mediador local.

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 Luego aparecen las endocrinas (distancia larga) y las células con señales de MP (distancia corta o
larga)

Las células emisoras tienen dos tipos de señalización:

Mediante moléculas segregadas

Mediante moléculas unidas a la membrana celular

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 Células receptoras de señales
Existen dos tipos de receptores:

De superficie celular

Intracelulares

Intercambio de sustancias

Permeabilidad
o Transporte activo
o Transporte pasivo
Difusión simple
Difusión facilitada
Citosis
o Exocitosis
o Endocitosis
Transporte pasivo
Difusión simple

Es el transporte a favor de gradiente debido a la difusión de

cualquiera de las moléculas que pueden atravesar
directamente la membrana plasmática, es decir, de cualquier
molécula hidrofóbica [o liposolubles; por ejemplo, los lípidos
(ej.: hormonas esteroides, fármacos liposolubles, etc)], o muy
pequeña, tanto las no polares, como las polares, pero sin carga
(es permeable a gases como el O2, CO2, al H2O, a moléculas
polares pequeñas como el etanol, etc). Es un mecanismo de
transporte no selectivo, no
directamente proporcional a la diferencia de
la molécula transportada a uno y otro lado de la membrana.
Se transportan a través de la fase lipídica
Difusión facilitada
Transporte a través de la fase proteica.
Las membranas de la célula también son permeables a diversas moléculas polares que atraviesan
con gran lentitud las bicapas lipídicas (iones, azúcares, aminoácidos, nucleótidos y muchos
metabolitos). Lo hacen a través de unas proteínas de membrana llamadas en general proteínas de
transporte. Son muy diversas y específicas para una clase particular de moléculas.

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 La alteración de alguna de estas moléculas produce enfermedades importantes, por ejemplo, la
cistinuria. Todas las que se conocen son proteínas transmembrana multipaso.
Existen dos tipos de proteínas transportadoras:

1. Proteínas de transporte (transportadores, permeasas, carriers): se unen al soluto, cambian

su conformación y lo transfieren a través de la membrana.

2. Proteínas canal: Forman poros hidrofílicos y no necesitan unirse al soluto (o solo muy
débilmente). A través de los canales se produce a una velocidad mucho mayor que a través
de los transportadores. Aunque al agua puede difundir a través de las bicapas lipídicas,
todas las células tienen proteínas canal específicas (canales de agua o acuaporinas) que
aumentan la permeabilidad de las membranas al agua.

Se realiza a través de les proteínas canal y de multitud de

transportadores. Transporta a través de la mp sin consumo
de energía, a favor de gradiente: fuerza impulsora basada
en la diferencia de concentración fuera-dentro (gradiente
de concentración), en la diferencia de carga (gradiente
eléctrico) o en las dos (gradiente electroquímico).
Los transportadores tienen especificidad por sus solutos en
diferente grado. El transporte pasivo mediado por receptor
presenta una cinética de saturación Se regula mediante
diversos factores.

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 Transporte activo
Transporte en contra de gradiente de concentración, eléctrico, o electroquímico, y, por tanto, con
aporte de energía. En este transporte intervienen unas proteínas transmembrana transportadoras

que transportan las moléculas desde el lugar de menor concentración al de mayor concentración
y/o carga.
Gracias a este mecanismo se consigue que las concentraciones intra y extracelulares de diversas
sustancias sean diferentes (por ejemplo, iones, creando un gradiente electroquímico). El transporte
activo es específico en cuanto a las moléculas que se transportan y su velocidad depende de los
transportadores.
A) transportadores acoplados (intercambiadores)
B) bombas de ATP
C) bombas de E lumínica

Citosis
Exocitosis
Se trata de la expulsión de partículas mediante vesiculación. Puede ser constitutiva, cuya función es
secretar productos al exterior y renovar la membrana plasmática o regulada (inducida) cuya
función es secretar gran cantidad de producto específico al exterior (acumulado en vesículas de
secreción)

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 Endocitosis
Se trata de la incorporación de partículas por vesiculación.

Fagocitosis endocitosis en la que se incorporan grandes partículas sólidas

(microorganismos, restos celulares, etc) que son rodeadas por expansiones de la membrana
llamadas pseudópodos. Una vez que se completa la captura esas partículas quedan incluidas
en una vesícula fagocítica o fagosoma. Este mecanismo es utilizado por microorganismos
para capturar a otros microorganismos, pero en animales pluricelulares sólo pueden
fagocitar ciertas células especiales: macrófagos y otros leucocitos que nos defienden de
microorganismos.
Los productos ingeridos son reconocidos por receptores en la membrana del macrófago.
Implica un recambio importante de la membrana plasmática (debe haber un equilibrio entre
pérdida y renovación de la membrana)

Pinocitosis endocitosis en la que se incorpora parte del medio extracelular al producirse

invaginaciones de la membrana de forma aleatoria, inespecífica. Las vasículas que se forman
son pequeñas, visibles solo al microscopio electrónico.

Medida por receptor es similar a la pinocitosis, pero en este caso la formación de las
invaginaciones no es aleatoria o indiscriminada, sino que las moléculas que van a ser
capturadas por la célula se unen antes a proteínas receptoras específicas de la membrana.

Transcitosis Permiten el paso de

macromoléculas desde un especio extracelular a
otro mediante la formación de vesículas.

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 Tema 4. Compartimentos celulares

Existen muchos compartimentos internos limitados por membrana (orgánulos) situados dentro de
un espacio general común a todos ellos (citosol o hialoplasma).
Cada orgánulo tiene un conjunto propio y característico de enzimas y otras moléculas, y realiza una
función específica en la célula.
Las proteínas confieren a cada compartimento sus propiedad estructurales y funcionales,
catalizando reacciones y transportando selectivamente moléculas.
Para comprender el funcionamiento de las células eucarióticas debemos saber:

Qué ocurre en cada uno de esos compartimentos

Cómo se mueven las moléculas de unos a otros
Cómo se forman y mantienen cada uno de ellos

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 Retículo endoplásmico
Forma parte de un sistema endomembranoso organizado en forma de estructura reticular de
túbulos ramificados y cisternas aplanadas.
La membrana del RE constituye más del 50% de la membrana de una célula animal. Contiene un
70% de proteínas, un 30% de lípidos, y un pequeño porcentaje de glúcidos.
Estructura

La membrana del RE tiene continuidad con la membrana externa de la envoltura nuclear.

Forman una lámina continua que delimita un único espacio interno, el lumen del RE (espacio
cisternal) que ocupa más del 10% del volumen celular total. Las regiones del RE revestidas con
ribosomas se denominan RE rugoso, las que son sin ribosomas RE liso. La fracción del REL del cual
emergen las vesículas de transporte al Aparato de Golgi se llama RE transicional.
Funciones

Síntesis de proteínas
La síntesis de las proteínas del citosol y del RE ocurre en un conjunto común de ribosomas
(polirribosomas). Los ribosomas se mantienen adheridos a la membrana del RER con la
ayuda de las riboforinas.

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 Fases de la síntesis de proteínas al RER:

A) Inicio en los ribosomas libres

B) Unión péptido señal-SRP
C) Acoplamiento al receptor de la
SRP
D) Translocación de la proteína al
interior
E) Reciclaje de SRP y del receptor de
SRP
Las proteínas que pueden entran al RER pueden ser solubles8 o transmembrana9
Síntesis de proteínas solubles

Síntesis de proteínas transmembrana

Monopaso- un dominio apolar. La síntesis continua tras la aparición de la señal hidrofóbica de
parada.

8
Quedan libres en la luz o lumen del RE
9
Quedan integradas en la membrana del RE, y pueden ser de paso único o múltiple

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 Variante del anterior: el péptido hidrofóbico de inicio de transferencia no es terminal y no se
elimina. Las proteínas tiene dos dominios transmembrana (multipaso, con más de un dominio
apolar)
A lo largo de la síntesis de la misma cadena peptídica pueden aparecer más péptidos señal,
repitiéndose el proceso. Así se sintetizan proteínas transmembrana multipaso.

Glicosilaciones o glucosilación
Es el proceso de adición de carbohidratos a una proteína o a un lípido. Para que puedan ser
transportadas a otros orgánulos, a la membrana plasmática o al exterior de la célula, las
proteínas deben ser convertidas en glucoproteínas. En la luz de las cisternas del RER se
añaden fragmentos de oligosacáridos a las proteínas mientras estas se están traduciendo.

Control de proteínas mal plegadas

Se exportan y se degradan. Una vez las proteínas se han sintetizado y glicosilado, tiene lugar
su plegamiento en el RE. Si están correctamente plegadas, se intenta re-glucosilarlas y
plegarlas de nuevo; si no hay plegamiento o el mecanismo anterior falla serán enviadas
fuera del RE para ser eliminadas.
La calnexina es una proteína chaperona10 que intenta retener a las proteínas mal plegadas
en el RE para que puedan plegarse de nuevo bien. Antes de abandonar el RE, se eliminan 3
residuos glucosa y 1 manosa del oligosacárido. La duración de este proceso permite la
detección de proteínas mal plegadas.
Las proteínas mal plegadas se degradan en el proteasoma, lisosoma o mediante
macroautofagia.

10
Ayudan al plegamiento de otras proteínas recién formadas en la síntesis.

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 Síntesis de lípidos
El REL sintetiza casi todos los tipos principales de lípidos, entre ellos los fosfolípidos y
colesterol necesarios para la producción de nuevas membranas. Es el sitio de producción de
lípidos para la mayoría de los orgánulos celulares, incluyendo al propio RE, el aparato del
Golgi, lisosomas, endosoma, vesículas de secreción, membrana plasmática, mitocondria y
peroxisomas.

Detoxificación
En los hepatocitos, el REL contiene enzimas que catalizan reacciones para la detoxificación
de drogas liposolubles y diversos compuestos tóxicos producidos por el metabolismo. Ej:
Citocromo P450.

Reserva de Ca2+
En la mayoría de las células, el Ca2+ se acumula en el REL. Una bomba de Ca2+ lo transporta
desde el citosol hasta el lumen del RE. Una alta concentración de proteínas que se unen al
Ca2+ facilita su acumulación. La liberación y captura de Ca2+ por el retículo sarcoplásmatico
desencadena la contracción y relajación, respectivamente, de las miofibrillas durante cada
contracción muscular.

Vía de transporte intracelular

El RE forma un compartimento separado dentro de la célula, desde el cuál las moléculas
pueden transportarse a distintas localizaciones sin entrar en contacto con el citosol. Las
proteínas residentes del RE contienen una señal de retención de cuatro aminoácidos en su
extremo C- terminal, que son responsables de retener la proteínas en el RE.

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 Aparato de Golgi
Es un orgánulo membranoso de las células
eucariotas generalmente situado cerca del
núcleo formado por un conjunto de sacos
aplanados o cisternas con forma de discos
curvados, y por vesículas asociadas; las
cisternas se disponen formando pilas,
denominadas dictiosomas. El citoplasma que
rodea al dictiosoma se denomina zona de
exclusion, ya que en el no aparecen
cloroplastos, mitocondrias o ribosomas y está
ocupado únicamente por RE. El aparato de
Golgi esta polarizado, lo que quiere decir que
en cada dictiosoma se diferencian dos caras:

- La cara cis o de formación: es la cara convexa

a la que llegan las pequeñas vesiculas de
transporte que se forman por gemación del RE (asi es como llegan lipidos y proteinas sintetizados
.

- maduración: es la cara concava, de la que

que se forman por gemación a partir de las cisternas situadas en esta cara del dictiosoma. Entre
ambas caras existen varias cisternas, cuyos bordes estan rodeados de numerosas vesiculas,
l estas vesiculas transportan compuestos de unas cisternas a otras en
direccion a la cara trans. Se forman por gemacion del borde de una cisterna y se fusionan con la
siguiente.

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 Los polipéptidos sintetizados en el RE y enviados a Golgi, deben modificarse, clasificarse y enviarse
con precisión al compartimento correcto.
Funciones
Modificación de proteínas y lípidos

empaquetamiento, distribución y
secreción de las proteínas y los
lípidos sintetizados en el RER y REL,
que pasan del RE a las cisternas de la
cara cis del aparato de Golgi
mediante las vesículas de transición.
Durante su paso por el aparato de
Golgi (de una cisterna a otra, a través
de vesículas de transporte), se
completa la glucosilación de las
proteínas y los lípidos iniciada en el
RE (se eliminan y se añaden nuevos
azúcares), y se forman así las
glucoproteínas y los glucolípidos
definitivos, que se empaquetan en
vesículas de secreción en la cara
trans de los dictiosomas.
En el aparato de Golgi tiene lugar la formación de los lisosomas primarios; otras vesículas viajan
hasta la membrana plasmática y se fusionan con ella, liberando su contenido al exterior (exocitosis),
lo que además sirve para reponer proteínas y lípidos de la membrana, y en general los fragmentos
de membrana que se pierden por endocitosis.

Glucosilaciones (oligosacáridos complejos): las proteínas glicosiladas son más resistentes a

las proteasas, la glicosilación es importante en la señalización celular
Sulfataciones : Las sulfotransferasas de las membranas de Golgi, permiten la sulfatación de
numerosos sustratos.
o Activación del sulfato por el ATP
o Transferencia del sulfato activado sobre las proteínas
Depende de un donante de sulfatos que se importa desde el citosol. Las sulfataciones
ocurren principalmente en la red trans-Golgi.

Fosforilación de manosas de proteínas que son enzimas lisosomiales, convirtiéndolas en

manosa-6-fosfato. Las identifica y marca su destino (endosoma), ocurre principalmente en
la red cis-Golgi.
Secreción de proteínas

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 Los lisosomas se forman por la fusión de vesículas lisosomiales-endosomas. Se produce un reciclaje
de membranas, incorporándose la membrana de la vesícula a la plasmática.

Formación de vesículas y transporte

Vesícula cubierta
Son aquellas vesículas que emergen de una determinada membrana celular y en su superficie
presentan una cubierta proteica característica.
Después de emerger del compartimento celular que la generó, la vesícula se elimina y permite que
su membrana interactúe directamente con la membrana con la que se debe fusionar.
Las células producen diferentes clases de vesículas cubiertas. Se considera que la cubierta cumple al
menos dos funciones:

Dar forma a la vesícula membranosa

Participar, directa o indirectamente, en la selección de las proteínas

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 Estructura de la clatrina
Está formada por tres cadenas pesadas y tres cadenas ligeras que forman el triskelion. Estos, unidos
a la membrana conforman una caja poliédrica que provoca la invaginación de la membrana. Esta
caja está regulada por las cadenas de clatrina: las pesadas le dan la base estructural mientras que
las ligeras regulan su formación y su rotura.
Transporte asociado a microtúbulos

Lisosoma
Los lisosomas son vesículas globulares, esféricas, rodeadas de membrana que contienen en su
interior un gran número de diferentes enzimas digestivos (que pueden hidrolizar las diversas
biomoléculas). Su membrana está recubierta internamente por una capa de glucoproteínas, que
impiden que las enzimas hidrolasas ataquen la propia membrana del lisosoma.
Están presentes en células eucariotas animales y vegetales,
aunque son más numerosos en las primeras. Se forman a partir
de evaginaciones de los sáculos de los dictiosomas del Ap. de
Golgi como lisosomas primarios.
Estos enzimas digestivos degradarían todas las moléculas y
estructuras de la célula de no haber sido encapsuladas
previamente por el aparato de Golgi, y de no actuar
preferentemente a pH ácido.
Características generales
Está formado por enzimas lisosomales (40 tipos diferentes de
hidrolasas ácidas) y por una membrana que contiene proteínas
transportadoras, de membrana altamente glucosiladas y
bombas H+.

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 Funciones Digestión intracelular

1. Endocitosis mediada por receptor

2. Fagocitosis
3. Auto fagocitosis (Autofagia)
a. Activación de moléculas señalizadoras
b. Vesículas de moléculas señalizadoras
c. Cierre de la doble membrana que forma el auto fagosoma
d. Digestión de la membrana interna y del contenido de la auto fagolisosoma
Peroxisoma
Son vesículas membranosas que contienen varias oxidasas relacionadas con la producción de
peróxido de hidrógeno, y una catalasa para la descomposición de H2O2 a oxígeno y agua.
Funciones
1. Reacciones oxidativas

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 2. -oxidación
Formación de Acetil CoA a partir de ácidos grasos
3. Participación en la síntesis de plasmalógenos (fosfolípidos más abundantes en las vainas de
mielina)

Mitocondria
Son orgánulos con doble membrana, que presentan formas variadas,
aunque frecuentemente alargados presentes en células eucariotas
animales y vegetales.
Características generales
1. Movilidad
2. Plasticidad
3. Número/célula: Su número varía según la demanda energética
de la célula.
4. Localización: Se asocian a microtúbulos.

a) mitocondrias b) microtúbulos
Estructura

Membrana externa: muy permeable ya

que posee unos grandes complejos
proteicos (porinas), que forman grandes
canales acuosos que permiten el paso

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 inespecífico de moléculas hasta del tamaño de pequeños polipéptidos.

