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Informe de laboratorio
PRÁCTICA N°2
MANEJO DEL MICROSCOPIO Y TÉCNICAS PARA HACER PREPARACIONES
MICROSCOPICAS
Cesar Villadiego Ortega
Edwin Elías Espinosa Padilla
María Alejandra Romero Moreno
María Angel Pacheco Ortiz
Valentina Hernández Pacheco
Universidad de Córdoba
Facultad de Educación y Ciencias Humanas
Departamento de Ciencias Naturales y Educación Ambiental
Biología General L-02
Montería
21 de marzo 2023
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INTRODUCCIÓN
El microscopio es un instrumento óptico diseñado aumentar considerablemente la imagen de
objetos muy pequeños permitiendo así la observación de objetos pequeños y microorganismos que no son
visibles al ojo humano. Dado que la imagen de la muestra está ampliada muchas veces e invertida, es
difícil moverla de forma manual. Por ello los soportes de los microscopios científicos de alta potencia
están montados en una plataforma que se puede mover con tornillos micrométricos. Algunos Todos los
microscopios de investigación cuentan con tres o más objetivos montados en un cabezal móvil que
permite variar la potencia de aumento.
El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:
a. El sistema mecánico: está constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes
que permiten el movimiento para el enfoque.
b. El sistema óptico: comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el
aumento de las imágenes que se observan a través de ellas.
c. El sistema de iluminación: comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y
regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a través del microscopio.
SISTEMA MECÁNICO
• Soporte: sostiene la parte óptica, está formado por dos partes: el pie o base y el brazo.
• El pie o base: en forma de herradura es el apoyo de las demás piezas del microscopio.
• EL brazo: sirve de soporte a las otras piezas, de ella se agarrará el microscopio cuando se
transporte de un lugar a otro del laboratorio. En algunos está articulado a la parte superior del pie
mediante un tornillo que permite la inclinación de la columna para comodidad en el momento de
la observación.
• Platina: es el lugar donde se deposita la preparación. Puede ser cuadrada, circular o rectangular
con un orificio central a través del cual pasa la luz a través de ella.
• Carro: posee dos tornillos que permiten movimientos horizontales (derecha, izquierda, adelante,
hacia atrás).
• Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular o triocular.
• Tubo del ocular: se encuentra en la parte superior del microscopio, sobre él se encuentran
acoplados los oculares.
• Revólver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite cambiar los objetivos al girarlos.
• Tornillos de enfoque: Macrométrico y micrométrico.
o El tornillo macrométrico permite desplazamientos amplios, para subir o bajar la platina
de forma visible.
o El tornillo micrométrico permite desplazamientos muy finos de la platina, permite el
enfoque correcto de la imagen.
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SISTEMA ÓPTICO
Son las partes más importantes del microscopio, puesto que son las que permiten la iluminación, la
ampliación y visión aumentada del objeto en la platina.
• Oculares: están situados en la parte superior del tubo ocular, cerca del ojo del observador; y
consiste en una lente que se acopla a un pequeño tubo. Amplía la imagen proveniente del objetivo.
• Objetivos: son los lentes acoplados al revolver, cerca de la preparación y pueden ser cambiados
de posición según la necesidad con solo rotarlos. El número del objetivo varía según la capacidad
de aumento.
o Objetivos ordinarios o secos: son los de menor aumento y se usan en las observaciones
corrientes, donde hay una capa de aire entre el objeto que se examina y la lente frontal.
o Objetivos de inmersión homogénea o de aceite: presenta la lente frontal más pequeña y
curvada, lleva impresa las letras OIL, UOEL, o INM o un círculo acanalado negro, rojo o
blanco. Con estas lentes se utiliza aceite de inmersión generalmente de cedro, cuyo índice
de refracción que es de 1,515 recoge los rayos luminosos y los concentra para dirigirlos al
objetivo.
• Condensador: es una lente convergente que concentra los rayos luminosos para enviarlos al
objetivo a través de la platina. Se compone de dos o tres lentes y un diafragma que regula la
cantidad de luz que debe llegar al objeto. En ocasiones se presentan algunos anillos por debajo del
diafragma, que se utilizan para colocar filtros cuando se requiere alguna modificación especial de
luz.
• Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
• Foco o fuente de luz: dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Puede ser un espejo que
recoge los rayos de luz de una fuente cercana al microscopio o una lámpara incorporada al pie del
microscopio que envía la luz directamente al condensador.
PROPIEDADES BÁSICAS DEL MICROSCOPIO
• Poder separador o poder de resolución: es una cualidad del microscopio, y se define como la
distancia mínima entre dos puntos próximos que pueden verse separados. El ojo normal no puede
ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una décima de milímetro. Entre mayor
sea el poder del microscopio, más pequeña es la distancia que puede medir entre dos puntos.
El poder de resolución del ojo humano es de 100 micras; en el microscopio óptico, el poder
separador máximo conseguido es de 0,2 décimas de micra, y en el microscopio electrónico, el
poder separador llega hasta 10 ángstrom.
• Poder de definición: se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas tanto en la periferia como
en el centro del campo visual, se refiere sobre todo a la definición de los contornos. Esta
propiedad depende de la calidad y de la corrección de las aberraciones de las lentes utilizadas.
• Poder de Aumento: se define como la relación entre el diámetro aparente de la imagen y el
diámetro o longitud del objeto, o sea:
Aumento (A) = Diámetro / objeto
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Esto quiere decir que, si el microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que estamos
viendo es 100 veces mayor que el tamaño real del objeto. Tanto el ocular como el objetivo poseen
un poder de aumento determinado, así que, para calcular el aumento de un microscopio, basta
multiplicar el aumento del ocular por el aumento del objetivo. Por ejemplo, si estamos utilizando
un ocular de 10X y un objetivo de 45X, el aumento a que estamos viendo la preparación será:
1OX x 45X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 450 veces.
• Poder de penetración: es la propiedad que permite observar varios planos del preparado con una
misma posición de enfoque. Generalmente el microscopio enfoca un solo plano del preparado.
ENFOQUE DE UNA MUESTRA EN EL MICROSCOPIO
1. Bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya
debería estar en esas condiciones.
2. Haciendo uso del revolver colocar el objetivo de menor aumento (seco débil 4x) en posición de
empleo.
3. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas y centre la
preparación haciendo uso de los tornillos del carro.
4. Regule la luz mediante el uso del diafragma. Los objetivos necesitaran más luz cuanto mayor
poder de aumento posean.
5. Haciendo uso del tornillo macrométrico suba al máximo la preparación hasta que encuentre tope
sin observar con los oculares. Esto se debe hacer usando el objetivo de menor aumento del
microscopio.
6. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos
(10x). Accione el macrométrico hasta que visualice la imagen en el campo visual.
7. Una vez enfocada afine la imagen con el tornillo micrométrico.
8. Si desea mayor detalle cambie de aumento rotando el revólver hacia el objetivo que proporcione
el aumento deseado.
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, bajar por completo la platina y asegurarse de que la parte mecánica de la platina no
sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar
que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su
caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un
papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo
con pañuelos especiales para óptica. En cualquier caso, se pasará el papel por la lente en un solo
sentido y con suavidad.
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6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina,
revólver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación
para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el
tubo de este ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo
con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y al
acabar el curso encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.
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OBJETIVOS
• Familiarizar al estudiante con el uso, funcionamiento, cuidado del microscopio.
• Definir y comprobar las propiedades básicas del microscopio: poder de aumento, poder de
resolución, poder de penetración y poder de definición.
• Analizar el sentido o posición de la imagen dada por el microscopio con relación a la posición del
objeto que se observa.
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MARCO TEÓRICO
El microscopio es un instrumento utilizado para observar objetos que son demasiado pequeños
para ser vistos a simple vista. La técnica de microscopía ha sido utilizada en diversas áreas de la ciencia,
como la biología, la medicina, la física, la química, la geología y la ingeniería, entre otras. El manejo
adecuado del microscopio y la correcta preparación de las muestras son esenciales para obtener imágenes
de alta calidad y precisión.
El microscopio compuesto es el tipo de microscopio más comúnmente utilizado en los
laboratorios de ciencias. Consiste en dos sistemas de lentes: el objetivo y el ocular. El objetivo se
encuentra cerca de la muestra y amplía la imagen, mientras que el ocular se encuentra cerca del ojo del
observador y proporciona una ampliación adicional. La combinación de estos sistemas de lentes permite
ampliar las muestras hasta varias veces su tamaño original.
