LEVADURAS DE INTERÉS

CLÍNICO
Dr. Patricio Godoy Martínez
Instituto de Microbiología Clínica

Universidad Austral de Chile

www.pgodoy.com

Taxonomía

1
 Cryptococcus

Rhodotorula Basidiomycota Malassezia

Trichosporon

GÉNERO CRYPTOCOCCUS

Tabla 1. Clasificación taxonómica de Cryptococcus.

División Clase Orden Teleomorfo Anamorfo Serología

Basidiomycota Hymenomycetes Tremellales Filobasidiella C. neoformans v. grubii A

neoformans C. grubii
Filobasidiella C. neoformans v. D
neoformans neoformans
Filobasidiella C. neoformans v. gattii ByC
bacillispora C. gatti
C. bacillisporus
Filobasidiella C. uniguttulatus
uniguttulatum
C. laurentii

C. albidus

2
 DIFERENCIACIÓN ENTRE C. NEOFORMANS Y
C. GATTII

Cryptococcus neoformans
Anamorfa Cryptococcus gattii
Híbrido var.
var. grubii
AD neoformans

Serotipos A AD D B&C

Teleomórfa Filobasidiella neoformans Filobasidiella bacillispora

Fenotípicas CGB NEGATIVO POSITIVO

D-Proline NEGATIVO POSITIVO

Biológicas (cruza) No producen por meiosis recombinantes haplóides verdadeiros

VGI/AFLP4
VNI/AFLP1 VGII/AFLP5
Filogenética VNIII VNIV
VNII o
(~DNA = 55-63%) AFLP3 AFLP2 VGIII/AFLP6
AFLP1A
VGIV/AFLP7

Kwon-Chung. FEMS Yeast Res, 6:57,2006.

Cryptococcus
Nueva Taxonomía

Hagen F, Khayhan K, Theelen B, Kolecka A, Polacheck I, Sionov E, Falk R, Parnmen S, Lumbsch HT,
Boekhout T. Recognition of seven species in the Cryptococcus gattii/Cryptococcus neoformans
species complex. Fungal Genet Biol. 2015 May;78:16-48.

Warnock DW. 2017. Name changes for fungi of medical importance, 2012 to 2015. J Clin Microbiol 55:53–59. https://doi.org/
10.1128/JCM.00829-16.

3
 CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS / GATTII

PATOGÉNESIS DE LA CRIPTOCOCOSIS
Resolución

Inmunidad celular Infección aguda

Infección
latente

Perfect & Casadevall, Infect Dis Clin N Am, 2002;16:875; Mitchell & Perfect, Clin Micr Rer, 1995;8(4):515

4
 INFECCIÓN PULMONAR

• Nódulo único o múltiple

• Infiltrado lobar
• Infiltrado Intersticial
• Cavitaciones
• Masa endobronquial
• Diagnóstico diferencial
• TBC
• Nocardiosis

INFECCIÓN SNC

• Meningitis o meningoencefalitis subaguda son las formas de

presentación más frecuentes.
• Cefalea
• Fiebre
• Alteración de conciencia
• Visión borrosa
• Fotofobia
• Diplopía
• Masa cerebral: criptococomas.

10

5
 POR QUÉ C. NEOFORMANS ES DIFICIL DE ERRADICAR

CÁPSULA MELANINA
• Antifagocítica • Protege contra oxidantes
• Anti-Inflamatoría • Interfiere en la muerte celular
• Inmunosupresora • Protege contra los antifúngicos

11

¿CUÁLES SON LAS HERRAMIENTAS

DIAGNÓSTICAS DISPONIBLES?

▪ Examen Directo: Tinta China de

cualquier fluido.

▪ Cultivo do LCR, Biopsia, LBA o esputo.

▪ Antígeno Criptocócico en LCR y Sangre.

▪ Examen Histopatológico.
Casadevall & Perfect. Cryptococcus neoformans, 1998.

12

6
 DIAGNÓSTICO POR MICROSCOPÍA
• Levaduras encapsuladas (tinción con tinta o con
nigrosina) en el sedimento del LCR u otros líquidos
corporales.
• Las cápsulas pueden ser muy pequeñas e incluso estar
ausentes.

