MICROSCOPIOS ÓPTICOS
ESPECIALES
MG. CINTHYA LOVON LUQUE
MICROSCOPIOS ÓPTICOS ESPECIALES
• 1. Microscopio de fase o contraste de fase
• 2. Microscopio de interferencia
• 3. Microscopio de luz polarizada
• 4. Microscopio de campo oscuro
• 5. Microscopio de luz ultravioleta
• 6. Microscopio de fluorescencia
CONTRASTE DE FASE
• FUNDAMENTO: Las diferencias de fase o retraso que se produce en las
ondas de luz al atravesar estructuras de diferente composición química y
densidad, son AMPLIFICADAS y convertidas en diferencias de intensidad
luminosa por ello se aprecia zonas con diferentes grados de brillo y
oscuridad sin usar colorantes
• USO: Células vivas y tejidos vivos
• Condensador (anillo de fase) y objetivo (placa de difracción fase)
• cualitativo
MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA
Fundamento: Parecida al M. de fases y puede dar resultados cuantificados. Se
logra la separación de la luz en dos haces. Se puede medir los rayos que sufren
diferentes retardos
USO: Determinar peso seco de las sustancias integrantes en células y tejidos.
Observar tejidos vivos. Muestras de mayor grosor como cultivos celulares
MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA
Materiales celulares:
• Fundamento: usa luz polarizada (luz
que vibra en un solo plano) para Se ven
brillantes
iluminar la muestra. debido a que
Presenta: son
birrefringentes
- Un prisma polarizador de la luz (nicol) que
solo deja pasar la luz polarizada a la muestra
- Un analizador sobre la muestra
• USO: Componentes celulares con
ordenamiento molecular
• Fibras colágenas, musculares, nerviosas Se ven
oscuros
Microfotografía de la corona de un
diente visto con microscopio de luz
polarizada:
E = Esmalte.
D = Dentina
1 = Laminilla del
esmalte.
2 = Límite
amelodentinal.
3 = Canalículos
dentinales
• Se usa para ver detalles finos de fibras
musculares y tejido conectivo, cilios flagelos
• Presenta 2 filtros analizador (registra las
variaciones de la polarización) y polarizador
(transforma la luz en polarizada)
MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
Fundamento: con
condensador especial
que dirige los rayos
luminosos. Los lentes
reciben solo la luz
dispersada por los
componentes celulares
Uso: Bacteriología, y
para ver
espermatozoides
• Treponema pallidum
MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA
FUNDAMENTO: Utiliza luz ultravioleta que oscila entre 400 a
200 nm. Lentes de cuarzo. Impresión en placas fotográficas
para visualización.
USO: ácidos nucleicos en células vivas, para cuantificar se usa
espectrofotómetro
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
• Fundamento: Usa luz ultravioleta 400
nm
• Algunas absorben la energía de la luz
UV y emiten fluorescencia
• USOS:
• Identificar ácidos nucleicos
• En técnica de inmunofluorescencia
• citogenética
MICROSCOPIO
CONFOCAL
• Microscopio de fluorescencia
modificado que utiliza un fino
láser que barre la muestra
• Se analiza las diversas
profundidades focales para
formar imágenes
tridimensionales de la muestra
FACULTAD DE MEDICINA
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
MG. CINTHYA JEYMI LOVON LUQUE
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
Microscopio de barrido
https://www.unsa.edu.pe/unsa-es-la-primera-en-latinoamerica-en-contar-con-microscopicos-electronicos-de-ultima-generacion-de-nivel-
atomico/
Del microscopio óptico al microscopio electrónico (1931)
CARACTERÍSTICAS DE RAYOS
CATODICOS
• Son Corrientes o haces de electrones que se
propagan en el vacío siguiendo un trayecto
ondulatorio.
• Se puede disminuir a voluntad la longitud de estas
ondas, hasta conseguir ondas miles de veces más
pequeñas que las de luz (esto se consigue
aumentando la diferencia de potencial entre el cátodo
y el ánodo).
• Estos electrones atraviesan láminas finísimas de
materia.
• Son deflexionados por campos electromagnéticos
• Producen efectos térmicos y mecánicos
• Son invisibles.
• Producen fluorescencia al incidir sobre planos de
material fluorescente.
• Impresiona las placas fotográficas.
