BENEMERITA UNIVERSIDAD AUTONOMA DE
PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA DE QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
ASIGNATURA: LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA I
NRC: 21604
DOCENTE: MARIA MENESES SANCHEZ
PRÁCTICA 12. CARACTERIZACIÓN DE BACILOS GRAMPOSITIVOS:
Bacillus
ALUMNA: RODRIGUEZ ORTEGA DOLORES
MATRÍCULA: 201907774
FECHA DE ENTREGA: 4 DE NOVIEMBRE DE 2022
PRÁCTICA 12. CARACTERIZACIÓN DE BACILOS GRAMPOSITIVOS:
Bacillus
INTRODUCCION
El género Bacillus pertenece a la familia Bacilliaceae, es un género que hoy en día
incluye más de 60 especies de bacilos. Este género está formado por
microorganismos bacilares Gram positivos, formadores de endosporas,
quimiheterotrofos que normalmente son móviles y rodeados de flagelos periticos.
Son anaerobios o aerobios facultativos son catalasa positivos. Las células
bacterianas de este género tienen un amplio tamaño que varia 0,5 a 2,5 µm x 1,2-
10 µm. Este género se encuentra comúnmente en suelos y plantas donde tienen
un papel importante en ciclo del carbono y el nitrógeno. Son habitantes comunes
de aguas frescas y estancadas, son particularmente activos en sedimentos.
(Koneman, 2001). Taxonómicamente según la segunda Edición del Manual
Bergey's (1982). El género Bacillus pertenece a la familia I Bacilliaceae, del orden
I Bacillales de clase tres Bacilli, del fillum BXIII firmicutes del Dominio bacteria. En
la primera edición del género es claramente diverso desde el punto de vista
fenotípico y genotípico. La diferenciación entre especies del género Bacillus se
centro en los resultados en la fermentación de lactosa, sorbitol, manitol,
melobiosis, hidrólisis de la urea, y descarboxilacion de la lisina.(Anderson et
al.,2003).
Más recientemente, los datos de la secuencias de RNA se han empleado para
dividir géneros de Bacillus en al menos cinco líneas diferentes.
Entre las especies más representativas del genero Bacillus se encuentran
B.alkalophilus, B anthracis, B azotoformans, B brevis,B cereus, B subtillis,B
coagulans,B firmus,B insolitus,B lincheniformis,B polimyxa y B turingiensis entre
otros.
OBJETIVO
Identificar por pruebas de laboratorio al género Bacillus.
No. De cepa con la que se trabajó: 14
RESULTADOS
Crecimiento:
Tinción Gram: Bacilos MIO: Negativa
En el agar sangre la cepa
Gram positivos Aunque la prueba de movilidad creció con normalidad,
salió negativa, lo correcto debió desarrollándose de la mejor
ser que saliera positiva, esta manera.
diferencia en el resultado pudo
Hemolisis: Positiva
deberse a que la prueba
bioquímica no fue preparada
Sensibilidad a la
correctamente.
penicilina: Negativa
Solución de NaCl al
7.5%. Negativo
Catalasa: Positiva
CONCLUSION
De acuerdo a los resultados obtenidos y basándonos en las pruebas anteriores,
podemos observar la manera de diferenciar una Bacillus, se priorizan pruebas
como el MIO, sensibilidad y NaCl, debido a que la hemolisis fue + y fue resistente
a penicilina podemos ver que se trata de Bacillus Cereus.
CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el fundamento de la tinción de Shaeffer-Fulton y cómo se
realiza en el laboratorio?
La tinción de Schaeffer-Fulton es una técnica empleada con el fin de teñir
las endosporas de las bacterias que presenten estas estructuras,
empleando el colorante verde de malaquita y la safranina, que funciona
como el colorante de contraste. Se fundamenta en la baja permeabilidad de
las endosporas al colorante primario y otros agentes externos, siendo el
calentamiento una forma de aumentar esta permeabilidad. De esta forma,
tras añadir el verde de malaquita a la preparación y calentar el portaobjetos,
procurando la emisión de vapores de la preparación mas no la ebullición del
colorante, el verde de malaquita logrará ingresar a la endospora y teñirla.
Posteriormente se realiza un lavado con agua. Debido a que el verde de
malaquita es un colorante soluble en agua y con baja afinidad por las
estructuras celulares, este lavado es suficiente para remover el colorante de
la preparación, a excepción del que se encuentra tiñendo ya las
endosporas. Por último, se adiciona a la preparación el colorante de
contraste, la safranina, que permite facilitar la identificación de las
endosporas tiñendo el resto de las estructuras celulares
2. Menciona otras pruebas para diferenciar especies de Bacillus.
Las pruebas bioquímicas para la diferenciación entre las dos especies de
mayor interés clínico del género Bacillus están determinadas por la
evaluación de su movilidad, presencia de cápsula, morfología microscópica,
hemólisis y sensibilidad a penicilina. Considerando este hecho, las pruebas
a realizar son: inoculación en medio MIO para evaluar movilidad, tinción de
Gram para visualizar morfología microscópica, siembra en Agar Sangre de
Carnero para evidenciar presencia de hemólisis y prueba de sensibilidad a
penicilina empleando un sensidisco impregnado con el antibiótico. A
continuación, se presenta una tabla comparativa con los resultados de
estas pruebas en B. anthracis y B. cereus.
3. Menciona medios de cultivo para el aislamiento de Bacillus.
Para el aislamiento de Bacillus se recomienda el uso de dos medios
selectivos: el Agar Manitol-Yema de huevo y Polimixina (Agar MYP), en el
que B. cereus crece como colinas rosas rodeadas de precipitado; y el
medio selectivo para B. cereus PEMBA (Polymyxin Pyruvate Egg Yolk
Mannitol Bromothymol Blue Agar), en el que crecen colonias de B. cereus
con aspecto turquesa y rodeadas de precipitado.
4. Menciona las medidas de seguridad que debe tener el laboratorio para
poder trabajar con Bacillus anthracis.
Por su patogenicidad y riesgo para la salud, B. anthracis es un agente
patógeno que se debe trabajar en espacios considerando un nivel de
bioseguridad de mínimo 2. Considerando esto, algunas de las medidas de
seguridad recomendadas son el uso de la vestimenta protectora adecuada:
bata, lentes de seguridad, guantes, cubrebocas; trabajar bajo condiciones
de esterilidad (preferentemente dentro de cabinas biológicas de seguridad)
si se manipulan muestras con sospecha de la bacteria o medios de cultivo y
el uso de señalética de riesgo biológico para los contenedores destinados a
almacenar desechos potencialmente contaminados con el agente patógeno.
Además, es necesario que las actividades se lleven a cabo por personal
capacitado en el uso de agentes biológicos infecciosos y bajo la supervisión
de un profesional como un profesor, en caso de tratarse de un laboratorio
de docencia
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