13

Tinción de Plata - Pulmón Tinción de Mucicarmim de Meyer

14

7
 MEDIO CGB

CGB: positivo = C. gattii

15

LF CRYPTOCOCCUS

▪ Criptococosis
❑Comercialmente
disponible (tiras)
❑Immuno-Mycologics
Inc, USA
❑Costo del test en EUA
(U$2), Brasil (U$8)

16

8
 EXAMEN DE ANTÍGENO CRIPTOCÓCICO

Perfect & Casadevall, Infect Dis Clin N Am, 2002;16:875; Judith et al, J Clin Microbiol, 1991;29(6):1260

17

TRATAMIENTO DE LA
CRIPTOCOCOSIS

▪ Depende: Sitio de Infección + Inmunidad

▪ Formulaciones de Anfotericina B

▪ Asociaciones de Anfotericina B + 5 Fluorocitosina

▪ Fluconazol, Itraconazol, Voriconazol

Saag et al, Clin Infect Dis, 2000;30(4):710

18

9
 MALASSEZIA
Las levaduras del género Malassezia son consideradas como
parte de la microbiota normal de la piel humana y de otros
mamíferos.

Malassezia bajo la influencia de ciertos factores exógenos y

endógenos pueden volverse patógenos. Entre los endógenos
están la predisposición genética, piel seborreica, hiperhidrosis,
infecciones crónicas, desnutrición y estados de
inmunosupresión.

19

Malassezia

CUADROS CLÍNICOS: Malassezia

Dra Jane Tomimori Dr Josep María Torres - Rodriguez

20

10
 Malassezia
Clasificación Malassezia
• Malassezia furfur
• Malassezia sympodialis (Tronco)
• Malassezia restricta (Cuero cabelludo)
• Malassezia globosa (Tronco y brazos)
• Malassezia slooffiae HUMANOS
• Malassezia obtusa
• Malassezia japonica - Sugita S. et al. 2003
• Malassezia yamatoensis - Sugita S. et al. 2004

•Malassezia pachydermatis
•Malassezia dermatis - Sugita et al. 2002
•Malassezia nana ANIMALES
•Malassezia equina - Nell et al. 2002
•Malassezia caprae
•Malassezia cuniculi

25 especies asociadas al género (2020) Prohic et al – Int J Dermatol 55: 494-504, 2016.

21

EXAMEN MICROSCÓPICO DIRECTO

ES DIAGNÓSTICO

✓ EMD: KOH 20% más tinta donde observamos: Filamentos cortos,

células levaduriformes aisladas o en racimo sugerentes del género
Malassezia.

22

11
 CULTIVO

✓Medio con substancias lipídicas - 7 días, 37°C.

✓Cultivos cremosos, crema opacos; células redondas u
ovales.

23

Malassezia

24

12
 Malassezia

Ramadán S, Sortino M, Bulacio L, Marozzi ML, López C, Ramos L. Prevalence of Malassezia species in
patients with pityriasis versicolor in Rosario, Argentina. Rev Iberoam Micol. 2012 Jan-Mar;29(1):14-9.

25

TRATAMIENTO

1. LOCAL (solución, Shampoo, spray)

• Azólicos
• Sulfacetamida sódica
• Sulfato de selenio

2. SISTÉMICO
• Azólicos
• (Fluconazol, itraconazol)

26

13
 TAXONOMÍA

• El género Trichosporon pertenece a:

• División: Basidiomycota
• Clase: Hymenomycetes
• Orden: Tremellales
• Familia: Filobasidiaceae
• Género: Trichosporon

27

TRICHOSPORON - PIEDRA BLANCA

• Tricopatía pura, causada por el hongo levaduriforme
Trichosporon sin comprometimiento de la piel vecina.

• Carácter asintomático, benigno y de bajo contagio.

• Acomete los cabellos y pelos de las regiones axilares,

pubiana, barba y bigote.

• Es encontrada como microbiota de la piel, intestinal,

ampliamente distribuidos en la naturaleza.

28

14
 CUADRO CLÍNICO
Nódulos hialinos a lo largo del
pelo

Tamaño 0.5 – 4 mm (1,5 mm

prom.)

Consistencia blanda

Poco adherido al pelo

Fusiforme, traslucidos

Sensación de rugosidad

Puede formar varias nodulaciones

(1-10)

29

Trichosporon

Diagnóstico

Bonifaz

30

15
 MICROMORFOLOGÍA
TRICHOSPORON SPP.

31

TRICHOSPORON

➢Seis especies son identificadas (De Hogg e Guarro, 1995):

➢T. asahii, T. asteroides, T. cutaneum, T. inkin, T.
mucoides y T. ovoides.
➢Piedra blanca, cuero cabelludo y barba - T. ovoides.
➢Piedra blanca genital: T. inkin.
➢Infección superficial: T. cutaneum.
➢Infección sistémica: T. asahii, T. mucoides,T. inkin.