Membrana interna :bastante impermeable que presenta repliegues interiores(denominados

crestas mitocondriales), generalmente perpendiculares al eje mayor de la mitocondria, que
incrementan la superficie membranosa y, por tanto, su actividad; esta membrana posee un
gran número de proteínas de membrana: permeasas para el transporte a través de la
membrana interna de biomoléculas; los complejos proteicos de la cadena respiratoria o
cadena transportadoras de electrones y gran número de complejos ATP-sintasa [complejo
proteico también llamado complejo F0F1, que es el sistema enzimático que sintetiza ATP
mediante la fosforilación oxidativa.

Espacio intermembrana o
intermembranoso: entre ambas
membranas con una concentración
elevada de protones (H+)

Matriz mitocondrial (espacio

interior): es un fluido acuoso en el
que hay muchas sustancias.

Composición química
La membrana externa es permeable a moléculas pequeñas, está formada por un 40% de lípidos
(fosfolípidos, en mayor proporción fosfatidilcolina y fosfatidileranolamina y poco colesterol) y un
60% de proteínas (porina proteína canal y enzimas metabolismo de lípidos).
El espacio intermembranoso es similar al citosol, pero contiene enzimas: adenilato cinasa (ATP +
AMP 2 ADP.
La membrana interna es impermeable a la mayoría de iones y moléculas pequeñas, está formada
por un 20% de lípidos (fosfolípidos, cardiolípidos y no tiene colesterol) y un 80% de proteínas:

Transportadores específicos: debido a su impermeabilidad necesita transportadores

específicos (transportadores de ADP/ATP, fosfato, piruvato, etc.)
Componentes de la cadena de transporte electrónico: Complejos I, II, III, IV y la ATP sintasa

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 La matriz contiene mitorribosomas, ARNt, enzimas relacionados con la actividad del ADN (expresión
génica, replicación), enzimas que participan en el
metabolismo oxidativo y el ADN mitocondrial:

1% del ADN celular

Doble cadena, circular y cerrada
Cadena H (rica en A y G) y cadena L (rica
en T y C)
Código genético distinto del universal
o 37 genes codifican: 13
polipéptidos, 22 ARNt y 2 ARNr
(12S y 16S)
o Presenta gran mutabilidad y no
tiene histonas

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 Funciones
Metabolismo oxidativo

Descarboxilación oxidativa: paso de piruvato

a acetil-CoA (en la matriz)
- oxidación de ácidos grasos a acetil-CoA
(en la matriz)
Ciclo de Krebs: diversas oxidaciones a partir
del acetil-CoA (en la matriz)
Fosforilación oxidativa (membrana
mitocondrial interna)
Cadena de transporte electrónico.

Formación de 32 a 34 ATP mediante fosforilación oxidativa.

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 Formación de precursores

Gluconeogénesis formación de glucosa (en el citosol) a partir de un precursor de la matriz

mitocondrial (ácido pirúvico)
Síntesis de ácidos grasos formación de ácidos grasos (en el citosol) a partir de un
precursor de la matriz mitocondrial (Acetil CoA)
Síntesis de aa no esenciales a partir de diversos metabolitos de la mitocondria
Ureogénesis (en mitocondrias hepáticas) formación de urea a partir de NH3
Síntesis de proteínas
Propias y ajenas
Participación en la apoptosis
Interrupción del transporte de electrones. Liberación de activadores de la caspasa

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 Tema 5. Citoesqueleto

El citoesqueleto es una red compleja de filamentos proteicos que se extiende por todo el
citoplasma. Su estructura es muy dinámica.
El citoesqueleto está involucrado en el:

Soporte estructural a la célula, mantiene la forma celular

Movimientos de las células, movilidad y división celular
Mantenimiento de la posición y movimiento de las estructuras intracelulares en el
citoplasma: transporte.
Los diferentes filamentos se coordinan para originar una estructura tridimensional común.

Componentes proteicos del citoesqueleto

Filamentos (polímeros) formados por múltiples monómeros proteicos.

Microtúbulos (25nm de diámetro)

Filamentos de actina o microfilamentos (7nm de diámetro)
Filamentos intermedios (10nm de diámetro)
Microtúbulos
Son cilindros huecos de longitud variable. Necesitan GPT para polimerizar, tienen uniones débiles.
1. Microtúbulos lábiles o citoplásmicos
Se observan tras la fijación del glutaraldehído (>4ºC), irradian desde los MTOC. Se localizan
en el citoplasma, cambian su forma y posición.
Ej: Transporte de orgánulos y vesículas
2. Microtúbulos estables
Quedan conservados con cualquier fijador. Forman parte de estructuras complejas:
centriolos, axonema de cilios y flagelos y de cilios inmóviles. No suelen cambiar de forma o
de posición.

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 Composición química
Citoquímica: Digestión con pepsina (contenido proteico), actividad ATPasa (enzimática)
Análisis químico: Unidad estructural: dímero de tubulina. Heterodímero de tubulina sitio de
sitio de unión a GTP (forma T) o a GDP (forma D).
Unión a alcaloides: La colchicina impide la polimerización y el taxol aumenta la estabilidad
impidiendo dinamismo mitótico.
Organización molecular

El alineamiento paralelo de los protofilamentos

da mayor estabilidad al centro del microtúbulo
y permite un mayor dinamismo en los
extremos.
La tubulina libre se encuentra principalmente
en forma T (T-tubulina).
Los mts son POLARES (extremo + y -) y crecen
por los dos extremos, pero se incorporan más
rápidamente por el extremo + (mayor afinidad
T-tubulina). Tras incorporarse al polímero, el
GTP se hidroliza y la forma T pasa a froma D (D-
tubulina).

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 Extremos más y menos
Situación A: Concentración alta de dímeros de tubulina.
El polímero está constituido por una mezcla de formas T y D.
En el extremo - incorporación de dímeros lenta pasan a D antes de una nueva incorporación.
En el extremo + incorporación de dímeros rápida las incorporaciones son más rápidas que el
paso a D.
Consecuencia: extremo constituido por formas D, extremo + constituido por formas T
Concentración crítica
Concentración de tubulina en el medio por debajo de la
cual un extremo del mt deja de crecer y comienza a
perder dímeros. La de D es mayor que la de T: la forma
D tiende al desensamblaje y la forma T al ensamblaje.
A una concentración intermedia de dímeros en el
medio (entre las dos concentraciones críticas) el mt
crecerá por el extremo + y decrecerá por el extremo -
Recambio rotatorio.
Recambio rotatorio
Situación B: Por debajo de la concentración crítica para el extremo.
El extremo deja de crecer. El extremo + continua creciendo ya que todavía no ha llegado a su
concentración crítica. La ausencia de crecimiento desestabiliza el extremo - , que comienza a perder
dímeros.
Recambio rotatorio: circunstancia por la que se incorporan dímeros en el extremo + y se pierden en
el -.

Inestabilidad dinámica

Catástrofe: Fase dinámica en que la hidrólisis del GTP es más rápida que la incorporación de
subunidades, se pierde la tubulina T en el extremo y el microtúbulo comienza a acortarse.
Recuperación: Fase dinámica en que es posible que se añadan suficientes subunidades T
para formar un extremo T y entonces el microtúbulo vuelve a crecer.

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 Estructuras formadas por microtúbulos estables
Centriolos
Cilindro hueco con estructura de 9 tripletes de mts. Cada triplete está unido a sus dos adyacentes
por puentes proteicos.
El centrosoma es un orgánulo cuya función es ser el principal centro organizador de microtúbulos
(MTOC) en células animales. Está formado por:

Diplosoma: pareja de centriolos dispuestos perpendicularmente

Matriz pericentriolar: suspensión densa con proteínas en la que se embebe el diplosoma
Áster: conjunto de mt radiales que emanan en todas direcciones desde la matriz

Cilios y flagelos
La diferencia entre ambos es la longitud, el número y la función.

Cilios: 10µm de longitud. Tiene movimiento coordinado de atrás a delante (golpe-recogida).

Su número es variable, son númerosos.
Su función es el desplazamiento sobre la superficie de las células epiteliales
Flagelos: 200µm de longitud. Movimiento de hélice. En humanos existe un solo flagelo,
tiene como función el desplazamiento celular (Espermatozoide)

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 Biopatología Embarazo ectópico (consecuencia de disfunción ciliar del oviducto)
Cilio primario o inmóvil
No tiene movimiento propio (sin dineína). Su axonema es diferente (92 + 0). Está presente en la
superficie apical de muchas células, capta señales extracelulares físicas y bioquímicas (función
sensitiva)
Cuerpo basal
Cilios móviles e inmóviles se forman a partir de un cuerpo basal que lo arraiga con fuerza a la
superficie celular. En el centro, un centriolo, con la misma estructura y forma de rueda de carro.
Es un centriolo modificado, que consta de un eje proteico central del cual salen 9 láminas radiales.

Funciones de los microtúbulos

1. Proporcionan y mantienen la estructura celular (control de la forma)
2. Regula la posición (transporte y localización) de vesículas y orgánulos
3. Forman los centriolos y el axonema de cilios y flagelos (movimiento celular)
4. Participación en la división celular (forman el huso mitótico y meiótico)

Filamentos de actina o microfilamentos

Son filamentos compactos de 7nm de diámetro de longitud variable. Son más flexibles y finos que
los microtúbulos.
Normalmente se presentan como haces o redes, por unión a proteínas asociadas, raramente se
presentan como filamentos únicos.
Abundan cerca de la cara interna de la mp córtex celular (confiere rigidez estructural a la célula)
Necesitan ATP para polimerizar.
Composición química
Unidad estructural: monómero de actina G.
Puede estar unido a ATP o ADP (forma T o
forma D).
Tienen actividad enzimática de los monómeros
para hidrolizar ATP o ADP.
Organización molecular
Situación A: concentración alta de actina G
Los filamentos de actina crecen por los dos extremos por incorporación de actina G, pero más
rápidamente por el extremo +. La actina G libre se encuentra mayoritariamente en la forma T.

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 Poco después de la incorporación al polímero se produce la hidrólisis de ATP y las formas T pasan a
D, el polímero está constituido por una mezcla de formas T y D.
En el extremo -

D.
CONSECUENCIA: extremo constituido por formas D, extremo + constitudo por formas T.

Concentración crítica
Concentración de actina G en el medio por debajo de
la cual un extremo del filamento deja de crecer y
comienza a perder actina G.
La concentración crítica de D es mayor que la de T: la
forma D tiende al desensamblaje y la forma T al
ensamblaje.
A una concentración intermedia de actina G en el
medio (entre las dos concentraciones críticas) el
filamento crecerá por el extremo + y decrecerá por el

Recambio rotario
Situación B: por debajo de la concentración crítica para el extremo (Ejemplo: 60u)
Circunstancia por la que se incorpora actina G en el extremo + y se pierde en el negativo.
El extremo deja de crecer. El extremo + continua creciendo, ya que aún no ha llegado a su
concentración crítica. La ausencia de crecimiento desestabiliza el extremo -, que empieza a perder
actina G.

Funciones
1. Control de la posición (transporte de orgánulos y vesículas papel secundario)
2. Control de la forma celular (córtex celular)*
3. Movimientos celulares

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 4. Participación en la división celular (citocinesis)
5. Participación en complejos de unión (cel-cel,cel-matriz)
6. Contracción de las fibras musculares
7. Soporte de microvellosidades y estereocilios (microvellosidades gigantes células del oído
interno: participan en la captación del sonido)
¿Dónde se localiza la actina?
Córtex celular y estructuras derivadas

Microvellosidades
Esterocilios
Los estereocilios son
microvellosidades
especializadas. En el
oído actúan com
mecanorreceptores.
Anillo contractil
Asociada a miosina

Complejos de unión

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 Filamentos intermedios
Son filamentos de 10nm de diámetro de longitud variable. Se hallan en la mayoría de las células
eucariotas, no en todas. Son los elementos más estables del citoesqueleto.
No tienen polaridad (sin extremos +/-), no necesitan GTP ni ATP para polimerizar.
Existen diversos tipos de filamentos intermedios diferentes.
Composición química

Monómero
Dímero (paralelo)
Tetrámero (antiparalelo y desplazado)
Protofilamento (8 tetrámeros alineados)
Filamento intermedio (protofilamentos
alineados)

Las diferencias con la actina y los microtúbulos son:

No requieren energía para polimerizar
No tienen extremos +/- (son apolares)
No experimentan intercambio rotatorio

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 Funciones
Su función principal es estructural, confiriendo a la célula resistencia mecánica. Por ejemplo,
forman parte de complejos de unión célula- célula (desmosomas) y células-matriz extracelular
(hemidesmosomas), dar estabilidad al núcleo
Funciones y regulación
Funciones
Control de la posición de la posición y transporte de orgánulos y vesículas (MT, AC)
Papel principal de los mt y proteínas asociadas: expansión radial. Los mt controlan su
posición/orientación dentro de la célula.
Proteínas motoras

Unión a filamentos polarizados

Partes: cabeza o dominio motor y cola (función biológica)
Tipos: (AC) miosinas (MT) quinesinas (+) dineínas (-)
Carga: componentes celulares, otros filamentos
Control de la forma celular (MT, AC, FI)
La forma depende de la acción coordinada de los tres tipos de filamentos.

Intermedios: estabilidad mecánica

Actina: forman el córtex celular
o Resistencia mecánica en la superficie
o Permite rápidos cambios de forma polimerización despolimerización
o Forma estructuras especializadas
La capacidad de polimerizar y despolimerizar favorece el rápido control de la forma celular.

Movimientos celulares (MT, AC)

Quimiotaxis
Tipos de movimiento:
o Movimientos sobre un sustrato sólido (AC)
o Movimientos ciliares (MT)
o Desplazamiento por flagelo (MT)
(ver ppt)

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 Participación en la división celular (MT, AC)
La despolimerización de microtúbulos y filamentos de actina en la división deja a la célula sin
control de su forma.
Participación en complejos de unión (AC, FI)

Contracción de las fibras musculares (AC)

Soporte de microvellosidades y estereocilios (AC)
Regulación de los filamentos del citoesqueleto
Se regulan gracias a las proteínas accesorias, que forman parte del citoesqueleto con los filamentos.
Estas proteínas intervienen en: la nucleación de los filamentos, la elongación, la estabilización, el
entrecruzamiento, la rotura y la unión de estos filamentos a la membrana plasmática
Nucleación
-TuRC (complejo de anillo de tubulina- ): formado por tubulina- y proteínas accesorias. Inicia la
nucleación unido a los lugares de nucleación del centrosoma. Permanece en el extremo
estabilizándolo.
La formina forma dímeros que nuclean y elongan filamentos.
Complejo ARP (actin-related proteins): redes de actina lamelipodios

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 Formación de haces y redes (Entrecruzamiento)
MAP2 y Tau: tienen dos dominios, uno se une a la superficie
del mt y el otro sirve para establecer una separación con el mt
adyacente. MAP2 tiene el dominio separador más largo que
Tau.
Plectina: entrecruzamiento, empaqueta filamentos
intermedios, también une a mt, actina y miosina.
Elongación/bloqueo de la elongación
Profilina: se une a una actina G y facilita su incorporación al
extremo +
Timosina: bloquea la incorporación de actina G
Estabilización/desestabilización
Cofilina: desestabiliza el filamento. Se une a las formas D y
favorece la despolimerización
Unión a la membrana plasmática
Espectrina: forma redes y se une a proteínas de la mp y a la
actina. Estructura la mp

ERM: conecta la actina del córtex con la mp

Tema 6. Núcleo celular y cromosomas

El núcleo es una estructura organizada constituida por una doble membrana (envoltura nuclear/
carioteca) que rodea el material genético (ADN) de la célula, separándolo del citoplasma y se
comunica con él a través de los poros nucleares.
El medio interno recibe el nombre de nucleoplasma, en el que se encuentran, más o menos
condensadas, las fibras de ADN, que reciben el nombre de cromatina y uno o más corpúsculos muy
ricos en ARN, denominados nucléolos.