Antes de comenzar a utilizar el microscopio, es importante asegurarse de que está limpio y en
buenas condiciones de funcionamiento. Las lentes deben estar limpias y libres de polvo y huellas
dactilares, y la platina debe estar nivelada y sin obstrucciones. Una vez que se ha verificado el estado del
microscopio, se puede comenzar a preparar la muestra.
Existen diferentes técnicas de preparación de muestras para microscopía, dependiendo del tipo de
muestra y del tipo de información que se desea obtener. Algunas técnicas comunes incluyen:
o Montaje en seco: se utiliza para muestras que ya están secas, como hojas o insectos. La muestra
se coloca directamente sobre un portaobjetos limpio y seco, y se cubre con una lámina delgada de
vidrio llamada cubreobjetos.
o Montaje en húmedo: se utiliza para muestras que deben permanecer húmedas, como organismos
vivos o células. La muestra se coloca en una solución acuosa y se cubre con un cubreobjetos.
o Tinción: se utiliza para resaltar ciertas características de la muestra, como las células o los tejidos.
La muestra se trata con un colorante específico que se une a la estructura que se quiere resaltar.
Después se enjuaga y se monta en un portaobjetos y se cubre con un cubreobjetos.
Una vez que la muestra está preparada, se puede colocar en el microscopio. El portaobjetos se
coloca en la platina y se ajusta hasta que esté enfocado. La iluminación también debe ser adecuada para
obtener la mejor imagen posible. Es importante recordar que el movimiento del portaobjetos debe ser
suave y lento para evitar dañar la muestra o el objetivo.
En general, el manejo del microscopio y la realización de preparaciones microscópicas requieren
de una práctica constante y de una buena técnica para obtener resultados óptimos.
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MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
• Microscopio óptico compuesto.
• Frasco gotero con agua destilada.
• Portaobjetos.
• Cubreobjetos.
• Papel periódico impreso.
• Cuchilla.
• Lápices de colores.
• Lana o algodón de colores.
• Corcho.
• Cabello.
• Cebolla.
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PROCEDIMIENTO (DIAGRAMA DE FLUJO)
❖ MICROSCOPIO Y SUS PARTES
Oculares
Cabezal
Brazo
Revolver
Objetivos
Uñas o ganchos
Carro
Platina
Tornillo macrométrico
Condensador
Tornillo micrométrico
Diafragma
Tornillos del
carro
Bombilla
Control de bombilla
Base
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DIAGRAMA DE FLUJO
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❖ FIBRA DE ALGODÓN O LANA
Tome una muestra muy pequeña de lana o algodón de diferentes colores, colóquela sobre el
portaobjetos agregue una gota de agua destilada y cúbrala con el cubreobjetos. Lleve al
microscopio, observe con 4x y 10x.
• ¿Cuántas veces esta aumentada la imagen en ambas observaciones?
o Al observar la muestra de lana en 4x la imagen estuvo aumentada 40x y en 10x
estuvo aumentada 100x ya que los oculares por si solos están aumentado 10x, este
aumento se le debe agregar a los objetivos lo cual al hacer el cálculo quedaría:
10*4= 40 y 10*10=100.
Observara varias fibras superpuestas. Determine los niveles de las fibras coloreadas cambiando el
enfoque. Esquematice sus observaciones.
• ¿Se enfocan todos los hilos al mismo tiempo usando el objetivo de menor aumento?
o Al tomar la fibra de lana y observarla en 4x (el objetivo de menor aumento), se
podían observar todos los hilos al mismo tiempo.
• ¿Se enfocan todos los hilos al mismo tiempo usando el objetivo de mayor aumento?
o Al tomar la fibra de lana y observarla en 10x (el objetivo de mayor aumento) se
alcanzaban a enfocar todos los hilos al mismo tiempo.
• ¿Qué propiedad (es) puede comprobar en esta observación?
o La propiedad que se puede comprobar en esta observación es la penetración ya que
se pueden observar simultáneamente dos o más planos de la muestra de lana.
