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EL PLEGAMIENTO DE LOS PRIONES*

OSCAR FLORES-HERRERA, FEDERICO MARTÍNEZ Y JUAN PABLO PARDO

RESUMEN ABSTRACT
Se ha sugerido que los priones causan algunas enfermeda- Prions cause transmissible, genetic and sporadic neuro-
des transmisibles, genéticas y esporádicas del sistema ner- degenerative diseases, including bovine spongiform en-
vioso central, entre las que se incluyen a la encefalopatía cephalopathy and Creutzfeldt-Jakob, Gerstmann-Sträuss-
espongiforme del ganado bovino y a las enfermedades de ler-Scheinker and fatal familial insomnia diseases in hu-
Creutzfeldt-Jakob, Gerstmann-Sträussler-Scheinker y el mans. Infectious particles are composed of an abnormal
insomnio fatal familiar en los humanos. Las partículas in- isoform of the prion protein, which is encoded by a chro-
fecciosas están compuestas por una isoforma anormal de la mosomal gene. A postranslational process, as yet uniden-
proteína priónica, la cual está codificada por un gene cro- tified, converts the cellular prion protein into an abnor-
mosomal. Un proceso postraduccional aún desconocido, mal isoform. The prion diseases provide a connection
convierte la proteína priónica celular en una isoforma between protein folding and neurodegenerative diseases.
anormal. Los estudios realizados en este tipo de enferme- In this review, thermodynamic model for prion folding is
dades, proveen una conexión entre el plegamiento de las examined and the possible mechanism of prion replica-
proteínas y las enfermedades priónicas. En este trabajo se tion to understand infectious, inherited and sporadic
examina el modelo termodinámico para el plegamiento de forms of these diseases.
los priones, así como el mecanismo para su propagación
que se ha propuesto para entender la forma infecciosa, he- KEY WORDS: Prion, bovine spongiform encephalo-
reditaria y esporádica de este tipo de enfermedades. pathy, protein folding, amyloid fibril, Creutzfeldt-Jakob
disease, Gerstman-Straussler-Scheinker disease, fatal
PALABRAS CLAVE: Prion, encefalopatía espongiforme, familial insomnia.
termodinámica del plegamiento de proteínas, fibras
amiloideas, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, enferme-
dad de Gerstman-Straussler-Scheinker, enfermedad del
Insomnio fatal familiar.

INTRODUCCIÓN de vacuolas dentro de las células neurológicas inducidas por los cam-
Las enfermedades priónicas son un del sistema nervioso. Los signos bios en el metabolismo de la PrP
grupo heterogéneo de entidades no- clínicos de tales enfermedades se pueden adquirirse por la transmi-
sológicas neurodegenerativas ca- pueden presentar en meses, años e sión de una partícula infecciosa (el
racterizadas, aunque no exclusiva- incluso décadas, y las lesiones cere- prion), de carácter hereditario debi-
mente, por tres tipos de lesiones tí- brales sólo son el producto final de do a la transferencia de una muta-
picas en el cerebro: la hipertrofia e otro proceso que involucra el pro- ción en el gen PRNP o de carácter
hiperplasia de los astrocitos, la pér- ducto de un único gen: el PRNP (la espontáneo, originado por un meca-
dida de las neuronas y el desarrollo proteína priónica).Las disfunciones nismo aún desconocido (1).

* Recibido: 16 de octubre de 2002. Aceptado: 21 de enero de 2003

Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Autónoma de México. Apartado Postal 70-159, 04510, México, D. F.,
México. Tel.: 5623-2168, Fax: 5616-2419. Correo E: oflores@[Link]
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Figura 1. Estructura primaria de un prion (PrP). (A) Esta proteína está asociada a la cara externa de la membrana plasmática por medio de
una anclaje de glicosilfosfatidilinositol (GPI). La glicosilación puede ocurrir en dos residuos de asparagina, y el enramado de carbohidratos
puede variar dependiendo de la estirpe priónica de que se trate. En el núcleo hidrofóbico se encuentra el sitio de corte del extremo N-termi-
nal, donde la proteína es cortada según las condiciones metabólicas. El puente de disulfuro une dos regiones de la proteína que presentan una
estructura de α-hélice. Cerca del extremo N-terminal se muestran las repeticiones octaméricas, las cuales pueden unir más de cuatro átomos
de cobre. Muchas proteínas priónicas de mamíferos presentan un octámero incompleto, sin embargo, se desconoce si presenta alguna función.
En cuanto a la estructura secundaria, con técnicas de NMR se predice una topología β1α1β2α2α3, así como el núcleo resistente a proteasas.
