Universidad Nacional de Colombia
Departamento de Farmacia
Farmacognosia y Fitoquímica – 2015659
Informe de laboratorio
Integrantes: Cristian Castellanos Sánchez Código 1007698618
Diana Valentina Villamil Cortés Código 99122007959
1. OBJETIVOS
Identificar las características generales de los glicósidos cardiotónicos.
Por medio de pruebas como Kedde y Xanthidrol identificar estos
metabolitos secundarios en un extracto patrón (Digitallis purpurea) y en
nuestro extracto (Urtica sp).
2. MARCO TEÓRICO
Los usos tradicionales se remontan hasta la época de Dioscórides quien estaba
maravillado con la planta y describió sus usos; más adelante, en 1532 el botánico Otto
Brunfels en su libro “Contrafayt Keuteerbuch” describe los usos que se le daban en ese
entonces a los extractos de las hojas secas entre los cuales estaban estimulación de la
menstruación, expulsión de gases, cálculos y orina, de la misma manera era usado como
afrodisiaco, en tratamientos contra neoplasias , problemas en el bazo, pleura y neumonía
además de otras afecciones. En la actualidad se ha encontrado que tiene efecto diurético,
alivia el reumatismo y la artritis, ayuda a eliminar la hiperplasia benigna prostática, mejora
los síntomas de la rinitis alérgica, entre otros; estos usos han sido analizados por medio
de estudios clínicos realizados a varios pacientes obteniendo resultados satisfactorios.
("Enciclopedia de Plantas > Urtica dioica L. (Ortiga)", n.d.)
En cuanto a los usos caseros o remedios encontramos que se usa en trastornos de las
vías biliares, como rubefaciente, antiartístico, cicatrizante y antiinflamatorio debido a que
estimula la producción de linfocitos en humanos; Presenta actividad bactericida,
astringente, vasodilatadora e hipoglucemiante. ("Enciclopedia de Plantas > Urtica dioica L.
(Ortiga)", n.d.), (Barnes, Anderson & Phillipson, 2007), (VADEMÉCUM COLOMBIANO DE
PLANTAS MEDICINALES, 2008)
Los principales constituyentes de la planta son la clorofila y los productos de degradación
de ésta como carotenoides, vitaminas, triterpenos y esteroles (entre ellos, ß-sitosterol),
ácidos como el carbónico, fórmico, cafeico (incluyendo ésteres de este), cítrico, silico,
fumárico, málico, fosfórico, succínico, oxálico, entre otros. Las hojas contienen flavonoides
derivados del quercetol, kamferol y ramnetol, sales minerales, mucílagos y
escopoletosido. Además, en los tricomas se encuentra glucoquininas y aminas como la
serotonina, histamina y colina. (Barnes, Anderson & Phillipson, 2007), (VADEMÉCUM
COLOMBIANO DE PLANTAS MEDICINALES, 2008)
La administración del extracto acuoso de las partes aéreas de la planta genera diuresis y
natriuresis en ratas, los polisacáridos del extracto acuoso de la raíz generaron actividad
antiinflamatoria en el mismo animal, el extracto hidroalcohólico de las hojas presentó
actividad antioxidante, además de tener actividad analgésica e hipolipemiante para ratas y
ratones. La toxicidad del extracto es mínima en comparación con la toxicidad dérmica que
causa la planta, su dosis tóxica en ratones es de 3.5g/Kg, lo que representa una alta
seguridad en la comercialización de extractos. (VADEMÉCUM COLOMBIANO DE
PLANTAS MEDICINALES, 2008), (Kandis et al., 2010).
Los principales glicósidos cardiotónicos presentes en la Digitalis Purpurea.