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 Estructuralmente
Su aspecto depende del ciclo celular en que se
encuentre: núcleo interfásico (no está en fase de
división) y núcleo mitótico (se diferencian los
cromosomas)

La envoltura del núcleo varía a lo largo del ciclo

celular. Es estable durante la interfase, pero al
principio de la mitosis se desintegra y al final de la
mitosis vuelve a formarse (estudiaremos el núcleo
en está dase porque está entero)

Estructuras del núcleo

Carioteca
El retículo endoplasmático surge de la expansión de la
envoltura nuclear
Capas de fuera hacia dentro:
1. Membrana nuclear externa
2. Espacio perinuclear
3. Membrana nuclear interna
4. Lamina nuclear:
Red proteica de 10-20 mm de grosor que forma un
enrejado reticular hecho de filamentos intermedios y
proteínas asociadas llamadas láminas nucleares.
Está fusionado con la cara interna de la membrana
nuclear interna.
Su función es dar estabilidad mecánica a la envoltura nuclear.
5. Complejo del poro:
Son grandes agrupamientos de proteínas, llamadas nucleoporinas, que atraviesan la
envoltura nuclear.
Las proteínas que forman los poros nucleares se asocian para formas 8 bloques que
configuran un octágono regular, y se distribuyen formando anillos.

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 Son estructuras dinámicas capaces de
formarse y desaparecer dependiendo
del estado funcional de la propia
célula. Tienen forma de canales
acuosos que regulan los intercambios
de moléculas entre el núcleolo y el
citosol.
Permiten la circulación libre de moléculas hidrosolubles, y en el caso de macromoléculas
como ARN o las proteínas, que no son hidrosolubles, regulan mecanismos de transporte
activo.
En los mamíferos, la nucleoporina TPR es necesaria para establecer zonas de exclusión de
heterocromatina asociadas a poros nucleares (+TPR)
Transporte a través del complejo del poro
Es bidireccional, selectivo para muchas moléculas y puede ser activo o pasivo. Hay un continuo
trasiego de moléculas: ARN hacia el citosol y proteínas hacia el interior del núcleo (y exterior)
Las proteínas pueden volver a salir formando parte de nuevos complejos como por ejemplo, los
ribosomas

Salida de moléculas de ARN

La estructura proteína-ARN experimenta
diferentes transiciones hasta que el ARNm está
maduro y listo para el transporte a través del
complejo del poro (transcripción).

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 Entrada de proteínas al núcleo
Se añaden señales de localización nuclear a una
proteína citosólica (marcadas con fluorescencia) Se
localiza así la región del núcleo o citoplasma.
a. Localización de una proteína que contiene
una señal de localización nuclear

b. Localización de una proteína que contiene una señal de localización nuclear mutados

Nucleoplasma
Parte fluida del interior del núcleo, con moléculas en suspensión. Su interior está ocupado por el
núcleo o carioplasma de aspecto homogéneo dentro del cual se sitúa la cromatina (conjunto de
ADN, histonas y proteínas no histónicas), y uno o varios nucléolos.
Cromatina
Es el material genético del núcleo interfásico. Está formada por la fibra elemental de cromatina o
collar de perlas, que está formada por una molécula de ADN asociada a diversas proteínas histornas
que forman nucleosomas11.
Se pueden diferenciar dos tipos de cromatina:
1. Eucromatina: es la forma menos condensada de la
cromatina y es la transcripcionalmente activa

2. Heterocromatina: es la forma más condensada de la

cromatina interfásica y transcripcionalmente
inactiva. Se observa al microscopio como una región
más teñida o más densa que el resto.

11
Octamero de histonas junto con 1,7 vueltas de ADN + el ADN espaciador

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 Su función es la de dirigir la actividad de la célula, el núcleo interfásico desarrolla una intensa
actividad que controla la vida de la célula; en él tiene lugar la expresión de la información genética
del ADN (transcripción) que forma los ARNm que pasará al citoplasma para la síntesis de proteínas
(traducción) en los ribosomas. También contiene la herencia, información sobre la estructura y
funcionamiento del organismo que se transmite de generación en generación. En la cromatina
están las moléculas de ADN, y en el núcleo se produce la replicación de este.
Nucléolo
Es un corpúsculo esférico cuyo diámetro oscila
entre 1 y 3µm, y que se encuentra en el interior
del núcleo interfásico. Está compuesto de
proteínas y ARN que se encuentra dentro del
núcleo de las células y que interviene en la
formación de los ribosomas.
No posee membrana que lo limite
Se encarga de la transcripción del ARN
ribosomal por la polimerasa I, para luego
procesarlo y llevar a cabo el ensamblaje de las
subunidades ribosómicas. Sin la presencia del
nucléolo, disminuyen los ribosomas en el
citoplasma, hasta queda completamente
escasos.
Partes del nucléolo
1. Centro fibrilar (NOR)
ADN en transcripción y tiene lugar la
transcripción del pre ARNr 45S (el transcrito
primario a partir del cual se obtendrán 3 de
los 4 ARNr que forman los ribosomas)
2. Componente fibrilar denso
Partículas de ARNr participando en el proceso de transcripción (fibrillas altamente
empaquetadas)
3. Componente granular
Precursores de los ribosomas maduros (gránulos de 10-20 nm intercalados entre los
componentes fibrilares)
Envolviendo el nucleolo está la heterocromatina12 perinucleolar
Estructura
El número y tamaño de los nucléos suele guardar relación con la actividad celular. Las células suelen
tener entre 1-5 nucléolos, las que requieren una síntesis de proteína elevada (Embrionarias,

12
Se llama heterocromatina cuando está pegada a la envoltura nuclear (más oscura), eucromatina (más clara) se
encuentra dentro de la envoltura.

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 tumorales, neuronales, etc.) pueden tener más de 5, y las que no tienen, o están muertas o
muriendo.
Cuando las células se dividen, los nucléolos presentes en la interfase desaparecen en la profase, y
reaparecen en forma de cuerpos prenucleolares en la telofase: ciclo del nucléolo.
La estrucutra del nucléolo está condicionada por la actividad celular:
A. Donde la actividad transcripcional es baja (linfocitos), existe un único centro fibrilar.
B. Cuando se estimula, la producción de ribosomas se acelera, el nucleolo se agranda y
aparecen numerosos centros fibrilares.
Morfología del nucléolo a lo largo del ciclo celular
En la profase disminuye y desaparece.
En la telofase aparecen nucléolos (hasta 10) que aumentan de tamaño y se fusionan hasta formar 1,
2, 3 nucléolos grandes. (fase G1 al final de la división celular)
Los genes que codifican para ARNr están en los cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22
La función más importante del nucléolo es la síntesis de las subunidades ribosomales
transcripción de ARNr a ribosoma.
Ribosoma
Partícula granular pequeña (15-20nm), presente en el
citoplasma de todas las células, donde tiene lugar la síntesis
de proteínas.
Son partículas sin membrana, observables solamente con el
ME como granulaciones densas más o menos esferoidales o
elípticas.
Cada ribosoma está formado por una subunidad pequeña y
otra grande, que se disocian al final de cada proceso de
síntesis proteica. Tanto las moléculas de RNA ribosómico
como las proteínas de las dos subunidades son diferentes.

Los dos tipos de ribosomas del citoplasma son estructural y

funcionalmente iguales, pero según estén libres o unidos al RE,

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 sintetizan proteínas cuyos destinos finales son diferentes.
Composición química
Constan de dos subunidades desiguales, una grande y otra pequeña, separada por una hendidura
transversal, perpendicular al eje mayor del ribosoma. Estas dos subunidades se forman en el
nucléolo donde se unen a sus dos componentes: el ARNr y las proteínas ribosomales.
En el ribosoma eucariota 80S existe:

Un sitio de unión a ARNm

Tres sitios de unión a ARNt
o Sitio A (aminoacil-ARNt)
o Sitio P (peptidil. ARNt)
o Sitio E (salida)
Función
Síntesis de proteínas (traducción)

Iniciación La señal de iniciación es el triplete de iniciación AUG en el ARNm, este se une a la

subunidad pequeña del ribosoma (con la contribución de un factor de iniciación proteico).
Entonces se produce la unión del ARNt especial de iniciación que se corresponde con el triplete
AUG, y que lleva unido el aminoácido
derivado de la metionina
La molécula de f-Met-ARNt se localiza

grande del
ribosoma, y entonces se une la
subunidad grande. El complejo de
iniciación está ya completo y dispuesto
para la elongación de la cadena
polipeptídica. En la formación de este
complejo de iniciación intervienen
ciertos factores de iniciación
(proteínas) y se gasta energía.

Elongación
de la subunidad grande del ribosoma se une el aminoacil-ARNt correspondiente al siguiente
codón. A continuación se produce la formación del enlace peptídico entre la N-formil-metionina
del sitio P y el aminoácido unido al aminoacil-ARNt que ha llegado al sitio A. Entonces se produce
la translocación: el ARNt sin aminoácido, que queda en el sitio E, abandona el ribosoma, el
>3' y el peptidil-ARNt ocupa el sitio P, y queda
libre el sitio A para la llegada del siguiente aminoacil-ARNt. Con esto, el proceso puede continuar
en un nuevo ciclo de elongación. Será el péptido el que se una al aminoácido entrante con
enlace peptídico. La repetición de sucesivos ciclos de elongación genera la cadena polipeptídica,
que crece del extremo amino-terminal al COOH. El ARN mensajero se lee de 5' >3'. La

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 traducción de una molécula de ARNm se puede llevar a cabo por varios ribosomas
simultáneamente.

Terminación cuando llega al sitio A alguno de los codones de terminación UAA, UGA y UAG no
se une ningún ARNt, pues ninguno los reconoce. En su lugar se une un factor proteico de
liberación, que activa la liberación de la cadena polipeptídica del ARNt. La proteína ya formada
abandona el ribosoma y también lo hacen el ARNm y el ARNt. El ribosoma se disocia en sus dos
subunidades hasta un nuevo comienzo de síntesis.

Cromosomas
Es un elemento en forma de bastón resultante de la condensación de la cromatina del núcleo
durante la división celular (mitosis o meiosis).

Funciones
Almacenamiento (heterocromatina), expresión (cromatina poco condensada) y transmisión
(cromosoma condensado) todos las tienen pero dependiendo del grado de compactación será más
factible en una u otro.

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 Características generales
El cromosoma que vamos a estudiar es el cromosoma metafásico. Tiene una forma compacta e
individualizada. Está formado por:

Cromátidas: Cada una de ellas está formada por una de las dos moléculas de ADN idénticas
entre sí (resultado de la replicación). Por lo tanto, un cromosoma tiene dos copias de la
misma molécula de ADN.
Telómero: Sin genes. ADN minisatélite. Su función es la protección del material genético
subtelomérico. Evitan la fusión de los extremos cromosómicos.
Centrómero: Sin genes. ADN -satélite. Su función es la formación del cinetocoro13
(segregación cromosómica), gracias a una variante de la histona H3 denominada CENP-A

Partes del cromosoma metafásico

Constricción primaria: centrómero

Constricciones secundarias: cromosomas 13, 14,
15, 21 y 22 (región organizadora nucleolar, NOR)
Es el sitio del cromosoma donde se localizan
los clusters de genes ribosómicos (ADNr), que
codifican para el ARN ribosómico. Implicadas en
la organización de los nucléolos.

13
Durante la mitosis/meiosis los microtúbulos del huso se enganchan al cinetocoro para acortarse y separar las dos
cromátidas hermanas

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 Composición química
Están compuestos por ADN, ARN y proteínas:

Histonas: estructurales
o Histona H1 (220aa), nucleosomales H2A, H3, H4 (102 a 135aa)
No histónicas: estructurales replicación transcripción reparación
Se aislaron a partir de cromatina descondensada digerida con nucleasas
Están presentes en cantidades elevadas; la masa total de histonas es igual a la de ADN
Organización molecular
1º compactación de la cromatina
Formación del octámero de histonas. Fibra nucleosómica de
11nm.
Cohesión ADN-histonas: 142 puentes de hidrógeno aa+ (lisina,
arginina)

Complejos remodeladores
Proteínas que, mediante el consumo de ATP, relajan
temporalmente la unión del ADN con las histonas
nucleosomales
Funciones:
1. Dar accesibilidad al ADN enrollado (replicación, transcripción y reparación), por
deslizamiento del ADN sobre el octámero.
2. Sustitución de histonas nucleosomales o de octámeros enteros.

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 2º compactación de la cromatina
Fibra nucleosómica de 30nm (modelo de solenoide), otro
modelo bastante aceptado, es el modelo zigzag (plantea que
la fibra de 11nm describe una línea en zigzag especialmente
que luego se comprime)
3º compactación de la cromatina
Fibra nucleosómica de 300nm.
Dominios en forma de bucles, cada seis bucles se empaquetan y se
asocian a un esqueleto nuclear formando un rosetón.
4º nivel de compactación de la cromatina
Fibra nucleosómica de 700nm
Treinta rosetones forman una espiral y veinte espirales forman una
cromátida del cromosoma. Se produce por el arrollamiento de la
fibra de 300nm sobre sí misma formado una espiral y empaquetando
el ADN hasta 10mil veces formando una cromátida. La unión de dos
cromátidas hermanas se produce a través de las condensinas.

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 Tema 7. Mitosis y ciclo celular
muy importante poner envoltura nuclear en el examen

Introducción
El ciclo celular es el conjunto de procesos que ocurren desde que una célula eucariota se forma por
división de una preexistente hasta que ella misma se divide y da origen a células hijas. Las células
duplican su contenido y forman dos células hijas.
Conceptos importantes

Crecimiento celular: Aumento de la masa celular previo a la división.

Proliferación: Incremento del número de células producido por la división celular.
Diferenciación: Proceso por el que una célula cambia de un tipo a otro.

El ciclo celular está regulado con mucha presión. Permite el desarrollo coordinado de tejidos y
órganos (etapas iniciales de la vida) y la estabilidad y equilibrio del organismo en el individuo
adulto.
La homeóstasis es el equilibrio entre ambos factores.

Fases del ciclo celular

El ciclo celular se divide en dos fases:

actividad y desarrollo. Esta fase se caracteriza por la ausencia de cromosomas visibles,

visualizándose solo la cromatina en el núcleo, y por un aumento progresivo del volumen
celular. La célula se prepara para la fase de división. Se puede dividir en tres periodos:
o G1: Se produce el crecimiento14 y diferenciación celular. Actividad biosintética
(síntesis de ARN y proteínas, síntesis de orgánulos). Al final se alcanza el punto de no
retorno (punto R), si se pasa la célula ya está obligada a realizar todas las fases hasta
completar la mitosis.
o S: Se produce la replicación del ADN del núcleo, a partir de cada molécula de ADN se
forman dos dobles hélices de ADN idénticas entre sí.
o G2: Fase de corta duración en la que la célula posee un estado de latencia, pero se
prepara para la división celular, sintetizándose y ensamblándose histonas, proteínas,

14
Aumento del volumen, duplicación del nº de orgánulos y estructuras.

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 etc. Esta fase acaba cuando los cromosomas empiezan a condensarse al inicio de la
mitosis.

Fase M: División celular que se divide en cariocinesis por mitosis o meiosis (división del
núcleo) y citocinesis (división del citoplasma)
*Nota
Estado de quiescencia. G0: La célula se encuentra bloqueada en G1, no entra en división. Esto
se da en células que entran temporalmente en reposo (pueden reanudar el ciclo), en células
diferenciadas terminalmente y en células senescentes15

Actividades de síntesis durante el ciclo

Síntesis de ADN (solamente en fase S)

Síntesis de ARN (todo el ciclo excp fase M)
Síntesis de proteínas (todo el ciclo)
Síntesis de orgánulos (todo el ciclo)

15
Las células se envejecen, dejan de dividirse pero no mueren.

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 Puntos de control del ciclo celular
Son mecanismos moleculares de regulación, que verifican que se cumplen o no ciertas condiciones
necesarias, para permitir o impedir en su caso, la progresión del ciclo celular y que se pase de una
fase a otra. Aseguran que las células no se dividan en condiciones desfavorables como por ejemplo,
cuando el ADN está dañado.

Punto de control del inicio: Se produce al final de G1,

antes de que la célula entre en fase S y replique el ADN.
Permite que la célula se divida o no.
o Tamaño adecuado, suficientes nutrientes,
factores de crecimiento, ADN dañado o no.