(B) Mapa genético de las mutaciones y polimorfismos que provocan enfermedades priónicas en humanos, así como cuatro regiones altamen-
te conservadas en los mamíferos (regiones sombreadas). Asimismo, se muestran las inserciones de 32, 48, 56 y 72 residuos de aminoácidos,
de los cuales los últimos tres están asociados con el síndrome de CJ familiar. En particular, se ha podido determinar que las mutaciones pun-
tuales en los residuos 102 (Pro➞Leu), 117 (Ala➞Val) y 198 (Phe➞Ser) se encuentran en pacientes con el síndrome GSS. Las mutaciones pun-
tuales en los residuos 178 (Asp➞Asn) y 200 (Glu➞Lys) se encuentran en pacientes con el síndrome de CJ. En letras itálicas se muestran las
variantes para los priones de cabra y en letras itálicas y subrayadas, las de ratón.

PROPIEDADES GENERALES misibles, donde la PrPSc, de acuer- de la proteína, hacia el extremo car-
DE LOS PRIONES do con la teoría priónica, es el úni- boxilo terminal, hay tres α-hélices
La conversión de una proteína prió- co componente de la partícula in- y 2 láminas β-plegadas estrecha-
nica común (PrPC, el superíndice C fecciosa (1). mente asociadas (Fig. 1A). Los 80 a
significa celular) en una isoforma La proteína priónica madura tie- 100 residuos de aminoácidos res-
resistente a la acción de las protea- ne de 208 a 220 residuos de ami- tantes en el extremo amino termi-
sas, la PrPSc (el superíndice Sc del noácidos dependiendo de la espe- nal, incluyendo los dominios para la
inglés “scrapie”, escrapie en espa- cie, dos sitios de glicosilación y uno fijación del cobre, adquieren una
ñol, enfermedad neurodegenerativa de anclaje a la membrana del tipo estructura muy flexible y poco defi-
que se presenta en los ovinos, 2), es del glicosilfosfatidilinositol (GPI) nida. La isoforma PrPSc, resistente a
el evento clave en la patogénesis de ubicado en el extremo carboxilo las proteasas, carece de este seg-
todas las enfermedades PrP trans- terminal. En las dos terceras partes mento amino-terminal, y debido a
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esto se ha sugerido que dicha región enfermedades genéticas como las cula de PrPSc, o bien, promover la
puede tener poca importancia en la adquiridas (1). conversión de la PrPC a la confor-
transmisión de las encefalopatías; La proteína PrPC se expresa en el mación PrPSc. Esta asociación pue-
sin embargo, la isoforma PrPSc que sistema nervioso central, en el tejido de continuarse hasta formar un nú-
se acumula en las afecciones cere- linfático y en las uniones neuromus- cleo estable (Fig. 2 B), el cual cre-
brales puede presentar la secuencia culares en forma de una glicoproteí- ce por adición de nuevas moléculas
del extremo amino-terminal (1). na asociada a la membrana plasmáti- de PrPSc. Posteriormente, esta es-
En la célula, el polipéptido PrP ca por medio de un anclaje de GPI tructura se divide en pequeñas uni-
que se sintetiza de novo tiene un (Fig. 1). La estructura covalente de dades infecciosas (Fig. 2 C), las
péptido señal de secuencia conven- la forma patógena (PrPSc) es idéntica cuales continúan creciendo, propa-
cional que se acopla al complejo ri- a la PrPC, pero tiene una conforma- gando así la formación de estructu-
bosoma-RNAm y al canal translo- ción tridimensional radicalmente di- ras fibrilares (Fig. 2 D). Este tipo
cador de partículas localizado en la ferente, lo cual produce su agrega- de polimerización lineal se ha mo-
cara citoplásmica del retículo endo- ción y la formación de partículas es- delado matemáticamente y se han
plásmico rugoso (RER) (3). En ge- tables. Aunque la PrPSc aún no se ha predicho muchas de las observacio-
neral, el paso de la proteína PrP a purificado a homogeneidad, se han nes obtenidas durante la evolución
través de este canal se inicia por el obtenido fracciones proteicas con un de la enfermedad (7).