También se puede observar la propiedad de definición al ver con nitidez las fibras
de lana. La propiedad de aumento realizando el cálculo de Aumento=
diámetro/objeto.
❖ FIBRA DE CABELLO
Tome una muestra de cabello y realice el montaje sobre el portaobjetos. Lleve al microscopio,
observe con 4x y 10x. Esquematice sus observaciones.
• ¿Cuántas veces esta aumentada la imagen en ambas observaciones?
o Al observar la muestra de cabello en 4x la imagen estuvo aumentada 40x y en 10x
estuvo aumentada 100x ya que los oculares por si solos están aumentado 10x, este
aumento se le debe agregar a los objetivos lo cual al hacer el cálculo quedaría:
10*4= 40 y 10*10=100.
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• ¿Qué propiedad (es) puede comprobar en esta observación?
o La propiedad que se puede comprobar en esta observación es la penetración ya que
se pueden observar simultáneamente dos o más planos de la muestra.
También se puede observar la propiedad de definición al ver con nitidez las fibras
de cabello.
La propiedad de aumento realizando el cálculo de Aumento= diámetro/objeto.
❖ CORCHO
Realice un corte fino de corcho y realice el montaje sobre el portaobjetos. Lleve al microscopio,
observe con 4x y 10x. Esquematice sus observaciones.
• ¿Cuántas veces esta aumentada la imagen en ambas observaciones?
o Al observar la muestra de corcho en 4x la imagen estuvo aumentada 40x y en 10x
estuvo aumentada 100x ya que los oculares por si solos están aumentado 10x, este
aumento se le debe agregar a los objetivos lo cual al hacer el cálculo quedaría:
10*4= 40 y 10*10=100.
❖ EPIDERMIS DE CEBOLLA
Corta un bulbo de cebolla, Toma una de las escamas con la superficie cóncava y rómpela,
entonces observaras que se desprende con facilidad una capa muy delgada y transparente que es la
epidermis. Toma un fragmento y colócalo sobre un portaobjetos con una gota de agua de modo
que la superficie que estaba en contacto con la escama quede hacia arriba. Usa un fragmento de
epidermis de no más de 1 cm2 y cúbrelo con un cubreobjetos.
Lleve al microscopio, observe con 4x, 10x y 40x. Esquematice sus observaciones.
• ¿Qué observa?
o En la epidermis de la cebolla con un objetivo de 4x se obtuvo un campo visual
amplio de la muestra, se podía ver la textura uniforme de un color café, en el
objetivo de 10x el campo visual era más reducido, se podían observar de forma
más cerca la pared celular de la muestra de cebolla y en el objetivo 40x se
visualizó aún más cerca las células de la cebolla.
• ¿Cuántas veces esta aumentada la imagen en las tres observaciones?
o Al observar la muestra de epidermis de cebolla en 4x la imagen estuvo aumentada
40x, en 10x estuvo aumentada 100x y en 40x estuvo aumentada 400x, ya que los
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oculares por si solos están aumentado 10x, este aumento se le debe agregar a los
objetivos lo cual al hacer el cálculo quedaría: 10*4= 40,
10*10=100 y 10*40=400.
• ¿Cómo se aprecia la morfología de las células y sus paredes?
o Podemos apreciar la morfología de las células de la epidermis ya que tienen una
altura bastante rectangular y en algunas células podemos visualizar algunos
puntos que hacen referencia al núcleo. También podemos ver qué algunas células
están rodeadas por dos capas recordando que las células vegetales tienen
membrana celular y pared celular.
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PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. ¿Por qué es importante la utilización del microscopio en el estudio de la biología celular?
o Es importante ya que así podemos obtener imágenes en diferentes tipos de aumentos,
logrando así, ver detalladamente cosas que al ojo humano son invisibles.
2. ¿Por qué el microscopio electrónico tiene mayor poder de resolución que el microscopio
compuesto?
o El microscopio electrónico tiene mayor resolución que uno compuesto ya que este los
electrones de este tienen una longitud de onda mucho más corta que la luz visible,
alcanzando así una resolución aproximadamente 40.000 veces más que el poder de
resolución de un microscopio de luz, y 2x106 veces el poder de resolución de un ojo
humano.