Punto de control G2: Se produce al final de G2, antes

de que la célula entre en mitosis.
o ADN replicado en fase S, tiene daños o no,
entorno favorable.

Punto de control de transición metafase/anafase: (ya

iniciada la división celular)
o Cromosomas asociados al huso de manera
bipolar y que todos se encuentran en la placa
metafásica

Complejos Cdk-ciclina
Cdk: Cinasas dependientes de ciclinas Enzimas que
procuran el avance del ciclo celular
Ciclinas: Proteínas reguladores que se unen a las Cdk,
activándolas.

Podemos encontrarlos en la célula, regulan el avance del ciclo celular. Esto varía según en que fase
nos encontremos.

Las concentraciones de Cdk son constantes a lo largo del ciclo y superiores a las de las
ciclinas, que varían en las diferentes fases del ciclo.
De los picos de concentración de las ciclinas depende de la formación de estos complejos
Cdk-ciclina. La proteína reguladora APC/C inicia la transición de la metafase a la anafase.

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 El primer complejo aumenta al inicio de la interfase, G1, y se mantiene hasta que empieza la
síntesis del ADN. El tercero se mantiene hasta la mitosis, el último que se incrementa es la M
después de que se dupliquen los cromosomas hasta la mitad de la mitosis.

La división celular
La división celular tiene diversas finalidades, la primordial es la reproducción celular que tiene por
objetivo la creación de nuevos individuos a partir de los existentes y mantener la homeostasis. Se
divide en mitosis (división nuclear)16 y en citocinesis (división citoplasmática)17.
Papel del citoesqueleto
Los componentes del citoesqueleto
cambian sus funciones a lo largo de la
división celular. Sus elementos se
encargan de separar los cromosomas
durante la mitosis y meiosis, además de
dividir la célula madre en dos células
hijas durante la citocinesis.

Centrosoma
Es un orgánulo cuya función es la de ser el
células animales. Está formado por:

Diplosoma: Formado por dos centriolos dispuestos perpendicularmente el uno del otro.
Cada centriolo es una estructura cilíndrica vacía formada por 9 tripletes de microtúbulos.

16
Proceso que tiene como consecuencia el reparto equitativo del material genético
17
División física de la célula con el consiguiente reparte de orgánulos.

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 Matriz pericentriolar: Suspensión densa de proteínas en las que está embebido el
diplosoma.
Áster: conjunto de microtúbulos radiales que sales de la matriz en todas las direcciones

Ciclo del centrosoma

Fase G1
1. Formación del áster Los microtúbulos polimerizan por unión de dímeros de tubulina,
-

positivo.
2. Separación de centriolos Los dos centriolos se separan unas micras, esta separación es
necesaria para la duplicación.

Fase S
3. Duplicación de los centriolos A partir de cada centriolo original se forma un nuevo
centriolo hijo por nucleación. Los dos diplosomas comparten la matriz pericentriolar y
permanecen juntos cerca del núcleo.
Fase G2
4. Incremento de la matriz pericentriolar Aumenta la síntesis de tubulina. Los factores
catástrofe despolimerizan microtúbulos del citoesqueleto, liberando tubulina, que se

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 incorpora a la matriz pericentriolar. En esta matriz, las MAP hacen el efecto contrario:
estabilizan y favorecen la polimerización a partir de la tubulina incorporada.

Profase mitosis
5. Separación de dos centrosomas Los diplosomas se separan, cada uno con su propia
matriz, dando lugar a dos centrosomas.
6. Formación del huso mitótico El huso mitótico es una máquina, formada por una matriz
de microtúbulos bipolar, encargada de repartir las cromátidas hermanas de los cromosomas
entre las células hijas.
7. Alargamiento de los microtúbulos polares El huso mitótico adquiere polaridad (se separan
los polos)

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 Preparación de la división
La mitosis se empieza a preparar en la interfase, con la replicación del ADN (fase S) y la síntesis de
proteínas necesarias (fase G2).

La mitosis es la división del núcleo que se produce en la fase de división celular o fase M del ciclo
celular, normalmente va seguida de la citocinesis, típicamente se obtiene dos células hijas. La
mitosis es una división del núcleo en la que se obtienen dos núcleos genéticamente idénticos entre
sí y al núcleo inicial de la célula progenitora. Su función es permitir la reproducción asexual en
organismos eucariotas, unicelulares o pluricelulares; además, en seres pluricelulares la mitosis
permite el desarrollo y crecimiento, así como la reparación o la renovación de tejidos y órganos.

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 Profase
1. Condensación de la cromatina: La cromatina se condensa
por las condensinas y las cohesinas regulan cuanto se
pueden condensar.
2. Centrómero y cromátidas visibles.
3. Nucléolo
4. Cinetocoros: La función de los cinetocoros es unirse al
huso acromático.

5. Carioteca íntegra
6. Formación y polaridad del huso mitótico: En eucariotas
animales, los dos centrosomas producto de la duplicación del
original se van alejando progresivamente hacia los lados o
polos opuestos de la célula, a la vez que entre ellos se
organizan una serie de microtúbulos proteicos (polares) que
constituyen el huso acromático, en vegetales ocurre lo
mismo, pero sin centrosomas.

Prometafase
En la profase avanzada son claramente visibles los cromosomas de dos cromátidas (dispersión y
condensación). Junto con la desaparición de la cromatina desaparecen los nucléolos y la carioteca
inicia su desaparición para que los cromosomas queden dispersos en el citoplasma. El huso mitótico
invade la célula y se sigue polarizando. Los cromosomas se unen (microtúbulos) y se empieza el
movimiento hacia el plano ecuatorial

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 Metafase
1. El huso mitótico reúne a los cromosomas dentro del plano ecuatorial
2. Existe el cromosoma metafásico (con movilidad, máxima condensación, tensión)
3. A las zonas externas de los cinetócoros se unen haces de microtúbulos que se extienden
hasta el polo más cercado a cada uno de ellos. Estos se orientan paralelos a los microtúbulos
polares del huso, de manera que cada una de las dos cromátidas de cada cromosoma queda
orientada hacia uno de los polos opuestos. Gracias a los MTs cinetocóricos los cromosomas
se desplazan hasta agruparse en una zona central, alineados a igual distancia de los polos
formando la placa ecuatorial.

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 Anafase
1. Ruptura de la unión de las
cromátidas.
2. Anafase A Movimiento de las
cromátidas hacia los polos

3. Anafase B Movimiento de los polos hacia fuera.

4. Cromátidas en los polos,

desaparición de los MTs
cinetocóricos
5. Inicio de la carioteca
6. Inicio de la citocinesis

Telofase
1. Descondensación de los cromosomas
2. Reconstrucción de la carioteca
3. Superposición de los microtúbulos. El huso
mitótico comienza a desorganizarse hasta
quedar reducido a un haz de microtúbulos en
posición euatorial, que marcan el lugar por
donde se dividirá o repartirá el citoplasma de la
célula.
4. Final de la cariocinesis

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 Citocinesis
División o reparto del citoplasma en la división celular. Se comienza al acabar la telofase.

Ciclo del cromosoma

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 Tema 8.1 Células madre

Introducción
Definición
Las células madre o troncales son células:
1. Capaces de diferenciarse, en respuesta a señales específicas, hacia diversos tipos de células
especializadas.
Madres Progenitoras Diferenciadas Involutivas
2. Capaces de autorrenovarse, generando copias idénticas de sí mismas durante largos
períodos de tiempo.
Cuando se divide, cada hija tiene una elección: puede seguir siendo una célula madre o
puede embarcarse en un curso que lo comprometa a la diferenciación terminal

Las podemos encontrar a nivel embrionario o en un individuo adulto (célula madre somática)
Dos posibles estrategias explican la preservación de un porcentaje de células madre en los tejidos:
División asimétrica
Tras la división, diversos factores reguladores son
heredados, de manera asimétrica, por una de las células
hijas, que mantendrá su fenotipo.
Defiende que el n º de células madre permanece en un bajo
número
Elección independiente
Tras la división, cada célula hija tiene un 50% de
probabilidad de mantenerse como madre o diferenciarse. El
ambiente podría sesgar esta decisión en un sentido u otro
(necesidad de la célula, momento del desarrollo). Defiende
una mayor cantidad de células madre. Observaciones
realizadas en células intestinales encajan con este modelo.

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 Clasificación de células madre
Totipotentes
Capaces de dar lugar a todos los tipos celulares del organismo adulto (derivados del tejido
embrionario) y los de la placenta (tejido extraembrionario)

Tipos de células totipotentes:

Cigotos producto de la fecundación

Cigotos obtenidos por transferencia nuclear dentro de un proceso de clonación

Blastómeros de las primeras divisiones del cigoto en desarrollo

Las células diferenciadas contienen las instrucciones para dirigir la formación de un organismo

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 Experimentos
1. Enucleación de un ovocito e inserción de núcleo de célula diferenciada. El núcleo inyectado es
capaz de programar el ovocito para dar un renacuajo normal.

Basado en las experiencias de Briggs y King

(Rana pipiens) 1952: La totipotencia se
pierde a medida que avanza el desarrollo
embrionario y por tanto la diferenciación.
2. Los núcleos pueden ser reprogramados si
se trasplantan a un citoplasma ajeno
Experiencias de Wilmut y cols. (Ovejas)
1996: Cultivo de células de tejido mamario
de oveja. Extracción de núcleos.
Enucleación de un ovocito e inserción del
núcleo. Estímulo de la división con un
choque eléctrico. Implantación en una
oveja distinta-
Resultado: Primer mamífero clonado, la
oveja Dolly. Murió
prematuramente,¿núcleo
envejecido?¿patología heredada?

Pluripotentes
Capaces de dar lugar a todos los tipos celulares del organismo adulto (derivados del tejido
embrionario) pero no a los placentarios
Tipos de células madre pluripotentes:

Células madre embrionarias (ES): Forman parte de la masa celular interna de embriones en
estado de blastocisto alrededor de 5 días después de la fecundación
Bajo condiciones de cultivo adecuadas proliferan de manera indefinida (telomerasa18; se
une a los telomeros) y mantienen un potencial de diferenciación sin restricciones (linajes
embrionarios)

18
Enzima de las células que las ayuda a mantenerse vivas al agregar ADN a los telómeros

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 Ventajas e inconvenientes
(V) Propias del cultivo celular (alta disponibilidad, modificación genética, selección)
(I) Potencial tumorigénico, inmunogenicidad, cuestiones de tipo ético en humanos

Células iPS (induced pluripotent stem cells): obtenidas experimentalmente a partir de

células somáticas.

Ventajas e inconvenientes
(V)Propias del cultivo celular, no generan rechazo inmunológico si se obtienen del propio
paciente
(I) El proceso es lento e ineficiente; 10 días o más en cultivo y muy pocas células llegan a iPS

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 Producción de células diferenciadas procedentes de ES o de iPS en cultivo. Estas células pueden ser
cultivadas indefinidamente como pluripotentes adheridas como monocapa en una placa de cultivo.
Alternativamente, podemos despegarlas y permitir que formen unos agregados denominados
cuerpos embrioides. Estos cuerpos embrioides, cultivados con determinados factores en el medio
de cultivo, pueden ser dirigidos hacia diferentes vías de diferenciación y dar lugar a diversos tipos
celulares.
Multipotentes
Son capaces de producir tipos celulares de la misma capa embrionaria de la que proceden o,
excepcionalmente, de dos capas. Sirven para la renovación de un tipo particular de tejido.
Tipos de células madre multipotentes:
c : derivadas de los diferentes tejidos del organismo posnatal.

CM hematopoyéticas (HSC): dan lugar a todos los tipos celulares de la sangre. La aplicación
que tienen es trasplante de HSC en pacientes con cánceres hematológicos (leucemias y
linfomas)
CM mesenquimales (MSC): in vitro pueden diferenciarse a células de hueso, cartílago,
músculo, neuronas, etc. Las aplicaciones que tiene son trasplantes en diversos
tejidos/órganos.
Las principales fuentes tisulares de células madre de adulto son el cordón umbilical, la médula
ósea, el tejido adiposo.
Las células madre del cordón umbilical de un bebé destacan por su ilimitada disponibilidad (por su
expansión in vitro) y son ideales en trasplantes para hacer frente a enfermedades futuras del
mismo individuo o de sus hermanos o padres.

Aplicaciones de células madre

a. Generación de órganos
Células ES o iPS en cultivo, con una manipulación cuidadosa de las condiciones ambientales,
interactúan hasta construir un órgano entero, aunque a pequeña escala.

Células ES pueden dar lugar a un órgano tridimensional. Bajo unas condiciones adecuadas y con
una manipulación muy cuidadosa, células ES de un ratón en cultivo pueden proliferar,
diferenciarse e interactuar para formar una estructura tridimensional semejante a un ojo,
aunque a mejor escala. La estructura incluye una retina en desarrollo que contiene múltiples
capas de células neurales (células en rosa).

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 b. Reparación de tejidos y de órganos
Trasplante de células madre a tejidos/órganos lesionados tienen dos efectos teóricos:
o Diferenciación in situ: Regeneración del tejido dañado
o Efecto paracrino: Secreción de moléculas señal que promueven supervivencia,
proliferación, generación de vasos (angiogénesis), etc.

Numerosos estudios han analizado el potencial terapéutico del trasplante de células madre en
tejidos afectados (infartos, ictus, Alzheimer, etc). La conclusión general es que el efecto directo de
las células madre (diferenciación) ha sido limitado, si bien ha ejercido efectos positivos por otros
mecanismos (paracrinos)
La transdiferenciación es la diferenciación directa de un tipo celular a otro en presencia de factores
de transcripción. Evita la producción de iPS.
Ejemplo
En infarto de miocardio. Conversión de fibroblastos cardíacos en células
musculares cardíacas en presencia de tres factores de transcripción.
a. En el corazón del ratón, se inyectan vectores retrovirales con los
transgenes de los tres factores (terapia génica19)
b. La expresión forzada de estos factores, regenera el tejido
cardíaco perdido por transdiferenciación de los fibroblastos
cardíacos a células musculares cardíacas.
c. Las células transdiferenciaddas no generan rechazo (trasplante
autólogo)

19
Es la introducción de un activo biológicamente en las células de un individuo con fines terapéuticos. La transferencia
de ADN a las células se consigue gracias a vectores víricos

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 3. Análisis y tratamiento de enfermedades genéticas Búsqueda de nuevos fármacos
a. En enfermedades genéticas
b. Obtención de iPS en cultivo
c. Diferenciación al tipo celular afectado por la enfermedad
d. Investigación del mecanismo patológico in vitro
e. Búsqueda de nuevos fármacos in vitro
f. Tratamiento del paciente
Ejemplo
El síndrome de Timothy es un desorden severo del ritmo cardiaco. Se generan iPS y se diferencian a
cardiomiocitos in vitro. Comparándolos con las mismas células de controles sanos se descubrieron
contracciones irregulares y flujo anómalo de Ca2+.
Una vez caracterizados estos defectos se están testando fármacos que puedan ser utilizados
posteriormente en los pacientes.

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 Tema 8.2 Diferenciación celular

Dogma de la biología molecular

A pesar de que, una vez se conoció la estructura de la doble hélice de ADN, ya estuvo claro que el
ADN era el portador de la herencia y como podría autoduplicarse, todavía no se sabía cuál era su
mecanismo de actuación, cómo se expresaba esa información, cómo se traducía esa información de
los factores hereditarios o genes en los caracteres que presenta un individuo.
El mecanismo mediante el cual se pasa de tener una secuencia de nucleótidos a tener una
secuencia de aminoácidos de una proteína, sucede mediante dos procesos: la Transcripción,
proceso en el que se sintetiza una molécula de ARNm cuya secuencia de nucleótidos o bases es
complementaria a la de un gen (ADN; de una de las dos hebras) y la Traducción, proceso en el que
se sintetiza una proteína concreta (con su secuencia de aminoácidos particular) a partir del ARNm
(de su secuencia de nucleótidos) obtenido en la transcripción.
Ese flujo de la información, es lo que constituye el llamado
Y las proteinas son las responsables de los caracteres del organismo.

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 Diferenciación y especialización
Diferenciación celular
Una célula es capaz de diferenciarse en varios tipos celulares
Pluripotente. Estas células se llaman células madre en los animales y
meristemáticas en las plantas.
Si la célula es capaz de diferenciarse en todos los tipos celulares de un
organismo se llama totipotente.
En los mamíferos, sólo el cigoto y las células embrionarias jóvenes son
totipotentes. En las plantas, muchas células diferenciadas pueden volverse
en totipotentes.