extremo amino terminal y se conti- alto grado infeccioso, las cuales con- Este mecanismo también explica
nua hasta que se adiciona el anclaje tienen una gran proporción de la el hecho de que la enfermedad prió-
del GPI y el enramado de carbohi- PrPSc. La ausencia de ácidos nuclei- nica puede aparecer por la herencia
dratos, modificaciones que permi- cos en estas preparaciones, además de mutaciones que desestabilizan la
ten su tránsito hacia la membrana de la evidencia genética, permite estructura de la forma PrPC y que
plasmática. Sin embargo, algunos concluir que la encefalopatía espon- predisponen su conversión a la for-
cambios en la secuencia de los resi- giforme transmisible (TSE de sus si- ma PrPSc, o bien por medio de infec-
duos de aminoácidos disminuyen la glas en inglés) es un conjunto de en- ciones iatrogénicas o dietéticas con
velocidad de translocación de la fermedades producidas únicamente la isoforma PrPSc. Asimismo, la evo-
proteína, lo que permite la aparición por proteínas (4). lución de los casos clínicos en don-
de un intermediario estructural, de- Debido a que la PrPSc presenta un de las causas de la enfermedad no
nominado Ctm-PrP, el cual tiene su núcleo resistente a la acción de la son conocidas (casos esporádicos),
extremo amino terminal en el lu- proteinasa K (PK) en el tejido cere- también puede ser explicada por el
men del RER y su extremo carboxi- bral infectado, la isoforma PrPC mismo paradigma descrito en el mo-
lo terminal en el citosol. Esto puede puede ser rápidamente degradada, delo, en donde la aparición de la en-
favorece la autoasociación del in- mientras que la isoforma infecciosa fermedad puede deberse a una mu-
termediario y la formación de las fi- se mantiene presente (5). La mi- tación somática o por la conversión
bras amiloideas. La mutación Val croscopía electrónica de la fracción espontánea de la proteína silvestre a
117 ala en el gen del prion humano enriquecida con este material resis- la conformación PrPSc. Algunos es-
es de este tipo y está estrechamente tente a la acción de la PK muestra la tudios recientes sugieren que el sín-
relacionada con la herencia domi- presencia de material fibrilar (6). drome de Creutzfeldt-Jakob del tipo
nante del síndrome de Gerstmann- esporádico está asociado a una ciru-
Straussler-Scheinker (GSS). MODELOS PARA LA gía en la historia clínica del pacien-
La expresión de la mutante Val PROPAGACIÓN PRIÓNICA te o a una estancia prolongada en
117Ala (además de otras mutantes) Debido a las características estruc- una granja (8). Sin embargo, para
produce la acumulación del Ctm- turales de las PrPSc infecciosas, se confirmar estas observaciones clíni-
PrP en el cerebro de los ratones ha propuesto un modelo para expli- cas, aún debe desarrollarse un estu-
transgénicos (Tg), los cuales sufren car el desarrollo de las enfermeda- dio estadístico riguroso.
una rápida degeneración del siste- des causadas por estas proteínas
ma nervioso central sin la forma- (Fig. 2). En este modelo, la PrPC CONFORMACIÓN
ción de la isoforma infecciosa del nativa está en equilibrio con la iso- Y ESTABILIDAD DE LA PrPc
prion, la PrPSc. Esto sugiere que la forma conformacional PrPSc (Fig. 2 En la década de los 90’s se determi-
Ctm-PrP puede ser una molécula A). En este momento, la isoforma nó la conformación de la PrPC re-
neurotóxica común tanto para las PrPSc puede asociarse a otra molé- combinante de ratón (9), de hámster
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(10) y de humano (11) por medio de de la α-hélice 3 ubicada en el extre- fluorescencia de flujo detenido
resonancia magnética nuclear mo carboxilo terminal y el rearreglo (stopped-flow) empleando el nú-
(NMR de sus siglas en inglés), la del puente de disulfuro. En la inter- cleo de la PrPC de ratón resistente a
cual en esencia, es la misma: 3 α- fase del dímero se forma una lámi- las proteasas, denominado
hélices y 2 láminas β-plegadas aso- na β-plegada antiparalela intercate- MoPrP(121-231), con la mutación
ciadas por dos o tres puentes de hi- naria trenzada, la cual está consti- Phe175Trp, el cual presenta la mis-
drógeno. Lo anterior contrasta con tuida por los residuos de aminoáci- ma estructura y estabilidad que la
conformación de la isoforma PrPSc, do que forman a la α-hélice 2 en la proteína silvestre, pero muestra un
cuya estructura está enriquecida estructura monomérica determinada mayor cambio en la fluorescencia
con lámina β-plegadas (40% lámina por NMR. Las mutaciones que se durante su desnaturalización debido
β-plegadas y 30% α-hélices, deter- relacionan con las enfermedades al triptofano incorporado. Aunque a
minados por la Transformada de priónicas familiares se localizan en temperatura ambiente el plegamien-
Fourier de la espectroscopía en el las regiones involucradas en la in- to es muy rápido para ser observa-
infrarrojo, FTIR por sus siglas en terconversión de la estructura α-hé- do, a 4ºC, éste ocurre con un tiem-
inglés) (12). Sin embargo, aunque lice en lámina β-plegada. La estruc- po de vida medio de 170 µs sin la
no se cuenta con la estructura tridi- tura determinada a partir del cristal, presencia de algún intermediario.
mensional del monómero de la PrPC sugiere que la oligomerización a De acuerdo con estas observacio-
o la PrPSc determinada por métodos través de la interconversión tridi- nes, los estudios de intercambio de
cristalográficos, en el 2001, el gru- mensional de este dominio puede hidrógeno/deuterio con la PrPC hu-
po de Yee (13) reportó la estructura ser un paso importante en la vía de mana, muestran que la constante de
cristalográfica con una resolución transformación de la PrPC en la equilibrio que describe la distribu-
de 2 Å de un dímero del prión hu- PrPSc. ción de los estados nativo y desna-
mano. Este dímero es el resultado En cuanto a la cinética del plega- turalizado tiene el mismo valor que
de la interconversión tridimensional miento, se han realizado estudios de el factor de protección del inter-
cambio de hidrógeno/deuterio (11);
es decir, que la ruta más probable
para la conversión de la PrPC a la
PrPSc es a través de un estado des-
plegado que retiene una pequeña re-
gión estructurada de 10 residuos de
aminoácido alrededor del puente de
disulfuro, y no a través de un inter-
mediario altamente organizado, co-
mo ha sido sugerido para el caso de
la formación de la placa amiloide
en otros sistemas.