Figura 1: Purpurea glicósido A
Figura 2: Digitoxina
Figura 3: Purpurea glicósido B
Figura 4: Gitoxina
Figura 5: Glucogilatoxina
Figura 6: Gilatoxina
3. RESULTADOS
a. Resultados de pruebas de tubo
Extracto de Digitalis (Digitalis purpurea) Extracto de Ortiga (Urtica sp)
a) b)
a. Prueba de Xantidrol-HCl, prueba de Kedde y blanco (Izquierda a derecha)
b. Blanco, prueba de Kedde y prueba de Xantidrol-HCl (Izquierda a derecha)
b. Resultados de cromatografía en capa delgada
Condiciones cromatográficas:
Fase estacionaria: Sílica gel
Fase móvil: Cloroformo-metanol (9:1)
Agentes reveladores: Vainillina/ Ácido sulfúrico
Extracto de Digitalis Digitoxina Extracto de Ortiga (Urtica
(Digitalis purpurea) sp)
Frente de solvente=3.6 cm Frente de solvente=3.6 cm Frente de solvente=3.6 cm
Mancha 1=0.7 cm Rf=0.194 Mancha 1=1.3 cm Rf=0.361 Mancha 1=0.8 cm Rf=0.222
Mancha 2=1.1 cm Rf=0.306 - Mancha 2=1.5 cm Rf=0.417
Mancha 3=1.3 cm Rf=0.361 - Mancha 3=2.2 cm Rf=0.611
Mancha 4=1.5 cm Rf=0.417 - Mancha 4=2.8 cm Rf=0.778
Mancha 5=1.7 cm Rf=0.472 - Mancha 5=3.5 cm Rf=0.972
Mancha 6=2.1 cm Rf=0.583 - -
Mancha 7=2.8 cm Rf=0.778 - -
Mancha 8=3.4 cm Rf=0.944 - -
Condiciones cromatográficas:
Fase estacionaria: Sílica gel
Fase móvil: Cloroformo-metanol (9:1)
Agentes reveladores: Reactivo de Kedde
Extracto de Digitalis Digitoxina Extracto de Ortiga
(Digitalis purpurea) (Urtica sp)
Frente de solvente=3.5 cm Frente de solvente=3.5 cm Frente de solvente=3.5 cm
Mancha 1=0.2 cm Rf=0.057 Mancha 1=1.3 cm Rf=0.371 Mancha 1=2.2 cm
Rf=0.629
Mancha 2=0.9 cm Rf=0.257 - Mancha 2=2.5 cm
Rf=0.714
Mancha 3=1.2 cm Rf=0.343 - Mancha 3=3.4 cm
Rf=0.971
Mancha 4=1.4 cm Rf=0.400 - -
Mancha 5=1.7 cm Rf=0.486 - -
Mancha 6=2.0 cm Rf=0.571 - -
Mancha 7=2.4 cm Rf=0.686 - -
Mancha 8=2.7 cm Rf=0.771 - -
Mancha 9=3.3 cm Rf=0.943 - -
4. ANÁLISIS DE RESULTADOS
Como paso primordial para esta práctica y antes de iniciar la extracción se llevó a cabo la
precipitación de clorofilas; proceso importante ya que estas moléculas pueden llegar a
alterar los resultados de la práctica especialmente durante la CCD (como se ha podido
apreciar en prácticas anteriores), para este fin se utilizó la sal de un metal pesado
(Acetato de Plomo). Basándose en la literatura es posible afirmar que esta reacción se
debe a la sustitución del metal pesado en lugar del átomo de Mg como ion central en el
anillo porfirínico de la clorofila, disminuyendo así la solubilidad en varios órdenes de
magnitud; este fenómeno es bastante evidenciable en plantas expuestas a contaminación
por metales pesados. (Saba Haider, Salma Kanwal, Fahim Uddin and Rafia Azmat, 2006.)
Tras realizar la remoción de clorofilas se procedió con la extracción, para la cual se utilizó
como disolvente una disolución de cloroformo: metanol (90:10); el hecho de haber
seleccionado este solvente en particular se debe a que presenta una constante dieléctrica
de 7.6, lo que nos permite catalogarlo como “poco polar”; a pesar de que los glicósidos
cardiotónicos son compuestos considerados polares gracias a que contienen azúcares,
su polaridad tiene a verse disminuida con la presencia de un núcleo esteroidal que
favorece interacciones hidrofóbicas. Luego del proceso de extracción y de modificaciones
posteriores al mismo se procedió a realizar pruebas de tubo (Kedde y Xanthidrol) y
cromatografía en capa delgada (CCD).
En cuanto a la prueba de Kedde, ésta se fundamenta en la identificación del anillo
presente
en - lactonas -, -insaturadas; a modo de explicación del mecanismo de acción de esta
reacción, se dice que en primera medida se forma el anión cardenolide que será
convertido en un anión de color rojo- violáceo tras la adición del reactivo de Kedde (ácido
3,5- dinitrobenzóico). Debido a la hidrólisis del anillo lactónico el color desaparece a los
pocos minutos, de manera general se dice que esta reacción está basada en la proto-
disociación catalizada por medio alcalino; Mientras que en la prueba de Xanthidrol, el
reactivo actúa como electrófilo llevando a cabo reacciones de alquilación
enantioselectivas en compuestos metilénicos activados como lo será el carbono #2 de los
desoxiazúcares, generando así, un compuesto coloreado que absorbe alrededor de 700
nm. Esta prueba (Xanthidrol) no será selectiva a los metabolitos estudiados ya que en
caso de que existan estructuras metilenicas activadas se obtendrá un falso positivo; para
evitar esto se llevan a cabo pruebas conjuntas que nos brindarán la información necesaria
para afirmar si los extractos contienen glicósidos cardiotónicos o no. (Semmelweis.hu, n.d.)
(Bhat, Nagasampagi and Sivakumar, 2005) (Trillo Alarcón, 2014)
Para la cromatografía en capa delgada se utilizó cloroformo-metanol (9:1) por su
polaridad, ya que gracias a la interacción por puentes de hidrógeno se presentó una
separación efectiva de glicósidos cardiotónicos y otros componentes presentes, en caso
de que fuera utilizada una fase movil “apolar” es probable que la distancia entre manchas
fuera mínima impidiendo el correcto análisis en términos de Rf. Luego de realizar la
cromatografía, la placa que posteriormente se revelaría con Vainillina/ Ácido sulfúrico fue
llevada a la cámara UV; en 254 nm el revelado no se apreciaba claramente debido a que
las manchas se encontraban distorsionadas (como si se tratara de una sola); en 365 nm
el revelado se observó apropiadamente ya que las manchas estaban bastante definidas;
la mancha correspondiente a la digitoxina (patrón para cromatografía) no fue observable
en luz UV bajo ninguna de las dos longitudes de onda.