32

16
 Trichosporon

51 especies de
Trichosporon, 16
de las cuales son
de importancia
clínica

Mariné M, Brown NA, Riaño-Pachón DM, Goldman GH (2015) On and Under the Ski:n Emerging Basidiomycetous Yeast Infections Caused
by Trichosporon Species. PLoS Pathog 11(7): e1004982. doi:10.1371/journal.ppat.1004982

33

34

17
 Cutaneotrichosporon debeurmannianum está estrechamente relacionado con Trichosporon cutaneum, Trichosporon jiroveci, Trichosporon
moniliiforme, Trichosporon dermatis y Trichosporon mucoides

35

Clasificación de Levaduras. Phylum Ascomycota

Kurtzman & Fell, 1998.
Ascomycota
Phylum

Hemiascomycetes
Archiascomycetes Euascomycetes Clase
Clase Clase

Saccharomycetales
Orden

Schizosaccharomycetales Pneumocystidales Saccharomycetaceae

Orden Orden Candidaceae
Familia
Familia

Kluyveromyces

Schizosaccharomycetaceae
Familia
Pneumocystidaceae
Familia
Candida
Pichia

Saccharomyces
Geotrichum
Schizosaccharomyces Pneumocystis

36

18
 Candida Teleomorfos de Candida

• Arxiozyma, Citeromyces, Clavispora, Debaromyces,

Issatchenkia, Kluyveromyces, Pichia, Saccharomyces,
Stephanoascus, Torulaspora, Wickerhamiella, Yarrowia,
Zygoascus

• C. krusei Issatchenkia orientalis

• C. kefyr Kluyveromyces marxianus
• C. guillermondii Pichia guillermondii
• C. lusitaniae Clavispora lusitaniae

37

Candida spp.:
levadura de mayor importancia médica
Infecciones comunitarias de piel y
mucosas:

Vulvovaginitis:
75% de las mujeres en edad
fértil presentarán al menos 1 episodio el
la vida (5% CVVR).

Candidiasis oro-faríngea:
>90% en pacientes con sida, antes de la
terapia anti-retroviral combinada

Infecciones fúngicas hospitalarias:

Candida responde por 80 a 90% de las
micosis

Colombo Al , Rev Bras Soc Med Trop, 2004

38

19
 CANDIDIASIS VULVOVAGINAL
• Suspender toda medicación antibiótica y/o antifúngica (local u oral) 10 días antes de la
toma de muestra, la paciente no debe tener relaciones sexuales por lo menos 3 días
antes de la extracción de la muestra, la higiene deber ser realizada 48 horas antes de la
toma de muestra sin ducha vaginal, el médico debe utilizar un espéculo desechable para
tomar la secreción de la mucosa del saco vaginal posterior, con ayuda de un hisopo
(tórula). Las muestras deben ser enviadas de inmediato al laboratorio, en solución salina
estéril para evitar la desecación.

39

EXAMEN MICROSCÓPICO DIRECTO:

MUCOSA
◼ KOH 20% más tinta: • Tinción de Gram:
Blastoconidios y Presença de levaduras
pseudohifas con o sin pseudohifas;

40

20
 MEDIOS DE CULTIVO
• Agar Sabouraud
dextrosa

• CHROMagar

• Agar arroz
(microcultivo)

41

TRATAMIENTO
• Nistatina (óvulos)
• Ciclopirox olamina o clotrimazol (imidazoles)
• Triazólicos (orales) Fluconazol, Itraconazol,
Posaconazol.
• Supositorios vaginales de ácido bórico son utilizados
en algunos países.
• Equinocandinas pueden ser utilizadas (elevado costo)

Mendling W et al. Mycoses. 2015. 58 (1):1-15.

42

21
 FORMAS CLÍNICAS AGUDAS
• Pseudomembranosa
• Presentación más clásica y común
• Placas blancas: lengua, paladar, mucosa
• Base eritematosa
• Neonatos, diabéticos, neoplasias, Sida, ancianos, alt de gl.
Salivares (Síndrome de Sjörgren)

43

FORMAS CLÍNICAS AGUDAS

• Atrófica
• Estomatitis eritematosa y dolorosa: dorso lengua y paladar
• Antibióticos y corticosteroides

44

22
 INTERTRIGO POR CANDIDA SPP.

• Colonización por Candida en las manos es

transitoria;

• Humedad y microtraumas en la piel aumentan

la colonización por Candida spp.

• factores de riesgo: lavanderas y otros

profesionales.