No obstante, aunque a pH fisioló-
gico las proteínas recombinantes de
PrPC se desnaturalizan a través de
un mecanismo de dos estados, a pH
ácido se observa una vía de plega-
miento alternativa. Las proteínas
PrPC recombinantes de humano
(huPrP(90-231)) y de ratón (MoPrP(121-
231)) presentan un intermediario en
Figura 2. Mecanismo propuesto para la propagación de la estructura PrPSc. El modelo es di- su vía de plegamiento a pH de 4
vidido en cuatro estados. (A) La estructura PrPC (círculo) se encuentra en equilibrio con la (14). La espectroscopía de dicroís-
isoforma PrPSc (cuadrado). (B) Los monómeros pueden interaccionar entre sí, de forma débil
y reversible, hasta constituir un núcleo estable. Una vez que se ha alcanzado este tamaño, los mo circular muestra que este inter-
monómeros de PrPSc pueden asociarse irreversiblemente y permitir así el crecimiento de la mediario está bien estructurado, con
estructura fibrilar (C). La partícula infectiva puede dividirse y producir dos unidades meno- una topología constituida esencial-
res pero estables, permitiendo multiplicar el número de estructuras fibrilares (D). mente de lámina β-plegada, por lo
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que se ha propuesto como un estado lizan ocho mutaciones asociadas sentido, si el modelo termodinámico
intermedio en la vía de formación de con la presencia de la enfermedad es el adecuado y la conversión de la
la PrPSc. Aunado a esto, los estudios neurológica. Las proteínas mutan- especie monomérica PrPC en la mul-
realizados con un fragmento del tes presentan las mismas caracterís- timérica PrPSc está controlada por la
prion humano (huPrP(91-231)), mostra- ticas espectroscópicas que la proteí- diferencia en las ∆G de cada estado
ron que a pH ácido y en un ambien- na silvestre, lo que excluye la posi- (Fig. 3 A), se podría esperar que la
te reductor, la PrP se pliega como un bilidad de que las mutaciones per se producción de la PrPSc a partir de la
monómero soluble constituido casi puedan inducir la conformación proteína silvestre sea de aproxima-
exclusivamente de láminas β-plega- PrPSc. Sin embargo, la estabilidad damente el 1% de la producción de
das (15). Los autores sugieren que termodinámica de las proteínas mu- la PrPSc a partir de la mutante. Esta
las características del medio pueden tantes no se correlaciona con los fe- predicción no coincide con los datos
influir en la transformación de la notipos específicos correspondien- neuropatológicos y las observacio-
PrPC, cuya conformación nativa es tes. En este sentido, solo cinco de nes epidemiológicas del síndrome
de α-hélices, en un monómero alta- las mutaciones desestabilizan a la de CJ esporádico, probablemente
mente compacto y rico en láminas proteína, mientras que las restantes porque no se ha incluido en el análi-
β-plegadas. Este monómero soluble presentan la misma estabilidad que sis la agregación de la PrPSc, que
(β-PrP) es resistente a la actividad la proteína silvestre. Lo anterior su- puede desviar el equilibrio hacia el
de la PK, característico de la PrPSc, y giere que la desestabilización de la estado Sc. Aunado a esto, los expe-
es un precursor de estructuras fibri- PrPC no es el único mecanismo pa- rimentos de irradiación ionizante
lares muy similares a las aisladas de ra su transformación en la PrPSc, ni sugieren que la partícula infecciosa
cerebros enfermos. No obstante, aún la base para el fenotipo de las enfer- mínima es un dímero de PrPSc (19).