En la mayoría de los organismos pluricelulares, las células no son idénticas. Por ejemplo, las
células que forman la piel en el ser humano son diferentes de las células que componen los
órganos internos.
Sin embargo, todos los tipos celulares derivan de una sola célula inicial o cigoto, procedente
de la fecundación de un óvulo por un espermatozoide, gracias a la diferenciación celular.
La diferenciación es un mecanismo mediante el cual una célula no especializada se
especializa en numerosos tipos celulares que forman el cuerpo. Durante la diferenciación,
ciertos genes son expresados, mientras que otros son reprimidos. Este proceso es
intrínsecamente regulado gracias al control epigenético de las células. Así la célula
diferenciada se desarrollará en estructuras específicas y adquirirá determinadas funciones.

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 Definición
Proceso por el que las células adquieren una forma y una función determinada durante el
desarrollo embrionario o la vida de un organismo pluricelular, especializándose en un tipo celular.
La morfología de las células cambia
notablemente durante la diferenciación,
pero el material genético, permanece
inalterable.
Concepto
Un organismo pluricelular tiene muchos
tipos celulares (diferenciación). Se
activan genes diferentes, en diferentes
momentos y con diferente intensidad.
Los diferentes tipos celulares utilizan
parcialmente una información común a
todos ellos.
Especialización celular
La célula hace un trabajo en concreto y desarrolla una forma característica.
Se producen cambios en el citoplasma de la célula, relacionados con la diferente actividad de los
distintos orgánulos celulares.

La diferenciación puede producir cambios fisiológicos en la célula como el tamaño, la forma, la

polaridad, la actividad metabólica, la sensibilidad a ciertas señales y la expresión de genes.

Las células de los mamíferos se pueden clasificar en tres categorías:

Células de la línea germinal

Células somáticas
Células madre
La mayoría de las que forman el cuerpo son diploides: poseen dos copias de cada cromosoma. Estas
células se llaman somáticas. Todas las células de la línea germinal están destinadas a la formación
de gametos y son las únicas capaces de transmitir su material genético a las generaciones
siguientes. La célula madre es la única que tiene capacidad de dividirse indefinidamente y
proporcionar células especializadas.

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 Control de la expresión génica
Niveles de control
1. Cromatina
2. Transcripción
3. Procesamiento del ARNm (splicing)
4. Transporte y localización del ARNm Control post- transcripcional
5. Control de la degradación del ARNm en el citosol
6. Control de la traducción
7. Control de la actividad proteica Control post- traduccional

Nivel 1: La cromatina
a. Modificación de la secuencia del ADN: Algunos tipos
celulares experimentan reordenamientos y
eliminación de partes del genoma.
b. Remodelación de la cromatina: complejos
remodeladores, modificación de histonas, metilación
de citosinas, ARN no codificantes.
Puede incluir estructuras heterocromáticas o eucromáticas
Nivel 2: La transcripción
Una región de control génico consta de: un promotor, varias
y numerosas secuencias reguladoras en cis
Los factores de transcripción son proteínas que se unen al ADN para controlar/regular la expresión.

Factores Unión a regiones Regulación de genes

Generales Promotoras Todo tipo
Proximales Reguladoras proximales Todo tipo
De expresión regulada
Distales Reguladoras distales (inducibles, no constitutivos o
housekeeping)

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 Nivel 3: Procesamiento del ARNm
a. Maduración: proceso de corte y unión (splicing)

b. Maduración alternativa (splicing alternativo)

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 c. Edición del ARNm inmaduro

Nivel 4: Transporte del ARNm al citosol

Nivel 5: Control de degradación de ARNm en el citosol

1. Degradación fisiológica del ARNm: Todos los ARNm se acortan gradualmente por acción de
una exonucleasa (temporizador). Existen secuencias de degradación rápida (secuencias
desestabilizadoras)
Cuando la cola de poli-A llega a una longitud crítica (30A aprox.) se da la degradación por
estos dos procesos:

La cola de poli-

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 Región no traducida

Tema 8.3 Envejecimiento celular

Las etapas del ciclo vital son: fecundación, desarrollo embrionario, nacimiento, desarrollo
postnatal, madurez, envejecimiento y muerte.
Envejecimiento celular
Características físicas
Son poco evidentes, pero se determina por el tamaño celular, la
forma y el contacto entre otras células.

Acumulación de pigmentos de desgaste

Lipofucsina (en neuronas y cardiomiocitos) ceroides (en
hepatocitos)
Acumulación de filamentos intermedios (queratinocitos)
Caracterización experiencias de Hayflick
Los cultivos de fibroblastos humanos normales, se dividen durante un tiempo y finalmente mueren.
Parece que el envejecimiento es una propiedad intrínseca de las células.
Experiencia: Obtenemos cultivo primario de tejido pulmonar embrionario. Al alcanzar la confluencia
(1 semana) se hacen subcultivos. Mientras las células se dividen, se siguen haciendo subcultivos. Al
cabo de unos 50 subcultivos ya no se dividen, degeneran y mueren.
Límite de Hayflick: Número de divisiones necesarias para entrar en senescencia.
Para saber si el envejecimiento es una propiedad intrínseca de las células:
Experiencia A: ¿viven más las células viejas si las mezclamos con jóvenes?
1. Células masculinas (XY) en subcultivo 40 se subcultivan 10 veces más
2. Células femeninas (XX) en subcultivo 10 se subcultivan 40 veces más

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 3. Mezcla de ambos cultivos se subcultivan 20 veces más y sólo quedan células femeninas
(XX)
Experiencia B: ¿viven más las células viejas si las congelamos y descongelamos?
Las células pueden ser congeladas a temperaturas muy bajas y volver a vivir cuando se
descongelan.
Céls. Congeladas tras 20 subcultivos se descongelan y se pueden subcultivar 30 veces más
Céls. Congeladas tras 40 subcultivos se descongelan y se pueden subcultivar 10 veces más
Conclusión: la duración limitada de la vida de las células es una propiedad intrínseca de las mismas.
Otras experiencias demuestras que el factor regulador del
envejecimiento replicativo está en el núcleo celular.
Experiencia ¿De qué orgánulo depende la senescencia?
Tratando las células con citocalasina B, expulsan el núcleo
y se convierten en los citoplastos que son viables varios
días. Después podemos transplantar núcleos a citoplastos:

Núcleos de cé[Link] + citoplastos viejos

Núcleos de cels. Viejas + citoplastos jóvenes
Sobreviven más las células con núcleos jóvenes.
Conclusión: en el núcleo se encuentra el reloj mitótico que determina el límite de la vida celular.
Conclusiones de las experiencias de Hayflick
1. El envejecimiento es una propiedad intrínseca de las células
2. El proceso de congelación no altera la evolución del envejecimiento
3. La edad del citoplasto no influye en la duración de la vida de las células
4. La edad del núcleo determina la capacidad de seguir multiplicándose
Hipótesis explicativas

Inestabilidad genómica
Pérdida de proteostasis
Alteraciones metabólicas: desregulación en nutrientes
y disfunción mitocondrial
Agotamiento de células madres y comunicación
intercelular alterada
Genes del envejecimiento
Metilación ADN
Acortamiento de los telómeros *

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 Tipos de muerte celular

Necrosis Apoptosis
Accidental Fisiológica

Afectada a grupos de células Afecta a células individuales

Se produce inflamación No produce inflamación

Puede alterar la estructura y función del tejido No altera la estructura ni función del tejido

Aumento del volumen celular Disminución del volumen celular

Orgánulos alterados Orgánulos bien conservados

Condensación anómala de la cromatina Picnosis (condensación + marginalización)

Fragmentación del núcleo y citoplasma en
Rotura de la membrana plasmática
cuerpos apoptóticos20
Fagocitosis por células especializadas Fagocitosis por células hermanas

20
Vesículas con material celular

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 Control de la apoptosis
Activación de las caspasas21

Las primeras caspasas que se activan se llaman procaspasas

iniciadoras (8, 9, 10).
Las iniciadoras activan a muchas procaspasas ejecutoras
(cascada porteolítica de caspasas)
Las caspasas ejecutoras escinden proteínas clave de la
célula
Desde las primeras etapas del desarrollo embrionario, las células
sanas fabrican procaspasas y otras proteínas necesarias para la
apoptosis.
Activación de la apoptosis desde el exterior de la célula (vía
extrínseca) eliminación selectiva de células del sistema inmunitario

Activación de la apoptosis desde el interior de la célula (vía intrínseca)

21
Cisteín-proteasa que hidroliza a su sustrato al lado de un residuo de ácido aspártico

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 Tema 9. Meiosis y gametogénesis

Reproducción sexual
La reproducción de los seres vivos implica una capacidad de adaptación a las variaciones que se
producen en el medio ambiente, generación tras generación.
La meiosis es un proceso que juega un papel clave en la reproducción Este proceso tiene lugar
una vez la célula ha duplicado tanto su material genético como sus orgánulos.
1. Meiosis: División especial de las células germinales
formando otras nuevas a partir de la mitad de los
cromosomas, generando gametos.
2. Fecundación: Fusión celular de 2 células (espermatozoide
y el ovocito secundario) que tiene como resultado la
formación de un cigoto.
La reproducción sexual se basa en la unión de dos células que
previamente han sufrido una división especial, de este modo se formará una célula (cigoto) a partir
del cual se formará un nuevo organismo que recoge información genética de dos orígenes distintos
combinando la información genética de dos gametos fusionados, uno de origen paterno y otro de
origen materno.
Ventajas de la reproducción sexual
Se une el genoma de dos células (gametos). Los descendientes difieren genéticamente de sus
progenitores y también entre ellos.

La mezcla de genes ayuda a las especies a sobrevivir en un entorno variable e impredecible

También ayuda a eliminar genes peligrosos de una población

Meiosis
Tipo de división celular que se produce en las células sexuales germinales (diploides =2n) para
obtener gametos (haploides = n), por medio de dos divisiones consecutivas.

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 Fases de la meiosis

La meiosis I es reduccional, lo que quiere decir que el número de cromosomas se divide, las células
hijas quedan con la mitad de la dotación cromosómica (n) que tenía la célula madre (2n); la II es
ecuacional, es decir, la cantidad de cromosomas no varía.
MEIOSIS I
Interfase
Se produce la duplicación del ADN durante la fase S

Profase I
Es la etapa más compleja del proceso, y donde se encuentran las diferencias más importantes
respecto a la mitosis. Se suele subdividir en cinco subetapas en función del comportamiento
cromosómico: leptoteno, zigoteno, paquiteno, diploteno y diacinesis:

Leptoteno: se caracteriza porque se inicia la condensación o compactación de la cromatina y

los cromosomas de dos cromátidas comienzan a visualizarse. Los cromosomas se presentan
como estructuras filiformes. Los telómeros están unidos a la lámina nuclear.

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 Cigoteno: Los cromosomas continúan condensándose, acortándose y engrosando. Los
homólogos (dos cromátidas cada uno) se asocian, alineándose por parejas de homólogos,
uniéndose entre sí mediante el complejo sinaptonémico22. Esta asociación o apareamiento
en forma de cremallera de los cromosomas se llama sinapsis. A la estructura resultante de
la unión de los dos cromosomas homólogos en sinapsis se le llama bivalente o tétrada.

*Las cohesinas lo mantienen unido

Paquiteno: se produce un acortamiento y engrosamiento de los bivalentes. Gracias a la

sinapsis se produce el sobrecruzamiento (roturas transversales en las cromátidas de los
cromosomas homólogos y posterior
unión cruzada de los extremos rotos)
que hace posible el intercambio de
segmentos (con sus genes) entre las
cromátidas de los cromosomas
homólogos (así, quedan formando
parte de la misma molécula de ADN
segmentos que inicialmente
pertenecían a cromátidas de dos
cromosomas homólogos, uno de
procedencia paterna y otro de
procedencia materna) este proceso se
denomina recombinación genética.
Gracias a la recombinación se incrementa la variabilidad genética, al formarse nuevas
combinaciones de genes. Se forman quiasmas.

22
Mantiene a los cromosomas homólogos unidos y alineados el uno con el otro para la formación de los quiasmas en la
recombinación

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 Diploteno: Los cromosomas homólogos unidos en sinapsis inician su separación que avanza
hasta que sólo quedan unidos por quiasmas, que coinciden con los puntos de
sobrecruzamiento. Las cromátidas hermanas siguen unidas por sus centrómeros como al
inicio del proceso. Desaparece así el complejo sinaptonémico.

Nota: Una variante es el dictioteno que solo se produce en los ovocitos primarios en las
mujeres. En el séptimo mes del desarrollo embrionario, todas las células germinales son
ovocitos primarios y todas han entrado en meiosis, pero se han quedado paradas en el
dictioteno, en ese momento los cromosomas de esas células se descondensan y sintetizan
grandes cantidades de proteína.
Estos quedan parados durante años hasta que llega la ovulación (pubertad hasta unos años
antes de la menopausia), cada mes hay un ovocito primario que reanuda la meiosis y que
pasa a ovocito secundario.

Diacinesis: Se produce la desorganización de la membrana nuclear hasta desaparecer, y los

centrómeros de cada cromosoma quedan unidos por sus cinetocoros a fibras del huso
acromático recién formado. Los cromosomas alcanzan un elevado grado de condensación, y
la separación de los pares de cromosomas homólogos de cada bivalente continua, de modo
que los quiasmas se desplazan hacia los extremos de los cromosomas, por donde
permanecen unidos hasta la metafase.

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 Prometafase I
*Algunos libros lo incluyen dentro de la diacinesis.
Se rompe la carioteca y comienza el movimiento de los bivalentes al plano ecuactorial.
Metafase I
Los cromosomas de los bivalentes se condensan al máximo y se
desplazan hacia el ecuador de la célula para formar la placa metafásica.

Cada par de homólogos se orientan de modo que cada uno de

dichos cromosomas se sitúan en lados opuestos de la placa, el de
origen materno hacia uno de los polos y el de origen paterno al
contario; dicha orientación, es al azar, lo que es causa de
variabilidad en los gametos.
También se orientan los cinetocoros al centro del cromosoma.
Anafase I
Un cromosoma homólogo, con sus dos
cromátidas hermanas, se separa (gracias
a la acción de la separasa que rompe la
unión de las cohesinas; separa todas las
cohesinas excepto las del centro del
cromosoma) hacia cada uno de los polos
de la célula, arrastrada por el
acortamiento de los microtúbulos
cinetocóricos.
La diferencia más importante de la anafase I con la anafase mitótica típica es que son cromosomas
homólogos de dos cromátidas lo que se separan y no cromátidas hermanas.
A. Movimiento de los polos
B. Separación de los polos
Telofase I
Los grupos de cromosomas de dos cromátidas alcanzan los polos del huso y se forman envolturas
nucleares (carioteca) alrededor de ellos, para formar los dos núcleos hijos, que tienen sólo la mitad
de cromosomas que la célula madre (son núcleos haploides, n y el de la madre era diploide, 2n),
aunque cada uno sigue teniendo dos cromátidas (ADN duplicado, y por eso es necesaria la meiosis
II). Se descondensa la cromatina.

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 Citocinesis I

Interfase II
Los cromosomas se descondensan un poco, pero pronto comienzan a condensarse de nuevo. En
esta interfase no hay replicación del ADN, pues los cromosomas ya están duplicados.
MEIOSIS II
Sucede igual que en la mitosis pero tenemos la
mitad de los cromosomas.
Profase II
Condensación de los cromosomas y formación del
huso meiótico.
Prometafase II
Rotura de la carioteca y movimiento d ellos
cromosomas al plano ecuatorial
Metafase II
Cromosomas en el plano ecuatorial y orientación
de los cinetocoros

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 Anafase II
Separación de las cromátidas (Anafase A y B)
Telofase II
Formación de las cariotecas, descondensación de la cromatina y termina la citocinesis II

Origen de la variabilidad genética en la meiosis

a. Recombinación genética
b. Distribución al azar de los homólogos
Variabilidad genética en la reproducción sexual
a. Recombinación genética (Meiosis)
b. Distribución al azar de los homólogos (Meiosis)
c. Combinación de los genes del óvulo y el espermatozoide (Fecundación)

Comparación de mitosis y meiosis

Mitosis Meiosis
Células Células
somáticas germinales
Replicación del
Replicación del
ADN + 2
ADN + división
divisiones La cromatina se
celular
celulares condensa en
Duración corta Puede durar años cromosomas. El
Diferencias Los homólogos citoesqueleto dirige
Semejanzas
Lo homólogos tienen una el reparto
son estrecha relación cromosómico. Se
independientes al inicio de la dividen el núcleo y el
división citoplasma
Existen
Copia exacta
variaciones en el
del genoma a
genoma de las
las células hijas
células hijas

Evolución del número de cromosomas y de moléculas de ADN

Profase I Telofase I 2n, 4c
Citocinesis I Metafase II 1n, 2c
Anafase II Telofase II 2n, 2c
Citocinesis II 1n, 1c

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 Consecuencias genéticas de la meiosis
1. Reducción del número de cromosomas a la mitad
2. Generación de diversidad genética en los gametos
a. Recombinación entre cromátidas de homólogos durante la profase de la primera
división.
b. Reparto al azar de cromosomas de origen paterno y materno durante la anafase de
la primera división.
3. Las células generadas por meiosis son genéticamente diferentes unas de otras y de la célula
progenitora
4. Los errores producen patologías importantes

Gametogénesis
Es el proceso de formación de los gametos. Los gametos son células haploides capaces de
fusionarse y formar el cigoto, célula origen de todas las células de un nuevo individuo.
La gametogénesis se produce en las gónadas: ovarios en la mujer, testículos en el hombre

Espermatogénesis
Los espermatozoides se localizan en los túbulos seminíferos que se encuentran en los testículos.
Van desde la base de los túbulos a la luz del conducto.

