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Cromatograma Sanger de Hemoglobina

Este documento describe una práctica de laboratorio para determinar el aminoácido terminal de la hemoglobina mediante el método de Sanger. Los estudiantes realizaron un derivado de dinitrofenil de la hemoglobina y lo analizaron mediante cromatografía junto con sustancias de referencia. Comparando las distancias de corrimiento, identificaron que el aminoácido N-terminal de la hemoglobina es la valina. Aprendieron que es importante retirar el exceso de reactivo DNFB para evitar diluir la muestra problema y obtener un corrimiento

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Balbuena Nequis Héctor Emiliano
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Cromatograma Sanger de Hemoglobina

Este documento describe una práctica de laboratorio para determinar el aminoácido terminal de la hemoglobina mediante el método de Sanger. Los estudiantes realizaron un derivado de dinitrofenil de la hemoglobina y lo analizaron mediante cromatografía junto con sustancias de referencia. Comparando las distancias de corrimiento, identificaron que el aminoácido N-terminal de la hemoglobina es la valina. Aprendieron que es importante retirar el exceso de reactivo DNFB para evitar diluir la muestra problema y obtener un corrimiento

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS


SECCIÓN:2 EQ.3 BALBUENA NEQUIS HÉCTOR E. CHAVARRIA RAMÍREZ LIZETH M.

PRACTICA3. Determinación de aminoácidos terminales con grupo alfa amino libre por el método de Sanger.

DERIVADO DINITROFENILADO DE CROMATOGRAMA


HEMOGLOBINA
REACTIVO USO
Hemoglobina Solución a determinar su
grupo alfa amino terminal.
Bicarbonato de Desprotonar a los
sodio 4.2% aminoácidos presentes.
DNFB 1% Marcar al alfa amino
terminal
HCL 3N Protonar la solución y por
lo tanto detener la
reacción.
Éter saturado Capturar el DNFB para DISCUSIÓN
con FeSO⁴ facilitar su extracción Al terminar la práctica pusimos darnos cuenta que
H2O Capturar a las moléculas realizamos de manera adecuada el marcaje del grupo
polares alfa amino terminal por el método de Sanger, ya que
Éter Capturar al “problema” nuestra muestra de hemoglobina no produjo espuma
(alfa amino terminal) de más y con el cromatograma comprobamos que los
CROMATOGRAFÍA lavados con éter para retirar el DNFB fueron
DNP-phe Sustancias utilizadas cómo correctos dado que este mismo no afectó el
DNP-asp referencia y comparación corrimiento de nuestro problema.
DNP-val al momento del
DNFB corrimiento. También pudimos notar el cómo afecta la
Ácido cítrico y Disolvente que propicia el contaminación de capilares o en nuestro el contacto
citrato de sodio corrimiento de las directo de las sustancias en un punto inicial que no
0.1M sustancias. era el indicado, esto debido a que en nuestro primer
cromatograma no se pueden identificar las
OBJETIVOS
diferencias de corrimiento y por lo tanto tampoco
-Conocer el fundamento y aplicación del método pudimos identificar y comparar nuestra muestra
de Sanger problema.

-Realizar un derivado de DNFB de hemoglobina.

-Realizar un cromatograma y aprender a CONCLUSIÓN


interpretarlo. Con la relación de las distancias de corrimiento y la
distancia del frente del solvente (Rf) , y la comparación
de este entre las muestras y el problema se puede
identificar el aminoácido terminal, el cuál en nuestro caso
el aminoácido N-terminal de la hemoglobina es la valina.
Si no retiramos la mayor parte de DNFB corremos el
riesgo de diluir nuestra muestra problema y no obtener el
corrimiento adecuado.

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