tiene que demostrarse experimental- medades priónicas heredables. Si se considera la energía requerida
mente que estas alteraciones en la Por otro lado, Cohen (17) propu- para la formación de un dímero, en-
estructura de los estados conforma- so que la conversión conformacio- tonces la formación de la PrPSc a
cionales de la proteína son suficien- nal de la isoforma PrPC en la PrPSc partir de la proteína silvestre podría
tes para causar la enfermedad. puede estar bajo un control termo- ser tan solo del 0.01% de la produc-
Las mutaciones del gen PRNP dinámico o cinético. El hecho de ción total de la PrPSc a partir de la
tienen diferentes efectos sobre la que la proteína priónica pueda en- mutante. Además, el valor de la coo-
proteína sintetizada, por ejemplo, contrarse en dos estructuras confor- peratividad en la formación del dí-
puede predisponer a la molécula a macionales, el monómero represen- mero a partir de la proteína mutante
formar agregados, promover la aso- tado por la PrPC y la multimérica depende del sitio donde se encuen-
ciación entre la isoformas PrPSc y la formada por la PrPSc, donde la pro- tra la sustitución del residuo de ami-
PrPC, o facilitar la unión de un li- teína silvestre es más estable en la noácido. Así, la contribución de la
gando específico a la proteína sil- conformación PrPC, mientras que la cooperatividad a la diferencia de la
vestre. En este sentido, Glockshu- mutante prefiere adoptar la forma energía libre entre ambas isoformas
ber y cols. (16) realizaron experi- PrPSc, puede deberse a un control (∆(GWT/MUT) no excede de 2-3 kcal-
mentos de mutaciones dirigidas en termodinámico si la diferencia en /mol. En esas condiciones extremas,
el gen PRNP humano para relacio- la estabilidad de la proteínas silves- la forma PrPSc silvestre debería ser
nar la estabilidad de la PrPC y su tre y mutante en los estados C y Sc tan común como la especie PrPSc
propensión para transformarse en es grande, o cinético si la barrera mutante, donde los niveles de la
PrPSc. Sus resultados prueban la hi- cinética que evita la conversión de PrPSc silvestre podrían ser detecta-
pótesis de que las mutaciones aso- la secuencia silvestre (WT) del es- dos a través de bioensayos de infec-
ciadas con las enfermedades prióni- tado C al Sc es eliminada por la tividad. Sin embargo, esto no coin-
cas heredadas pueden provocar, en mutación que causa la enfermedad cide con los estudios de inoculación
algunos casos, la desestabilización (Fig. 3 A y B). de la PrPC (20).
de la PrPC y promover su transfor- La estabilidad conformacional de En contraste, el modelo de con-
mación a la isoforma PrPSc. En el una amplia variedad de proteínas trol cinético de la conversión de la
dominio del extremo carboxilo mutantes sugiere que una mutación PrPC en la PrPSc aporta una explica-
(huPrP(121-231)), el cual es la única re- puntual puede modificar el valor del ción sencilla para los resultados clí-
gión de la proteína con una estruc- ∆G de plegamiento en aproximada- nicos y experimentales (Fig. 3 B).
tura terciaria bien definida, se loca- mente 2 ó 3 kcal/mol (18). En este En este modelo, la isoforma PrPSc
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y 0.4 kcal/mol), mientras que para

seis de ellas es mayor a 1.5 kcal-
/mol. Probablemente, las primeras
tienen un mayor impacto en el ∆G‡
que en la estabilidad de la forma
PrPC. La isoforma PrPSc también
puede tener una influencia en el as-
pecto cinético del proceso de con-
versión si actúa como un molde
que disminuye la barrera de activa-
ción (∆G‡) para los cambios con-
formacionales, de una manera simi-
lar a como actúa el sitio activo de
las enzimas, orquestando la coloca-
ción del sustrato para acelerar la
velocidad de una reacción.
En general, la formación de los
depósitos fibrilares en la enferme-
dad priónica puede seguir el si-
guiente esquema:

A
 A*
 B

 Bn

donde A es la isoforma PrPC cuyo

estado estructural es el de un mo-
nómero, A* es un estado conforma-
cional activado de A, el cual es sus-
ceptible a experimentar un dramáti-
co cambio estructural, B es el esta-
do conformacional alterado que es
Figura 3. Diagramas de la energía libre para la estabilidad y la transición conformacio- propenso a la auto-asociación, y Bn
nal de la proteína priónica. Modelos del control termodinámico (A) y cinético (B) para la es el estado multimérico que repre-
conversión de la isoforma PrPC silvestre (WT) y mutante (MUT) en la isoforma PrPSc. DG senta al material patogénico difícil
es la diferencia en la energía libre entre los estados PrPC y PrPSc, y DG‡ es la energía de de reciclar.
activación entre esos dos estados. D(GWT/MUT es la diferencia entre el DGWT y el DGMUT. Los
En el modelo cinético se pueden
diagramas de la energía libre para las proteínas silvestre (WT) se muestran en líneas con-
tinuas y para la proteína mutante en líneas punteadas. La estabilidad termodinámica de establecer dos tipos de barreras pa-
las proteínas MoPrPC y MoPrPSc determinadas a pH de 3.6 es de 4 kcal/mol y 6 kcal/mol, ra la formación de Bn. Si se trata de
respectivamente, mientras que el DG entre ambas proteínas es de 2 kcal/mol. El estado una proteína grande y las conforma-
desnaturalizado se representa por una U (C). El diagrama de la energía libre para la tran- ciónes de A y B son muy diferentes,
sición conformacional, representa la energía de activación determinada a pH de 3.6, don- entonces puede existir una gran ba-
de ET es el estado de transición (D). La isoforma PrPSc presenta una transición adicional
hacia la formación de la placa amiloide (línea punteada).