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO
• Necesita sistema de vacío
• El haz de electrones tiene bajo poder de penetración por eso el grosor de la
muestra debe ser 20 a 100 nm
• Imágenes en blanco y negro Los electrones son
• Longitud de onda de electrones 0.05 A° capaces de
moverse en el vacío
• Aumentos mayores a 500 000 (de 10 a 5 A°)
• A menor longitud de onda mayor poder de resolución
• ELEMENTOS
PARTES PRINCIPALES DE UN MICROSCOPIO ELECTRONICO
• 1) TUBO O COLUMNA:
• -El filamento o cátodo, produce electrones
• -Ánodo, permite el paso de electrones)
• -Bobina electromagnética, lente
condensadora
• -Lentes electromagnéticas
• -Lente del proyector
• -Pie de la columna con una pantalla
• 2) LA CONSOLA:
• -Circuitos eléctricos, bombas de vacío, y el
transformador de alta tensión
TIPOS DE MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS
•1. Microscopio de transmisión: MET
•2. Microscopio de barrido: MEB
MICROSCOPIA ELECTRÓNICA
DE TRANSMISIÓN: MET
• Cañón de electrones: Filamento o
cátodo incandescente de Tungsteno
• Haz de electrones viajan a la columna
con condiciones de vacío y atraviesan la
muestra
• Las partes de la muestra que han
sido atravesadas por los
electrones aparecen claras; las
partes que han absorbido y
dispersado los electrones a causa
de su densidad inherente o la
adición de metales pesados
durante su preparación aparecen
oscuras.
Microscopia electrónica de transmisión: MET
MICROSCOPIA ELECTRÓNICA
DE BARRIDO: MEB
• Proporciona una imagen tridimensional del
especímen o muestra.
• A medida que el haz de electrones explora
la superficie del objeto se refleja algunas
electrones electrodiversos y se expulsan
otros electrones secundarios.
• Los detectores de electrones capturas a esos
electrones y se procesan, comparan y
muestran en un monitor como una imagen
tridimensional
O SEM
IMÁGENES
TRIDIMENSIONALES
Haz de electrones no es fijo y rastrea la superficie de la muestra, y la imagen se forman por los
electrones retrodispersados y secundarios-
sirve para observar
superficies en relieve
• Epitelio traqueal de mamífero
• Diagrama comparativo de la formación de imágenes en diferentes tipos de microscopios Fuente: Ross, 2006
Microscopio Optico Caracteristicas Microscopio Electronico
De interferencia de rayos luminosos Imagen dada por el M Rayos catodicos, deflexionados por campos
elecromagneticos
Simple con aire Tubo Al vacio con gran diferencia de potencial
Luz (fotones) Fuente Filamento de Tungsteno (electrones)
Ocular, objetivos y condensador Lentes Bobinas: Campos electromagneticos o
condensador, objetivo y proyectos
Celulas vivas o muertas Estudian Celulas muertas
Coloreada o no Observacion de imágen Diferentes tonos de gris, sombreados
electronicamente
0.1 µm Poder de resolucion 1 nm o 10 A
5 500 A Longitud de onda λ 0.05 A (puede disminuir a voluntad por difenerencia
de potencial entre ánodo y cátodo)
500 a 2000 de veces Aumento 200 000 a 300 000 aumentos directos
Microscopio Optico Caracteristicas Microscopio Electronico
Formol, Carnoy, etc Fijacion Bicromato dde K., tetraoxido de osmio,
formaldehido
Parafina o celoidina Inclusión Acrilicos o resina epoxi
Con el microtomo Cortes Con el ultramicrotomo
De acero Cuchilla para corte De diamante o vidrio
De 4 a 10 µm Grosor de cortes 20 a 100 nm
De vidrio Portaobjeto De colodion, aluminio o berilio
Estructura Nivel de observacion Ultraestructura
Visual, micrografias y placas fotgraficas Observacion Impresionan placas fotograficas 1 000
000 de aumentos
De campo claro, de contraste de fase, de Tipos De transmision, de barrido (scanning)
Interferencia, de luz polarizada, de acmpo
oscuro, de LUV, de fluorecencia
Mecanica y optica Partes Tubo o columna y consola
MICROSCOPIO DE FUERZA ATÓMICA
https://esp.brainpop.com/ciencia/la_naturaleza_de_la_ciencia/metodo_cientifico/cuestionario/