3. ¿Por qué la imagen aparece invertida en el microscopio compuesto?
o La imagen del microscopio compuesto se invierte ya que el ocular está situado de modo
que no forma una segunda imagen real, si no que hace divergir los rayos luminosos, que
al entrar en el ojo observador parecen proceder de una gran imagen invertida situada más
allá del objeto.
4. La imagen dada por el microscopio ¿es real o virtual? Explique por qué.
o La imagen real seria la que es vista por los objetivos, en cambio, los oculares actúan como
unos amplificadores simples formando una gran imagen virtual en una distancia que el ojo
pueda apreciar de mejor manera.
5. ¿Cuál es la razón por la cual se utilizan cortes de tejidos muy delgados para observar al
microscopio?
o Los cortes de los tejidos deben ser finos, ya que así no se produce una autolisis, y también
permitiendo que los tejidos permanezcan sin cambios luego de subsecuentes tratamientos.
A este proceso se le llama corte histológico.
6. ¿Cuáles son las ventajas y cuales las limitaciones que presenta el microscopio óptico en la
observación de estructuras biológicas?
o Una de las ventajas que tiene el microscopio óptico, es que se puede ver células vivas, por
lo que es posible observar a las células hacer sus comportamientos normales, como por
ejemplo migrar o dividirse. En cambio, sus desventajas o limitaciones son que el aumento
es bastante reducido debido a la longitud de onda visible. Y otra de sus limitaciones es
que no se puede hacer investigaciones a profundidad, debido a la baja resolución de los
lentes.
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7. Consulte y enumere algunos tipos de microscopio utilizados para realizar observaciones
biológicas.
o Microscopio simple: El microscopio simple fue durante mucho tiempo el mejor
instrumento que se contó para escudriñar el mundo microscópico. Su calidad es superior a
la que se le atribuye normalmente y permite observar casi todas las estructuras y
orgánulos que se ven con un moderno microscopio compuesto.
o Microscopio compuesto u óptico: El microscopio óptico es uno de los inventos que ha
marcado un antes y un después en la historia de la ciencia, especialmente en el campo de
la biología y la medicina. Esencialmente se puede definir como un instrumento que
permite observar en un tamaño aumentado elementos que son imperceptibles a simple
vista.
o Microscopio electrónico: El microscopio electrónico es un instrumento de gran utilidad
en la investigación científica gracias a su gran poder de aumento. Mediante este tipo de
microscopio es posible aumentar imágenes de muestras hasta niveles muy superiores a los
del microscopio óptico.
o Microscopio electrónico de barrido: El Microscopio electrónico de barrido o SEM
(Scanning Electron Microscope), es aquel que utiliza un haz de electrones en lugar de un
haz de luz para formar una imagen. Tiene una gran profundidad de campo, la cual permite
que se enfoque a la vez una gran parte de la muestra. También produce imágenes de alta
resolución, que significa que características espacialmente cercanas en la muestra pueden
ser examinadas a una alta magnificación.
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CONCLUSIÓN
En conclusión, el manejo del microscopio y las técnicas para hacer preparaciones microscópicas
son habilidades esenciales para cualquier persona que desee trabajar en el campo de la investigación y de
las ciencias. Es importante conocer las partes del microscopio y cómo ajustar los diferentes parámetros
para obtener una imagen clara y nítida.
Las técnicas de preparación de muestras incluyen la fijación, la tinción y el montaje de las
muestras en portaobjetos y cubreobjetos. Cada técnica requiere una preparación y protocolo específico, y
es importante seguir cuidadosamente cada paso para garantizar que la muestra se mantenga en las mejores
condiciones y pueda ser examinada adecuadamente.
Además, se deben tener en cuenta las medidas de seguridad para evitar dañar el microscopio o la
muestra, y para prevenir lesiones personales. Estas incluyen la limpieza adecuada del microscopio, el uso
de protección personal y la eliminación segura de las muestras.
En resumen, el manejo del microscopio y las técnicas de preparación de muestras son
fundamentales para una investigación precisa y eficiente. Es importante dedicar tiempo y esfuerzo para
adquirir estas habilidades y seguir las medidas de seguridad adecuadas para garantizar resultados óptimos.
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