Lesiones se inician con rash vesículo-pustular pruriginoso, que se

transforma en área macerada, con placa blanca de base eritematosa.
Lesiones satélites son frecuentes

45

INTERTRIGO CANDIDIÁSICO -
DERMATITIS DEL PAÑAL

La lesión inicial es una vesículo-pústula, que se rompe y se une a otras para formar
una placa eritematosa, con zona limítrofe descamativa y presencia de lesiones
satélites (A. Martínez Roig)

46

23
 ONICOMICOSIS POR CANDIDA SPP

Jenny Abad-González,* Alexandro Bonifaz,** Rosa María Ponce . Dermatología Rev Mex 2007;51(4):135-41

47

CANDIDEMIA
• Infecciones por Candida responden por 80% de todas las
infecciones fúngicas documentadas en el ambiente hospitalario.

• Candidemia constituye la 4ta/5ta causa (~10%) de infecciones

del torrente sanguíneo en hospitales terciarios.

• Unidades de terapia intensiva (UTI) responden por 35 - 45% de

las candidemias en hospitales terciarios.

• Desafíos: problema diagnóstico y mortalidad

Wisplinghoff et al, Clin Infect Dis39: 309-17, 2004

48

24
 Es necesaria la exposición continuada y
prolongada de pacientes críticos a los factores de
riesgo para que ocurra el evento candidemia!!!!

49

Mortalidad global

Edmond MB, et al. Clin Infect Dis 1999; 29: 239-44

50

25
 ESPECIES DE CANDIDA RELACIONADAS
CON CANDIDEMIA EN LA AMÉRICA DEL
SUR

Referencias / (ano) / nº de aislados

Cuenca-
Pfaller Pfaller Godoy Silva
Especies Estrella
(2000) (2001) (2002) Arg. (2003) (2004) Chile

107 132 230 103 130

C. albicans 42,5% 45% 40,9% 42% 41%

C. parapsilosis 28,3% 25% 30,4% 21,3% 13%
C. tropicalis 15,9% 16% 20,4% 24,2% 10%
C. glabrata 5,8% 6% 2,6% 7,7% 4%
C. krusei 1,5% 1% 2,2% 1% -
Otras 6% 7% 3,5% 4% 11%

51

AGENTES ETIOLÓGICOS DE
CANDIDEMIA EN LOS EUA Y EUROPA

Especies EUA Europa

(N=3.863) (N=2.089)
C.albicans 54,4 56,0
C.glabrata 18,3 13,6
C.parapsilosis 13,2 13,3
C.tropicalis 9,6 7,2
C.krusei 2,1 1,9
Otras 2,4 8,0
Pfaller et al, Clin Microbiol Infect 10 (Suppl 1): 11-23, 2004
Tortorano et al, Eur J Clin Microbiol Infect Dis 10 (Suppl 1): 11-23, 2004

52

26
 Resultados de Vigilancia –
Candidemia ISP, Chile

53

PERFIL DE SUSCEPTIBILIDAD DE 1000

MUESTRAS DE CANDIDA SPP.
PORCENTAJES DE SENSIBILIDAD, SUSCEPTIBILIDAD DOSIS-DEPENDIENTE
(SDD) Y RESISTENCIA

Fluconazol Itraconazol Voriconazol

Especies (%) (%) (mg/mL)
S/SDD/R S/SDD/R 1 / 1

C. albicans (400) 100/0/0 99,5/0,5/0 100/0

C. tropicalis (243) 100/0/0 98,4/1,6/0 100/0

C. parapsilosis (238) 100/0/0 98,8/0,8/0,4 100/0

C. glabrata (44) 93,2/2,3/4,5 34,1/50/15,9 93,2/6,8

Da Matta et al, Diag Microbiol Infect Dis 57: 399–404, 2007

54

27
 CANDIDEMIA EN PACIENTE
NEUTROPÉNICO

• Mejor opción – equinocandinas – anidulofungina –

caspofungina – micafungina - Anfotericina B
liposomal – Anfotericina complejo lipídico.

55

56

28
 Método Clásico de
Identificación de
Levaduras

57

Aspecto de la colonia en agar

Sabouraud
Las colonias de las levaduras son glabrosas, siendo sus texturas cremosas,
membranosas y húmedas, no formando hifas aéreas

58

29
 Aspecto de la colonia en agar
Sabouraud

59

Microcultivo
➢Técnica de cultivo en lámina o placa de Petri con agar-maíz
o arroz con Tween 80.

➢Estímulo para la formación de pseudo-hifas en baja tensión

O2

60

30
 Micromorfología

➢Visualización al microscopio: artroconídios, blastoconídios,

clamidoconídios, pseudo-hifas e hifas verdaderas → presencia e disposición
(48 a 96h).