rrera cinética de tipo entálpico, don-
de B podría desempeñar el papel de
sólo necesita ser marginalmente do, un pequeño cambio en la mag- molde para disminuir la barrera
más estable que la PrPC (∆(G entre nitud de la barrera de activación energética de los cambios confor-
-1.5 y -3 kcal/mol). Para explicar la (∆(G‡WT/MUT = 1.5 a 3 kcal/mol) po- macionales. En este sentido, se tie-
ausencia de la PrPSc, la barrera dría producir una disminución en la nen algunas evidencias que sugie-
energética que separa a ambos esta- velocidad de conversión en aproxi- ren que las enfermedades priónicas
dos debería tener un valor de ∆G- madamente 100 veces. Los resulta- se ajustan a este modelo. Por otra
‡de entre 36 y 38 kcal/mol, si se su- dos obtenidos muestran que el parte, si es una proteína pequeña la
pone la presencia de un estado de cambio en la estabilidad de algunas que experimenta un gran cambio
transición (Fig. 3 B). En este senti- mutantes es despreciable (∆(G = -2 conformacional, como el péptido
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βAPP en la enfermedad de Alzhei- hasta incluir en ésta al residuo 168, mente más estable (Fig. 3 D). En es-
mer o la calcitonina en el carcinoma con lo que se forma una superficie tas condiciones, la formación de la
medular de la tiroides (21), o si se continua (10). En este sentido, placa amiloidea se ve favorecida.
tiene un pequeño cambio conforma- Jackson (15), empleando un prion Asimismo, este grupo modeló el
cional, como en la formación de la humano recombinante, huPrP(90-231), plegamiento de los priones em-
hemoglobina fibrilar (22), entonces identificó una forma monomérica pleando un modelo de malla (“latti-
el paso limitante es la formación del rica en estructuras β, capaz de for- ce model) de baja resolución para el
núcleo multimérico estable (Bn). mar moléculas fibrilares; aunque plegamiento de las proteínas (25).
Los resultados de la fibrinogénesis aún no se cuenta con evidencias ex- Si en el modelo se permite la dime-
experimental empleando péptidos perimentales que demuestren que se rización de las proteínas durante su
del tipo βAPP, sugieren que esta en- trata de una molécula infecciosa, es re-plegamiento, sólo una pequeña
fermedad se ajusta al modelo de la un buen candidato para representar proporción de éstas (alrededor del
polimerización nuclear (23). al estado B. Sin embargo, aún es ne- 17%) adopta un estado nativo ho-
En general, para las enfermeda- cesario hacer una mejor caracteriza- modimérico. El arreglo de la estruc-
des priónicas, dos estados especifi- ción de cada uno de esos estados tura de este nuevo estado nativo ho-
cados en la ecuación 1 han sido cla- para refinar el modelo de la multi- modimérico es muy diferente en
ramente identificados, mientras que plicación de las partículas infeccio- conformación a la estructura del
para los restantes se tienen algunos sas en las enfermedades priónicas. monómero nativo. Asimismo, mos-
candidatos. Las isoformas PrPC y Recientemente, Cohen y cols. traron que las proteínas modelo que
PrPSc corresponden a los estados A (24), han demostrado que en el ple- son relativamente menos estables
y Bn respectivamente, donde A es gamiento hacia el estado nativo de como monómeros, tienden a auto-
un monómero rico en estructuras α- la proteína recombinante del prion asociarse en un homodímero nativo
hélices, mientras que Bn es la forma del ratón (MoPrP(89-231)), existe un estable. Sus resultados sugieren que
multimérica rica en estructuras lá- control cinético. Por medio de la es- las proteínas cuyo estado nativo es
minas β-plegadas. Aunque el tama- pectroscopía de dicroísmo circular un monómero inestable, adquieren
ño de la forma multimérica aún no y de la cromatografía de exclusión una mayor estabilidad por medio de
ha sido determinado, los experi- molecular, se determinó que la des- incrementar el número de las inte-
mentos de irradiación ionizante in- naturalización por urea de la isofor- racciones entre los monómeros,
dican que el tamaño de las partícu- ma PrPC tiene un ∆G de -3.6 kcal- dando por resultado un estado nati-
las infecciosas es de 55 kDa, lo que /mol, mientras que para la isoforma vo multimérico cuya conformación
corresponde a un dímero de la PrPSc PrPSc el ∆G es de -6.1 kcal/mol puede ser sustancialmente diferente
(19). En 1997, Kaneko y cols. (20) (Fig. 3 C). Lo anterior indica que la al monómero nativo inicial. Este
sugirieron que los residuos de ami- isoforma PrPSc, rica en estructuras modelo que explica el plegamiento
noácidos en las posiciones 168, láminas β-plegadas, es termodiná- aberrante de las proteínas, puede te-
172, 215 y 219 son importantes en micamente más estable que la iso- ner una gran repercusión en las en-
la auto-interacción de la PrPSc. Ex- forma PrPC, rica en estructuras α- fermedades asociadas con la agre-
perimentos de NMR muestran que hélices. La transición conformacio- gación de las proteínas.