En cuanto al revelado de las placas cromatográficas, se sabe con anterioridad que el
reactivo de Kedde tiene como función revelar los compuestos que presenten lactonas
terpénicas por lo que es específico a glicósidos cardiotónicos; mientras que el revelado
por medio de Vainillina se utilizó para compuestos con un núcleo esteroidal; sin embargo,
este reactivo no solamente reconoce glicósidos cardiotónicos pero sí dará coloraciones
aparentemente específicas para cada grupo de metabolitos secundarios, por ejemplo, las
antocianinas darán una coloración entre azul y púrpura, los fenilpropanoides presentarán
una coloración amarilla, los terpenos brindarán coloraciones muy variadas (entre verdes y
rojos); por último, los glicósidos cardiotónicos presentarán una coloración marrón.
(González Lozano, n.d.)
Para efectos de este informe se tomará que valores de Rf0,5 serán considerados como
compuestos polares. Para la muestra patrón encontramos la primera mancha ,en la placa
con el revelado de Kedde, con un Rf de 0.057 y aunque no es una mancha muy clara, en
la placa con Vainillina se encuentra muy cerca de la entrada del solvente por lo que se
asegura un compuesto altamente polar con una coloración similar a la obtenida con la
digitoxina; basándonos en su alta polaridad se asume es la gilatoxina; la segunda mancha
presente en la placa de Keede, primera en la placa con Vainillina, presenta un Rf
promedio de 0.227 siendo un compuesto polar; basándonos en esto y en el hecho de que
reaccionó con ambos reactivos se dice que podría tratarse de gitoxina; la tercera mancha
se encontró en un Rf promedio de 0.326 siendo un compuesto polar con un Rf bastante
cercano al de la digitoxina por lo que es posible suponer que se trata de purpurea
glicósido A (digitoxina glucosilada); la cuarta mancha presentó un Rf promedio de 0.381,
muy similar al de la digitoxina (0.366) por lo que se afirma que se trata de la digitoxina; la
quinta mancha presenta un Rf de 0.417 (solamente identificada en Vainillina) por lo que
podría tratarse de un heterósido de flavona; la sexta mancha ,con un Rf promedio de
0.479, siendo un compuesto medianamente polar se presume una saponina; la séptima
mancha ,con un Rf promedio de 0.577, podría ser de igual manera una saponina; la
octava mancha que tiene un Rf 0.686 (Solamente identificado en Kedde) podría tratarse
de una antraquinona debido a que no reacciona con la vainillina; la novena mancha con
un Rf promedio de 0.775 podría ser un flavonol debido a su polaridad menor a los
glicósidos y la décima mancha ,con un Rf promedio de 0.994 presentando una baja
polaridad, podría suponerse que se trata de un compuesto terpénico gracias a su
coloración verdosa con Vainillina. (Plantasyhongos.es, n.d.)
Con respecto al extracto problema (Urtica sp) la primera mancha presenta un Rf de 0.222
(Solamente identificado en Vainillina) siendo un compuesto altamente polar que se
supone es un escopoletosido; la segunda mancha tiene un Rf de 0.417 (Identificado en
Vainillina) siendo un compuesto medianamente polar, basándonos en lo supuesto en el
extracto de Digitalis se asume que podría tratarse de un glicósido de flavona; la tercera
mancha con un Rf promedio de 0.620 podría corresponder a un glucósido de flavona; la
cuarta mancha con un Rf de 0.714 (Identificado con Kedde) podría asumirse que es una
antraquinona; la quinta mancha presenta un Rf de 0.778 (Identificado en Vainillina) podría
tratarse de un flavonoide debido a que su polaridad es inferior a los glicósidos de flavona
y la sexta mancha ,con un Rf promedio de 0.972, basándonos en coloración
proporcionada con Vainillina podemos afirmar que se trata de un compuesto terpénico,
muy probablemente un carotenoide debido a la información reportada en literatura para la
especie.
5. CONCLUSIONES
Tras evaluar los resultados de la cromatografía y las pruebas de tubo realizadas
tanto a la muestra patrón como a la muestra problema, se obtuvieron los
resultados esperados ya que en cuanto al patrón (Digitallis purpurea) se aprecian
resultados positivos para la presencia de glicósidos cardiotónicos; mientras que
para la muestra problema se aprecian resultados negativos como se encuentra
reportado en la literatura para plantas de su mismo género como lo son la ortiga
mayor (Urtica dioica L) y la ortiga menor (Urtica urens L).
Se dice que las pruebas empleadas durante la práctica presentan eficacia y
exactitud ya que los compuestos identificados tras CCD coinciden de manera
inequívoca con los reportados para ambas muestras.
6. BIBLIOGRAFÍA
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