61

Asimilación de carbohidratos
(Auxanograma)
➢Capacidad de la levadura de asimilar un determinado carbohidrato como
única fuente de carbono para mantener la viabilidad celular
➢Después de incubación (24*-72h), presencia de crecimiento visible (turbio) →
asimilación + .

62

31
 Identificación de las principais levaduras de interés clínico
Asimilación
Levaduras Morfología
Gli Sac Gal Raf Xil Cel Tre Dul Mal
C. albicans Clamidoc. + V + - + - + - +
Ph/Blastoc
C. tropicalis en cadenas + + + - + + + - +

Ph curvas/
C. parapsilosis células + + + - + - + - +
gigantes
Ph fina
C. guilliermondii Blastocon. + + + + + + + + +

Ph/blastoc.
C. krusei largos + - - - - - - - -

C.glabrata Ph (-) + - - - - - + - -
Ph=pseudo-hifa; Gli=glicose; Sac=sacarose; Gal=D-galactose; Raf=rafnose; Xil=D-xilose;
Cel=celobiose; Tre=trealose; Dul=dulcitol; Mal=maltose; V=variable

63

MÉTODOS DE SCREENING (CANDIDA

ALBICANS)
C. glabrata ?
C. tropicalis C. albicans

64

32
 Métodos Manuales
Auxacolor Fungichrom I
API Candida

65

Vitek system MALDI-TOF MS

66

33
 Criseo G, Scordino F, Romeo O. Current Methods For Identifying
Clinically Important Cryptic Candida Species. J Microbiol Methods.
2015;111:50-6.

67

Características Fenotípicas de C.
albicans, C. dubliniensis, C. africana

Borman AM, et al., Epidemiology, antifungal susceptibility, and pathogenicity of Candida africana
isolates from the United Kingdom. J Clin Microbiol. 2013 Mar;51(3):967-72.

68

34
 Candida parapsilosis

▪ 2ª causa de aislamientos en sangre: Europa (12%), Asia

(17%)
▪ Su incidencia en América Latina aumentó del 14 al 20 %
(2000-2004)
▪ Asociada con catéteres
▪ Especie aislada en manos de personal de salud
▪ Frecuente en neonatos, pacientes UCI
▪ Tiende a formar biopelículas
▪ Implicada en brotes hospitaliarios
▪ Estudios moleculares: C. parapsilosis
C. orthopsilosis
C. metapsilosis

69

phylogenetic analysis of 18S-ITS1-5.8S-ITS2-

28S ribosomal RNA genes

70

35
 Gabaldón, Toni Et Al. “Comparative Genomics Of Emerging Pathogens
In The Candida Glabrata Clade.” BMC Genomics 14 (2013).

71

Hou X, Xiao M, Chen SC -A, Wang H, Yu S-Y, Fan X, Kong F and Xu Y-C (2017) Identification and Antifungal Susceptibility Profiles of Candida nivariensis and Candida bracarensis in
a Multi-Center Chinese Collection of Yeasts. Front. Microbiol. 8:5.

72

36
73

Candida auris

• El primer reporte de C. auris se hizo en el Japón en 2009 a partir

de la secreción de oído.

• Se han reportados casos en Corea del Sur, India, Reino Unido,

Colombia, Venezuela, Estados Unidos, Israel entre otros.
Principalmente en ITS, heridas y otitis.

• Su identificación por metodos comerciales y automatizados es

errónea (C. haemulonii, C. sake, C. famata, Saccharomyces,
Rhodotorula).

74

37
75

Candida auris

❖A 25ºC en extracto de levadura

peptona dextrosa:
• Célula ovoide, elipsoidales o
alargadas.
• Tamaño aprox. 2,5 – 5,0 μm.
Individuales, en parejas o grupos.

❖En extracto de Malta a 25ºC por un

mes:
• Cultivo viscoso, blanco a gris, liso y
brillante.
• No se producen pseudohifas después
de 59 días a 25ºC.
• C. haemulonni si las produce.

76

38
77

Candida guilliermondii
• Es una levadura emergente que produce fungemia, osteomielitis y
peritonitis, presenta una baja incidencia.
• Complejo de especies: C. guilliermondii, C. fermentati, C. carpophila y
C. xestobii (Cheng et al 2017).
• Presenta baja mortalidad.
• Puede presentar baja susceptibilidad a los azoles y equinocandinas.

78

39
 Arendrup MC. Candida and candidaemia. Susceptibility and epidemiology. Dan Med J. ;60(11):B4698, 2013.

79

40