en la estructura tridimensional de nal entre ambas isoformas tiene una El grupo de Chang (26) ha estu-
varias recombinantes de la PrPC, los barrera energética de 20 kcal/mol, diado la participación del puente de
residuos 172, 215 y 219 forman un la cual es asociada con el proceso disulfuro (Cys179-Cys214) en el
“parche” continuo en la superficie de desnaturalización y con la for- plegamiento de la proteína recom-
de la molécula. Los experimentos mación de oligómeros de la isofor- binante del prion de ratón
de mutagénesis dirigida mostraron ma PrPSc (Fig. 3 D). En un ambien- (MoPrP(23-231)). En condiciones re-
que los residuos 172 y 171, aunque te ácido y en presencia de urea, la ductoras, la proteína muestra unas
forman parte de este parche, no son proteína MoPrP(89-231) se encuentra propiedades de plegamiento muy
indispensables para la interacción. parcialmente desnaturalizada, en inusuales; por ejemplo, en ausencia
Por otra parte, se ha sugerido que la estas condiciones se evita la trampa de cualquier agente desnaturalizan-
reorganización estructural que da cinética que dirige la consolidación te, su plegamiento es extremada-
lugar a la formación de A* involu- de la isoforma PrPC y la proteína se mente lento, sin importar el valor
cra el alargamiento de una α-hélice pliega directamente en la isoforma del pH del medio. Sin embargo, a
hacia el extremo amino terminal, PrPSc, la cual es termodinámica- pH de 8 y en presencia de algún
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agente desnaturalizante (4 M de hidratación de las mutaciones asociada a la membrana celular.

urea o 2 M de hidrocloruro de gua- Ala➞Val sobre el plegamiento del En este sentido, el grupo de Sure-
nidina), la proteína MoPrP(23-231) péptido. Los péptidos sintéticos que wicz (28) estudió las alteraciones
con las cisteínas reducidas, es ca- utilizaron fueron: dos secuencias en la conformación del prion huma-
paz de plegarse hacia la estructura que incluyen al núcleo hidrofóbico no originadas por su interacción
nativa. Más aún, este plegamiento del prion de hámster sirio, la prime- con las membranas lipídicas. Se uti-
puede ser estimulado por la presen- ra abarca desde el residuo 106 al lizaron tres péptidos derivados del
cia de moléculas oxidantes tales 122 (SHa(106-122)), la otra desde el re- prion humano: huPrP(23-231), que in-
como el glutatión oxidado. Por otra siduo 104 al 122 con las mutaciones cluye a toda la proteína, excepto la
parte, el plegamiento de la Ala113Val, Ala115Val y Ala118Val región del anclaje del GPI; huPrP(23-
MoPrP(23-231) reducida en condicio- (SHa(104-122), 3Ala➞Val); el tercer 145), que incluye sólo al extremo N-

nes ácidas (pH = 4) y en presencia fragmento fue el segmento hidrofó- terminal y huPrP(90-231), que incluye
de 4 M de urea, produce tres isóme- bico del prion de ratón, que se limi- sólo al extremo C-terminal (Fig. 1
ros conformacionales distintos al ta en los residuos 89 y 143 (Mo(89- A). La proteína huPrP(23-231) se aso-
estado nativo. De estos estudios, 143)); el cuarto fragmento es el seg- cia a las membranas de vesículas
los investigadores sugieren que la mento hidrofóbico del prion de ra- constituidas por fosfatidilserina y
MoPrP(23-231) reducida puede adop- tón sustituido en la prolina 101 por fosfatidilcolina. Esta interacción,
tar una estructura muy rígida, don- una leucina (Mo(89-143), Pro101Leu). que depende del pH, es particular-
de las cisteínas se encuentran ocul- La difracción de rayos X del pép- mente grande en condiciones áci-
tas en el núcleo hidrofóbico; la pre- tido SHa(106-122) muestra la forma- das. Los datos espectroscópicos
sencia de agentes desnaturalizantes ción de una estructura parecida a muestran que la asociación de la
o un pH ácido desestabiliza esta es- una loza de 33 Å de grueso, la cual huPrP(23-231) a las membranas produ-
tructura rígida y disminuye la ba- está estabilizada por una gran canti- ce que la región del N-terminal se
rrera energética, lo que permite la dad de puentes de hidrógeno. En ordene formando estructuras α-hé-
oxidación de las cisteínas y el ple- contraste, cuando este péptido liofi- lices. Por otra parte, el dominio ple-
gamiento de la proteína. Con res- lizado se equilibró contra una hu- gado del extremo C-terminal em-
pecto a la producción de tres distin- medad relativa del 100%, mostró pieza a desestabilizarse, especial-
tos isómeros conformacionales, és- muy pocas estructuras del tipo lá- mente a pH bajos, mientras que su
tos presentan dos cisteínas libres y mina β-plegada. En condiciones si- asociación a la membrana es pobre.