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 Fase proliferativa: durante toda la vida del hombre, las espermatogonias proliferan (mitosis)
en la base de los túbulos seminíferos
Fase madurativa: a partir de la pubertad, se produce en una proporción de espermatogonias
(meiosis + diferenciación) espermatozoides.

Espermiogénesis
Es la diferenciación de las espermátidas a
espermatozoides. Eliminación progresiva de todos los
componentes celulares que el espermatozoide
maduro no necesita.
Partes del espermatozoide:

Cabeza: acrosoma, núcleo

Cola: pieza intermedia, flagelo
Desde el desarrollo embrionario a la pubertad ocurre
la proliferación de espermatogonias, de la pubertad a
la muerte una parte continua proliferando y otra hace
meiosis y se diferencia.

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 Transporte de los espermatozoides

En la eyaculación, los espermatozoides atraviesan rápidamente el aparato genital, se mezclan con

las secreciones de la vesícula seminal y la próstata. El pH del líquido seminal normal es de 7- 8,3.
Entre 2-5mL de semen/eyaculación (15-50 millones de espermatozoides/mL)
Los espermatozoides eyaculados son morfológicamente maduros, pero funcionalmente no
fecundantes, empiezan a ser fecundantes una vez entran en la vagina.

Ovogénesis
El ovocito es la mayor célula conocida, tiene un gran diámetro
que produce una anisogamia23, su gran tamaño se debe a que
contiene reservas nutritivas en forma de vitelo. Contiene una
zona pelúcida cubierta proteica de protección mecánica
donde se produce el reconocimiento específico de los
espermatozoides
Cambios celulares
a) Proliferación y diferenciación
Ovogonias:
Desde el 4to mes haste el 7mo del desarrollo
embrionario proliferan y progresivamente van entrando
en meiosis (ovocitos primarios)
En el 7mo mes todos han entrado en meiosis, que
queda parada en el diploteno de la profase I
(dictioteno)
b) Crecimiento
Ovocitos primarios:
Parados en dictioteno desde el 7mo mes del embrión
hasta, como mínimo la pubertad). Los cromosomas

23
Gran diferencia de tamaño entre las gónadas femeninas y masculinas

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 están descondensados por lo que se produce la expresión génica.
Dentro de los folículos ováricos, las células foliculares contribuyen a la nutrición de los
ovocitos en crecimiento.
Están conectadas entre sí y con el ovocito por uniones gap que permiten el intercambio de
moléculas pequeñas.
c) Maduración folicular
Ovocitos primarios:
Desde la pubertad y hasta algunos años previos a la menopausia, cada mes maduran entre 5
y 12 folículos, cada uno portador de un ovocito
primario.
d) Maduración del ovocito predominante y ovulación
Uno de los folículos que maduran predomina sobre
los demás y en él se dan:
La maduración del ovocito predominante
Concluye la meiosis I con formación de un
ovocito secundario + un primer corpúsculo
polar.
Avance del ovocito secundario hasta la
metafase II, donde vuelve a detenerse la división.
La ovulación Expulsión del ovocito del ovario en la cavidad peritoneal del aparato
reproductor.
e) Post-ovulación
Ovocito secundario expulsado:
El ovocito secundario es captado por la trompa de
Falopio y se dirige hacia el útero. Permanece parado en
metafase II hasta que es fecundado por un
espermatozoide. Si es fecundado, se reanuda la meiosis
II y concluye con la formación de un óvulo + un segundo
corpúsculo polar.
El óvulo fecundado es el nuevo cigoto.
Folículos ováricos
Estructuras tisulares que se encargan de la protección y nutrición del ovocito. Desde el nacimiento
y hasta la ovulación de cada ovocito, los folículos son primarios.
Cada mes, entre 5 y 12 folículos empiezan un proceso de crecimiento y maduración y pasan a
folículos secundarios (más grande, más células foliculares y desarrolla un antro región cargada
de líquido)
Folículo de Graaf (terciario), el antro es más de la mitad del volumen del folículo. Solo en uno de
esos folículos folículo predominante, se va a producir la maduración y ovulación del ovocito
predominante. El aumento de FSH + LH desencadena la maduración del ovocito primario
predominante a ovocito secundario y su expulsión.

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 Características del ovocito después de la ovulación

Transporte del ovocito

1. Captación del ovocito por la trompa
de Falopio y desplazamiento gracias
al fluido segregado por las células
epiteliales, el movimiento de los cilios
(células epiteliales) y las
contracciones del músculo liso.
2. Lugar de fecundación (tercio externo
de la trompa). Desplazamiento al
útero + primeras divisiones.
3. Si no hay fecundación entre 12-48h
después de la ovulación: el ovocito
muere menstruación.

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 Fecundación
Inseminación y transporte de los espermatozoides

1. Vagina Inseminación: espermatozoides depositados en la parte alta de la vagina

2. Cuello o cérvix uterino pH óptimo para la motilidad de los espermatozoides (6-6,5). Los
espermatozoides lo atraviesan por: movimientos musculares de las paredes del cérvix y
movimientos del flagelo.
3. Útero y trompas Los espermatozoides se desplazan por: movimientos del flagelo,
contracciones del músculo liso de la trompa.
Capacitación: Adquisición de la capacidad de fecundar, alcanzada dentro del tracto genital
femenino (5-6 horas de duración, concluye con la llegada a las
trompas).
4. Ovocito secundario: Solo unos 200 llegan a las proximidades
del ovocito
Fusión de los gametos
Para llegar al ovocito, el espermatozoide atraviesa:

La corona radiada son 2/3 de capas de células foliculares con

una matriz extracelular rica en ácido hialurónico. Los
espermatozoides atraviesan la corona gracias al movimiento
flagelar y a la hialuronidasa24 (de la superficie celular).
La zona pelúcida contiene tres tipos de glucoproteínas que
forman una red tridimensional: ZP2 y ZP3 se unen formando
largos filamentos, mientras que ZP1 forma puentes entre sí.
ZP3 es reconocida y se une al espermatozoide
(determinante para evitar fertilización entre especies)
Reacción acrosómica
Provoca la exocitosis de las enzimas hidrolíticas del acrosoma
del espermatozoide penetración zona pelúcida contacto
con la mp del ovocito fusión de las membranas de las dos
células el núcleo y el centrosoma del espermatozoide
penetran en el ovocito secundario.

24
Enzima que descompone el ácido hialurónico

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 Activación del ovocito
La entrada de un espermatozoide activa el ovocito que:
a) Reanuda la meiosis: Desde la metafase II hasta el
final, con la formación de un óvulo maduro
(fecundado) y la expulsión de un segundo
corpúsculo polar.
b) Evita la polispermia mediante la reacción cortical:
Exocitosis de los gránulos corticales alteración
de la zona pelúcida impedimento de la
polispermia de dos formas:
a. Se inactiva ZP3. No existe más
reconocimiento de más espermatozoides
b. Se rompe ZP2. Endurecimiento de la zona
pelúcida
Formación del cigoto. Anfimixia
Aproximación de los núcleos, las cariotecas están en contacto (no se fusionan). Se inicia la mitosis,
se forma el huso mitótico del cigoto y en la prometafase se rompen las cariotecas.
Anfimixia: Proceso por el que los cromosomas maternos y paternos se unen al mismo huso
mitótico. Fin de la mitosis dos blastómeros.

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 Tema 10. Genoma y herencia

Genoma humano
Recuerdo histórico
En 1865 Mendel descubrió que existen factores discretos que no se mezclan, sino que se combinan
unos con otros cuando se transmiten de una generación a otra. Se trata de entidades estadísticas
abstractas. No conoce su naturaleza química.
Más tarde Watson y Crick descubrieron la doble hélice de ADN.
Conceptos básicos de herencia

Genoma: contenido total de ADN de una célula. Se aplica a células,

organismos, especies. Existen dos tipos: genoma nuclear y genoma
mitocondrial.
Gen: segmento de ADN que contiene la información necesaria para
sintetizar una o más macromoléculas con función biológica.
Genotipo: información genética de un individuo
Fenotipo: características detectables (físicas y conductuales) de un
organismo, producto de la expresión del genotipo y de la influencia
del ambiente

Cromosomas homólogos: Pareja de cromosomas que tienen

o Misma forma y tamaño (excepto la pareja X e Y)
o Los genes que controlan las mismas características hereditarias
o Uno viene del espermatozoide paterno y el otro del óvulo materno.
Locus, loci: posición específica dentro de un cromosoma
Alelo: cada una de las formas alternativas que puede tener un gen ejemplo, el gen AB0 es
una serie alélica con tres formas: IA, IB, i. Un gen determinado tiene un alelo en cada
cromosoma homólogo. Los alelos de dos homólos pueden ser iguales o diferentes.

Homocigosis: los dos alelos de un gen (en los homólogos) son idénticos
Heterocigosis: los dos alelos del gen son diferentes
Hemicigosis: solamente existe un alelo para cada gen

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 Alelismo múltiple: existencia de varios posibles alelos
para un gen.
o Un gen determinado tiene un alelo en cada
cromosoma homólogo. Los alelos pueden ser
iguales o diferentes
Leyes de Mendel
1º ley de Mendel Uniformidad de los híbridos de la primera
generación.
Si se cruzan dos individuos homocigotos (para un gen) con
parejas de alelos diferentes, todos los descendientes de la
primera generación serán iguales entre sí y heterocigotos (igual
genotipo y fenotipo)
Herencia dominante: (en el cromosoma homólogo) Un
alelo es dominante cuando su expresión es evidente
siempre, independientemente de qué alelo tenga como
pareja. Un alelo es recesivo cuando su expresión solo es
evidente en ausencia de un alelo dominante.
2º ley de Mendel segregación de los genes.
Al cruzar entre sí individuos de la primera generación
(F1), en la segunda generación (F2) aparecen individuos
que presentan los genotipos y fenotipos de la
generación parental.
3º ley de Mendel distribución independiente de los
caracteres.
En la transmisión de dos o más genes, cada pareja de
alelos se transmite independientemente de cualquier
otra pareja de alelos de otro gen. Apareciendo en F2
todas las combinaciones posibles para estos caracteres.
Teoría cromosómica de la herencia
Enunciada por Sutton y Boveri (1902), confirmada por Morgan (1915). Adapta las leyes de Mendel
al descubrimiento de los cromosomas y los genes.

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 Mendel Teoría C
Cada gen no es un cromosoma. Un cromosoma
Cada factor mendeliano es una partícula
contiene una gran cantidad de genes
Los factores mendelianos existen en pares, un Los genes se presentan por pares, un alelo en el
factor proviene del padre y el otro de la madre cromosoma paterno y otro en el materno
En la meiosis, los genes se segregan (dentro de
Los factores se segregan cuando se forman los
sus cromátidas) cuando se forman los gametos,
gametos, y cada gameto porta un solo factor
y cada gameto porta una copia del gen
Los factores mantienen su individualidad Los genes y cromosomas mantienen su
estructural durante todo el ciclo vital de un individualidad estructural durante todo el ciclo
organismo vital de un organismo

Estructura y función del ADN

Una molécula de ADN está formada por 2 cadenas
complementarias de nucleótidos unidas por puentes de
hidrógeno. Cada cadena ADN hecha de combinaciones
de 4 tipos de nucleótidos (ACGT).
Las cadenas de ADN

cadena lineal y la secundaria es una doble hélice.

Los nucleótidos están formados por una pentosa + 1 o
más fosfatos + 1 base nitrogenada25. La unión AT forma
dos puentes de hidrógeno y la GC forma tres puentes de
hidrógeno.
Tiene una función autosintética Replicación: copia
necesaria para la transmisión de la información. La
estructura del ADN explica el mecanismo de la herencia.
Y heterosintética Síntesis: de moléculas con función biológica (proteínas, ARN no codificantes)

25
Bases púricas: AG y bases pirimidínicas TC.

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 Puede desnaturalizarse: por temperatura y álcalis (rompiendo los enlaces de puente de hidrógeno)
y renaturalizarse por el proceso aleatorio.
Tipos de doble hélice

Fisiológicamente hay mayoría de forma B y minoría de forma A, las de forma Z son infrecuentes. Las
moléculas de doble ARN e híbridas ADN-ARN adoptan hélice dextrosa tipo A.
Proyecto genoma humano
Sus objetivos son:

Determinar la secuencia completa de nucleótidos

Almacenar toda la información en bases de datos
Mejorar los métodos de análisis de datos
Identificar los genes que existen en el genoma
Supervisar los temas éticos, legales y sociales derivados del PGH
Fechas importantes
1990: Inicio del proyecto, liderado por el departamento de energía y el instituto nacional de salud
(USA)
2000: se completa el borrador de todo el genoma humano
2001: se hace público el análisis del borrador
2003: se completa la secuenciación y el proyecto se declara terminado
Resultados descriptivos
Los genes son muy grandes. La diferencia en tamaño gen-proteína muestra que hay largas
extensiones de ADN no codificante (intrones y secuencias reguladoras) y una porción minoritaria
codificante (exones).
Los genes se concentrar en regiones aparentemente aleatorias del genoma, con grandes espacios
de ADN no codificante entre ellos.

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 Existen las islas CpG. Zonas ricas en CG en adyacentes a las zonas ricas en genes (barrera frente al
resto del genoma)
El cromasoma 1 es el que más genes tiene (3141) y el cromosoma Y el que menos (231)
Secuencias
El genoma humano es intensamente REPETITIVO
1. Repetidas (aprox 50% del genoma)
a. ADN microsatélite
Repeticiones en tándem de grupos de 1-4 nucleótidos en regiones no codificantes
b. ADN minisatélite
Repeticiones en tándem de secuencias de 5-100 nucleótidos en regiones no codificantes
Ejemplo: los telómeros con secuencias de 6nt repetidas en tándem

Monomórficos: todos los individuos de la especia tienen el mismo número de

repeticiones
Polimórficos: cada individuo tiene un número de repeticiones diferente
c. ADN -satélite
Repeticiones en tándem de secuencias de más de 100 nt.
Ejemplo: el ADN del centromero tiene una secuencia de 170 nt. Este puede unirse a una
variante de la histona H3 llamada CENP-A
d. Transposones
Elementos genéticos móviles que se han multiplicado en nuestro genoma por
autorreplicación e inserción de nuevas copias en posiciones diferentes. Tiene interés
evolutivo y etiopatogenia26
i. No retrovirales
Secuencias de ADN que incluyen información para sintetizar un complejo
retrotranscriptasa/endonucleasa. Además, requiere de múltiples enzimas de la
célula.
1. LINEs La secuencia LINE más abundante es la L1. Tiene una longitud
de 6mil nt. Tenemos 800mil copias (21% del genoma). Mutación en el
gen del factor VIII (hemofilia)
2. SINEs En humanos reciben el nombre de secuencias Alu. Tienen
una longitud de 300nt y se repiten 1millon 500mil veces (13% del
genoma)

26
Causas y mecanismos de cómo se produce una enfermedad concreta

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 ii. Similares a retrovirus
Sus secuencias incluyen información para sintetizar una integrasa y una
transcriptasa reversa. No necesitan enzimas adicionales.
2. Únicas
a. Genes: Secuencia de ADN que contiene la información necesaria para codificar una o
más moléculas con función biológica
b. Pseudogenes: Secuencias similares a los genes funcionales. Contienen múltiples
mutaciones/cambios que impiden su expresión. Se forman por duplicación de un gen
funcional.
Interés confusiones en diagnóstico evitar falsos positivos
Transcritos
1. ARNm. Codifica proteínas
a. ARNht (heterogéneo nuclear) o ARNm inmaduro: antes del splicing (corte y unión)
b. ARNm maduro tras el splicing (corte y unión)
2. ARNr. Estructural de los ribosomas, cataliza la síntesis de proteínas
a. ARN nucleolar o ARNr inmaduro: ARNr 45 S
b. ARNr maduro: fragmentos derivados del 45 S (28 S;5,8 S; 18S) y el ARNr 5 S
3. ARNt. Adaptador ARNm-aminoácidos
4. ARNsn (small nuclear). Forma parte del espliceosoma. Modifica ARNm
5. ARNsno (small nucleolar). Modifica ARNr 45 S
6. ARN sca (small cajal body-specific). Modifica los ARNsn y ARN son
7. RNAi (ARN de interferencia). Se genera a partir de ARN ds. Localiza sus dianas por
apareamiento de bases
8. ARN intrónico (de los intrones, algunos
contienen ARNmi)
9. IncRNA (ARN largo no codificante) Más de 200
nt, podrían actuar en la activación o represión
de genes (funciones poco conocidas)
10. ARN de xist. Transcrito dell gen Xist. Participa en
la inactivación de un cromosoma X en mujeres
11. TERC (componente de ARN de la telomerasa).
Estructural de la telomerasa

Variabilidad del material genético

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 Polimorfismo
o Existencia de múltiples alelos para un gen
o Sinónimo de alelo polimórfico: variante del alelo normal que no afecta a la función
fisiológica. Aparece al menos en un 1% de la población.
Mutación
o Alteración permanente de la secuencia de ADN
o Sinónimo de alelo mutado: alelo cuya presencia se relaciona con una patología.
Aparece en un porcentaje <1% de la población

Tipos de mutación
Según el tipo de célula afectada

Germinal
Se originan durante la vida de una célula germinal, mayoritariamente durante la meiosis. La
mutación llega a uno o más gametos derivados de la meiosis. Si un gameto portador da
lugar a un cigoto, la mutación se encontrará presente en todas las células del organismo
descendiente (transmisión hereditaria)
Las células germinales del hijo también la poseen y la transmiten a sus descendientes.
La importancia depende de cual sea la función afectada (Si es esencial, ocurren abortos
tempranos, a veces no detectables; si no es esencial, pero si importante, se origina una
enfermedad hereditaria)

Somáticas
Aparecen en una célula somática diploide de cualquier órgano, tejido o célula aislada,
durante el desarrollo o en la edad adulta. Afectan solo a esa y a las células descendientes,
no a todo el organismo. Cuanto más temprano surja la mutación, mayor será el territorio
afectado.
El individuo adulto es un mosaico genético: presencia de dos o más líneas celulares
genéticamente distintas, derivadas de un mismo cigoto.
Nunca son heredables

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 Según el tamaño de la mutación

Cromosómica
Puntual (alteración de un nucleótido)

Según las consecuencias sobre el producto sintetizado

Silenciosas

No silenciosas
o Mutación con cambio de sentido (missense)

o Mutación sin sentido (nonsense)

o Mutación con cambio de pauta de lectura (frameshift)

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 Las inserciones y deleciones de un nucleótido cambian la pauta de lectura
Agentes que dañan el ADN

Condiciones fisiológicas:
metabolismo
Radiaciones: Ionizantes, UV
Radicales libres
Agentes químicos
Virus
Mecanismos de reparación
Tipos de lesiones en el ADN:
1. Modificación química de una base nitrogenada (mutación si no lo repara)
2. Pérdida de una base nitrogenada (deleción si no lo repara)
3. Uniones covalentes cruzadas entre bases (crosslinks)
a. Dentro de la misma cadena
b. Entre cadenas
4. Apareamiento incorrecto (durante la replicación)
Provoca una distorsión de la doble hélice
Reparación por reversión directa
El daño ocurre en bases específicas.

Alquilación de bases. Agentes alquilantes metilan las bases de guanina. Esta modificación
produce un apareamiento erróneo de esta base con la timina en vez de la citosina durante
la replicación.
La metilguanina ADN metiltransferasa (MGMT) elimina el grupo metilo de la guanina,
transfiriéndola a un sitio activo de cisteína propia. Esta unión inactiva la enzima, que se
degrada en el proteosoma (enzima suicida)
Reparación por escisión
1. Reparación de base (BER)
Repara las bases modificadas (C y A desaminadas, oxidadas, etc.) y la pérdida de bases.
Detección de la BN dañada y eliminación (glicosilasa)
Eliminación del azúcar fosfato (endonucleasa AP+fosfodiesterasa)
Reemplazo del NT eliminado (DNA polimerasa)
Ligamiento (DNA ligasa)
2. Reparación de nucleótidos (NER)

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 Repara casi cualquier tipo de distorsión de la doble hebra: dímeros de pirimidina (T-T, T-C, C-C),
uniones covalentes con hidrocarburos. Una variante es NER acoplada a la transcripción.
Detección de una alteración de la doble hélice y desenrollado de la misma (helicasa)
Corte de un fragmento de 30nucl. que incluye la lesión (complejo proteico con actividad
nucleasa)
Sustitución por los nucleótidos correctos (ADN-polimerasa) Uso de la cadena no dañada
como molde
Ligamento de la cadena (ADN-ligasa)
3. Reparación de apareamiento erróneo (MISMATCH REPAIR)
Se reparan los apareamientos erróneos de bases (no complementarias) que se han introducido
en el ADN durante la replicación.
Reconocimiento de la lesión en ADN por el complejo proteico MutS
Incorporación y reconocimiento de la cadena nueva por el complejo proteico MutL
Corte y eliminación del fragmento dañado por la exonucleasa I y sustitución por
nucleótidos correctos por la ADN polimerasa delta
Ligamiento de la hebra por la ADN ligasa
Reparación por rotura de hebras
Este proceso permite la reparación del ADN cuyas dos hebras se han roto

Patrones de transmisión

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 Árboles genealógicos

Herencia autosómica

Dominante
o No dependen del sexo: afecta igual a
hombres y mujeres
o Patrón de transmisión vertical aparece
en todas las generaciones
o Un individuo no afectado no puede
transmitir el gen afectado que determina la
enfermedad
o Recurrencia usual 50%

Recesiva
o No dependiente del sexo: afecta igual a hombres y
mujeres
o Individuos sanos pueden transmitir la enfermedad
o Patrón de transmisión horizontal: salta generaciones
o Recurrencia usual 25%
o El riesgo de enfermedad aumenta
Uniones entre consanguíneos

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 Segregados genéticos
Herencia ligada al sexo
En los cromosomas sexuales X, y se da un heteromorfismo cromosómico. El cromosoma X es de
tamaño mediano, submetacéntrico y tiene una gran cantidad de genes (aprox 1000), por lo que
tiene numerosas patologías asociadas, mientras que el cromosma Y es pequeño, acrocéntrico, con
escasos genes y presenta heterocromatina

Ligada a X dominante
o Afecta más a mujeres que a hombres, aproximadamente el doble de enfermas que
de enfermos
o Los varones afectados transmiten la enfermedad a todas sus hijas pero a ninguno de
sus hijos
o Las mujeres enfermas heterocigóticas transmiten la enfermedad a la mitad de sus
descendientes de uno y otro sexo (igual como en herencia autosómica dominante)
o Las mujeres enfermas homocigóticas transmiten la enfermedad a toda su
descendencia (igual como en herencia autosómica dominante)

Ligada a X recesiva
o La frecuencia de la enfermedad es mucho mayor en hombres que en mujeres
o La mutación que determina la enfermedad es transmitida por un hombre enfermo a
través de todas sus hijas, que serán sanas portadores, a la mitad de los hijos varones
de estas.
o La mutación que determina la enfermedad, no es transmitida generalmente de un
hombre enfermo a su hijo varón.

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 o El carácter puede transmitirse por mujeres portadoras por varias generaciones sin
que aparezca la enfermedad (patrón horizontal)

Ligada a Y

Tema 11.1 Cultivos celulares

Definición
Son células, tejidos u órganos, que han sido aislados de un organismo, metidos en una placa de
cultivo y han sobrevivido más de 24h.
Técnicas de cultivo celular
Conjunto de técnicas que nos permiten mantener células creciendo bajo condiciones controladas
27

Condiciones para el mantenimiento de las células vivas

27
Vida fuera del organismo

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 Medios de cultivo definidos: MEM, RPMI-1640, F-12
Esterilidad: tanto al manipular, como el material y los medios
Condiciones ambientales: temperatura de 37ºC y una atmósfera controlada con CO2 en el
aire, humedad y celular
Condiciones para que la célula crezca como si estuviese en su hábitat.
Los medios de cultivo contienen: aminoácidos, vitaminas, sales, glucosa, tampón y un indicador de
pH (regula el color al cambiar el pH)
Suero bovino/equino fetal, tiene los factores de crecimiento, permite que las células se adhieran a
la superficie, ya que al principio están flotando.
El antibiótico (penicilina) para que no se contagien.

Condiciones ambientales (incubador de células)

Tipos de cabina
En las cabinas hay luces ultravioleta para desinfecta la zona a la que llegue.
Deben tener un espacio que mantengan las condiciones esteriles para poder trabajar

Clase II: Constan de 2 filtros hepa. Aplican un flujo laminar previamente filtrado (aire estéril)
para que no contamine la zona de trabajo.
Clase III: Constan de 2 filtros hepa y está totalmente sellada
La diferencia es que en la de clase II llega aire exterior, la III está totalmente sellada

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 Técnicas para la obtención de las células en cultivo

Cultivo de explantes: se siembran fragmentos de tejido pequeños (1mm3) y se cubren con

medio de cultivo. Las células migran del explante a la placa.
Cultivo de células aisladas:
o Células libres (sangre, médula ósea)
o Cultivos de tejidos sólidos
Disgregación mecánica
Disgregación enzimática (tripsina, colagenasa, etc.)
La confluencia de un cultivo origina la inhibición por contacto apoptosis de la célula

Técnica de subcultivo
Hay muchas células, llegan a una confluencia mayor del 70% técnicas de subcultivo o pase
El objetivo de la realización de un subcultivo es mantener las células en condiciones de duplicación
normales y no entren en apoptosis. Las células adheridas a superficies sólidas se despegan del
soporte y separan enzimáticamente (tripsina), después se resuspenden, se tiñen con colorante vital
(azul de tripano) y se cuentan.
En el subcultivo, renovamos el medio de cultivo y mantenemos la relación células /medio/superficie
incial. Si partimos de un cultivo de células en suspensión directamente contamos las células
Clasificación de los cultivos

Primarios: se obtienen directamente del ser vivo. Cultivos por explantes o por células
aisladas de un tejido
Secundarios: proceden de un cultivo primario por un proceso de subcultivo. La mayoría de
células mueren después de un número finito de divisiones.

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 Líneas establecidas: son los cultivos a los que las células se han adaptado a las condiciones
in vitro y son capaces de vivir indefinidamente

Tiempo de duplicación: Es el período de tiempo que tarda

(un cultivo) en duplicar el número de células

Patrones morfológicos

Tipo de crecimiento según la adherencia

Monocapa Se forma una capa simple de células adheridas a una superficie

Suspensión Las células se multiplican suspendidas en el medio de cultivo

Para que se adhieran es necesario el suero bovino fetal

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 Ventajas e inconvenientes
Ventajas
1. Las células crecen en un medio controlado y definido y son directamente accesibles.
2. Las células suelen formar una población homogénea (todas del mismo tipo)
3. Se obtiene un gran número de células
4. Se observan directamente las células vivas
Inconvenientes
1. La adaptación a la vida in vitro supone un cambio importante en el microambiente natural
de la célula, lo que pueden repercutir en sus funciones. No son exactamente iguales a las
células de las que se derivan in vivo.
2. El peligro de contaminación está siempre presenta (virus, micoplasmas, levaduras, bacterias,
etc.)
Dependen de lo que quieres investigar
Aplicaciones
Estudio de la división celular u otros procesos
Ginecología (fecundación in vitro)
Citogenética (cariotipo)
Bioquímica
Microbiología (soporte para cultivo de virus)
Fabricación de vacunas
Terapia génica y mapas génicos
Farmacología (pruebas de fármacos)
Inmunología (obtención de anticuerpos monoclonales a partir de células híbridas o
hibridomas)

Tema 11. 2 Citogenética

Introducción
Un cromosoma es un elemento en forma de bastón resultante de la condensación de la cromatina
del núcleo durante la división celular (mitosis o meiosis)
Cariotipo
El cariotipo es un patrón cromosómico de una especia. La citogenética es una disciplina que estudia
los cromosomas (forma, estructura, comportamiento, anomalías)

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 Metodología
La obtención del cariotipo de realiza mediante el cultivo de linfocitos de sangre periférica:

Permite el estudio de cromosomas metafásicos máxima condensación y forma definida,

podemos parar la mitosis en metafase
Fácil obtención de la muestra biológica (sangre periférica)

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 Clasificación de los cromosomas
Se clasifican los cromosomas y se ordenan por parejas de homólogos atendiendo a:

Tamaño, posición del centrómero y presencia de constricciones secundarias

Se clasifican en A, B, C, D, E, F Y G
Técnicas de estudio de bandas cromosómicas

Bandas G
La técnica que se utiliza es la desnaturalización parcial de la cromatina con tripsina + Giemsa (a
continuación de la etapa 9 del protocolo)
Las funciones son la identificación y la detección de anomalías

Bandas de alta resolución (prometafase)

Modificando el protocolo con la adición de un fármaco (metotrexato) se puede sincronizar el
ciclo celular desde la fase S y conseguir cromosomas prometafásicos, más descondensados y
finos que presentan más bandas G.

Detección de anomalías cromosómicas por cariotipo numéricas y estructurales

Citogenética molecular
Aplicación de las técnicas de biología molecular (hibridación de ADN) a preparaciones citogenéticas.
Sus aplicaciones son:

Estudio de la estructuras y función de regiones cromosómicas específicas

Detección de anomalías cromosómicas en células en interfase y metafase
Hibridación in situ fluorescente (fish)
Técnica de marcaje de los cromosomas con una sonda de ADN fluorescente, para la visualización al
microscopio de fluorescencia.

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 Procedimiento

Sondas específicas o de locus

Unión a secuencias específicas de uno o más genes. Función:
interfase y metafase (Estudio de microdeleciones)
Sondas completas o de pintado
Diversas sondas marcadas con el mismo fluorocromo que se
unen a lo largo de un cromosoma específico, dando la sensación
de que pintan el cromosoma entero.
Función: metafase detectar translocaciones28
Multifish o fish multiplexado
Cada cromosoma es marcado con un conjunto de sondas específicas de pintado. Las sondas de cada
cromosoma están conjugadas con una combinación diferente de 5 fluorocromos que dan a cada
cromosoma un pseudocolor.
24 tipos de cromosoma = 24 pseudocolores
Aplicaciones:
1. Anomalías numéricas y reordenamientos
2. Estudio de células tumorales con anomalías cromosómicas muy grandes
3. Territorios estables de los cromosomas interfásicos (se ha demostrado que en interfase
cada cromosoma ocupa un espacio determinado)

28
Desplazamiento de un segmento de cromosoma a un nuevo lugar en el genoma y se une a otro cromosoma

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 Desventajas
1. Precio alto
2. No muestran bandas (difícil ubicación de los loci con reestructuraciones)

Tema 12. Técnicas genéticas

Concepto
Ingeniería genética
La ingeniería genética es la formación de nuevas combinaciones de material genético por inserción
de moléculas de ácidos nucleicos (aislados previamente de un organismo) en un sistema vectorial
que permita su propagación continua.
Esta técnica permite aislar un gen de un organismo, para insertarlos en un vector, e integrar ese
vector en un organismo huésped diferente.
El organismo huésped, que suele ser una bacteria, célula vegetal, hongo o virus, adquiere la
capacidad de producir una proteína que le es totalmente extraña.
Ejemplo: gen de la insulina
Sinónimos: tecnología del ADN recombinante, clonaje génico y manipulación genética

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 Código genético
Es la correspondencia, equivalencia o relación entre la secuencia de bases nitrogenadas del ARNm
(complementaria del ADN) y la secuencia de aminoácidos que constituyen la proteína que codifica.
Está compuesto por codones (codón = 3 bn) que definen el proceso de traducción.