son ricos en estructuras láminas β- milares, los péptidos mutados Debido a que los fragmentos de la
plegadas (determinadas por di- SHa(104-122) 3Ala➞Val, y el PrPC empleados en este estudio se
croísmo circular). El hecho de que MoPrP(89-143) Pro101Leu, formaron sobrelapan en la región 90-145, es
puedan ser separados por técnicas estructuras fibrilares β-cruzadas de difícil localizar con precisión los si-
de HPLC, indica que el prion es ca- 40 Å de ancho, lo que apoya la hi- tios de unión de la proteína con la
paz de adoptar distintas estructuras pótesis de que la secuencia hidrofó- membrana. Sin embargo, el análisis
conformacionales estables que son bica forma un molde o núcleo que de la desnaturalización térmica de
separadas por barreras energéticas. promueve el β-plegamiento. Asi- la proteína huPrP(23-231) en presencia
Por otra parte, el grupo de Inouye mismo, estas mutaciones favorecen de las vesículas no es reversible, lo
y Kirschner (27) estudió el núcleo el plegamiento de estos péptidos en que sugiere la formación de agrega-
hidrofóbico de los priones, en parti- estructuras compactas, lo que reper- dos de tipo proteico. Estos datos co-
cular, explorando el efecto de la hi- cute en la formación de estructuras rrelacionan con los resultados re-
dratación alrededor del sitio de la β-fibrilares de gran tamaño. portados por Riek (9), los cuales in-
mutación en los cambios estructura- Sin embargo, aunque dichos es- dican que una de las superficies del
les que experimenta la proteína PrP. tudios han aportado una gran canti- dominio plegado presenta carga po-
Para esto, se emplearon péptidos dad de evidencias experimentales sitiva y es relativamente hidrofóbi-
sintéticos derivados de la PrP, donde sobre la transformación de la pro- co (alto momento hidrofóbico), lo
se incluye la mutación Pro102Leu teína priónica PrPC en la isoforma que le permite interactuar con la su-
en el dominio hidrofóbico, caracte- PrPSc, éstos se han realizado en so- perficie de la membrana. En con-
rística del síndrome de Gerstmann- luciones acuosas, lo que contrasta traste con la proteína huPrP(23-231) y
Sträussler-Scheinker (GSS). Asi- con la situación biológica, donde la el fragmento 23-145, el fragmento
mismo, analizaron el efecto de la proteína priónica PrPC se encuentra que incluye la región del carboxilo
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terminal solo se une a la membrana recombinantes humanas asociadas a cerebrales enfermos, mostraron que
a pH inferior a 6. Esto se correlacio- las membranas lipídicas, y son dife- la PrPSc puede adoptar diferentes es-
na con la distribución de los resi- rentes a lo observado cuando la pro- tados conformacionales. Aunado a
duos de aminoácidos cargados posi- teína está libre en la solución. Lo esto, algunas evidencias sugieren
tiva o negativamente dentro de los anterior sugiere que las interaccio- que la interacción de la proteína
diferentes segmentos de la PrPC: la nes entre la membrana y la proteína PrPC con la membrana celular pue-
proteína completa, así como la PrP pueden desempeñar un papel de desencadenar su transformación
huPrP(23-145) son muy básicas y sus importante en modular la transición en la isoforma PrPSc. Sin embargo,
puntos isoeléctricos son 9.3 y 10.6, conformacional de la proteína, en aún es necesario diseñar experi-
respectivamente, mientras que el especial la conversión entre la PrPC mentos para identificar las diferen-
punto isoeléctrico del segmento a la isoforma PrPSc. tes estirpes priónicas y la enferme-
huPrP(90-231) es de 7.2. El comporta- dad neurodegenerativa a la que dan
miento de unión de los diferentes CONCLUSIONES origen, con lo que se pueden desa-
fragmentos a la membrana y el re- Hasta ahora se ha reforzado ex- rrollar terapias génicas encamina-
querimiento de fosfolípidos ácidos, perimentalmente la participación de das a preservar la salud de los indi-
sugieren que la interacción de la las proteínas priónicas como el viduos. Mientras tanto, es muy im-
proteína o sus fragmentos con los agente involucrado en la aparición portante desarrollar pruebas de la-
lípidos de la membrana se establece y el desarrollo de diferentes enfer- boratorio para detectar la forma pa-
por fuerzas electrostáticas. No obs- medades neurodegenerativas. El tógena del prión en los animales vi-
tante, aún no se puede descartar la avance en el conocimiento de la na- vos y evitar que dichas enfermeda-
participación del efecto hidrofóbi- turaleza de las enfermedades prió- des se dispersen.
co. En este sentido, Swietnicki y nicas incluyen la determinación de
cols. (29) demostraron que a pH la estructura tridimensional de la AGRADECIMIENTOS
ácido se induce un incremento en el PrPC y su dinámica de plegamiento, Los autores agradecen al Dr. Ale-
área hidrofóbica expuesta por el así como la caracterización de dife- jandro Fernández la revisión crítica
fragmento huPrP(90-231). rentes estados durante el plega- del manuscrito. Este trabajo fue
En conjunto, estos resultados miento que pueden estar involucra- parcialmente apoyado por la DGA-
muestran que existen diferencias dos en la conversión a la isoforma PA de la UNAM (proyecto
sustanciales en la estabilidad y la PrPSc. La susceptibilidad proteolíti- IN238402-3 para OFH e IN200399
conformación de las proteínas PrP ca, así como el análisis de tejidos para FM).

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