Codones de inicio: AUG

Codones de terminación: UAG, UAA y UGA
Las características del código genético son:
1. Es degenerado, redundante Hay codones sinónimos que codifican para el mismo
aminoácido (varios codones para un mismo aa), gracias a esto si ocurre una mutación el
nuevo triplete codificará para algún aminoácido. Dependiendo de si es el mismo aa u otro
habrá unas consecuencias.
2. Es universal es el mismo para todos los seres vivos. Permite obtener organismos
transgénicos.
3. Es un código continuo y sin solapamientos: es una secuencia lineal sin separación entre los
onde cada nucleótido (base) pertenece únicamente a un codón que codifica un
aa.
Análisis molecular
Entre los 70 y 80 se desarrollaron herramientas de la biología molecular y la ingeniería genética, lo
que se reconoce como ADN recombinante. La técnica se fundamenta en:

Doble cadena del ADN

Complementariedad de bases
Siempre que se encuentren secuencias complementarias se unen entre ellas
El orden de las bases determina la formación de proteínas
Código de transcripción universal
Conocimiento del gen que queremos clonar
Todas las células de un
organismo contiene el
mismo genoma pero en
tejidos diferentes se
transcriben genes
diferentes.

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 Clonación de genes

Los plásmidos son moléculas de ADN extra cromosómico

generalmente circular que se replican y transmiten
independientes del ADN cromosómico. Normalmente,
presentes en bacterias y en algunas ocasiones en levaduras.
En general, no contienen información esencial, sino que
confieren ventajas al hospedador en condiciones de
crecimiento determinadas. El ejemplo más común es el de los plásmidos que contienen genes de
resistencia a un determinado antibiótico.
Aislamiento de genes
Métodos físicos

Agitación
Sonicación, acto de aplicación de la energía del sonido (generalmente ultrasonidos) para
agitar las partículas de una muestra
Síntesis química

Oligonucleótidos pequeños

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 Enzimas de restricción

Endonucleasas de restricción Enzima aislada de una bacteria que corta la molécula de

ADN en secuencias específicas. El aislamiento de estas enzimas es fundamental para el
desarrollo de la tecnología de ADN recombinante (ADNr) y la ingeniería química.
Son proteínas que se unen al ADN de una manera muy específica. Realmente reconocen los
pares de bases en el ADN. En general se unen a una secuencia palindrómica. 29

Corte e inserción de genes en plásmidos

Vectores génicos. ADN recombinante

Un vector génico es un agente que transfiere información genética, por algún medio, de un
organismo a otro.
El ADN recombinante, o ADN recombinado, es una molécula de ADN artificial formada de manera
deliberada in vitro por la unión de secuencias de ADN provenientes de dos organismos distintos
que normalmente no se encuentran juntos. Al introducirse este ADN recombinante en un
organismo, se produce una modificación genética que permite la adición de una nueva secuencia
de ADN al organismo, conllevando a la modificación de rasgos existentes o la expresión de nuevos
rasgos.

29
Secuencia que tiene una copia en espejo de si misma

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 Método clásico de clonación

1. Se utiliza un vector (plásmido) que codifica resistencia a dos antibióticos: ampicilina y

tetraciclina.
2. Inserción. Se inserta el gen que queremos clonar, cortando con enzimas de restricción
dentro del gen de resistencia a tetraciclina (este gen queda inutilizado)
3. La inserción se conseguirá solo en un porcentaje de plásmidos (recombinantes)
4. Transformación Proceso de integración de los plásmidos por parte de las bacterias. Las
bacterias empleadas son sensibles a los dos antiobióticos. Los plásmidos se integran solo en
un porcentaje de bacterias (bacterias transformadas). Los plásmidos integrados podrían ser
recombinantes o no recombinantes.

5. Adición de las bacterias sobre una placa con ampicilina. Los transformados sobreviven
mientras que los no transformados, mueren.
6. Para distinguir los transformados con plásmidos recombinantes de los transformados con
plásmidos no recombinantes se siembran las mismas colonias en dos tipos de placas: una
con ampicilina y otra con tetraciclina.
7. Los que sobreviven en presencia de ampicilina y mueren con tetraciclina son los
recombinantes.
8. Amplificación Finalmente, hacemos crecer las colonias recombinantes, se obtienen
grandes cantidades de producto génico que posteriormente se puede purificar.

Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
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 Método del gen LacZ

1. Se utiliza un vector (plásmido) que codifica resistencia a la amapicilina y tiene el gen LacZ
(codifica la enzima -galactosidasa que degrada la lactosa en galactosa y glucosa)
2. Inserción se inserta el gen que queremos clonar, cortando con enzimas de restricción
dentro del gen LacZ (este gen queda inutilizado)
3. La inserción se conseguirá solo en un porcentaje de plásmidos (plásmidos recombinantes)
4. Transformación Proceso de integración de plásmidos por parte de una bacteria.
5. Adición de las bacterias sobre la placa de ampicilina y X-gal. El X-gal es hidrolizado por la -
galactosidasa a galactosa y a producto que aporta coloración azul
6. Las colonias que sobreviven en presencia de ampicilina y no son azules, son las
recombinantes
7. Amplificación hacemos crecer las colonias recombinantes y se obtiene gran cantidad de
producto génico.
Construcción de una librería de ADN

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 Secuenciación

Método Sanger o didesoxi

Se basa en la replicación del ADN. Se emplean dideoxinucleótidos que carecen del grupo
hidroxilo del carbono 3 , de manera que cuando uno de estos nucleótidos se incorpora a una
cadena de ADN en crecimiento, esta cadena no puede continuar elongándose. Esto sucede
porque la ADN polimerasa necesita un grupo terminal 3 OH para añadir el siguiente
nucleótido y el incorporado carece de él.

El método comienza una vez que se aisla y se clona el ADN que se desea secuenciar. Este
ADN se desnaturaliza y se emplea una sola hebra para la secuenciación. En la secuenciación
se utiliza un cebador o primer, que se encarga de sumistrar el terminal 3 OH que necesita la
ADN polimerasa para comenzar a elongar. Se preparan 4 tubos de reacción, cada uno con el
ADN molde de hebra sencilla que se desea secuenciar, con ADN polimerasa, con el primer y
con los cuatro nucleótidos trifosfatados.

A cada tubo se le añade una pequeña proporción de un dideoxinucleótido trifostato; un

tubo con ddATP, otro con ddTTP, otro con ddGTP y el último con ddCTP. En cada uno de
estos tubos se producen cadenas de ADN de distintas longitudes, todas las cuales terminan
en el lugar en el que se incorporó el dideoxinucleótido correspondiente añadido al tubo.
Los productos de las 4 reacciones, cada una conteniendo una pequeña cantidad de uno de
los cuatro dideoxinucleótidos, se cargan en un gel de acrilamida y se someten a
electroforesis.

Así obtendremos un patrón de bandas en orden, del cual es posible deducir la secuencia del
ADN introducido.

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 Secuenciación de segunda generación (NSG)
Conceptos empleados:
o Profundidad: número de veces que cada base de ADN está presente en las lecturas
o Cobertura: número de lecturas presentes de una región dada
o Sensibilidad: capacidad técnica para identificar variantes presentes en las muestras
o Especificidad: fiabilidad de las variantes identificadas

Secuenciación
Clonación in vitro
PCR (Polymerase Chain Reaction)
Fue diseñada por el Dr. Kary Mullis en 1987. La utilizó para la amplificación del gen de -
hemoglobina humana, y el diagnostico prenatal de anemia falciforme.
El método se basa en la realización de tres reacciones sucesivas llevas a cabo en distintas
temperaturas. Estas reacciones se repiten clínicamente entre veinte y cuarenta veces.
1. La muestra se calienta hasta lograr la separación de las dos cadenas que constituyen el ADN
desnaturalización.
2. La temperatura se reduce para permitir el apareamiento de cada una de dos cadenas
cortas de oligonucleótidos (cebadores o primers) con cada una de las hebras separadas del
ADN molde.
Los primers son sitetizados en el laboratorio y diseñados de manera tal que permiten definir
los límites del tramo de ADN que se desea replicar. Se unen siempre al extremo 3 del gen
de interés.
3. La ADN polimerasa produce la extensión de los primers, en el espacio comprendido entre
ambos, sintetizando las secuencias complementarias de las hebras del ADN molde (la Tª la
condiciona la polimerasa)

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 La PCR se realiza en un Thermo Cycler Termociclador. Es una máquina que calienta y enfría la
reacción en periodos cortos de tiempo.

Hay que conocer previamente la secuencia que se quiere amplificar

Elevada sensibilidad. Teóricamente, es posible amplificar fragmentos de ADN a partir de
una sola molécula de doble cadena. En cualquier caso, basta una cantidad de muestra muy
pequeña (unas pocas células)
Elevada especificidad. Si se eligen bien los primers, solo se amplifica el fragmento deseado.
Poco costosa. Se realiza en poco tiempo y utiliza reactivos no muy caros.
Componentes de la PCR
ADN
Primers o cebadores
Taq polimerasa
dNTPs
Buffer
Cationes divalentes
H2O

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 La ADN polimerasa (de [Link]) se desaactiva a la alta temperatura de la desnaturalización del ADN,
por lo cual debía agregarse enzima fresca al comenzar el tercer paso de cada ciclo. Este
inconveniente fue solucionado de manera ingeniosa cuando se la reemplazó por su equivalente de
la bacteria termófila .
Aplicación: amplificar ADN

Fragmentos de ADN antiguos (momias, fósiles, etc.)

ADN de la escena de un crimen
ADN de células embrionarias para diagnóstico prenatal
ADN de genes virales
RT-PCR
Se utiliza para medir ARN (niveles de expresión génica)
Implica dos procesos:

RT- Reverse Transcription: Durante este paso, sintetizamos ADN monocatenario a partir de
la plantilla de ARN
PCR- Polymerase chain reaction: Usando cebadores específicos amplificamos una cierta
parte de nuestro gen de interés para obtener la cantidad suficiente para un análisis
posterior
¿Por qué?
El contenido de ADN es el mismo para cada tipo celular El perfil de ARN es diferente para cada
tipo celular.
Cada célula (transcribe a ARN) solo una pequeña fracción (10-15%) del total de genes contenidos en
el genoma.

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 qPCR
La PCR cuantitativa a tiempo real monitoriza la fluorescencia emitida durante la reacción como un
indicador de la producción del amplicón en cada ciclo de PCR (en tiempo real) en comparación con
la detección del punto final.
Permite cuantificar la cantidad de ADN o ARN presente en la muestra original a partir de su
temperatura de fusión (Tm)

PCR cuantitativa (o real-time): Un método que mide

en tiempo real la amplificación de ADN por la
visualización del producto de PCR
Monitorización de la reacción en tiempo real vs
análisis del producto final
La PCR cuantitativa se diseña de modo que el
incremento de la cantidad de producto produce un
incremento de fluorescencia.
Aplicaciones de la qPCR
1. Determinación del nº de copias de un gen (SYBR o sondas)
2. Detección de mutaciones de una sola base (sondas)
3. Análisis de expresión génica: RT-qPCR
4. Detección de organismos transgénicos y patógenos
Aplicaciones de la melt curve después de una qPCR

1. Detección de primers-dimers
2. Detección de mutaciones de una sola base (SYBR)

Análisis multigénico
Para ello se utilizan los microarrays. Es un dispositivo para la realización de experimentos que
permite estudiar simultáneamente múltiples unidades (ADN, expresión ARN, proteínas, etc.) sobre
un soporte sólido (cristal, plástico, sílice, etc.)
Chip de AND: serie de sondas de ADN de Usos
longitud variable
Genotipado: análisis SNPs
Unidas a un soporte sólido Genómica comparative: CGH
En una disposición prefijada Transcriptómica: estudios de
Sobre la que podemos ensayar expresión
muestras
Soportes

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 Existen muchos tipos y distintas aplicaciones: proteínas, tejidos, lípidos, etc.
Nos centramos en:
Microarrays de AND
Sondas: oligonucleótidos fijados a la
Microarrays de expresión
superficie
Microarrays de 2 colores: Spotted
Depósito de ADN directo: Síntesis in vitro de cADN y posterior deposito sobre la superficie del
microarray.
Sonda: oligonucleótidos obtenidos por PCR o RT-PCR según deban ser complementarios a ARNs o
ADN. Las ondas se unen al soporte (imprimir)
Etapas
1. Diseño y producción del chip
2. Preparación de la muestra Control y caso (2 muestras)
marcadas con distinto fluoróforo (Cy3/Cy5) gDNA (array
CGH), cDNA o RNA (transcriptómica)
3. Hibridación Hibridación competitiva
4. Escaneado del chip
5. Análisis de la imagen Cuantificación relativa de la
fluorescencia

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 Microarrays de 1 color: Síntesis on chip
Síntesis directa sobre el microarray (nucleótido a nucleótido)
Sonda: oligonucleótidos sintetizados sobre un soporte sólido mediante fotolitografía .

Etapas
1. Diseño y producción del chip
2. Preparación de la muestra Una sola muestra: cDNA ej. SNPs-Genómica-estudio de
exones. cRNA transcriptómica
3. Hibridación Hidridación no competitiva
4. Escaneado del chip
5. Análisis de la imagen Cuantificación absoluta de la fluorescencia
Comparativa

2 colores. Spotted 1 color. Síntesis on chip

Menor cantidad de sondas (regiones analizadas) Mayor cantidad de sondas (regiones analizadas)

Sondas más largas Sondas más cortas

SEÑAL + INTENSA / - ESPECÍFICA SEÑAL INTENSA / + ESPECÍFICA
Hibridación competitiva Hibridación no competitiva
Un array compara 2 muestras
Un array, una muestra
- En cada array hay que introducir
- Un array control / n arrays muestra
control. NECESIDAD DE
- Necesidad de menor cantidad de
CANTIDAD
controles
- Riesgo de hibridación cruzada
- Cuantificación absoluta (perdura en el
- Cuantificación relativa (frente a
tiempo)
ese control)
- MAYOR REPRODUCIBILIDAD
- MENOR REPRODUCIBILIDAD
Diseño por impresión Diseño por fotolitografía
+ económico - económico
+ flexible - flexible
- exacto + exacto
+ riesgo de error - riesgo de error (menos manipulativo)

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 Tecnologías ómicas

Las ómicas son la base del desarrollo de una nueva disciplina, la biología de sistemas.

Qué nos muestra Para que han servido

Describir genomas de organismos

Genómica Lo que puede pasar
Definir biomarcadores moleculares

Analizar la expresión diferencial de

genes, en diferentes condiciones
Lo que parece que está
Transcriptómica celulares
pasando
Conocer nuevas funciones de genes no
codificantes ([Link])

Analizar los efectos de tratamientos

sobre síntesis de proteínas
Proteómica Lo que hace que ocurra
Modificaciones postraduccionales
Interacciones ADN/ARN-proteínas
Estudiar nuevas rutas metabólicas
Lo que está ocurriendo o ha
Metabolómica Estudiar el efecto de tratamientos
ocurrido ya
sobre metabolismo

Biología de sistemas
El estudio de los mecanismos que intervienen en procesos biológicos complejos como sistemas
integrados de múltiples componentes interactivos.

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 Comprende:
1. Recogida de grandes muestras de
datos experimentales
2. Propuesta de modelos
matemáticos que puedan explicar
por lo menos algunos aspectos
significativos de estas muestras
3. Solución informática precisa de
las ecuaciones matemáticas para
obtener predicciones numéricas
4. Estimación de la calidad del
modelo comparando las
simulaciones numéricas con los
datos experimentales

Diagnóstico molecular
Se refiere a un conjunto de técnicas de biología molecular empleadas para la identificación y
análisis de marcadores biológicos en el genoma y el proteoma (el material genético y cómo se
expresan los genes como proteínas), a fin de diagnosticar y monitorizar enfermedades, detectar el
riesgo y aplicar un tratamiento personalizado.
Aplicaciones

Prenatal
o Enfermedades hereditarias
o Predisposición genética sospecha clínica
Pre-sintomático (diagnóstico temprano)
o Enfermedad infecciosa (fase temprana)
o Predisposición a enfermedades como el cáncer, autoinmunes, degenerativa,
transtornos afectivos (historia clínica familiar)
Medicina translacional: El valor real de todas estas técnicas avanzadas depende de que sus
resultados sean aplicables de forma eficaz a las personas enfermas

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